CN116083452B - 一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用 - Google Patents

一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116083452B
CN116083452B CN202211578674.0A CN202211578674A CN116083452B CN 116083452 B CN116083452 B CN 116083452B CN 202211578674 A CN202211578674 A CN 202211578674A CN 116083452 B CN116083452 B CN 116083452B
Authority
CN
China
Prior art keywords
carrot
dcga20ox2
growth
gibberellin
plants
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211578674.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116083452A (zh
Inventor
王广龙
熊爱生
贾敏
张万鹏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Agricultural University
Huaiyin Institute of Technology
Original Assignee
Nanjing Agricultural University
Huaiyin Institute of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Agricultural University, Huaiyin Institute of Technology filed Critical Nanjing Agricultural University
Priority to CN202211578674.0A priority Critical patent/CN116083452B/zh
Publication of CN116083452A publication Critical patent/CN116083452A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116083452B publication Critical patent/CN116083452B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
    • C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明公开了一种分离的胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。具体涉及到在胡萝卜中表达的DcGA20ox2的克隆、转基因载体的构建、胡萝卜的转化以及上述基因在调控转基因植株生长发育中的应用。通过实验验证该基因能够应用于植物生长发育调控中，为其在植物生长方面的研究提供了科学依据。

Description

一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用
技术领域
本发明涉及植物基因工程技术领域，特别是涉及一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用。
背景技术
胡萝卜（Daucuscarota L.）是伞形科（Apiaceae）一年或二年生草本植物，原产于亚洲西部，是世界十大蔬菜作物之一。我国目前胡萝卜栽培面积和产量均居世界首位。胡萝卜含有丰富的胡萝卜素和膳食纤维等营养物质，具有很高的营养价值和药用价值，深受广大消费者的喜爱。
赤霉素（Gibberellic acid, GA）是一种重要的植物激素，调控植物整个生命周期内的生理生化进程和器官形态建成，包括种子萌发、茎叶生长、开花与结果等。GA生物合成过程中的关键酶主要包括柯巴焦磷酸合酶（CPS）、内根—贝壳杉烯合成酶（KS）、内根—贝壳杉烯氧化酶（KO）、GA20–氧化酶（GA20ox）、GA–3β–羟基化酶（GA-3β- hydroxylase）等。其中GA20ox是重要的活性GA生物合成调控酶，属于可溶性的双加氧酶，它能在GA生物合成的最后阶段催化从GA12到GA9及GA53到GA20一系列的氧化反应，最后形成具有生物活性的赤霉素。
研究显示，GA20ox参与了植物生长发育的许多过程，如种子萌发，叶片伸展，开花和种子发育等。但是现有文献中还没有关于胡萝卜GA20ox基因的相关报道，这影响了利用该类基因调控胡萝卜植株生长发育的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因，以解决上述现有技术中所存在的问题，利用基因工程得到的含有该基因的转基因植株生长发育改变，表现为植株变高，地上部生物量增加，肉质根木质化程度加深等，说明该基因在植物株型调控研究方面具有广泛的应用前景。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2，其核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示。
本发明还提供一种胡萝卜赤霉素氧化酶，其由胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
本发明还提供一种重组载体，包含所述的胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2，优选载体为pCAMBIA1301。
本发明还提供一种包含胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2的重组菌株，优选菌株为农杆菌GV3101。
本发明还提供一种胡萝卜DcGA20ox2阳性植株的构建方法，包括以下步骤：（1）利用重组载体pCAMBIA1301-DcGA20ox2转化农杆菌GV3101，得到重组菌株；（2）利用重组菌株对胡萝卜下胚轴外植体进行侵染；（3）将侵染好的下胚轴外植体进行培养，得到含DcGA20ox2基因的阳性植株。
本发明还提供胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2、胡萝卜赤霉素氧化酶以及重组载体在促进胡萝卜生长过程中的应用，应用于如下任一项：
（1）增加胡萝卜植株地上部的生物量；
（2）改变胡萝卜肉质根的结构；
（3）调控胡萝卜肉质根木质化程度。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
一、本发明从胡萝卜品种‘黑田五寸’中获得一个响应植株生长发育过程的基因DcGA20ox2，其为植物的一个新的赤霉素氧化酶基因，通过实验验证了该基因在植物生长调控方面的功能，通过基因工程获取的含有该基因的转基因植物的生长性状发生改变，表现为植株变高，地上部生物量增加，肉质根木质化程度加深等，证明该基因在调控植物生长方面具有广泛的应用前景；
二、本发明载体选用pCAMBIA1301，该载体具有高拷贝复制起点可实现高质粒产量，含有pVS1复制子使得其在农杆菌中具有高稳定性，载体小因而易于转化，还含有丰富的多克隆位点。
三、本发明菌株选用农杆菌GV3101，其侵染能力强，能通过将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，实现外源基因高效率地整合到植物受体细胞的染色体上并得到表达，通过细胞和组织培养技术得到转基因植物。
四、本发明外植体选用胡萝卜下胚轴，其获得和再生试验周期短，速度明显快于其他外植体，对于抗生素非常敏感，且其体积小，有效减少了试验成本和工作量。
附图说明
图1为本发明转DcGA20ox2基因胡萝卜植株筛选结果图；
图2为本发明对照胡萝卜植株与转DcGA20ox2基因胡萝卜植株的生长状态对比图，其中CK表示对照组，DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6表示转DcGA20ox2基因胡萝卜植株；
图3为本发明对照胡萝卜植株与转DcGA20ox2基因胡萝卜植株的根冠比对比图，其中CK表示对照组，DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6表示转DcGA20ox2基因胡萝卜植株；
图4为本发明对照胡萝卜植株与转DcGA20ox2基因胡萝卜植株的肉质根横切面对比图，其中CK表示对照组，DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6表示转DcGA20ox2基因胡萝卜植株；
图5为本发明对照胡萝卜植株与转DcGA20ox2基因胡萝卜植株的肉质根木质部比例对比图，其中CK表示对照组，DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6表示转DcGA20ox2基因胡萝卜植株；
图6为本发明对照胡萝卜植株与转DcGA20ox2基因胡萝卜植株的肉质根木质素含量对比图，其中CK表示对照组，DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6表示转DcGA20ox2基因胡萝卜植株；
图7为本发明对照胡萝卜植株与转DcGA20ox2基因胡萝卜植株的荧光定量表达验证结果图，其中CK表示对照组，DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6表示转DcGA20ox2基因胡萝卜植株。
具体实施方式
实施例1：胡萝卜总RNA的提取及cDNA的合成
采用RNA Simple Total RNA Kit（北京天根生化科技有限公司）从胡萝卜“黑田五寸”样品中分别提取总RNA。用Prime Script RT reagent Kit（南京诺唯赞生物科技有限公司）将提取的总RNA反转录成cDNA。
实施例2：胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2的克隆
基于胡萝卜基因组和转录组测序信息，以拟南芥GA20ox家族为信息探针，进行检索分析，获得胡萝卜DcGA20ox2的基因序列。根据该序列设计一对引物：
正引物向(SEQ ID NO:3)：5’-ATGTCTCAGACATCCACCAAA-3’，
反向引物(SEQ ID NO:4)：5’-TCAGTTAGTAGGTAACCATGC-3’。
以“黑田五寸”c DNA为模板进行扩增，PCR反应体系为模板DNA 2μl，上游引物1.5μl，下游引物1.5μl，PrimerStar Max Premix (2X) 15 μL，dd H2O 10μl；PCR反应条件为：98℃预变性3min；98℃变性10s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃延伸5min。PCR产物经质量体积分数1.2％琼脂糖凝胶电泳后回收目的条带，连接到，连接pMD19-T载体[TaKaRa（大连）生物工程公司]，并转化大肠杆菌DH5α（南京诺唯赞生物科技股份有限公司），提取质粒经PCR鉴定后委托南京金斯瑞生物科技有限公司测序。
实施例3：DcGA20ox2基因的重组表达载体构建
(1)首先利用双酶切BamHI和SacI(ThermoScientific)方法获得pCAMBIA1301[TaKaRa（大连）生物工程公司]的线性化载体，然后通过琼脂糖凝胶电泳和胶回收试剂盒（杭州唯特洁生化技术有限公司）纯化获得高纯度的p CAMBIA1301的线性化载体；
(2)将目的片段DNA和线性化载体pCAMBIA1301以3:1的摩尔比加到1.5ml的离心管中进行重组反应，混匀后在室温连接约30min，加入10μl的反应液到50μl的DH5a感受态细胞（南京诺唯赞生物科技股份有限公司）中，用移液器轻轻混匀，于冰上孵育30min，42℃水浴中热激45s后快速置冰上冷却2min；
(3)加入300μl LB液体培养基，37℃孵育45-60min。5000rpm离心2min收集菌体，弃掉部分上清，用剩余的培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有Kan抗性的LB固体培养基上轻轻涂匀，37℃培养箱中倒置培养16-24h；
(4)挑取重组反应转化平板上若干个克隆进行菌落PCR鉴定，鉴定为阳性的菌落，挑取相应单菌落于含有Kan抗生素的液体LB培养基中37℃、200rpm培养箱中培养过夜，提取质粒或将菌液直接测序以鉴定载体准确性。
(5)鉴定成功后，保存pCAMBIA1301-DcGA20ox2的质粒。
实施例4：重组载体转入农杆菌GV3101
(1)每100μlGV3101农杆菌（北京擎科生物科技有限公司）感受态细胞中加入2μg重组载体pCAMBIA1301-DcGA20ox2，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5min、液氮5min、37℃水浴5min、冰浴5min。加入700μl无抗生素的LB液体培养基，于28℃振荡培养2h；
(2)6000rpm离心1min收集菌体，留取100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，将其均匀地涂布于含有Kan和Rif的YEB固体培养基上，倒置放于28℃培养箱培养2天，挑取若干个阳性克隆利用菌落PCR简单验证结果。
实施例5：胡萝卜的培养
挑选带有胚的胡萝卜“黑田五寸”种子，在5 ml离心管中浸泡12h，然后用75%的酒精清洗1次，再用40%的NaClO清洗1次，后在40%的NaClO中浸泡45 min。于超净工作台中用灭菌后的ddH2O清洗3~5次，并置于滤纸上吸干水分。将种子铺于B5固体培养基上催芽，暗培养10d左右。将幼苗的下胚轴切成3~5mm长的段，并用作外植体。
实施例6：胡萝卜遗传转化
将农杆菌在含有100mg/L Rif和50mg/LKan的YEB培养基中在28℃下在震荡培养18h。将培养物4000rpm离心15min，以OD600=0.4的密度重新悬浮在含3%蔗糖和200µM乙酰丁香酮（pH5.2）的B5培养基中，并震荡培养1h。将下胚轴段浸入农杆菌悬浮液中15min，将外植体转移到B5固体培养基中，然后在黑暗25℃下共培养2d。
将侵染好的外植体转入锥形瓶，用灭过菌的ddH2O清洗4次，再加入含羧苄青霉素钠（Cb）的无菌ddH2O，放置于100rpm摇床上，清洗10min。随后将外植体转入B5筛选固体培养基中暗培养30d。
实施例7：愈伤组织的培养和转基因再生植株的分化
将有愈伤组织分化的外植体转入新的筛选培养基中继代培养，直至愈伤组织足够大。然后将其转移到不含激素的B5固体培养基中诱导生芽分化。将分化出的胚性芽放置光培养，待其长出至少4片真叶后炼苗2周，转移至营养土中培养。
实施例8：转基因胡萝卜鉴定
取筛选出的阳性植株的叶片提取DNA，利用PCR方法鉴定其含有DcGA20ox2基因，进行转基因植株的目的基因的分子验证，最终确认基因已经转入阳性植株。使用GUS染色试剂盒（上海浦迪生物科技有限公司）对阳性植株和对照植株进行染色，结果如图1所示。
实施例9：胡萝卜阳性植株表型观测
将对照植株与转基因胡萝卜植株移入植物生长间，生长75d后同时取样，结果如图2所示。
实施例10：胡萝卜阳性植株肉质根横切面结构观测
将对照植株（CK）与转基因胡萝卜植株（DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6）肉质根中间部分进行切片。根样品首先在二甲苯中脱色紧接着在乙醇中脱水，样品横切面用1%的番红染色2h，再用0.5%固绿复染15s。随后，多余的染色剂用乙醇抹去，横切面用中性树脂封存。木质化的组织被染为红色，而纤维化的组织被染成绿色。根样品经紫外线照射，利用荧光显微镜观察组织木质化，结果如图4所示。
实施例11：胡萝卜阳性植株根系测定
（1）分别测定对照植株（CK）与与转基因胡萝卜植株（DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6）根冠比和木质部占比（根中间区域木质部直径与总直径的比值）。
（2）木质素的测定：将根部样品在液氮中用研钵和研杵研磨，将粉末立即置于6ml99.7%的乙醇中溶解，14000rpm离心20min，收集沉淀，室温风干过夜。称取大约10mg干燥物转移到干净的试管中，加入1ml 2M HCl和0.1ml巯基乙酸，将混合物在100℃加热8h后在冰上冷却，4℃ 14000rpm离心20min。沉淀用1ml去离子水洗涤，并用1 ml 1M NaOH溶解，置于25℃下培养18h，14000rpm离心20min，上清液转移到新管中，加入1ml浓盐酸，置于4℃ 6h沉淀木质素巯基乙酸。离心20min后，将沉淀物溶解于1ml 1M NaOH中，以NaOH为空白，测定在280nm下的吸光值。
实施例12：胡萝卜阳性植株定量表达验证
1、取CK、DcGA20ox2-OE-1、DcGA20ox2-OE-4和DcGA20ox2-OE-6植株根部样本并立即用液氮速冻后，保存于-80℃冰箱中，根据实施例1中的方法获取RNA和cDNA。
2、选择胡萝卜的12个基因和胡萝卜中Actin的转录表达水平为内参序列设计表达检测引物，如表1。
表1引物
3、实时定量PCR使用南京诺唯赞生物科技有限公司提供的ChamQ SYBR qPCR Master Mix试剂盒，按照操作说明进行。
4、目的基因相对转录表达水平的计算公式为2-ΔΔCt，ΔΔCt＝（Ct目的基因-CtActin）处理组-（Ct目的基因-CtActin）对照组。
5、对数据进行分析处理，绘制相对表达量水平验证结果图，如图7所示。
6、最终试验结果
（1）将本发明克隆获得的胡萝卜DcGA20ox2基因转入胡萝卜植株中获得的阳性植株，地上部生长状态与表型明显优于对照植株（如图2所示）。
（2）荧光定量PCR结果显示转基因植株中的12个基因的表达水平均受到DcGA20ox2基因过表达的影响，且大部分保持在较高水平（如图7所示）。
（3）根系测定结果表明：转基因植株的根冠比明显低于对照，木质部占比和木质素含量高于对照，表明DcGA20ox2基因的表达改变了受体植物的根部发育和木质化水平。
（4）荧光定量表达与生理指标分析结果可证明：胡萝卜DcGA20ox2基因基因能显著促进受体植株的地上部生长和肉质根的木质部发育。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (4)

1.一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2在促进胡萝卜生长中的应用，其特征在于：所述胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述促进胡萝卜生长为以下（1）~（3）过程中的一种：
（1）增加胡萝卜植株地上部的生物量；
（2）改变胡萝卜肉质根的结构；
（3）调控胡萝卜肉质根木质化程度。
2.一种胡萝卜赤霉素氧化酶在促进胡萝卜生长中的应用，其特征在于：所述胡萝卜赤霉素氧化酶由权利要求1所述的胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；
所述促进胡萝卜生长为以下（1）~（3）过程中的一种：
（1）增加胡萝卜植株地上部的生物量；
（2）改变胡萝卜肉质根的结构；
（3）调控胡萝卜肉质根木质化程度。
3.一种重组载体在促进胡萝卜生长中的应用，其特征在于：所述重组载体包含权利要求1所述的胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2；
所述促进胡萝卜生长为以下（1）~（3）过程中的一种：
（1）增加胡萝卜植株地上部的生物量；
（2）改变胡萝卜肉质根的结构；
（3）调控胡萝卜肉质根木质化程度。
4.根据权利要求3所述的一种重组载体在促进胡萝卜生长中的应用，其特征在于：所述重组载体的制作方法如下，将胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA20ox2插入到质粒pCAMBIA1301上的BamHI和SacI限制性酶切位点之间，使得该核苷酸序列位于CaMV35S启动子下游并受其调控，得到胡萝卜赤霉素氧化酶表达质粒。
CN202211578674.0A 2022-12-07 2022-12-07 一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用 Active CN116083452B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211578674.0A CN116083452B (zh) 2022-12-07 2022-12-07 一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211578674.0A CN116083452B (zh) 2022-12-07 2022-12-07 一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116083452A CN116083452A (zh) 2023-05-09
CN116083452B true CN116083452B (zh) 2023-09-29

Family

ID=86207217

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211578674.0A Active CN116083452B (zh) 2022-12-07 2022-12-07 一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116083452B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111718940A (zh) * 2019-03-22 2020-09-29 南京农业大学 一种胡萝卜响应外源激素相关的DcWRKY69基因的序列及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111718940A (zh) * 2019-03-22 2020-09-29 南京农业大学 一种胡萝卜响应外源激素相关的DcWRKY69基因的序列及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Exogenous gibberellin altered morphology, anatomic and transcriptional regulatory networks of hormones in carrot root and shoot;Wang GL et al.;BMC Plant Biol;第15卷(第290期);第3页左栏第1段，表1 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN116083452A (zh) 2023-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2022135246A1 (zh) 一种控制大豆-根瘤菌匹配性的r基因及其蛋白质和应用
CN111593058B (zh) Bna-miR169n基因及其在控制甘蓝型油菜抗旱性中的应用
CN104450711B (zh) OsmiR156f基因在增加水稻有效分蘖并提高水稻单株产量中的应用
CN116083452B (zh) 一种胡萝卜赤霉素氧化酶基因及其表达和应用
CN115772212A (zh) 紫花苜蓿叶绿体MsSAP22基因及在提高植物抗旱性中的应用
CN115710587A (zh) 基于根癌农杆菌真空渗透介导的桑树离体瞬时转化方法
CN110106269A (zh) Bna-miR156d在控制甘蓝型油菜分枝发育中的应用
CN115851817A (zh) SlPIF4作为负调控因子在提升番茄果实褪黑素含量中的应用
CN106434692A (zh) 水稻OsPCF7基因在培育高分蘖水稻品种中的应用
CN116179573B (zh) 胡萝卜赤霉素氧化酶基因DcGA2ox1在调控植物生长发育中的应用
CN116376933B (zh) 一种水稻萌发速率调控基因OsSCYL2及其应用
CN114149993B (zh) 一种调控植物可溶性糖含量的lncRNA及其应用
CN117844849B (zh) 一种蒙古冰草的遗传转化方法
CN117025834B (zh) 一种转基因玉米vb15外源插入片段的旁侧序列及其应用
CN114107371B (zh) 黄瓜绿斑驳花叶病毒基因介导转基因烟草方法
CN117327712B (zh) 一种通过转EoBBR基因调控假俭草根系生长的方法
CN116479007B (zh) 一种芹菜AgDREBA6a基因及其在提高植物耐高温胁迫中的应用
CN105950620B (zh) 一种全面下调棉花番茄红素环化酶基因的表达载体及应用
CN117051006A (zh) 一种正向调控白菜抽薹开花的基因及其应用
CN116716335A (zh) 蒲公英TmABI5基因在促进植物合成菊苣酸中的应用
CN117025609A (zh) 一种水稻组织特异性表达启动子及其应用
CN114214325A (zh) 光皮桦miR156a前体基因及在促进植物分枝形成中的应用
CN105316319A (zh) 棉花植物事件aD14-2以及用于其检测的组合物和方法
CN116590291A (zh) 一种烟草烟碱合成相关环状rna nrc1及其应用
CN105296501A (zh) 棉花植物事件aC20-3以及用于其检测的引物和方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant