CN116144774A - 一种基于opcml的宫颈病变的分子诊断试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明属于基因检测领域，涉及一种基于OPCML的宫颈病变分子诊断试剂。所述的试剂包括针对单个基因标志物甲基化的检测试剂，用于检测所述标志物经修饰后的序列。本申请的试剂经试验证实，可以高灵敏、高特异地检测和诊断宫颈病变，有极高的临床应用价值。

Description

一种基于OPCML的宫颈病变的分子诊断试剂
技术领域
本发明属于基因检测领域，涉及一种基于OPCML的宫颈病变分子诊断试剂。
背景技术
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在我国女性特有的恶性肿瘤中排第二位，仅次于乳腺癌之后。宫颈癌的发生可通过对癌前病变的检查和处理得以有效控制。目前宫颈癌主要的无创筛查手段是细胞学检查和HPVDNA检测。宫颈细胞学涂片检查是现阶段发现早期宫颈癌及癌前病变[宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)]的初筛手段，特别是对临床体征不明显的早期病变的诊断。有巴氏涂片和宫颈液基细胞学检查法(TCT)两种，目前主要采用后者。宫颈细胞涂片检查作为宫颈癌筛查的优点是特异性高，缺点是敏感性不高，易漏检。因其需要专业的病理科医生在显微镜下阅片，因此通量有一定限制。
宫颈上皮内瘤变(CIN)属于子宫颈上皮非典型增生，其为一个动态变化的过程，分为1、2、3三级，即低、中和高三种程度。高度CIN是指非典型病变以累及上皮全层但未向基底膜浸润，又称宫颈原位癌。继续发展可向基底膜下浸润，可形成宫颈癌。低度CIN病变是指子宫颈上皮非典型增生仅累及上皮全层的上1/3。CIN1又称低级别鳞状上皮内瘤变(Low-grade Squamous Intraepithelial Lesion,LSIL)，CIN2/CIN3统称高级别鳞状上皮内瘤变(High-grade Squamous Intraepithelial Lesion,HSIL)。CIN是一个动态变化的过程，但及时治疗可以逆转，恢复正常。因此，CIN的诊断，对于预防或早期干预宫颈癌具有重要意义。
对于宫颈腺癌，原位腺癌(ACIS)是确定的前体病变。原则上，这些癌前病变是可逆的，尽管病变越严重，自发消退的机会越低。宫颈癌被认为是可预防的疾病，因为癌前阶段可通过脱落细胞学检测，并在必要时相对容易地治疗，只有轻微的副作用。宫颈筛查旨在早期诊断高级恶变前的(即CIN2/3和原位腺癌)和可治疗的癌性病变，从而降低浸润性宫颈癌症的死亡率。一般医疗实践包括治疗所有具有形态学证实的CIN2、CIN3和原位腺癌的女性，以便预防宫颈癌症的发展。
HPVDNA检测常用于检测生殖道有无人乳头瘤病毒(HPV)感染，间接评估患宫颈癌或宫颈上皮内瘤变的情况。HPV DNA分型检测有助于鉴别是否有高危型HPV病毒感染。对于HPV16及18型阳性的患者建议直接转诊阴道镜，进行组织学活检。HPV检测可以作为TCT的有效补充，二者联合有利于提高筛查效率。但大部分HPV感染是一过性感染，因此HPV检测虽然敏感性高，但对于宫颈癌的检测特异性低。HPV感染并非等同于得宫颈癌，因此用HPV检测来筛查宫颈癌特异性低，存在过度诊疗。TCT检测是镜下观察脱落细胞形态来诊断宫颈癌，受取材和人为因素影响大，敏感性不高。
DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰。特定基因启动子区DNA异常甲基化是肿瘤形成的一个早期事件。宫颈脱落细胞DNA甲基化标志物检查是新兴的宫颈癌检测方法，已有报道在宫颈癌和癌前病变(CIN2/3)阶段有许多基因启动子区发生了异常甲基化。并且检测这些DNA甲基化标志物可以作为宫颈癌的一种早期筛查诊断技术，报道较多的基因有ZNF582，PTPRR，PAX1，SOX1，EPB41L3和JAM3等。
现有一些DNA甲基化标志物用于宫颈癌检测存在的问题：1)检测试剂中靶基因太多，多为标志物组合，2)敏感性和特异性不高。比如，有试剂盒(GynTect)需要同时检测6个基因(DLX、ITGA4、RXFP3、SOX17、ZNF671和ASTN1)DNA甲基化程度，来评估HPV检测阳性患者的癌变转化风险。还有试剂盒需要同时检测SOX1和PAX1来辅助诊断宫颈癌和癌前病变。上述GynTect检测宫颈癌的敏感性虽然有100％(5/5)，但其特异性只有84.6％(137/162)。另有同类产品通过检测EPB41L3和JAM3甲基化来检测CIN2+(CIN2、CIN3和宫颈癌)，其性能为对CIN2+的敏感性为72.13％，特异性为91.53％。
发明内容
一方面，本申请提供了一种引物，所述引物选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ IDNO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13所示的序列或其互补序列中的至少任意一条。
在一些实施方案中，所述引物选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：
7、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：9和SEQID NO：13、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12和SEQ IDNO：13所示的任意一对引物对。
在一些实施方案中，所述引物选自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6，或SEQ IDNO：12和SEQ ID NO：13所示的引物对。
在一些实施方案中，所述引物选自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6所示的引物对。
一方面，本申请提供了一种探针，所述探针选自SEQ ID NO：3、或SEQ ID NO：11所示的序列，和它们的互补序列中的至少任意一条.
在一些实施方案中，所述探针选自SEQ ID NO：3所示的序列或其互补序列。
在一些实施方案中，本申请提供了所述的引物和/或探针在制备甲基化(例如OPCML的甲基化)检测试剂中的应用，或者制备宫颈病变检测试剂中的应用。
本领域公知，引物的成功设计对于PCR是至关重要。相对于一般的PCR，在甲基化检测中，引物的设计影响更为关键，这是由于甲硫化反应促使DNA链中的“C”转化为“U”，导致GC含量降低，使PCR反应后在序列中出现长的连续“T”，容易引起DNA链的断裂，导致很难选择具有合适的Tm值及稳定的引物；另一方面，为了区别硫化处理和没有硫化处理以及未完全处理的DNA，需要引物有足够数量的“C”，这些都增加了选择稳定引物的困难。因此，DNA甲基化检测中，引物所针对的扩增片段的选择，如扩增片段长短和位置，以及引物的选择等等都对检测的灵敏度和特异性产生影响。很多时候，发现了某些基因或核酸片段在肿瘤和非肿瘤中具有表达差异，然而其距离转化为肿瘤的标志物，应用到临床中，仍存在很长的距离。其中最主要的原因是因为检测试剂的限制，导致该潜在肿瘤标志物的检测灵敏度和特异性难以满足检测需求，或者检测方法操作复杂、成本高，难以在临床中大规模应用。
甲基化的发生是胞嘧啶上多了一个甲基，经过经亚硫酸氢盐或重亚硫酸氢盐或肼盐处理后，胞嘧啶会变成脲嘧啶，因为在进行PCR扩增时尿嘧啶与胸腺嘧啶相似而会被识别为胸腺嘧啶，体现在PCR扩增序列上就是没有发生甲基化的胞嘧啶变成了胸腺嘧啶(C变成T)，甲基化的胞嘧啶(C)则不会发生变化。PCR检测甲基化基因的技术通常为MSP，针对处理后的甲基化片段(即片段中未改变的C)设计引物，进行PCR扩增，如果有扩增则说明发生了甲基化，无扩增则没有甲基化。
作为疾病阶段可选的实施方式，可通过在宫颈病变不同阶段或时期的进展可通过从样品中获取的所述片段的甲基化程度的测量进行诊断。通过比较从宫颈病变的每个阶段的样品中分离出的所述片段甲基化程度，可检测样品中宫颈病变的具体阶段。
一方面，本申请提供了一种甲基化检测试剂，所述检测试剂包括OPCML甲基化检测的引物和/或探针。
在一些实施方案中，所述引物的上游引物具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
I.具有SEQ ID NO：1、4、9或12任一所示的核苷酸序列；
II.如I所示序列的互补序列。
在一些实施方案中，所述引物的下游引物具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
III.具有SEQ ID NO：2、5、6、7、8、10或13任一所示的核苷酸序列；
IV.如III所示序列的互补序列。
在一些实施方案中，所述引物选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12和SEQ IDNO：13所示的任意一对引物对。
在一些实施方案中，所述引物选自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6，或SEQ IDNO：12和SEQ ID NO：13所示的引物对。
在一些实施方案中，所述引物选自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6所示的引物对。
在一些实施方案中，所述探针具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
V.具有SEQ ID NO：3或11任一所示的核苷酸序列；
VI.如V所示序列的互补序列。
一方面，本申请提供了一种包含所述的引物、或所述的探针、或所述的甲基化检测试剂的试剂盒；优选地，所述试剂盒包括：第一容器，其包含用于扩增的引物对；第二容器，其包含探针。
在一些实施方案中，本申请提供了所述的引物，或所述的探针，或所述的甲基化检测试剂，或所述的试剂盒，在制备宫颈病变检测试剂中的应用。
在一些实施方案中，所述试剂针对的检测样本选自组织、体液或脱落细胞；在一些实施方案中，所述组织选自宫颈组织；在一些实施方案中，所述脱落细胞选自宫颈脱落细胞；在一些实施方案中，所述体液选自血液、血清、血浆、细胞外液、组织液、淋巴液、脑脊液或房水中的至少一种；在一些实施方案中，所述排泄物选自痰液、尿液、唾液或粪便中的至少一种。
一方面，本申请提供了一种宫颈病变的检测试剂，所述检测试剂包括所述的引物，所述的探针，所述的甲基化检测试剂，或所述的试剂盒。
一方面，本申请提供了一种宫颈病变检测系统，所述的系统含有：
1)OPCML的甲基化检测构件；
2)数据处理构件；
3)结果输出构件；
所述的甲基化检测构件含有所述的引物、或所述的探针、或所述的甲基化检测试剂、或所述的试剂盒。
在一些实施方案中，所述的数据处理构件被配置于：a.接收待测样本及正常对照样本的测试数据；b.储存待测样本以及正常对照样本的测试数据；c.比对同种类型的待测样本以及正常对照样本的测试数据；d.根据比对结果，响应于测试者罹患宫颈病变的概率或者可能性。
在一些实施方案中，所述的结果输出构件用于输出宫颈病变的患病风险和/或宫颈病变类型。
在一些实施方案中，所述的数据处理构件的判断标准为：根据界值判断病变标本和正常标本。
在一些实施方案中，宫颈脱落细胞中，若待测样本的测试数据小于或等于界值，则结果输出构件输出待测样本输出宫颈病变的患病风险高；若待测样本的测试数据大于界值，则结果输出构件输出待测样本输出宫颈病变的患病风险低。
在一些实施方案中，所述检测系统对的检测样本选自组织、体液或脱落细胞；在一些实施方案中，所述组织选自宫颈组织；在一些实施方案中，所述脱落细胞选自宫颈脱落细胞；在一些实施方案中，所述体液选自血液、血清、血浆、细胞外液、组织液、淋巴液、脑脊液或房水中的至少一种；在一些实施方案中，所述排泄物选自痰液、尿液、唾液或粪便中的至少一种。
在一些实施方案中，所述宫颈病变选自高级别鳞状上皮内瘤变和/或宫颈癌。
在一些实施方案中，所述高级别鳞状上皮内瘤变选自CIN2，CIN2-3，CIN3中的一种或多种。
本申请所检测的宫颈癌类型包括各期的宫颈鳞癌、鳞腺癌和腺癌，病理类型包括高分化、中分化、低分化，各种类型的宫颈癌均可检出，避免了某些类型癌症的漏检。CIN2-3是高级别上皮内瘤变，进展为癌的风险比CIN1高，临床上也会对CIN2-3做进一步治疗干预，所以发现CIN2-3并治疗对预防宫颈癌意义重大。
宫颈筛查旨在早期诊断高级恶变前的(即CIN2/3和原位腺癌)和可治疗的癌性病变，从而降低浸润性宫颈癌症的死亡率。一般医疗实践包括治疗所有具有形态学证实的CIN2、CIN3和原位腺癌的女性，以便预防宫颈癌症的发展。
作为病症阶段可选的实施方式，可通过在宫颈病变在不同阶段或时期的进展可通过从样品中获取的OPCML的甲基化程度的测量进行诊断。通过比较从宫颈病变的每个阶段的样品中分离出的OPCML甲基化程度与从没有细胞增殖性异常的样品中分离出的一个或多个核酸中的OPCML的甲基化程度，可检测样品中宫颈病变的具体阶段。
“癌前病变”是指在多步细胞进化为癌症中进展为癌的机会大大增加的阶段。利用经典形态学，病理学家难以预测个体患者中哪些病变将进展或消退。
本发明中的“检测”同诊断，除了宫颈病变的早期诊断，还包括宫颈病变中期和晚期的诊断，且也包括宫颈病变筛选、风险评估、预后、疾病识别、病症阶段的诊断和治疗性靶标的选择。
附图说明
图1为实施例1中用探针P1的引物探针组合的扩增曲线；
图2为实施例1中用探针P2的引物探针组合的扩增曲线；
图3为实施例3中组合1(Cq23-3)在475例宫颈脱落细胞样本中的检测ROC曲线。
具体实施方式
以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案，具体实施例不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本发明的保护范围。
如本申请所用，“炎症”指“宫颈炎”，作为其缩写或简称，二者可以互换使用。
如本申请所用，“甲基化水平”同“甲基化程度”，通常可以表示为甲基化胞嘧啶的百分比，其为甲基化的胞嘧啶数量除以甲基化胞嘧啶的数量与未甲基化胞嘧啶数量的总和；以及目前普遍采用甲基化靶向基因数量除以内参基因数量的方法来表示甲基化水平；以及其它现有技术中甲基化水平表示方法。
如本申请所用，“样本”同“标本”。
实施例1
将OPCML作为标志物，设计了如表1所示的多组引物和探针。
表1
名称 性质 序列 序列编号
F1： 上游引物 TTCGGTTTAGGTAAAGTTCGC SEQ ID NO：1
R1 下游引物 CGAACGAACCGCACAATC SEQ ID NO：2
P1 探针 TCGTTTAGTGTATTCGCGGGAAAG SEQ ID NO：3
F1-1 上游引物 TTCGGTTTAGGTAAAGTTCAC SEQ ID NO：4
R1-1 下游引物 ATCACTAAAACGCCGCTCG SEQ ID NO：5
R1-2 下游引物 ATCACTAAAACGCCGCTTG SEQ ID NO：6
R1-3 下游引物 AACCGCACAATCACTAAAACG SEQ ID NO：7
R1-4 下游引物 AACCGCACAATCACTAAAATG SEQ ID NO：8
F2 上游引物 CGGGTTTGGGAGTGAGATTATAGC SEQ ID NO：9
R2 下游引物 CGAATACACTAAACGACGAAAACG SEQ ID NO：10
P2 探针 CGCGTTCGGTTTAGGTAAAGTTCGC SEQ ID NO：11
F2-1 上游引物 CGGGTTTGGGAGTGAGATTATATC SEQ ID NO：12
R2-1 下游引物 CGAATACACTAAACGACGAAAATG SEQ ID NO：13
根据表1的引物探针序列，设计了如表2所示的引物探针组合。
表2
Figure BDA0003973478520000061
Figure BDA0003973478520000071
用探针P1的几个引物组合测试结果如图1，可见组合1(Cq23-3)的扩增线形接近S形，平台期荧光值最高。
用探针P2的几个引物组合测试结果如图2，可见组合2(Cq23-9)的扩增线形接近S形，平台期荧光值最高。
通过实验，结合扩增曲线线形和CT值，发现组合1(Cq23-3)：F1-1+R1-2+P1和组合2(Cq23-9)：F2-1+R2-1+P2的扩增效果最好，因此对这2个组合继续进行了宫颈脱落细胞标本检测。
实施例2
选取44例宫颈脱落细胞标本(21例宫颈炎，15例CIN1，6例HSIL，2例宫颈癌，均经阴道镜或病理确认)。
按以下所述技术方案操作：
1)收集有阴道镜病理结果的患者的宫颈脱落细胞标本(分类为炎症、CIN1、CIN2、CIN3、宫颈癌)至细胞保存液中；
2)取出1mL上清离心，用核酸提取试剂盒提取细胞沉淀的DNA；
3)用EZ DNA Methylation Kit(Zymo Research)对上一步骤中的DNA片段进行甲基化处理，最后的洗脱液用于qMSP检测。
最后得到Bisulfite转化后的DNA。然后进行qMSP检测，最后根据CT值判断标本中该标志物的甲基化水平。
本实施例qMSP反应体系：30μl(无核酸酶水10.1ul，5×Buffer(含MgCl2)6ul，dNTPs(10mM)1ul，FTaq DNA Polymerase 0.3ul，FP(10uM)0.9ul，RP(10uM)0.9ul，Probe(10uM)0.6ul，DNA 10ul)。反应程序：95℃5min，(95℃15s，58℃30s，72℃30s)×45Cycles，40℃30s。
PCR反应以ACTB作为内参基因，最后根据CT值判断标本中甲基化水平，目标基因CT值≦36判断为阳性，CT值>36判断为阴性。
绘制2个组合检测44例标本的ROC曲线，发现组合1(Cq23-3)检测HSIL以上病变(宫颈癌和HSIL)的AUC＝0.95，组合2(Cq23-9)检测HSIL以上病变(宫颈癌和HSIL)的AUC＝0.89。后续用组合1进行大样本检测。
实施例3
选取475例宫颈脱落细胞标本(245例宫颈炎，160例CIN1，14例CIN2，10例CIN3，30例CIN2-3，16例宫颈癌，均经阴道镜或病理确认)。按上述宫颈脱落细胞标本检测流程测试组合1(Cq23-3)的性能。
根据这475例宫颈脱落细胞标本结果，计算了引物探针组合1(Cq23-3)检测宫颈癌和癌前病变的敏感性和特异性。具体来说检测性能如下：
Figure BDA0003973478520000081
检测ROC曲线图如图3所示，该组合对宫颈癌的诊断AUC＝0.99，对HSIL(包括上述CIN2、CIN3、CIN2-3)的诊断AUC＝0.80。
本申请提供的单个基因标志物诊断宫颈病变的技术方案能够以极高的敏感性和特异性检测出宫颈癌和癌前病变(CIN3、CIN2)，本发明的标志物对宫颈癌的检测敏感性和特异性都高于90％。具体来说是在特异性为91％时，该标志物对宫颈癌敏感性高达94％，对CIN3敏感性为80％，对CIN2-3敏感性67％。
宫颈癌对妇女危害大，早期发现早期治疗其效果好、成本低。若发现晚，不仅治疗效果差，治疗费用也非常高。本申请的试剂中所含的甲基化试剂与宫颈癌发生发展密切相关，该标志物甲基化水平直接反映宫颈癌发病风险高低；与HPVDNA检测不同，HPVDNA只是与宫颈癌间接相关，HPV感染不代表会发生宫颈癌。本申请的试剂比HPVDNA能够更特异的检测出宫颈癌。
对比例1
以Schmitz,M.等所报道的GynTect在宫颈脱落细胞中检测宫颈癌和癌前病变数据作为对比例。GynTect需要同时检测6个基因(DLX、ITGA4、RXFP3、SOX17、ZNF671和ASTN1)。
其检测性能如下：
Table 6 GynTect test positive rate according to age and histology
Figure BDA0003973478520000091
表中显示：GynTect检测宫颈癌及癌前病变的特异性仅为84.6％(137/162)。

Claims (11)

1.一种引物，其特征在于，所述引物选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：13所示的序列或其互补序列中的至少任意一条；
优选地，所述引物选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ IDNO：5、SEQID NO：4和SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：4和SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：9和SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：9和SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12和SEQ ID NO：13所示的任意一对引物对；
优选地，所述引物选自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6，或SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的引物对；
优选地，所述引物选自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6所示的引物对。
2.一种探针，其特征在于，所述探针选自SEQ ID NO：3、或SEQ ID NO：11所示的序列，和它们的互补序列中的至少任意一条；
优选地，所述探针选自SEQ ID NO：3所示的序列或其互补序列。
3.如权利要求1或2所述的引物和/或探针在制备甲基化检测试剂中的应用，或者制备宫颈病变检测试剂中的应用。
4.一种甲基化检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括OPCML甲基化检测的引物和/或探针：
优选地，所述引物的上游引物具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
I.具有SEQ ID NO：1、4、9或12任一所示的核苷酸序列；
II.如I所示序列的互补序列；
优选地，所述引物的下游引物具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
III.具有SEQ ID NO：2、5、6、7、8、10或13任一所示的核苷酸序列；
IV.如III所示序列的互补序列；
优选地，所述引物选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ IDNO：5、SEQID NO：4和SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：4和SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：9和SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：9和SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12和SEQ ID NO：13所示的任意一对引物对；
优选地，所述引物选自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6，或SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的引物对；
优选地，所述引物选自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6所示的引物对；
优选地，所述探针具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
V.具有SEQ ID NO：3或11任一所示的核苷酸序列；
VI.如V所示序列的互补序列。
5.一种包含权利要求1所述的引物、或权利要求2所述的探针、或权利要求4所述的甲基化检测试剂的试剂盒；
优选地，所述试剂盒包括：第一容器，其包含用于扩增的引物对；第二容器，其包含探针。
6.如权利要求1所述的引物，权利要求2所述的探针，权利要求4所述的甲基化检测试剂，或权利要求5所述的试剂盒，在制备宫颈病变检测试剂中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述试剂针对的检测样本选自组织、体液或脱落细胞；
优选地，所述组织选自宫颈组织；
优选地，所述脱落细胞选自宫颈脱落细胞；
优选地，所述体液选自血液、血清、血浆、细胞外液、组织液、淋巴液、脑脊液或房水中的至少一种；
优选地，所述排泄物选自痰液、尿液、唾液或粪便中的至少一种。
8.一种宫颈病变的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括如权利要求1所述的引物，权利要求2所述的探针，权利要求4所述的甲基化检测试剂，或权利要求5所述的试剂盒。
9.一种宫颈病变检测系统，其特征在于，所述的系统含有：
1)OPCML的甲基化检测构件；
2)数据处理构件；
3)结果输出构件；
所述的甲基化检测构件含有权利要求1所述的引物、或权利要求2所述的探针、或权利要求4所述的甲基化检测试剂、或权利要求5所述的试剂盒；
优选地，所述的数据处理构件被配置于：a.接收待测样本及正常对照样本的测试数据；b.储存待测样本以及正常对照样本的测试数据；c.比对同种类型的待测样本以及正常对照样本的测试数据；d.根据比对结果，响应于测试者罹患宫颈病变的概率或者可能性；
优选地，所述的结果输出构件用于输出宫颈病变的患病风险和/或宫颈病变类型；
优选地，所述的数据处理构件的判断标准为：根据界值判断病变标本和正常标本；
优选地，宫颈脱落细胞中，若待测样本的测试数据小于或等于界值，则结果输出构件输出待测样本输出宫颈病变的患病风险高；
若待测样本的测试数据大于界值，则结果输出构件输出待测样本输出宫颈病变的患病风险低。
10.如权利要求9所述的宫颈病变检测系统，其特征在于，所述检测系统对的检测样本选自组织、体液或脱落细胞；
优选地，所述组织选自宫颈组织；
优选地，所述脱落细胞选自宫颈脱落细胞；
优选地，所述体液选自血液、血清、血浆、细胞外液、组织液、淋巴液、脑脊液或房水中的至少一种；
优选地，所述排泄物选自痰液、尿液、唾液或粪便中的至少一种。
11.如权利要求6所述的应用、或权利要求8所述的检测试剂，或权利要求9所述的宫颈病变检测系统，其特征在于，所述宫颈病变选自高级别鳞状上皮内瘤变和/或宫颈癌；
优选地，所述高级别鳞状上皮内瘤变选自CIN2，CIN2-3，CIN3中的一种或多种。
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