CN116083574A - 长链非编码rna nonhsat017321在结肠癌诊断中的应用 - Google Patents

长链非编码rna nonhsat017321在结肠癌诊断中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于疾病诊断和分子生物学技术领域，具体涉及长链非编码RNA NONHSAT017321在结肠癌诊断中的应用。本发明通过研究发现，结肠癌患者外周血血清外泌体来源的lncRNA NONHSAT017321表达上调与结肠癌组织验证结果具有一致性，且检验结果的灵敏性高，特异性好，因此可作为结肠癌的诊断标志物，其不仅可用于结肠癌的早期诊断而且可以用于结肠癌患者的大规模筛查和患病风险的预测，为结肠癌的早期诊断和预测提供了强有力的技术支持，具有深远的临床意义和推广性。

Description

长链非编码RNA NONHSAT017321在结肠癌诊断中的应用
技术领域
本发明属于疾病诊断和分子生物学技术领域，具体涉及长链非编码RNANONHSAT017321在结肠癌诊断中的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
结肠癌是常见的消化系统肿瘤之一，近年来其发病率和死亡率不断上升，已成为重要的公共健康问题。目前，手术、化疗和放疗是结肠癌的主要治疗手段。虽然以手术为基础的综合治疗显著改善了结肠癌患者的预后，但由于早期没有明显的临床症状，大多数结肠癌患者初次诊断时已处于晚期，且存在远端转移，丧失了根治性手术的机会。大部分结肠癌患者预后差，死亡率高，5年生存率低。因此，探索新型诊断标志物对于改善结肠癌患者预后具有重要的临床价值。
外泌体(Exosomes)是一类直径为30-150nm的囊泡，含有RNA、脂质和蛋白质等成分。在血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中均有存在，可在体液中来回穿梭，在细胞之间运送遗传物质和蛋白质。肿瘤在生长过程中会不断地将外泌体释放到周围环境中去，同时外泌体可以在4℃条件下保存96小时或是-70℃下保存更长时间，而且通过在血清中分离外泌体进行结肠癌诊断克服了直接利用血液提取分子时血液中非检测物质的影响，使检验结果更真实精确。这些特点使得外泌体有助于肿瘤的早期诊断和预后判断。有文章报道通过研究在膀胱癌患者尿液来源的外泌体中发现了PCA-3、TMPRSS2两个生物标志物；在黑色素瘤患者血浆外泌体中肿瘤相关标志物CAV1表达水平明显增加，以此可诊断黑色素瘤；在肺癌模型发现外泌体中的miRNA可作为肺癌的标志物。然而，迄今为止，鲜有针对结肠癌诊断用外泌体标志物的报道。
发明内容
针对上述现有技术的不足，发明人经长期的技术与实践探索，提供长链非编码RNANONHSAT017321在结肠癌诊断中的应用。本发明通过研究发现，外周血血清外泌体来源的lncRNANONHSAT017321可用于结肠癌患者的诊断，血清来源的lncRNANONHSAT017321表达上调与结肠癌组织验证结果具有一致性，且检验结果的灵敏性高，特异性好。基于上述研究成果，从而完成本发明。
为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一个方面，提供检测lncRNA NONHSAT017321的物质在制备用于诊断、筛查、检测或监测结肠癌的产品中的应用。
其中，所述lncRNA NONHSAT017321其核苷酸序列如下所示：
GTTTTTTCAAATATTTAACATCCTTGCTTGGTTGAATCCACGGATGCGGAACCCATAGATCCTGAGGGCCGACTCTACCCCCTTCTGAGAACATCCCCCACAGATGGCTGGGCTGGGTGGAGTCTGGATAGTTAGACCCCAGCACCTGTGAGTCACGCAGACCCAGAAGCAGGAAGCAGACAGTAAGTGACAGCCGCTAAGACGCAGGGAGGCTGGGCCAGGGCTGGGGCACGAGGGTACCTTCACCTGGGCGTCAGAAGCACTTGAGAGGACAGGGGCTGCTG(SEQ IDNO.1)。
其中，所述lncRNA NONHSAT017321优选来源于受试者的血清外泌体。
本发明的第二个方面，提供一种诊断、筛查、检测或监测结肠癌的产品，其至少包含基于RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、基因芯片和基因测序检测lncRNA NONHSAT017321的表达水平的物质。
本发明的第三个方面，提供一种检测试剂，所述检测试剂包含用于检测lncRNANONHSAT017321的物质；
本发明的第四个方面，提供一种检测试剂盒，所述试剂盒包含上述检测试剂。
本发明的第五个方面，提供一种诊断、筛查、检测或监测结肠癌的系统，所述系统至少包括：
i)分析单元，所述分析单元包含：用于确定受试者的待测样品中选自上述lncRNANONHSAT017321表达水平的检测物质，以及；
ii)评估单元，所述评估单元包含：根据i)中确定的所述lncRNA表达水平判断所述受试者情况。
本发明的第六个方面，提供上述lncRNANONHSAT017321作为靶点在制备或筛选结肠癌药物中的应用。
与现有技术方案相比，上述一个或多个技术方案具有如下有益效果：
上述技术方案通过荧光定量PCR分析发现lncRNANONHSAT017321在结肠癌组织与其癌旁组织中存在差异性表达，且在结肠癌组织中表达上调。其次通过荧光定量PCR分析发现lncRNANONHSAT017321在结肠癌组织与正常人的结肠组织中存在差异性表达，且在结肠癌组织中表达上调。进一步在外周血血清中分离外泌体用于lncRNANONHSAT017321的检测，发现lncRNA NONHSAT017321的表达与正常人的表达存在明显的差异，且与组织中的检测结果相一致。
上述技术方案可以检测各人群中lncRNANONHSAT017321的表达水平，从而预测结肠癌患者的患病风险，筛查高危人群，并对结肠癌患者做出早期、快速的无创性诊断。
上述技术方案对结肠癌早期诊断特异性好，可达96％，灵敏度可达92％，只需在外泌体提取RNA即可检测lncRNANONHSAT017321的表达水平，操作简单，稳定性好。不仅可用于结肠癌的早期诊断而且可以用于结肠癌患者的大规模筛查和患病风险的预测，为结肠癌的早期诊断和预测提供了强有力的技术支持，具有深远的临床意义和推广性。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例2中实时荧光定量PCR分析lncRNA NONHSAT017321在结肠癌组织与癌旁组织中的表达差异；
图2为本发明实施例3中实时荧光定量PCR分析lncRNA NONHSAT017321在结肠癌组织与正常结肠组织中的表达差异；
图3为本发明实施例4中实时荧光定量PCR分析外泌体来源的lncRNANONHSAT017321在结肠癌患者与正常人中的表达差异；
图4为本发明实施例4中ROC分析外泌体来源的lncRNA NONHSAT017321对结肠癌早期诊断的特异性和灵敏性。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。下列具体实施方式中如果未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域技术内的分子生物学的常规方法和条件，这种技术和条件在文献中有完整解释。参见例如Sambrook等人，《分子克隆：实验手册》中所述的技术和条件，或按照制造厂商所建议的条件。
结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照销售公司所推荐的条件；实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径购买得到。
本领域中已知的有数种lncRNA的序列，应理解，以下所示的各个lncRNA的数据库登录号是人来源的lncRNA。然而，这些数据库条目还提供了例如以下不同来源的各自lncRNA的数据库登录号：例如任何哺乳动物、爬行动物、或鸟类来源的lncRNA。
术语“表达水平”是指在特定的时间点体内或样品中存在的基因产物的量。表达水平可以例如通过由基因表达的蛋白质或mRNA来测量/量化/检测。可以例如如下量化表达水平：用相同样品或参考样品(例如，在相同时间从同一个体得到的样品或相同样品的相同尺寸(重量、体积)的部分)中相同类型基因产物的总量(总蛋白质或mRNA)归一化样品中存在的目的基因产物的量，或者确定目的基因产物的量/限定的样品尺寸(重量、体积等)。可以通过本领域已知的任何方法来测量或检测表达水平，所述方法例如用于目的基因产物的直接检测和量化的方法(如质谱)，或者通常通过目的基因产物与对目的基因产物具有特异性的一种或更多种不同分子或检测装置(例如，引物、探针、抗体、蛋白质)结合而工作的用于间接检测和测量目的基因产物的方法。技术人员还已知的是确定基因拷贝的水平，其还包括确定一个或更多个片段的不存在或存在(例如，通过核酸探针或引物，例如定量PCR、多重连接依赖性探针扩增PCR等)。
术语指标的水平“上调”、“升高”或“提高”是指与参照相比，样品中这样的指标的水平降低。
术语指标的水平“下调”、“降低”或“下降”是指与参照相比，样品中这样的指标的水平降低。
在原理上，可以通过应用标准统计学方法基于给定lncRNA的平均值或中值来对本发明所指定的对象组或群组计算参考量。特别地，例如旨在或不旨在判断事件的方法的测试的精确度最好由其接受者操作特征(receiver-operating characteristic，ROC)来描述(尤其参见Zweig 1993，Clin.Chem.39：561-577)。ROC图是由在所观察到的整个数据范围上不断改变判定阈值获得的所有灵敏度相对于特异性对的图。诊断方法的临床表现取决于其精确度，即其将对象正确地分配到某种预后或诊断的能力。ROC图通过在适于区分的完整阈值范围将灵敏度相对于1-特异性绘图来表示两个分布之间的重叠。在y轴上是灵敏度或真阳性分数，其被定义为真阳性测试结果数与真阳性数和假阴性测试结果数之和的比率。这在疾病或病症的存在下也被称为阳性。其单独地由受影响的亚组计算。在x轴上是假阳性分数或1-特异性，其被定义为假阳性结果数与真阴性数和假阳性结果数之和的比率。其是特异性的指数，并且完全由未受影响的亚组计算。由于真和假阳性分数是完全单独地进行计算，因此通过使用来自两个不同亚组的测试结果，ROC图独立于群组中事件的普遍性。ROC图上的每个点表示对应于特定判定阈值的灵敏度/-特异性对。具有完美辨别(在两个结果分布中没有重叠)的测试具有经过左上角的ROC图，其中真阳性分数为1.0或100％，假阳性分数为0(完美特异性)。没有辨别(两组结果的分布相同)测试的理论图为从左下角到右上角的45°对角线。大多数图落在这两个极端之间。如果ROC图完全落在45°对角线之下，则这容易地通过将“阳性”标准从“大于”反转为“小于”来矫正，反之亦然。定性地，图越靠近左上角，测试的整体精确度就越高。根据期望的置信区间，可以从ROC曲线推导出阈值，允许分别用灵敏度和特异性的适当平衡诊断或预测给定事件。因此，可以优选地通过如上所述建立用于所述群组的ROC并从其推导出阈值量来生成用于本发明方法的参考。根据诊断方法的期望灵敏度和特异性，ROC图允许推导出合适的阈值。优选地，参考量位于这样的值范围内，其表示至少75％的灵敏度和至少45％的特异性、或者至少80％的灵敏度和至少40％的特异性、或者至少85％的灵敏度和至少33％的特异性、或者至少90％的灵敏度和至少25％的特异性。
如本发明所使用的术语“试剂盒”是指优选地单独提供或提供在单个容器内的上述组分的集合。容器还优选地包含有用于实施本发明方法的说明。在本说明书中已经给出了试剂盒的这些组分的实例及其使用方法。优选地，试剂盒包含在即用型制剂中的上述组分。优选地，试剂盒可另外地包括说明书，例如用于调节组分以及用于解释关于通过本发明方法所提供诊断的任何测定的结果的用户手册。特别地，这样的手册可以包括用于将确定基因产物的量分配至诊断类型的信息。细节见于本说明书的别处。此外，这样的用户手册可以提供关于正确地使用试剂盒组分用于确定相应生物标志物的量的说明。用户手册可以以纸质或电子形式提供。本发明还涉及所述试剂盒在根据本发明的任何方法中的用途。
本发明的一个典型具体实施方式中，提供检测lncRNANONHSAT017321的物质在制备用于(辅助)诊断、筛查、检测或监测结肠癌的产品中的应用。本发明通过研究发现，外周血血清外泌体来源的lncRNANONHSAT017321表达上调与结肠癌组织验证结果具有一致性，且检验结果的灵敏性高，特异性好，可用于结肠癌患者的诊断，且受试者创伤性小，依从性更佳，非常适合结肠癌高危人群的筛查和早期诊断等。
其中，所述lncRNANONHSAT017321其核苷酸序列如下所示：
GTTTTTTCAAATATTTAACATCCTTGCTTGGTTGAATCCACGGATGCGGAACCCATAGATCCTGAGGGCCGACTCTACCCCCTTCTGAGAACATCCCCCACAGATGGCTGGGCTGGGTGGAGTCTGGATAGTTAGACCCCAGCACCTGTGAGTCACGCAGACCCAGAAGCAGGAAGCAGACAGTAAGTGACAGCCGCTAAGACGCAGGGAGGCTGGGCCAGGGCTGGGGCACGAGGGTACCTTCACCTGGGCGTCAGAAGCACTTGAGAGGACAGGGGCTGCTG(SEQ IDNO.1)。
在一些实施方式中，所述lncRNANONHSAT017321优选来源于受试者的血清外泌体。本发明通过试验证明，全血中RNA的含量很低，直接处理抗凝的全血，即直接加入如Trizol裂解液，这样处理的血液体积有限，一般1mL Trizol只能处理100-200μl血液，提取RNA的量很少而且浪费试剂，非常不利于实际检测。而血清中外泌体含量较高，只需500μL血清便可分离出足够外泌体用于lncRNANONHSAT017321的表达水平检测，且血清外泌体中lncRNANONHSAT017321与结肠组织(细胞)中的lncRNA NONHSAT017321具有一致性，说明该方法具有极佳的可操作性。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种(辅助)诊断、筛查、检测或监测结肠癌的产品，其至少包含基于RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、基因芯片和基因测序检测lncRNANONHSAT017321的表达水平的物质。
在一些实施方式中，所述产品包括但不限于检测待测样品中所述lncRNANONHSAT017321表达水平的引物、探针、芯片、核酸膜条、制剂或试剂盒。
其中，所述引物具有如SEQ ID NO.2-3所示的核苷酸序列。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种检测试剂，所述检测试剂包含用于检测lncRNA NONHSAT017321的物质；
在一些实施方式中，所述物质包含引物，所述引物具有如SEQ ID NO.2-3所示的核苷酸序列。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种检测试剂盒，所述试剂盒包含上述检测试剂，所述检测试剂盒可以为实时荧光定量PCR检测试剂盒，其还可以包含诸如实时荧光定量SYBR染料、内参(如GAPDH)引物、RNA提取用试剂、反转录试剂、缓冲液等，这对本领域技术人员而言是容易实现的，在此不做具体限定。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种(辅助)诊断、筛查、检测或监测结肠癌的系统，所述系统至少包括：
i)分析单元，所述分析单元包含：用于确定受试者的待测样品中选自上述lncRNANONHSAT017321表达水平的检测物质，以及；
ii)评估单元，所述评估单元包含：根据i)中确定的所述lncRNA NONHSAT017321表达水平判断所述受试者情况。
本发明的又一具体实施方式中，所述评估单元具体评估流程包括：
与参照相比，所述受试者的待测样品中的lncRNANONHSAT017321表达水平上调，则所述受试者为或候选为结肠癌患者；反之，则所述受试者不为或不候选为结肠癌患者。
其中，“参照”可以是合适的对照样品，例如来自正常健康受试者的样品，其没有结肠癌相关症状并且没有异常的生理及病理学发现，参照也可以是来自同一受试者的在表现出病症或疾病症状之前或在诊断出结肠癌之前的样品。参照可以是经标化的样品，例如，包含来自若干健康受试者样品的材料或数据的样品，这些健康受试者没有结肠癌症状，也没有相关生理及病理学发现。
在一些实施方式中，所述待测样品具体可以为受试者外周血的血清外泌体。本发明通过研究证明，lncRNANONHSAT017321在结肠癌患者结肠癌组织以及血清外泌体中均显著高表达，利用血清外泌体中lncRNA NONHSAT017321的表达水平对结肠癌早期的诊断ROCcurve下方的面积(Area Under Roc Curve，AUC)可达0.9832，特异性可达96％，灵敏度达到92％。因此血清外泌体来源的lncRNA NONHSAT017321能较好地用于结肠癌的早期诊断。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述lncRNANONHSAT017321作为靶点在制备或筛选结肠癌药物中的应用。
在一些实施方式中，可以利用候选药物使用前和使用后对lncRNA NONHSAT017321的影响，从而确定候选药物是否可以用于预防或治疗结肠癌。
以下结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照销售公司所推荐的条件；在本发明没有特别限定，均可通过商业途径购买得到。
实施例1制备长链非编码RNA NONHSAT017321用于结肠癌高危人群的筛查、早期诊断或者结肠癌患者预后的试剂盒(50次反应)
1.Trizol试剂50mL
2.三氯甲烷22mL
3.异丙醇55mL
4.无水乙醇50mL
5.RNase-Free ddH2O 5mL
6.5×gDNAClean Reaction Mix 220μL
7.10×逆转录缓冲液2ml
8.10mM FQ-RT Primer mix 200ul
9.200U/μl Enzyme mix 50ul
10.2×Premix 500μL
11.10μM lncRNA NONHSAT017321实时荧光定量PCR特异性引物110μLNONHSAT017321Primer F 5'-CCACCTGTGCAGACTTGAGA-3'(SEQ ID NO.2)
NONHSAT017321Primer R 5'-TGGTCAAATCGTGGGGTGAG-3'(SEQ ID NO.3)
10.10μM GAPDH实时荧光定量PCR特异性引物110μL
GAPDH Primer F 5′-TGGTCACCAGGGCTGCTT-3′(SEQ ID NO.4)
GAPDH Primer R 5′-AGCTTCCCGTTCTCAGCCTT-3′(SEQ ID NO.5)实施例2LncRNANONHSAT017321在结肠癌组织与癌旁组织中的表达差异的验证
1、收集待测结肠癌组织与癌旁组织放入冻存管中，放至液氮中保存。
2、组织中RNA的抽提：取150mg标本于1.5mL EP管中，加入1.2mL Trizol经研磨超声处理后，加入240μL氯仿，用手剧烈震荡后4℃12000g离心20min；小心吸取上清于1.5mL无RNA酶EP管中，加入等体积异丙醇轻轻混匀，室温静置15min，4℃12000g离心15min；弃上清，加入750μl 75％乙醇(DEPC水稀释)重悬洗涤，4℃7500g离心8min，弃上清，重复1次。打开EP管于室温下晾干，加入DEPC水40-60μL溶解RNA。Nanodrop测定RNA的浓度及质量，OD260/280比值在1.8-2.0之间时RNA质量良好，-80℃保存。
3、LncRNA NONHSAT017321反转录：使用TIANGEN的反转录预混型试剂盒。
步骤1：去除基因组DNA
Figure BDA0003964428690000121
反应条件：42℃，6min；
步骤2：反转录反应
Figure BDA0003964428690000122
Figure BDA0003964428690000131
反应条件：42℃，1h；
4、金唯智生物科技有限公司合成的NONHSAT017321特异性引物进行实时定量PCR。10μL反应体系如下：
Figure BDA0003964428690000132
实时荧光定量PCR反应程序：95℃5min；，
Figure BDA0003964428690000133
5、-2ΔΔCT指标的测定：本实验数据采用相对定量的分析方法，GAPDH作为内参基因，数据利用软件SPSS进行分析。分析发现，与lncRNA NONHSAT017321在癌旁组织中的表达相比，50例结肠癌患者中lncRNA NONHSAT017321的表达明显上调，差异有统计学意义(P<0.001)。
实施例3LncRNA NONHSAT017321在结肠癌组织与正常结肠组织中的表达差异的验证
1、收集待测结肠癌组织与正常结肠组织放入冻存管中，放至液氮中保存。
2、组织中RNA的抽提：取150mg标本于1.5mL EP管中，加入1.2mL Trizol经研磨超声处理后，加入240μL氯仿，用手剧烈震荡后4℃12000g离心20min；小心吸取上清于1.5mL无RNA酶EP管中，加入等体积异丙醇轻轻混匀，室温静置15min，4℃12000g离心15min；弃上清，加入750μl 75％乙醇(DEPC水稀释)重悬洗涤，4℃7500g离心8min，弃上清，重复1次。打开EP管于室温下晾干，加入DEPC水40-60μL溶解RNA。Nanodrop测定RNA的浓度及质量，OD260/280比值在1.8-2.0之间时RNA质量良好，-80℃保存。
3、LncRNANONHSAT017321反转录：使用TIANGEN的反转录预混型试剂盒。
步骤1：去除基因组DNA
Figure BDA0003964428690000141
反应条件：42℃，6min；
步骤2：反转录反应
Figure BDA0003964428690000142
Figure BDA0003964428690000151
反应条件：42℃，1h；
4、金唯智生物科技有限公司合成的NONHSAT017321特异性引物进行实时定量PCR。10μL反应体系如下：
Figure BDA0003964428690000152
实时荧光定量PCR反应程序：95℃5min；，
Figure BDA0003964428690000153
5、-2ΔΔCT指标的测定：本实验数据采用相对定量的分析方法，GAPDH作为内参基因，数据利用SPSS进行分析。分析发现，与正常结肠组织相比，50例结肠癌患者中lncRNANONHSAT017321的表达明显上调，差异有统计学意义(P<0.001)。
实施例4血清外泌体来源的lncRNA NONHSAT017321用于结肠癌诊断的特异性、灵敏性的检测
1、血清中外泌体的分离
1.1外周血血清的分离：采用血液促凝管，采集待测个体血液2mL。采血后3500rpm离心10min，吸取血清放入1.5mL EP管中，-80℃冰箱保存。
1.2血清中外泌体的分离：取血清样本500μL中加入100μL的Total ExosomeIsolation Reagent，涡旋混匀，4℃反应30min。室温条件下10000g离心10min。EP管底部存有外泌体，用200μL PBS重悬外泌体。(选择已商品化的外泌体分离试剂盒)
2、外泌体中RNA的提取纯化(选择已商品化的外泌体分离纯化RNA试剂盒)
2.1外泌体中RNA的提取：加入200μL的2×Denaturing Solution混匀，冰上静置5min，再加入400μL的acid-Phenol:Chloroform，涡旋60s。室温条件下12000g离心10min，上清中含有RNA。
2.2RNA的纯化：吸取300μL上清液到无酶的EP管中，加入375μL的无水乙醇，两者混匀。将混合液加入过滤柱中，10000g离心15s，将收集管中的混合液倒掉。加入700μL的miRNAWash Solution 1，室温条件下10000g离心15s，倒掉收集管中的混合液。加入500μL WashSolution 2/3，室温10000g离心15s，重复此步骤。将过滤柱放进收集管中10000g离心1min。将过滤柱放入新的收集管中加入35μL的Elution Solution，室温10000g离心30s，即可得到纯化的RNA。
3、采用实施例2中步骤3进行反转录及实时定量的方法检测lncRNANONHSAT017321。
4、-2ΔΔCT指标的测定：本实验数据采用相对定量的分析方法，GAPDH作为内参基因，数据利用SPSS进行分析。分析发现：与正常人相比，50例患者血清外泌体中lncRNANONHSAT017321的表达差异明显(P<0.001),在结肠癌患者中表达上调，该结果与实施例2和实施例3组织中的检测结果相一致，说明通过检测血清外泌体来源的lncRNANONHSAT017321表达水平，即可判断该患者是否罹患结肠癌。同时，利用血清外泌体中lncRNA NONHSAT017321的表达水平对结肠癌早期的诊断ROC curve下方的面积(AreaUnder Roc Curve，AUC)可达0.9832，特异性可达96％，灵敏度达到92％。因此血清外泌体来源的lncRNA NONHSAT017321能较好地用于结肠癌的早期诊断。
本发明检测方法只需500μL血清便可分离出足够外泌体用于lncRNANONHSAT017321的表达水平检测，说明该方法具有较好地操作性。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.检测lncRNANONHSAT017321的物质在制备用于诊断、筛查、检测或监测结肠癌的产品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述lncRNA NONHSAT017321来源于受试者的血清外泌体。
3.一种诊断、筛查、检测或监测结肠癌的产品，其特征在于，其至少包含基于RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、基因芯片和基因测序检测lncRNA NONHSAT017321的表达水平的物质。
4.如权利要求3所述的产品，其特征在于，所述产品包括检测待测样品中lncRNANONHSAT017321表达水平的引物、探针、芯片、核酸膜条、制剂或试剂盒。
5.一种检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包含用于检测lncRNA NONHSAT017321的物质；
所述物质包含引物，所述引物具有如SEQ ID NO.2-3所示的核苷酸序列。
6.一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求5所述检测试剂。
7.一种诊断、筛查、检测或监测结肠癌的系统，其特征在于，所述系统至少包括：
i)分析单元，所述分析单元包含：用于确定受试者的待测样品中选自上述lncRNANONHSAT017321表达水平的检测物质，以及；
ii)评估单元，所述评估单元包含：根据i)中确定的所述lncRNA NONHSAT017321表达水平判断所述受试者情况。
8.如权利要求7所述的系统，其特征在于，所述待测样品具体为血清外泌体。
9.如权利要求7所述的系统，其特征在于，所述评估单元具体评估流程包括：
与参照相比，所述受试者的待测样品中的lncRNA NONHSAT017321表达水平上调，则所述受试者为或候选为结肠癌患者；反之，则所述受试者不为或不候选为结肠癌患者。
10.lncRNANONHSAT017321作为靶点在制备或筛选结肠癌药物中的应用。
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