CN116098918A - 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途 - Google Patents

一种胞磷胆碱药物组合物及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN116098918A
CN116098918A CN202211413497.0A CN202211413497A CN116098918A CN 116098918 A CN116098918 A CN 116098918A CN 202211413497 A CN202211413497 A CN 202211413497A CN 116098918 A CN116098918 A CN 116098918A
Authority
CN
China
Prior art keywords
citicoline
nmn
pharmaceutically acceptable
pharmaceutical composition
acceptable salt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211413497.0A
Other languages
English (en)
Inventor
庞涛
赵宁
谢璐阳
朱小峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Pharmaceutical University
Original Assignee
China Pharmaceutical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Pharmaceutical University filed Critical China Pharmaceutical University
Priority to CN202211413497.0A priority Critical patent/CN116098918A/zh
Publication of CN116098918A publication Critical patent/CN116098918A/zh
Priority to PCT/CN2023/111202 priority patent/WO2024098854A1/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种胞磷胆碱药物组合物及其用途，药物组合物由胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与烟酰胺单核苷酸NMN/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD+或其药学上可接受的盐组成；以及其制备在预防和/或治疗血管性痴呆的药物中的应用。本发明发现胞磷胆碱和NMN/NAD+联合给药比胞磷胆碱或NMN/NAD+单独给药具有更好的疗效，促进小鼠脑神经瘤细胞Neuro‑2a轴突长度明显增长，有轴突细胞数目明显增加，促进小鼠原代皮层神经元突起的延长及再生；可以显著缩短Morris水迷宫大鼠的逃避潜伏期，增加平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间，增加对新物体的探索的次数和时间；另外，可以显著改善大鼠脑内的免疫炎性微环境。

Description

一种胞磷胆碱药物组合物及其用途
技术领域
本发明涉及胞磷胆碱(Citicoline)和烟酰胺单核苷酸NMN/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD+联合给药在制备药物中的新应用，主要涉及胞磷胆碱和NMN/NAD+联合给药在制备治疗血管性痴呆的药物中的应用，属于医药技术领域。
背景技术
血管性痴呆(Vascular Dementia,VaD)是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成记忆、认知和行为等脑区低灌注的脑血管疾病所致的严重认知功能障碍综合征。根据流行病学调查显示，血管性痴呆是继阿尔茨海默病之后导致痴呆的第二大常见原因，约占15％的病例。发病率随着年龄的增长而上升，血管性痴呆的风险大约每5.3年翻一倍。此外，大约15-30％的受试者在中风后3个月出现痴呆。VaD不仅降低了患者自身的生存质量，而且也给患者家庭和社会带去沉重的负担。然而，与阿尔茨海默病不同，血管性痴呆没有获得许可的治疗方法。因此，临床迫切需要找到一种低风险、有效的药物来治疗血管性痴呆。
发明内容
血管性痴呆的发病机制主要与脑血流持续下降有关，慢性低灌注和血栓栓塞导致脑血流持续下降，缺氧，氧化应激并引发炎症反应。脑室周围白质区域、基底神经节和海马极易受到灌注不足引起的病变影响，前额叶-基底神经节回路的中断导致认知缺陷。脑白质极易受到缺氧诱发的损伤，引起脱髓鞘，脱髓鞘会延迟神经信号传递并导致认知丧失。炎症因子会进一步加重白质损伤(脱髓鞘、轴突缺失、少突胶质细胞变性)，神经发生、神经元祖细胞增殖、突触可塑性和树突状脊柱密度受损，引起神经变性和细胞死亡。
胞磷胆碱(Citicoline)是一种天然的内源性化合物，也是合成磷脂酰胆碱(细胞膜的成分之一)的前体。胞磷胆碱给药可以通过减少磷脂酰胆碱的分解来保护细胞膜。一旦被吸收，胞磷胆碱就会转化为胆碱和胞苷，它们在体内循环，进入全身循环并穿过血脑屏障，在大脑中重新合成为胞磷胆碱。多项研究表明，胞磷胆碱可有效治疗中枢神经系统疾病，包括急性和慢性脑缺血、脑出血、全脑缺氧和神经退行性疾病。胞磷胆碱治疗可减少梗塞面积(梗死组织区域)、降低游离脂肪酸浓度、减少神经功能缺损、恢复动物学习能力、减少谷氨酸介导的损伤、保持磷脂酰胆碱水平并提高神经元存活率。
烟酰胺单核苷酸(β-cotinamide mononucleotide)是一种自然存在的生物活性核苷酸，是辅酶1NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)的前体。在正常和病理生理条件下，腹腔给药NMN会迅速(在15分钟内)增加海马和下丘脑等大脑区域的NAD+水平，表明NMN可以通过BBB并有助于NAD+大脑中的生物合成。最近的研究表明，NMN可以改善大脑中的许多神经元功能。NMN给药改善了阿尔茨海默病小鼠和大鼠模型的认知和记忆。NMN保护神经元免受缺血或脑出血后的细胞死亡，并改善脑缺血中BBB完整性的丧失和组织纤溶酶原激活剂诱导的出血性转化。
近年研究发现，胞磷胆碱等脑保护剂联合用药对恢复脑功能有效，对提高患者的认知能力和智力水平有一定的作用。胞磷胆碱钠作为脑细胞代谢剂，通过降低脑血管的阻力，增加脑部血流来促进脑物质代谢，改善脑部血液循环，也可增强椎体系统的功能，改善运动麻痹，有促进大脑功能恢复和促进苏醒的作用，对脑中风所致的偏瘫可逐渐恢复四肢的功能，用于缺血性脑血管病和血管性痴呆的治疗。此外，胞磷胆碱钠可促进磷脂酰胆碱的合成，改善脑细胞营养。脑缺血会消耗脑组织NAD+导致生物能量学衰竭和细胞死亡。缺血后NAD+水平可以通过烟酰胺单核苷酸来补充，增加的NAD+水平促进神经血管单元中SIRT1的激活。此外，烟酰胺单核苷酸还具有保护脑细胞内线粒体的作用，产生足够能量以恢复神经传导功能。两种药物组分配伍的目的在于能量保证及脑细胞营养代谢两方面的互相协同，使得脑血管通过胞磷胆碱钠促进脑细胞代谢，并通过烟酰胺单核苷酸提供NAD+，使大脑的脑细胞恢复正常功能和苏醒，从而对脑血管疾病产生长久有效的治疗效果，避免单种药物治疗效果差、易复发。因此，本发明将胞磷胆碱与NMN/NAD+联用来制备预防血管性痴呆的药物，可能会产生良好的临床效果。
迄今为止，并没有相关论文阐述胞磷胆碱和NMN/NAD+在血管性痴呆上的应用，本发明的核心创新内容就在于胞磷胆碱和NMN/NAD+联用可以用于治疗血管性痴呆，可以改善慢性脑低灌注大鼠的行为认知能力，并改善大鼠脑内的神经免疫炎性微环境，这是目前为止尚未证明的新用途。
Figure BDA0003939668490000021
Figure BDA0003939668490000031
基于以上情况，本发明提供了一种胞磷胆碱药物组合物及其用途，从而为血管性痴呆的治疗提供新的治疗药物。
为此，本发明提供了如下技术方案：
一种药物组合物，所述药物组合物由胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与烟酰胺单核苷酸NMN/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD+或其药学上可接受的盐组成；所述胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与NMN/NAD+或其药学上可接受的盐的摩尔比为1:1至10:1，其中胞磷胆碱或其药学上可接受的盐以胞磷胆碱计，NMN/NAD+或其药学上可接受的盐以NMN/NAD+计。
其中，所述胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与NMN/NAD+或其药学上可接受的盐的摩尔比可以是1:1至10:1中的任何一个比例，包括但并不仅限于1:1、2:1、3:1、3.1：1、3.2：1、3.3：1、3.33：1、3.4：1、3.5：1、3.6：1、3.7：1、3.8：1、3.9：1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1等。
在一些实施例中，所述胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与NMN/NAD+或其药学上可接受的盐的摩尔比为1:1～8:1，优选为2:1～6:1，更优选2:1～4:1，最优选为3.3：1。
在一些实施例中，胞磷胆碱药学上可接受的盐选自胞磷胆碱钠盐。
第二方面，提供所述的药物组合物在制备预防和/或治疗血管性痴呆的药物中的应用。
所述药物组合物能够促进神经细胞系轴突再生，促进小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a轴突长度明显增长，有轴突细胞的数目增加，促进小鼠原代皮层神经元突起的延长及再生。
所述药物组合物能够显著缩短Morris水迷宫大鼠的逃避潜伏期，增加平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间，增加对新物体的探索的次数和时间。
所述药物组合物能够显著改善大鼠脑内的神经免疫炎性微环境，发挥治疗血管性痴呆的作用。所述药物组合物安全无毒，对体重及脏器系数没有影响。
提供了不同剂量的胞磷胆碱和NMN以及胞磷胆碱和NMN/NAD+联用在制备大鼠血管性痴呆模型药物上的应用，所述的治疗大鼠血管性痴呆是指药物组合物可以缩短Morris水迷宫大鼠的逃避潜伏期，增加平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间。
优选的，胞磷胆碱每日用药量是0.1～2mmol/kg，NMN每日用药量是0.1～2mmol/kg。
在以上方案的基础上，最优选的是，胞磷胆碱每日腹腔注射剂量是0.2～0.4mmol/kg，NMN每日腹腔注射剂量是0.1～0.4mmol/kg。
本发明的胞磷胆碱和NMN联用对大鼠血管性痴呆模型具有以下效果：
通过实验表明：胞磷胆碱和NMN联用能够促进神经细胞系轴突再生，促进小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a轴突长度明显增长，有轴突细胞的数目增加，促进小鼠原代皮层神经元突起的延长及再生。
胞磷胆碱和NMN联用能够显著缩短Morris水迷宫大鼠的逃避潜伏期，增加平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间，增加对新物体的探索的次数和时间。
胞磷胆碱和NMN联用能够显著改善大鼠脑内的免疫炎性微环境，发挥治疗血管性痴呆的作用。
本发明技术方案的第三方面是提供了一种药物制剂，活性成分为胞磷胆碱和NMN/NAD+药物组合，加入常规辅料，制备成临床可接受的胃肠道给药剂型、注射给药剂型等。
本发明公开了胞磷胆碱和NMN/NAD+联合给药在治疗大鼠血管性痴呆模型上的作用机制，发现胞磷胆碱和NMN/NAD+联合给药比胞磷胆碱或NMN/NAD+单独给药具有更好的疗效，促进小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a轴突长度明显增长，有轴突细胞数目明显增加，促进小鼠原代皮层神经元突起的延长及再生；可以显著缩短Morris水迷宫大鼠的逃避潜伏期，增加平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间，增加对新物体的探索的次数和时间；另外，胞磷胆碱和NMN/NAD+联合给药比胞磷胆碱或NMN/NAD+单独给药还可以显著改善大鼠脑内的免疫炎性微环境。因此，胞磷胆碱和NMN/NAD+联合给药可以用于治疗血管性痴呆，减少不良反应，为血管性痴呆治疗提供安全、有效的方法，具有1+1>2的意想不到的效果。
附图说明
图1.胞磷胆碱和NMN单给药对低血清诱导Neuro-2a细胞轴突再生模型的作用。A.胞磷胆碱单给药后用Image J软件测量Neuro-2a细胞轴突长度；B.胞磷胆碱单给药后用Image J软件计算细胞轴突的百分比；C.NMN单给药后用Image J软件测量Neuro-2a细胞轴突长度；D.NMN单给药后用Image J软件计算细胞轴突的百分比；*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比，N＝10。
图2.胞磷胆碱和NMN联合给药对低血清诱导Neuro-2a神经细胞轴突再生模型的作用。A.胞磷胆碱和NMN联合给药后用Image J软件测量Neuro-2a细胞轴突长度；B.胞磷胆碱和NMN联合给药后用Image J软件计算细胞轴突的百分比；*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比，N＝10。
图3.胞磷胆碱和NMN联合给药对低血清诱导小鼠原代神经元轴突再生模型的作用。A.胞磷胆碱和NMN单给药以及联合给药后用Image J软件测量小鼠原代神经元轴突长度；B.胞磷胆碱和NMN联合给药后用Image J软件计算神经细胞轴突的百分比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与空白组相比；&P<0.05，&&P<0.01和&&&P<0.001与Citicoline(2mM)组相比，N＝10。
图4.胞磷胆碱和NMN单给药与联合给药对大鼠血管性痴呆模型的学习记忆能力的影响。A.各组大鼠在水迷宫定位航行实验中的行为示意图；B.各组大鼠在水迷宫定位航行实验中的逃逸潜伏期；C.各组大鼠在新旧物体识别实验对新物体的探索的时间；D.各组大鼠在水迷宫空间探索实验中的行为示意图；E.各组大鼠在水迷宫空间探索实验中的平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间；*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比；&P<0.05，&&P<0.01和&&&P<0.001与Citicoline(200mg/kg)组相比，N＝6-15。
图5.胞磷胆碱和NMN单给药与联合给药对脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、CD206和IL-10基因表达的影响。A.给药后对TNF-α基因表达的影响；B.给药后对IL-1β基因表达的影响；C.给药后对IL-6基因表达的影响；D.给药后对CD206基因表达的影响；E.给药后对IL-10基因表达的影响；*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比；&P<0.05，&&P<0.01和&&&P<0.001与Citicoline(200mg/kg)组相比，N＝4。
图6.胞磷胆碱和NMN单给药与联合给药对大鼠安全性评价。A.各组大鼠体重统计；B.各组大鼠肝脏器系数；C.各组大鼠脾脏器系数；*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比，N＝6-15。
具体实施方式
为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
下面结合具体实施例对本申请做出详细说明。胞磷胆碱或其药学上可接受的盐在实施例中选取胞磷胆碱钠盐(分子量510.31)为例，简写为Cit，NMN/NAD+或其药学上可接受的盐在实施例中选取NMN(分子量334.22)为例。
根据胞磷胆碱和NMN联合给药对Neuro-2a神经细胞轴突再生的实验结果显示，胞磷胆碱和NMN的最优摩尔比为3.33:1。使用Q值公式计算药物的协同指数：Q＝E(a+b)/(Ea+Eb–Ea*Eb)，其中E(a+b)表示药物a(胞磷胆碱)与药物b(NMN)结合的抑制率(此处指神经细胞轴突增长率)，Ea和Eb分别表示药物a(胞磷胆碱)和药物b(NMN)的抑制率(此处指神经细胞轴突增长率)。药物协同指数结果判断：Q<0.85定义为拮抗作用，0.85<Q<1.15定义为相加作用，Q>1.15定义为协同作用。根据体外神经细胞轴突生长实验数据得出E(胞磷胆碱)＝449.76％，E(NMN)＝20.30％，E(胞磷胆碱+NMN)＝671.04％，最终计算出Q＝1.772>1.15，说明胞磷胆碱和NMN具有良好的药效协同作用。
根据体内实验结果，优选的，胞磷胆碱每日用药量是0.1～2mmol/kg，NMN每日用药量是0.1～2mmol/kg。
在以上方案的基础上，最优选的是，胞磷胆碱每日腹腔注射剂量是0.2～0.4mmol/kg，NMN每日腹腔注射剂量是0.1～0.4mmol/kg。
实施例1
一种药物组合物，由胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN组成；所述胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN的摩尔比为1:1。
实施例2
一种药物组合物，由胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN组成；所述胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN的摩尔比为2:1。
实施例3
一种药物组合物，由胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN组成；所述胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN的摩尔比为3.33:1。
实施例4
一种药物组合物，由胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN组成；所述胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN的摩尔比为4:1。
实施例5
一种药物组合物，由胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN组成；所述胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN的摩尔比为6:1。
实施例6
一种药物组合物，由胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN组成；所述胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN的摩尔比为8:1。
实施例7
一种药物组合物，由胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN组成；所述胞磷胆碱钠盐与烟酰胺单核苷酸NMN的摩尔比为10:1。
实施例8.胞磷胆碱和NMN单给药对低血清诱导Neuro-2a神经细胞轴突再生模型的作用。
实验方法：将Neuro-2a细胞接种在培养皿中，用含有0.1％FBS的MEM培养基诱导其轴突再生。然后将不同浓度(0.2mM、0.6mM、2mM)的胞磷胆碱和NMN分别作用于Neuro-2a细胞12、24及48h，对其进行明场拍摄，检测轴突长度以及有轴突细胞的数目是否显著增加。
结果如表1、表2和图1所示，作用时间为24h时，胞磷胆碱(2mM)能显著促进小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a轴突长度明显增长，有轴突细胞数目明显增加。*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比，N＝10。
组别 Axon length Percentage of the axon cells
Control 6.26±2.89 6.98±1.48
Model 27.97±4.71** 15.58±3.94**
Citicoline(0.2mM) 38.87±7.78# 23.48±3.15##
Citicoline(0.6mM) 96.56±7.99### 41.86±5.55###
Citicoline(2mM) 145.83±14.47### 50.63±8.29###
表1
组别 Axon length Percentage of the axon cells
Control 7.59±1.28 7.21±2.48
Model 25.54±6.19** 14.96±3.91**
NMN(0.2mM) 26.74±3.86 18.28±2.47#
NMN(0.6mM) 32.91±3.32# 21.87±2.39###
NMN(2mM) 42.06±3.39### 25.43±3.35###
表2
实施例9.胞磷胆碱和NMN联合给药对低血清诱导Neuro-2a神经细胞轴突再生模型的作用。
实验方法：将Neuro-2a神经细胞接种在培养皿中，用含有0.1％FBS的MEM培养基诱导其轴突再生。然后将不同比例(C1 or N1：2mM；C2 or N2：0.6mM；C3 or N3：0.2mM；C4 orN4：0.06mM；C5 or N5：0.02mM)的胞磷胆碱和NMN分别作用于Neuro-2a细胞12、24及48h，对其进行明场拍摄，检测轴突长度以及有轴突细胞的数目是否显著增加。
结果如表3和图2所示，作用时间为24h时，胞磷胆碱(2mM)+NMN(0.6mM)能显著促进小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a轴突长度明显增长，有轴突细胞数目明显增加。*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比，N＝10。
组别 Axon length Percentage of the axon cells
Control 6.14±2.46 5.86±2.6
Model 26.53±5.79** 14.11±1.99**
C1N1 194.49±12.36### 55.85±5.53###
C1N2 224.53±16.51### 68.47±5.32###
C1N3 160.42±12.3### 54.55±7.31###
C1N4 153.96±9.92### 53.33±6.24###
C1N5 142.06±10.08### 48.56±2.99###
C2N1 102.72±8.65### 35.18±2.99###
C2N2 94.76±8.89### 32.63±4.05###
C2N3 62.66±10.17### 31.41±4.77###
C2N4 54.05±8.46### 28.88±4.41###
C2N5 58.29±9.91### 28.4±2.61###
表3
实施例10.胞磷胆碱和NMN联合给药对低血清诱导小鼠原代皮层神经元轴突再生模型的作用。
实验方法：取怀孕15d的胎鼠，断头取脑，剥离脑膜。去掉除皮层以外的白质，用0.25％胰酶消化，滤网过筛，离心重悬，以1×106/ml的密度接种于L-多聚赖氨酸包被的24孔板上，然后将不同比例(1:1、2:1、4:1，总剂量为2mM)的胞磷胆碱和NMN分别作用于细胞12、24及48h，对其进行明场拍摄，检测神经细胞轴突长度以及有轴突细胞的数目是否显著增加。
结果如表4和图3所示，作用时间为24h时，Citicoline(1.6mM)+NMN(0.4mM)能显著促进小鼠原代皮层神经元轴突长度明显增长，有轴突细胞数目明显增加。#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与空白组相比；&P<0.05，&&P<0.01和&&&P<0.001与Citicoline(2mM)组相比，N＝10。
组别 Axon length Percentage of the axon cells
Control 30.41±5.57 6.96±3.48
Citicoline(2mM) 176.67±16.13### 26.37±5.49###
NMN(2mM) 54.21±13.76 18.83±2.65###
Cit(1mM)+NMN(1mM) 250.41±32.56### 36.67±3.74###
Cit(1.33mM)+NMN(0.67mM) 318.44±11.67### 44.59±7.62###
Cit(1.6mM)+NMN(0.4mM) 372.31±25.66###&&& 54.62±7.45###&&&
表4
实施例11.胞磷胆碱和NMN单给药与联合给药对大鼠血管性痴呆模型的学习记忆能力的影响。
实施材料：雄性SD大鼠，体重220-250g，购自杭州子源实验动物科技有限公司。
动物分组：雄性SD大鼠90只，将大鼠随机分为6组，每组15只，分为空白组、模型组、Citicoline(200mg/kg)组、NMN(500mg/kg)组、Citicoline(133.33mg/kg)+NMN(66.67mg/kg)组、Citicoline(160mg/kg)+NMN(40mg/kg)组。除空白组，其他5组以无菌器械沿颈部正中切开皮肤及皮下组织，在一侧颈前肌肉和侧方肌肉间隙钝性分离该侧颈总动脉结扎，另一侧操作同上，缝合皮肤。空白组只钝性分离肌肉后缝合皮肤。手术7天后，大鼠脑血流趋于平稳，减少至术前的65％，开始给药。空白组和模型组每日腹腔注射等量的生理盐水，其他4组分别注射对应剂量的药物，连续28天。并于手术28天后开始进行水迷宫测试和新旧物体识别实验，于手术35天处死大鼠取脑。
结果如表5、表6、表7和图4所示，手术造模后雄鼠的认知能力下降，而Citicoline(160mg/kg)+NMN(40mg/kg)能显著缩短Morris水迷宫大鼠的逃避潜伏期，增加平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间，增加对新物体的探索的次数和时间，且与Citicoline(200mg/kg)或NMN(500mg/kg)单独给药相比具有显著性优势，对血管性痴呆的治疗效果更加显著。*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比；&P<0.05，&&P<0.01和&&&P<0.001与Citicoline(200mg/kg)组相比，N＝6-15。
Figure BDA0003939668490000101
表5
Figure BDA0003939668490000102
表6
Figure BDA0003939668490000111
表7
实施例12.胞磷胆碱和NMN单给药与联合给药对脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、CD206和IL-10基因表达的影响。
动物造模及给药方法同实施例7。取脑组织，在电子天平上称20mg左右，加入Trizol进行裂解，提取脑组织总的RNA，逆转录成cDNA，配制反应体系，进行扩增，用来检测脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、CD206和IL-10基因表达的变化。
结果如表8、表9和图5所示，手术造模后大鼠脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平升高，胞磷胆碱(160mg/kg)和NMN(40mg/kg)联合给药能显著降低脑组织的TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平，且与胞磷胆碱(200mg/kg)或NMN(500mg/kg)单独给药相比具有显著性优势；手术造模后给药，胞磷胆碱(160mg/kg)和NMN(40mg/kg)联合给药可以显著升高脑组织的CD206和IL-10的mRNA表达水平，且与胞磷胆碱(200mg/kg)或NMN(500mg/kg)单独给药相比具有显著性优势。这些结果提示，与胞磷胆碱或NMN单独给药相比，胞磷胆碱和NMN联合给药后可以更显著地改善大鼠脑内免疫微环境，对血管性痴呆的治疗效果更加显著。*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001与空白组相比；#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001与模型组相比；&P<0.05，&&P<0.01和&&&P<0.001与胞磷胆碱(200mg/kg)组相比；$P<0.05，$$P<0.01和$$$P<0.001与NMN(500mg/kg)组相比，N＝4。
组别 TNF-α IL-1β IL-6
Sham 1±0.12 1±0.19 1±0.44
Vehicle 2.97±0.75*** 5.07±0.37*** 4.07±0.69***
Citicoline(200mg/kg) 2.76±0.43 3.51±0.64# 3.94±0.45
NMN(500mg/kg) 2.57±0.41 3.32±0.31## 3.64±0.48
Cit(160mg/kg)+NMN(40mg/kg) 1.4±0.31##&$ 2±0.49###&&$ 2.15±0.41#&$
表8
组别 CD206 IL-10
Sham 1±0.17 1±0.17
Vehicle 1.14±0.18 1.15±0.19
Citicoline(200mg/kg) 1.24±0.25 1.31±0.3
NMN(500mg/kg) 1.69±0.31 1.44±0.25
Cit(160mg/kg)+NMN(40mg/kg) 2.62±0.4###&&&$$ 2.24±0.52##&$
表9
实施例13.胞磷胆碱和NMN单给药与联合给药对大鼠毒性考察。
动物造模及给药方法同实施例7。每日统计各组大鼠体重，动物处死后，称量各只大鼠的脾重和肝重，计算各脏器系数并统计。
结果如表10和图6所示，各组体重均根据天数缓慢增长，各脏器系数统计没有显著性差异，表明胞磷胆碱和NMN各剂量均无毒性，符合临床安全用药标准。
Figure BDA0003939668490000121
Figure BDA0003939668490000131
表10
综上所述，本发明采用大鼠颈部双侧颈总动脉结扎的方式造成脑持续性低灌注，缺血缺氧性脑损伤，制作血管性痴呆模型，考察胞磷胆碱和NMN联合给药对血管性痴呆模型的治疗作用。结果显示，在体外胞磷胆碱和NMN联合给药可以显著促进神经细胞系轴突再生，促进小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a轴突长度明显增长，有轴突数目细胞明显增多，促进小鼠原代皮层神经元突起的延长及再生，与胞磷胆碱或NMN单独给药相比具有显著性优势。在体内胞磷胆碱(160mg/kg)和NMN(40mg/kg)联合给药能够显著缩短Morris水迷宫大鼠的逃避潜伏期，增加平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间，增加对新物体的探索的次数和时间；除此之外，胞磷胆碱(160mg/kg)和NMN(40mg/kg)能够显著改善大鼠脑内的神经免疫炎性微环境，对治疗血管性痴呆具有一定的参考意义。这些结果都说明胞磷胆碱和NMN联合用药在治疗血管性痴呆疾病上具有一定的药理药效协同作用。胞磷胆碱和NMN联合使用可进一步增加药效，减少不良反应，为治疗血管性痴呆疾病提供经济、稳定、安全、可靠的解决办法，具有1+1>2的意想不到的效果。
最后说明的是，以上实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其做出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物由胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与烟酰胺单核苷酸NMN/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD+或其药学上可接受的盐组成；所述胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与NMN/NAD+或其药学上可接受的盐的摩尔比为1:1至10:1，其中胞磷胆碱或其药学上可接受的盐以胞磷胆碱计，NMN/NAD+或其药学上可接受的盐以NMN/NAD+计。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与NMN/NAD+或其药学上可接受的盐的摩尔比为1:1～8:1。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与NMN/NAD+或其药学上可接受的盐的摩尔比为2:1～6:1。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述胞磷胆碱或其药学上可接受的盐与NMN/NAD+或其药学上可接受的盐的摩尔比为2:1～4:1，更优选为3.3：1。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，胞磷胆碱药学上可接受的盐选自胞磷胆碱钠盐。
6.权利要求1-5任一项所述的药物组合物在制备预防和/或治疗血管性痴呆的药物中的应用。
7.根据权利要求6的应用，其特征在于，所述药物组合物能够促进神经细胞系轴突再生，促进小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a轴突长度明显增长，有轴突细胞数目明显增加；
和/或，所述药物组合物能够促进神经细胞轴突再生，促进小鼠原代皮层神经元突起的延长及再生；
和/或，所述药物组合物能够显著缩短Morris水迷宫大鼠的逃避潜伏期，增加平台位置穿越次数、平台象限游泳距离和时间，增加对新物体的探索的次数和时间；
和/或，所述药物组合物能够显著改善大鼠脑内的免疫炎性微环境，发挥治疗血管性痴呆的作用。
8.一种药物制剂，其中含有治疗有效量的权利要求1-5任一项所述的药物组合物及药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。
9.根据权利要求8所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的剂型为胃肠道给药剂型、注射给药剂型或皮肤给药剂型，包括胶囊剂、散剂、片剂、颗粒剂、丸剂、注射剂、糖浆剂、口服液、吸入剂、霜剂、软膏剂、栓剂或贴剂。
10.权利要求8或9所述的药物制剂在制备预防和/或治疗血管性痴呆的药物中的应用。
CN202211413497.0A 2022-11-11 2022-11-11 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途 Pending CN116098918A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211413497.0A CN116098918A (zh) 2022-11-11 2022-11-11 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途
PCT/CN2023/111202 WO2024098854A1 (zh) 2022-11-11 2023-08-04 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211413497.0A CN116098918A (zh) 2022-11-11 2022-11-11 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116098918A true CN116098918A (zh) 2023-05-12

Family

ID=86260519

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211413497.0A Pending CN116098918A (zh) 2022-11-11 2022-11-11 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN116098918A (zh)
WO (1) WO2024098854A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024098854A1 (zh) * 2022-11-11 2024-05-16 中国药科大学 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1628690A (zh) * 2003-12-15 2005-06-22 孟繁浩 胞磷胆碱缓控释制剂及其制备方法
CN101444524A (zh) * 2008-12-30 2009-06-03 西南大学 胞二磷胆碱在治疗缺血性疾病中的新用途
CN101829134A (zh) * 2009-03-09 2010-09-15 北京利乐生制药科技有限公司 一种药用组合物新的临床用途
CN107412247A (zh) * 2016-05-23 2017-12-01 上海风劲生物医药科技有限公司 烟酰胺单核苷酸在制备预防或治疗脑出血药物中的应用
WO2020106746A1 (en) * 2018-11-19 2020-05-28 Heh Research & Development Services, Inc. Biologic enhancement formulation
CN113908169B (zh) * 2021-10-14 2023-04-25 中国药科大学 一种药物组合物及其用途
CN116098918A (zh) * 2022-11-11 2023-05-12 中国药科大学 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024098854A1 (zh) * 2022-11-11 2024-05-16 中国药科大学 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
WO2024098854A1 (zh) 2024-05-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2881112B1 (en) Pharmaceutical composition for promoting nerve injury restoration and application thereof
TW200800158A (en) Methods for neuroprotection
CN101716182B (zh) 含盐酸二甲双胍和维生素b12的组合药物
CN113413461A (zh) 抗老年痴呆药物及其制备方法
WO2024098854A1 (zh) 一种胞磷胆碱药物组合物及其用途
Eales, L. & Linder Porphyria-the acute attack-an analysis of 80 cases
WO2024078507A1 (zh) 麦角甾醇在制备防治胃溃疡药物中的应用
CN109966277B (zh) 一种治疗难治性癫痫的药物组合物及其应用
JPH08512311A (ja) 慢性疲労症候群治療用ヒ素医薬
CN112807292B (zh) 白首乌二苯酮在制备降尿酸药物中的应用
JPH10218775A (ja) 筋萎縮性側索硬化症治療剤
CN110151833A (zh) 一种治疗阿尔兹海默症的药物组合物
US20140234306A1 (en) Agent and Method for Reducing Inflammatory Markers
Stancioiu et al. Post-stroke recovery of motor function with a new combination of medicines-A pilot study
CN105935443A (zh) 一种治疗糖尿病性白内障的药物组合物
CN111329852A (zh) 4-苯基丁酸类衍生物在制备治疗脑缺血再灌注损伤的药物中的用途
CN102389564A (zh) 用于治疗骨髓增生异常综合征的组合物和方法及用途
CN115671107B (zh) 用于解酒的复方药物组合物
CN112972458B (zh) 一种组合物在制备阿尔兹海默症治疗药物中的应用
US4990513A (en) Antihypoxic drug and method of its application
CN113425723B (zh) Pim1小分子抑制剂在制备防治强直性脊柱炎产品中的应用
CN101347483A (zh) 一种治疗肠胃病的中草药组合物及其制备方法和用途
CN101411700B (zh) 5,7,4&#39;-三羟基二氢黄酮或其衍生物用于止痛的用途
JPH0826987A (ja) アシルカルニチン含有製剤
Sugar et al. Clotiapine Toxicosis in a Puppy

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination