CN116179535A - 一种快速核酸提取或纯化试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速核酸提取或纯化试剂盒，包括磁珠混合液、裂解液、洗涤液以及洗脱液，所述提取试剂盒中含有蛋白酶K溶液，所述裂解液包括1mmol/L～100mmol/L的PBS、1mmol/L～50mmol/L的CTAB、0.5mol/L～1.5mol/L的醋酸钠、0.5mol/L～15.0mol/L的异硫氰酸胍，质量百分含量为0.5％～5％的月桂醇聚氧乙烯醚、质量百分含量为0.5％～4％的NP‑40。本发明通过对试剂盒体系进行设计，使得该试剂盒的提取时间短，速度快，每96个样本的核酸提取可以在10分钟内完成，同时能够针对不同病毒的不同样本，如血清、血浆、全血、尿液等进行核酸提取，可配合自动化运行程序，操作简单，提高了提取效率。

Description

一种快速核酸提取或纯化试剂盒
技术领域
本发明涉及核酸提取技术领域，特别涉及一种快速核酸提取或纯化试剂盒。
背景技术
核酸提取是核酸检测的第一步，核酸提取结果对下游检测有很大的影响，目前最常用的核酸提取方法是磁珠吸附法和硅胶膜吸附柱法，磁珠吸附法因提取过程不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作的特点，已成为目前市场主流的核酸提取技术。但是，磁珠吸附法核酸提取法也存在一些问题，市面上给予的磁珠法核酸提取或纯化试剂盒，存在提取时间长的问题，整个提取过程通常需要30分钟甚至更长时间，不符合对核酸提取过程准确高效、快速便捷的要求，此外，现有试剂盒核酸提取针对的病毒种类、样本类型也比较单一。因此，在现有核酸提取试剂盒提取时间长，提取或纯化试剂盒针对的病毒种类、样本类型单一的背景下，改进核酸提取试剂盒体系，开发出更快速、更通用，适用于自动化工作平台的核酸提取或纯化试剂盒显得十分迫切。
发明内容
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种快速核酸提取或纯化试剂盒，主要克服现有核酸提取试剂盒提取时间长的问题，同时解决现有核酸提取试剂盒针对的病毒种类、样本类型单一的问题，最终达到更通用、更快速地对核酸进行提取或纯化的效果。
本发明采用的技术方案如下：一种快速核酸提取或纯化试剂盒，包括磁珠混合液、裂解液、洗涤液以及洗脱液，所述提取试剂盒中含有蛋白酶K溶液，所述裂解液包括1mmol/L～100mmol/L的PBS(即现有的PBS缓冲液)、1mmol/L～50mmol/L的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)、0.5mol/L～1.5mol/L的醋酸钠、0.5mol/L～15.0mol/L的异硫氰酸胍，质量百分含量为0.5％～5％的月桂醇聚氧乙烯醚、质量百分含量为0.5％～4％的NP-40(乙基苯基聚乙二醇)。
进一步，所述蛋白酶K溶液来自从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，其浓度为1mg/mL～10mg/mL，例如可以为1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL、5mg/mL、5.5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL等，其优选浓度为5mg/mL。
进一步，所述洗涤液包括洗涤液A和洗涤液B，所述洗涤液A包括10mmol/L～100mmol/L的PBS、0.1mol/L～1.0mol/L醋酸钠，质量百分含量为0.1％～0.6％月桂醇聚氧乙烯醚、0.5mol/L～2.0mol/L异硫氰酸胍、10％～40％体积比的异丙醇；所述洗涤液B包括10mmol/L～100mmol/L的PBS、0.1mmol/L～1mmol/L的柠檬酸钠、30％～90％体积比的无水乙醇。
进一步，在所述裂解液中，PBS的浓度优选为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L中的一种；CTAB的浓度优选为10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、50mmol/L中的一种；醋酸钠的浓度优选为0.5mol/L、0.8mol/L、1.3mol/L、1.5mol/L中的一种；异硫氰酸的浓度优选为0.5mol/L、5.0mol/L、10.0mol/L、15.0mol/L中的一种；月桂醇聚氧乙烯醚的质量百分含量优选为0.5％、1.5％、2.5％、5％中的一种；NP-40的质量百分含量优选为0.5％、1.0％、2.0％、4.0％中的一种。
进一步，在所述洗涤液A中，PBS的浓度优选为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L中的一种；醋酸钠的浓度优选为0.1mol/L、0.4mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L中的一种；月桂醇聚氧乙烯醚的质量百分含量优选为0.1％、0.2％、0.4％、0.6％中的一种；异硫氰酸的浓度优选为0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L、2.0mol/L中的一种；异丙醇的体积比优选为10％、20％、30％、40％中的一种。
进一步，在所述洗涤液B中，PBS的浓度优选为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L中的一种；柠檬酸钠的浓度优选为0.1mmol/L、0.5mmol/L、0.8mmol/L、1mmol/L中的一种；无水乙醇的体积比优选为30％、50％、70％、90％中的一种。
进一步，所述洗脱液包括0.1mmol/L～10mmol/L的柠檬酸钠。
进一步，在所述洗脱液中，柠檬酸钠浓度优选为1mmol/L、4mmol/L、6mmol/L、8mmol/L、10mmol/L中的一种。
进一步，所述磁珠混合液的官能团为氨基、羟基、羧基、硅羟基中的一种，优选为硅羟基。磁珠混合液的浓度为10mg/mL～20mg/mL，例如可以是10mg/mL、12mg/mL、14mg/mL、14.5mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL、20mg/mL等，优选为15mg/mL。
进一步，所述试剂盒可以用于多种样本的核酸提取或纯化，所述多种样本包括新冠病毒、EB病毒、HCMV病毒、血浆、血清、全血、尿液。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明通过对裂解液和洗脱液的组分和配比进行改进，使核酸提取或纯化试剂盒的裂解时间以及洗脱时间显著缩短，提取或纯化速度快，每96个样本的核酸提取可以在10分钟内完成，显著低于现有核酸提取试剂盒30分钟的提取时间，实现了快速提取的效果；
2、本发明对样本类型的兼容度高，可兼容常见的大部分含核酸的待提取样本，无需针对不同类型的样本匹配不同类型的核酸提取或纯化试剂盒，达到了一盒多用的技术效果，有效提高了试剂盒的通用性；
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同，同时，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供了一种快速核酸提取或纯化试剂盒，该试剂盒包括磁珠混合液、裂解液、洗涤液、洗脱液以及蛋白酶K溶液。其中，磁珠混合液中所带官能团包括但不限于带氨基、羟基、羧基、硅羟基官能团，优选为硅羟基官能团。
在本发明的试剂盒中，磁珠混合液的浓度为10mg/mL～20mg/mL，优选为15mg/mL。
在本发明的试剂盒中，裂解液包括1mmol/L～100mmol/L的PBS、1mmol/L～50mmol/L的CTAB，0.5mol/L～1.5mol/L的醋酸钠，0.5mol/L～15.0mol/L的异硫氰酸胍，质量百分含量为0.5％～5％的月桂醇聚氧乙烯醚、质量百分含量为0.5％～4％的NP-40。PBS的优选浓度为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L；CTAB的优选浓度为10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、50mmol/L；醋酸钠的优选浓度为0.5mol/L、0.8mol/L、1.3mol/L、1.5mol/L；异硫氰酸的优选浓度为0.5mol/L、5.0mol/L、10.0mol/L、15.0mol/L；月桂醇聚氧乙烯醚的优选质量百分含量为0.5％、1.5％、2.5％、5％；NP-40的优选质量百分含量为0.5％、1.0％、2.0％、4.0％。
在本发明的试剂盒中，洗涤液包括洗涤液A和洗涤液B，所述洗涤液A包括10mmol/L～100mmol/L的PBS、0.1mol/L～1.0mol/L醋酸钠，质量百分含量为0.1％～0.6％月桂醇聚氧乙烯醚、0.5mol/L～2.0mol/L异硫氰酸胍、10％～40％体积比的异丙醇。PBS的优选浓度为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L；醋酸钠的优选浓度为0.1mol/L、0.4mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L；月桂醇聚氧乙烯醚的优选质量百分含量为0.1％、0.2％、0.4％、0.6％；异硫氰酸的优选浓度为0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L、2.0mol/L；异丙醇的优选体积比为10％、20％、30％、40％。
进一步，所述洗涤液B包括10mmol/L～100mmol/L的PBS、0.1mmol/L～1mmol/L的柠檬酸钠、30％～90％体积比的无水乙醇。PBS的优选浓度为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L；柠檬酸钠的优选浓度为0.1mmol/L、0.5mmol/L、0.8mmol/L、1mmol/L；无水乙醇的优选体积比为30％、50％、70％、90％。
在本发明的试剂盒中，洗脱液包括0.1mmol/L～10mmol/L的柠檬酸钠。柠檬酸钠的优选浓度为1mmol/L、4mmol/L、6mmol/L、8mmol/L、10mmol/L。
在本发明的试剂盒中，蛋白酶K溶液来自从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，其浓度为1mg/mL～10mg/mL，优选浓度为5mg/mL。
本发明的试剂盒的使用方法为，使用天隆GeneRotex96提取仪或其他同等类型的仪器上进行自动化提取，其步骤包括：
S1、根据提取样本的数量，在96深孔板的第1、7列中按顺序加入20μL蛋白酶K溶液、200μL的样本、600μL裂解液；
S2、根据提取样本的数量，在96深孔板的第2、8列中加入600μL的磁珠混合液；
S3、根据提取样本的数量，在96深孔板的第3、9列中加入700μL的洗涤液A；
S4、根据提取样本的数量，在96深孔板的第4、10列中加入800μL的洗涤液B；
S5、根据提取样本的数量，在96深孔板的第6、12列中加入80μL的洗脱液；
S6、添加磁珠混合液前需充分混匀磁珠，如提取的样本数量较多，建议每添加完8个样品孔重悬一次磁珠。
利用天隆GeneRotex96自动提取仪提取的程序为：
GeneRotex96核酸提取仪按以下程序(如表1所示)进行自动化提取(注意：程序运行前需在深孔板第2和第8列放置搅拌套，7至12列孔位无试剂则第8列可不放置搅拌套，单条试剂第2列孔位放置搅拌套)。
表1本试剂盒核酸提取程序表
Figure BDA0004009981050000061
自动化程序结束后，将第6或12列(注意有效工作孔位)的洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管中。整个提取过程花费时间在10分钟内。
对照试剂(西安天隆科技有限公司核酸提取或纯化试剂盒(Ex-DNA/RNA病毒(3.0))的使用方法为，使用天隆GeneRotex96提取仪或其他同等类型的仪器上进行自动化提取，其步骤包括：
S1、根据提取样本的数量，在96深孔板的第1、7列中按顺序加入20μL蛋白酶K溶液、200μL的样本、500μL裂解液；
S2、根据提取样本的数量，在96深孔板的第2、8列中加入600μL的磁珠混合液；
S3、根据提取样本的数量，在96深孔板的第3、9列中加入700μL的洗涤液A；
S4、根据提取样本的数量，在96深孔板的第4、10列中加入700μL的洗涤液B；
S5、根据提取样本的数量，在96深孔板的第6、12列中加入80μL的洗脱液；
S6、添加磁珠混合液前需充分混匀磁珠，如提取的样本数量较多，建议每添加完8个样品孔重悬一次磁珠。
利用天隆GeneRotex96自动提取仪提取的程序为：
GeneRotex96核酸提取仪按以下程序(如表2所示)进行自动化提取(注意：程序运行前需在深孔板第2和第8列放置搅拌套，7至12列孔位无试剂则第8列可不放置搅拌套，单条试剂第2列孔位放置搅拌套)。
表2对照试剂盒核酸提取程序表
Figure BDA0004009981050000071
自动化程序结束后，将第6或12列(注意有效工作孔位)的洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管中。整个提取过程花费时间在35分钟左右。
从上述使用方法中的提取程序可知，本发明试剂盒体系的核酸提取时间远短于对照试剂盒的核酸提取时间。以下为本发明试剂盒体系与对照试剂盒体系在时间差异的前提下，两者针对不同病毒(新冠病毒、EB病毒、HCMV病毒)、不同样本对象(血清、血浆、全血、尿液和拭子洗液)的核酸提取效果的对比，以验证本发明试剂盒的性能。
实施例1
该实施例中的核酸提取或纯化试剂盒的试剂组分如下表3所示：
表3实施例1的核酸提取或纯化试剂盒的配方表
Figure BDA0004009981050000081
Figure BDA0004009981050000091
1、针对EB血清样本，该体系试剂盒与对照试剂的提取性能验证：
16例EB血清临床样本核酸提取验证：使用本试剂盒在天隆GeneRotex96提取仪上按照前述步骤进行16例临床样本的核酸提取，每例临床单样提取一次，扩增试剂盒定量标准品1#～4#各提取一次，与对照试剂检测结果的浓度对数值差异±0.5。对照试剂具体操作步骤参照试剂盒说明。提取完测病毒核酸使用苏州天隆生物科技有限公司的EB病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行扩增检测，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
2、针对EB血浆样本，该体系试剂盒与对照试剂的提取性能验证：
16例EB血浆临床样本核酸提取验证：使用本试剂盒在天隆GeneRotex96提取仪上按照前述步骤进行16例临床样本的核酸提取，每例临床单样提取一次，扩增试剂盒定量标准品1#～4#各提取一次，与对照试剂检测结果的浓度对数值差异±0.5。对照试剂具体操作步骤参照试剂盒说明。提取完测病毒核酸使用苏州天隆生物科技有限公司的EB病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行扩增检测，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
3、针对EB全血样本，该体系试剂盒与对照试剂的提取性能验证：
16例EB全血临床样本核酸提取验证：使用本试剂盒在天隆GeneRotex96提取仪上按照前述步骤进行16例临床样本的核酸提取，每例临床单样提取一次，扩增试剂盒定量标准品1#～4#各提取一次，与对照试剂检测结果的浓度对数值差异±0.5。对照试剂具体操作步骤参照试剂盒说明。提取完测病毒核酸使用苏州天隆生物科技有限公司的EB病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行扩增检测，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
4、针对HCMV血清样本，该体系试剂盒与对照试剂的提取性能验证：
16例HCMV血清临床样本核酸提取验证：使用本试剂盒在天隆GeneRotex96提取仪上按照前述步骤进行16例临床样本的核酸提取，每例临床单样提取一次，扩增试剂盒定量标准品1#～4#各提取一次，与对照试剂检测结果的浓度对数值差异±0.5。对照试剂具体操作步骤参照试剂盒说明。提取完测病毒核酸使用苏州天隆生物科技有限公司的人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行扩增检测，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
5、针对HCMV血浆样本，该体系试剂盒与对照试剂的提取性能验证：
16例HCMV血浆临床样本核酸提取验证：使用本试剂盒在天隆GeneRotex96提取仪上按照前述步骤进行16例临床样本的核酸提取，每例临床单样提取一次，扩增试剂盒定量标准品1#～4#各提取一次，与对照试剂检测结果的浓度对数值差异±0.5。对照试剂具体操作步骤参照试剂盒说明。提取完测病毒核酸使用苏州天隆生物科技有限公司的人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行扩增检测，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
6、针对HCMV全血样本，该体系试剂盒与对照试剂的提取性能验证：
16例HCMV全血临床样本核酸提取验证：使用本试剂盒在天隆GeneRotex96提取仪上按照前述步骤进行16例临床样本的核酸提取，每例临床单样提取一次，扩增试剂盒定量标准品1#～4#各提取一次，与对照试剂检测结果的浓度对数值差异±0.5。对照试剂具体操作步骤参照试剂盒说明。提取完测病毒核酸使用苏州天隆生物科技有限公司的人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行扩增检测，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
7、针对HCMV尿液样本，该体系试剂盒与对照试剂的提取性能验证：
16例HCMV尿液临床样本核酸提取验证：使用本试剂盒在天隆GeneRotex96提取仪上按照前述步骤进行16例临床样本的核酸提取，每例临床单样提取一次，扩增试剂盒定量标准品1#～4#各提取一次，与对照试剂检测结果的浓度对数值差异±0.5。对照试剂具体操作步骤参照试剂盒说明。提取完测病毒核酸使用苏州天隆生物科技有限公司的人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行扩增检测，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
8、针对模拟的新冠样本，该体系试剂盒与对照试剂的提取性能验证：
检测限：使用样本保存液稀释新冠-邦德盛标准物质(购自广州邦德盛生物科技有限公司，原液靶值浓度为(2.0±0.4)E+03copies/μL至试剂盒检测限，使用本试剂盒在天隆GeneRotex96提取仪上按照前述步骤进行核酸提取，重复20次提取，检出率为95％以上。对照试剂具体操作步骤参照试剂盒说明书。提取完测病毒核酸使用苏州天隆生物科技有限公司的新冠病毒核酸检测试剂(荧光PCR法)进行扩增检测，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
该实施例针对EB病毒的血清、血浆、全血样本的核酸提取与对照试剂的提取效果验证结果如下表4所示。
表4针对EB病毒，本实施例与对照试剂提取效果检测结果
Figure BDA0004009981050000111
/>
Figure BDA0004009981050000121
/>
Figure BDA0004009981050000131
由表4中数据可以得到，对于16例EB血清、血浆、全血临床样本核酸提取，对比本发明试剂盒与对照试剂盒的核酸提取效果，本试剂盒与对照试剂检测结果的浓度对数值差异范围在±0.5以内，本试剂盒提取性能符合标准且与对照试剂盒的提取效果相当。本试剂盒在保证提取效果的同时，核酸提取时间相比对照试剂盒短。
该实施例针对HCMV病毒的血清、血浆、全血、尿液样本的核酸提取与对照试剂的提取效果验证结果如下表5所示。
表5针对HCMV病毒，本实施例与对照试剂提取效果检测结果
Figure BDA0004009981050000132
/>
Figure BDA0004009981050000141
/>
Figure BDA0004009981050000151
/>
Figure BDA0004009981050000161
由表5中数据可以得到，对于16例HCMV血清、血浆、全血、尿液临床样本核酸提取，对比本发明试剂盒与对照试剂盒的核酸提取效果，本试剂盒与对照试剂检测结果的浓度对数值差异范围在±0.5以内，本试剂盒提取性能符合标准且与对照试剂盒的提取效果相当。本试剂盒在保证提取效果的同时，核酸提取时间相比对照试剂盒短。
该实施例针对模拟的新冠阳性拭子洗液的核酸提取与对照试剂的提取效果验证结果如下表6所示。
表6针对新冠阳性样本，本实施例与对照试剂提取效果检测结果
Figure BDA0004009981050000162
/>
Figure BDA0004009981050000171
由表6中数据可以得到，针对模拟的新冠阳性拭子洗液的核酸提取的检测限，本试剂盒与对照试剂盒的检出率均为95％以上。本试剂盒提取性能符合标准且与对照试剂盒的提取效果相当。本试剂盒在保证提取效果的同时，核酸提取时间相比对照试剂盒短。
实施例2
该实施例中的核酸提取或纯化试剂盒的试剂组分如下表7所示：
表7实施例2的核酸提取或纯化试剂盒的配方表
Figure BDA0004009981050000172
/>
Figure BDA0004009981050000181
使用该实施例的试剂盒对不同病毒(新冠病毒、EB病毒、HCMV病毒)、不同样本对象(血清、血浆、全血、尿液和拭子洗液)进行提取，并与对照试剂的提取效果进行对比验证，其验证方法和指标与实施例1相同。提取效果验证结果如下表8-10所示。
该实施例针对EB病毒的血清、血浆、全血样本的核酸提取与对照试剂的提取效果验证结果如下表8所示。
表8针对EB病毒，本实施例与对照试剂提取效果检测结果
Figure BDA0004009981050000182
/>
Figure BDA0004009981050000191
/>
Figure BDA0004009981050000201
由表8中数据可以得到，对于16例EB血清、血浆、全血临床样本核酸提取，对比本发明试剂盒与对照试剂盒的核酸提取效果，本试剂盒与对照试剂检测结果的浓度对数值差异范围在±0.5以内，本试剂盒提取性能符合标准且与对照试剂盒的提取效果相当。本试剂盒在保证提取效果的同时，核酸提取时间相比对照试剂盒短。
该实施例针对HCMV病毒的血清、血浆、全血、尿液样本的核酸提取与对照试剂的提取效果验证结果如下表9所示。
表9针对HCMV病毒，本实施例与对照试剂提取效果检测结果
Figure BDA0004009981050000211
/>
Figure BDA0004009981050000221
/>
Figure BDA0004009981050000231
由表9中数据可以得到，对于16例HCMV血清、血浆、全血、尿液临床样本核酸提取，对比本发明试剂盒与对照试剂盒的核酸提取效果，本试剂盒与对照试剂检测结果的浓度对数值差异范围在±0.5以内，本试剂盒提取性能符合标准且与对照试剂盒的提取效果相当。本试剂盒在保证提取效果的同时，核酸提取时间相比对照试剂盒短。
该实施例针对模拟的新冠阳性拭子洗液的核酸提取与对照试剂的提取效果验证结果如下表10所示。
表10针对新冠阳性样本，本实施例与对照试剂提取效果检测结果
Figure BDA0004009981050000232
/>
Figure BDA0004009981050000241
由表10中数据可以得到，针对模拟的新冠阳性拭子洗液的核酸提取的检测限，本试剂盒与对照试剂盒的检出率均为95％以上。本试剂盒提取性能符合标准且与对照试剂盒的提取效果相当。本试剂盒在保证提取效果的同时，核酸提取时间相比对照试剂盒短。
实施例3
该实施例中的核酸提取或纯化试剂盒的试剂组分如下表11所示：
表11实施例3的核酸提取或纯化试剂盒的配方
Figure BDA0004009981050000251
使用该实施例的试剂盒对不同病毒(新冠病毒、EB病毒、HCMV病毒)、不同样本对象(血清、血浆、全血、尿液和拭子洗液)进行提取，并与对照试剂的提取效果进行对比验证，其验证方法和指标与实施例1相同。提取效果验证结果如下(验证的结果与上述实施例无明显差别，为节约篇幅，以下不再提供实验数据，而只列出验证结果)：
对于血清、血浆、全血、尿液和拭子洗液样本核酸提取，对比本发明试剂盒与对照试剂盒的核酸提取效果，本试剂盒与对照试剂检测结果的浓度对数值差异范围在±0.5以内，本试剂盒提取性能符合标准且与对照试剂盒的提取效果相当。本试剂盒在保证提取效果的同时，核酸提取时间相比对照试剂盒短。
实施例4
该实施例中的核酸提取或纯化试剂盒的试剂组分如下表12所示：
表12实施例4的核酸提取或纯化试剂盒的配方
Figure BDA0004009981050000261
使用该实施例的试剂盒对不同病毒(新冠病毒、EB病毒、HCMV病毒)、不同样本对象(血清、血浆、全血、尿液和拭子洗液)进行提取，并与对照试剂的提取效果进行对比验证，其验证方法和指标与实施例1相同。提取效果验证结果如下(验证的结果与上述实施例无明显差别，为节约篇幅，以下不再提供实验数据，而只列出验证结果)：
对于血清、血浆、全血、尿液和拭子洗液样本核酸提取，对比本发明试剂盒与对照试剂盒的核酸提取效果，本试剂盒与对照试剂检测结果的浓度对数值差异范围在±0.5以内，本试剂盒提取性能符合标准且与对照试剂盒的提取效果相当。本试剂盒在保证提取效果的同时，核酸提取时间相比对照试剂盒短。
综合上述实施例1-4，本发明试剂盒体系与对照试剂针对EB/HCMV的血清、血浆、全血和尿液样本时，LOG浓度的差值绝对值均在0.5以内，两者提取效果相当，针对模拟的新冠阳性拭子洗液样本时，两者检出率均为95％以上，提取效果相当；充分验证了本发明与对照试剂盒的提取效率基本一致。然而，本发明试剂盒相比对照试剂盒的提取时间，明显缩短，本试剂盒将核酸提取时间缩短至对照试剂盒提取时间的40％以内，具有显著性进步。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种快速核酸提取或纯化试剂盒，包括磁珠混合液、裂解液、洗涤液以及洗脱液，其特征在于，所述提取试剂盒中含有蛋白酶K溶液，所述裂解液包括1mmol/L～100mmol/L的PBS、1mmol/L～50mmol/L的CTAB、0.5mol/L～1.5mol/L的醋酸钠、0.5mol/L～15.0mol/L的异硫氰酸胍，质量百分含量为0.5％～5％的月桂醇聚氧乙烯醚、质量百分含量为0.5％～4％的NP-40。
2.如权利要求1所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液来自从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，其浓度为1mg/mL～10mg/mL。
3.如权利要求1所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括洗涤液A和洗涤液B，所述洗涤液A包括10mmol/L～100mmol/L的PBS、0.1mol/L～1.0mol/L醋酸钠，质量百分含量为0.1％～0.6％月桂醇聚氧乙烯醚、0.5mol/L～2.0mol/L异硫氰酸胍、10％～40％体积比的异丙醇；所述洗涤液B包括10mmol/L～100mmol/L的PBS、0.1mmol/L～1mmol/L的柠檬酸钠、30％～90％体积比的无水乙醇。
4.如权利要求1所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，在所述裂解液中，PBS的浓度为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L中的一种；CTAB的浓度为10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、50mmol/L中的一种；醋酸钠的浓度为0.5mol/L、0.8mol/L、1.3mol/L、1.5mol/L中的一种；异硫氰酸的浓度为0.5mol/L、5.0mol/L、10.0mol/L、15.0mol/L中的一种；月桂醇聚氧乙烯醚的质量百分含量为0.5％、1.5％、2.5％、5％中的一种；NP-40的质量百分含量为0.5％、1.0％、2.0％、4.0％中的一种。
5.如权利要求3所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，在所述洗涤液A中，PBS的浓度为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L中的一种；醋酸钠的浓度为0.1mol/L、0.4mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L中的一种；月桂醇聚氧乙烯醚的质量百分含量为0.1％、0.2％、0.4％、0.6％中的一种；异硫氰酸的浓度为0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L、2.0mol/L中的一种；异丙醇的体积比为10％、20％、30％、40％中的一种。
6.如权利要求3所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，在所述洗涤液B中，PBS的浓度为10mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L中的一种；柠檬酸钠的浓度为0.1mmol/L、0.5mmol/L、0.8mmol/L、1mmol/L中的一种；无水乙醇的体积比为30％、50％、70％、90％中的一种。
7.如权利要求1所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括0.1mmol/L～10mmol/L的柠檬酸钠。
8.如权利要求7所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，在所述洗脱液中，柠檬酸钠浓度为1mmol/L、4mmol/L、6mmol/L、8mmol/L、10mmol/L中的一种。
9.如权利要求1所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，所述磁珠混合液的官能团为氨基、羟基、羧基、硅羟基中的一种，磁珠混合液的浓度为10mg/mL～20mg/mL。
10.如权利要求1-9任一所述的快速核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，所述试剂盒可以用于多种样本的核酸提取或纯化，所述多种样本包括新冠病毒、EB病毒、HCMV病毒、血浆、血清、全血、尿液。
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