CN116121119B - 一种治疗腹泻的长双歧杆菌bc012及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物技术领域。本发明公开了一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012，所述长双歧杆菌BC012于2021年10月25日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.23663。本发明的长双歧杆菌BC012具有良好的耐胃酸、耐胆盐能力，并可以改善腹泻。本发明还提供了一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012的应用，可用于制备改善腹泻的食品或药物。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其是涉及一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012及其应用。
背景技术
腹泻是常见的消化系统疾病之一，其中，由于细菌引起的腹泻占据主要地位，最为常见的细菌性痢疾病原体包括大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌等。产生肠毒素大肠杆菌是发展中国家儿童特有的腹泻和发育迟缓的主要原因。当前在治疗腹泻时，多使用抗生素，但是抗生素对于儿童或婴儿来说，具有很大的副作用，并且成本高，还易出现耐药性等问题。
双歧杆菌是人或其他动物肠道内的主要菌群，在宿主体内可以稳定存在，是一种既不产生内、外毒素，也不产生致病物质和有害物质的益生菌，对于维持机体的健康有重要意义。与普通的药物相比，双歧杆菌具有安全性高、无副作用、不会出现耐药性及成本低的优势，并且可以预防或者治疗某些疾病，在公开号为CN108220206A的专利申请文件中，长双歧杆菌YS108R具有很好的预防或治疗结肠炎的功效，在公开号为CN113005049A的专利申请中，短双歧杆菌CCFM1151具有缓解腹泻的作用。而关于长双歧杆菌BC012是否具有治疗结肠炎或缓解腹泻的功效还未有报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012及其应用，具有较强的胃酸及胆盐耐受能力，可以有效改善腹泻。
为实现上述目的，本发明提供了一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012及其应用，所述长双歧杆菌BC012已于2021年10月25日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.23663。
优选的，所述长双歧杆菌BC012的16s rRNA的序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了上述任一所述的一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012在制备治疗腹泻药物中的应用。
因此，本发明采用上述一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012及其应用，其技术效果如下：
(1)长双歧杆菌BC012可以改善腹泻等问题。
(3)长双歧杆菌BC012可用于药物的制备，所制得的药物同样具有改善腹泻的功效。
下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
图1是本发明长双歧杆菌BC012耐胃酸示意图；
图2是本发明长双歧杆菌BC012耐胆盐示意图；
图3是本发明不同组腹泻小鼠粪便含水率示意图；
图4是本发明不同组腹泻小鼠炎症因子水平示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其他实施方式，都属于本发明所保护的范围。
本发明的长双歧杆菌BC012具有较强的胃酸及胆盐耐受能力，可以有效改善腹泻。
本发明的新菌株长双歧杆菌BC012已于2022年10月25日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.23663。
长双歧杆菌BC012的16s rRNA的序列如SEQ ID NO.1所示。
实施例一
菌种活化：将长双歧杆菌接种与MRS液体培养基中在37℃下培养，以1％的接种量传代2次后，保存备用。
(一)长双歧杆菌BC012耐胃酸性能试验
配置胃液：通过NaCl和胃蛋白酶配置模拟胃液，用适量盐酸调整pH值分别为2、3、4，用0.2μm微孔滤膜过滤后待用。
将试验菌株接种与MRS液体培养基中，37℃下培养17-18h，10000g离心15min，去上清，称量菌体湿重，按照0.1g/ml的比例重新悬浮菌体与生理盐水中作为对照组，在按照1:10的比例分别加入到pH值为2、3、4的模拟胃液中，充分混匀后，置于37℃恒温培养箱中培养。
由图1可知，培养2h后，长双歧杆菌BC012在胃液pH值为2时，存活率为9.54％左右；在胃液pH值为3时，存活率为48.55％左右，在胃液pH值为4时，存活率为96.51％左右，表明长双歧杆菌BC012有较强的的耐胃酸能力。
(二)长双歧杆菌BC012耐胆盐性能试验
将试验菌株分别接入灭菌的含有0.1％、0.2％、0.3％胆盐的MRS液体培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养2h。
由图2可知，培养2h后，长双歧杆菌BC012在胆盐浓度为0.1％时，存活率为95.78％左右；在胆盐浓度为0.2％时，存活率为49.66％左右，在胆盐浓度为0.3％时，存活率为2.31％左右，表明长双歧杆菌BC012有较强的耐胆盐能力。
实施例二
(一)长双歧杆菌BC012对腹泻小鼠粪便含水量的影响
选取40只雄性6-8周龄健康小鼠，小鼠分别在温度为25±2℃、湿度为60±5％，光暗循环12h的房间内。将所有小鼠随机分成4组，每组10只。分别是空白对照组、模型组、长双歧杆菌BC012+抗生素组、短双歧杆菌CCFM1151+抗生素组。
试验分为3周。第一周为适应性饲养，空白对照组从试验开始到试验结束每天灌胃0.2ml含有132g/L的脱脂乳、19g/L的海藻糖和19g/L的蔗糖保护剂溶液。模型组从试验开始到试验结束每天灌胃0.2ml含有132g/L的脱脂乳、19g/L的海藻糖和19g/L的蔗糖保护剂溶液(不包括抗生素处理的3天)，长双歧杆菌BC012+抗生素组每天灌胃0.2ml的长双歧杆菌BC012菌液。短双歧杆菌CCFM1151+抗生素组每天灌胃0.2ml的短双歧杆菌CCFM1151菌液。第2周到第3周为造模期，在造模第1-3天，在小鼠饮用水中加入5g/L的抗生素，破坏小鼠体内的正常菌群，造模第4-7天，用不含抗生素的无菌水代替含有抗生素的水作为小鼠饮用水，并对小鼠禁食12h，12h后给所有小鼠灌胃0.2ml浓度为1.2*10 11 CFU/ml的ETEC078：K80悬液，连续灌胃4天，1天2次，每次间隔时间2h。
试验结束后，收集所有小鼠的粪便，通过冻干机测定小鼠粪便的含水率，结果如图3所示。空白对照组小鼠的粪便含水率为63.5％。模型组小鼠的粪便含水率为72.5％，与空白对照组有显著差异(P<0.05)。长双歧杆菌BC012+抗生素组小鼠的粪便含水率为64.2％，与空白对照组无显著差异(P>0.05)。短双歧杆菌CCFM1151+抗生素组小鼠粪便含水率为64.5％，与空白对照组有显著性差异(P<0.05)，与长双歧杆菌BC012+抗生素组小鼠的粪便含水率无显著性差异(P>0.05)
(二)长双歧杆菌BC012对腹泻小鼠血清中炎症因子水平的影响
试验结束后，处死小鼠，取血清，通过试剂盒测定每组小鼠血清中TNFα和白细胞介素10的含量，检测结果如图4所示。
对照组小鼠血清中的TNFα浓度为80.5pg/mL，模型组小鼠血清中TNFα浓度为177.5pg/mL，与空白对照组小鼠有显著差异(P<0.05)。长双歧杆菌BC012+抗生素组小鼠血清中TNFα浓度为90.6pg/mL，与空白对照组小鼠无显著差异(P>0.05)，与模型组小鼠有显著差异(P<0.05)，说明长双歧杆菌BC012降低了促炎症因子水平。短双歧杆菌CCFM1151+抗生素组小鼠血清中TNFα浓度为89.7pg/mL，与空白对照组小鼠无显著差异(P>0.05)，与模型组小鼠有显著差异(P<0.05)。
空白对照组组小鼠血清中白细胞介素10浓度为106.5pg/mL，长双歧杆菌BC012+抗生素组小鼠血清中白细胞介素10浓度为145.8pg/mL。模型组小鼠血清中白细胞介素10浓度为72.5pg/mL。空白对照组、长双歧杆菌BC012+抗生素组白细胞介素10与模型组均有显著性差异(P<0.05)，并且空白对照组和长双歧杆菌BC012+抗生素组无显著性差异(P>0.05)，说明长双歧杆菌BC012提高了腹泻小鼠抗炎症因子水平。短双歧杆菌CCFM1151+抗生素组小鼠血清中白细胞介素10浓度为142.9pg/ml。与长双歧杆菌BC012+抗生素组小鼠血清中白细胞介素10无显著差异(P>0.05)
(三)长双歧杆菌BC012对腹泻小鼠肠道菌群多样性的影响
选取40只雄性6-8周龄健康小鼠，小鼠分别在温度为25±2℃、湿度为60±5％，光暗循环12h的房间内。将所有小鼠随机分成4组，每组10只。分别是空白对照组、模型组、长双歧杆菌BC012+抗生素组、短双歧杆菌CCFM1151+抗生素组。
试验分为3周。第一周为适应性饲养，空白对照组从试验开始到试验结束每天灌胃0.2ml含有132g/L的脱脂乳、19g/L的海藻糖和19g/L的蔗糖保护剂溶液，模型组从试验开始到试验结束每天灌胃0.2ml含有132g/L的脱脂乳、19g/L的海藻糖和19g/L的蔗糖保护剂溶液(不包括抗生素处理的3天)，长双歧杆菌BC012+抗生素组每天灌胃0.2ml的长双歧杆菌BC012菌液，短双歧杆菌CCFM1151+抗生素组每天灌胃0.2ml的短双歧杆菌CCFM1151菌液。第2周到第3周为造模期，在造模第1-3天，在小鼠饮用水中加入5g/L的抗生素，破坏小鼠体内的正常菌群，造模第4-7天，用不含抗生素的无菌水代替含有抗生素的水作为小鼠饮用水，并对小鼠禁食12h，12h后给所有小鼠灌胃0.2ml浓度为1.2*10 11 CFU/ml的ETEC078：K80悬液，连续灌胃4天，1天2次，每次间隔时间2h。
灌胃前，在无菌条件下采集各组小鼠粪便，-20℃保存，检测肠道菌群。
试验结束后，在无菌条件下采集每只小鼠的粪便，-20℃保存，检测肠道菌群，选取Shannon指数和Simpson指数分析菌群的多样性。
Shannon指数越大表示多样性高，Simpson指数越小表示多样性高，各组小鼠肠道菌群多样性检测结果如下表：
表1小鼠肠道菌群多样性结果
；
试验结束后，空白对照组小鼠肠道菌群的Shannon指数和Simpson指数无明显变化。模型组小鼠肠道菌群的Shannon指数较试验前有明显减小，Simpson指数较试验前有明显增加。长双歧杆菌BC012+抗生素组和短双歧杆菌CCFM1151+抗生素组小鼠肠道菌群的Shannon指数较试验前有明显增加，Simpson指数较试验前有明显减小，并且两组之间无显著差异。表明长双歧杆菌BC012有效促进了腹泻小鼠肠道内的菌群增加，与短双歧杆菌CCFM1151效果相同。
因此，本发明采用上述一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012及其应用，可以改善腹泻等问题。长双歧杆菌BC012可用于药物的制备，所制得的药物同样具有改善腹泻的功效。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。
Claims (2)
1.一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012，其特征在于：所述长双歧杆菌BC012于2021年10月25日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.23663；
所述长双歧杆菌BC012的16srRNA的序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种治疗腹泻的长双歧杆菌BC012在制备治疗腹泻药物中的应用。
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2022
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