CN116068182A - 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置 - Google Patents

一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置 Download PDF

Info

Publication number
CN116068182A
CN116068182A CN202111283722.9A CN202111283722A CN116068182A CN 116068182 A CN116068182 A CN 116068182A CN 202111283722 A CN202111283722 A CN 202111283722A CN 116068182 A CN116068182 A CN 116068182A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
detected
measured value
measured
reaction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111283722.9A
Other languages
English (en)
Inventor
韩双亭
张黎明
李临
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kemei Boyang Diagnostic Technology Shanghai Co ltd
Original Assignee
Kemei Boyang Diagnostic Technology Shanghai Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kemei Boyang Diagnostic Technology Shanghai Co ltd filed Critical Kemei Boyang Diagnostic Technology Shanghai Co ltd
Priority to CN202111283722.9A priority Critical patent/CN116068182A/zh
Publication of CN116068182A publication Critical patent/CN116068182A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57476—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving oncofetal proteins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
    • G01N33/5304—Reaction vessels, e.g. agglutination plates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/471—Pregnancy proteins, e.g. placenta proteins, alpha-feto-protein, pregnancy specific beta glycoprotein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置，其包括免疫反应组件，所述免疫反应组件包括至少两个反应容器和试剂臂，其中所述试剂臂用于向两个反应容器中分别加入相同检测试剂，所述两个反应容器用于对同一待测样本进行两个平行的免疫反应检测；其中，检测所述同一待测样本的反应容器1中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值与反应容器2中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值不同。本发明所述装置能够解决HOOK效应样本的问题，不受检测范围限制，且重复性良好。

Description

一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置
技术领域
本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置。
背景技术
免疫学检测是基于抗原-抗体特异性反应的原理进行的，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被测物进行显示或信号的放大，常被用于检测蛋白质、激素等微量生物活性物质。
光激化学发光法是化学发光分析技术的常用方法之一，可用于研究生物分子间的相互作用，临床上主要用于疾病的检测。该技术整合了高分子微粒技术、有机合成、蛋白质化学及临床检测等相关领域的研究。光激化学发光分析技术的技术原理为:敏化剂在激光照射下能将周围环境中的氧分子激发为单线态氧分子，单线态氧分子能够与相距200nm左右的发光组合物反应，产生一定波长的光信号；当样品中包含待测抗原或抗体时，该抗原抗体的免疫反应能够使包含敏化剂的供体颗粒与包含发光组合物的受体颗粒结合，从而产生特定波长的光信号，检测该光信号即可检测待测抗原或抗体的含量。
在抗原-抗体的剂量反应曲线中，当抗体量固定时，反应信号会随着抗原量的增加呈现出先上升后下降的现象。将反应信号随抗原剂量增加而上升的区域称为“前带”区域，反应信号随抗原剂量增加而下降的区域称为“后带”区域，前带与后带之间衔接的区域称为“等价带”。
在免疫反应中，随着抗原与抗体的比例上升其反应性呈现出先上升后下降现象，被称为“钩状效应”或“HOOK效应”。在临床上，钩状效应会导致高值样本产生错误的阴性结果，也就是“假阴性”。
目前的免疫检测方法通常是利用剂量-反应曲线的前带区域，通过待测物含量与反应信号的线性关系计算待测物的浓度。而这种检测方法有诸多缺陷，例如：
检测范围狭窄：传统的免疫检测试剂只能利用剂量反应曲线的前带区段进行检测，检测浓度范围狭窄。超出检测范围的样本需要经过稀释后检测，操作复杂、耗时长、对稀释的精度要求高；
HOOK效应：传统的免疫检测试剂因为缺少识别HOOK效应的手段，常需要临床医师结合患者临床表现采用稀释血清样本的方法来鉴别样本是否存在HOOK效应，其操作复杂、耗时长，易造成漏检。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置。采用本发明的测定装置能够有效避免HOOK效应，并简便、快捷、精确地计算出待测物浓度。
为了实现上述目的及其他相关目的，本发明采用如下的技术方案：
本发明第一方面提供了一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置，其包括免疫反应组件，所述免疫反应组件包括至少两个反应容器和试剂臂，其中所述试剂臂用于向两个反应容器中分别加入相同检测试剂，所述两个反应容器用于对同一待测样本进行两个平行的免疫反应检测；
其中，检测所述同一待测样本的反应容器1中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值与反应容器2中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值不同。
在本发明的一些实施方式中，通过下述方式中的任意一种实现所述反应容器1中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值与所述反应容器2中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值不同：
方式1：反应容器1和反应容器2中加入的待测样本的量相同，且加入的检测试剂量不同；
方式2：反应容器1中加入的待测样本的量与反应容器2中加入的待测样本的量不同，且加入的检测试剂量相同；
方式3：反应容器1中加入的待测样本的量与反应容器2中加入的待测样本的量不同，且加入的检测试剂量不同。
在本发明的另一些实施方式中，所述装置包括免疫测定组件，所述免疫测定组件用于记录同一待测样本的两个平行的免疫反应的检测结果，分别为第一测值和第二测值；其中，反应容器1中的读数计为第一测值，反应容器2中的读数计为第二测值；优选地，两个平行的免疫反应检测中第一测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值大于第二测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值。
在本发明的一些实施方式中，所述装置包括处理器，所述处理器用于计算第一测值/第二测值的比值并确定待测样本中待测靶分子的浓度。
在本发明的一些具体实施方式中，所述检测试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1包含第一抗体(或抗原)包被的发光微粒，所述试剂2包含标记物标记的第二抗体(或抗原)。
在本发明的一些具体实施方式中，所述待测靶分子为抗原或抗体；和/或
所述第一抗体(或抗原)和第二抗体(或抗原)能够与待测靶分子特异性结合。
在本发明的一些实施方式中，所述装置执行如下步骤：
A1：对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质进行检测，其中对每个标准物质均进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值a和测值a’，且所述测值a与所述待测样本的第一测值的检测方式相同，所述测值a’与所述待测样本的第二测值的检测方式相同；
A2：计算测值a/测值a’的比值；
A3：做测值a/测值a’的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，并存储。
在本发明的另一些实施方式中，所述装置执行如下步骤：
处理器调取存储的所述相关性标准曲线，将待测样本的第一测值/第二测值的比值代入所述相关性标准曲线进行计算，来确定待测样本中待测靶分子的浓度。
在本发明的一些实施方式中，所述装置执行如下步骤：
B1：对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质进行检测，其中对每个标准物质均进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值b和测值b’，且所述测值b与所述待测样本的第一测值的检测方式相同，所述测值b’与所述待测样本的第二测值的检测方式相同；
B2：做测值b与标准物质浓度的反应曲线A，并存储；
B3：做测值b’与标准物质浓度的反应曲线B，并存储；
B4：在反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域所对应的标准物质浓度重叠的部分中取一点，将该点对应的测值b/测值b’的比值记为临界点c，并存储。
在本发明的另一些实施方式中，所述装置执行如下步骤：
处理器调取存储的所述反应曲线A、反应曲线B与临界点c，对测样本的第一测值/第二测值的比值与临界点c的大小进行判断；当待测样本的第一测值/第二测值的比值≤临界点c时，使用反应曲线A的前带区域计算待测样本中待测靶分子的浓度；当待测样本的第一测值/第二测值的比值＞临界点c时，使用反应曲线B的后带区域计算待测样本中待测靶分子的浓度。
本发明第二方面提供了一种计算机可读取的存储介质，其上存储有计算机程序产品，所述计算机程序产品使得如本发明第一方面所述装置执行相应的步骤。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)利用本发明的装置进行免疫测定时，能够解决HOOK效应问题，避免HOOK效应造成漏检，且不受检测范围限制；
(2)利用本发明的装置进行免疫测定时，可直接使用经典剂量-反应曲线计算，重复性良好；
(3)利用本发明的装置进行免疫测试时，检测范围大大超过常规检测方法。
附图说明
图1为抗原-抗体的剂量反应曲线。
图2为利用本发明的装置进行免疫测定时的计算方法1的原理图。
图3为利用本发明的装置进行免疫测试时的计算方法2的原理图。
图4为实施例2中标准物质浓度与反应容器1信号和反应容器2信号的反应曲线图。
图5为本发明所述免疫测定装置的结构示意图。
具体实施方式
为使本发明容易理解，下面将详细说明本发明。但在详细描述本发明前，应当理解本发明不限于描述的具体实施方式。还应当理解，本文中使用的术语仅为了描述具体实施方式，而并不表示限制性的。
在提供了数值范围的情况下，应当理解所述范围的上限和下限和所述规定范围中的任何其他规定或居间数值之间的每个居间数值均涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立包括在较小的范围中，并且也涵盖在本发明内，服从规定范围中任何明确排除的限度。在规定的范围包含一个或两个限度的情况下，排除那些包括的限度之任一或两者的范围也包含在本发明中。
除非另有定义，本文中使用的所有术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以在本发明的实施或测试中使用，但是现在描述了优选的方法和材料。
本发明第一方面所涉及的用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置，能够对每个样本均进行两个平行的测试，并根据得到的两个平行测试结果进行计算，最终得到待测样本中靶分子的浓度。所述装置无检测范围限制，能够避免HOOK效应造成的漏检。
在本发明的一些实施方式中，所述用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置包括免疫反应组件，所述免疫反应组件包括至少两个反应容器和试剂臂，其中所述试剂臂用于向两个反应容器中分别加入相同检测试剂，所述两个反应容器用于对同一待测样本进行两个平行的免疫反应检测；
其中，检测所述同一待测样本的反应容器1中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值与反应容器2中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值不同。
本发明中，反应容器1和反应容器2中含待测靶分子的待测样本量及检测试剂的添加量均可单独或同时改变，最终使反应容器1和反应容器2特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值不同。
在本发明的一些实施方式中，通过下述方式中的任意一种实现所述反应容器1中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值与所述反应容器2中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值不同：
方式1：反应容器1和反应容器2中加入的待测样本的量相同，且加入的检测试剂量不同；
方式2：反应容器1中加入的待测样本的量与反应容器2中加入的待测样本的量不同，且加入的检测试剂量相同；
方式3：反应容器1中加入的待测样本的量与反应容器2中加入的待测样本的量不同，且加入的检测试剂量不同。
本发明对反应容器的形状没有具体限定。在本发明的一些具体实施方式中，所述反应容器可以为反应孔、反应杯、反应槽等。
在本发明的一些实施方式中，所述装置包括免疫测定组件，所述免疫测定组件用于记录同一待测样本的两个平行的免疫反应的检测结果，分别为第一测值和第二测值；其中，反应容器1中的读数计为第一测值，反应容器2中的读数计为第二测值；优选地，两个平行的免疫反应检测中第一测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值大于第二测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值。
在发明的一些具体实施方式中，所述免疫测定组件可以包括光子计数模块和发光二极管，进而用于激发和记录同一待测样本的两个平行的免疫反应的检测结果。
在本发明的一些实施方式中，所述装置包括处理器，所述处理器用于计算第一测值/第二测值的比值并确定待测样本中待测靶分子的浓度。
在本发明的一些具体实施方式中，所述处理器可以为电脑，以对所述检测结果进行处理、作图和存储等。
在本发明的一些具体实施方式中，所述检测试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1包含第一抗体(或抗原)包被的发光微粒，所述试剂2包含标记物标记的第二抗体(或抗原)。
在本发明的一些具体实施方式中，所述待测靶分子为抗原或抗体。根据本发明的一些实施方式，所述抗原指具有免疫原性的任意物质。包括但不限于具有免疫原性的上述靶分子的实例中列举的物质。根据本发明的一些实施方式，所述“抗体”在本文中以最广义使用，并明确涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两个完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)，以及抗体片段(例如Fab区、Fc区、单链抗体)。
在本发明的另一些实施方式中，所述第一抗体(或抗原)和第二抗体(或抗原)能够与待测靶分子特异性结合。
在本发明的一些具体实施方式中，所述标记物可以为生物素。
本发明中，所述发光微粒含有发光基团，能够迅速吸收单线态氧，然后发射出一定波长(如500～615nm)的光。
本发明所涉及的免疫测定装置对每个样本所进行两个平行的测试中，样本中待测靶分子的含量与检测试剂中特异性捕获分子的含量(如，第一抗体(或抗原)包被的发光微粒、标记物标记的第二抗体(或抗原))的比例存在差异，最终产生两个不同的信号，分别为第一测值和第二测值(第一测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值大于第二测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值)。随着待测靶分子含量(浓度)的增加，第一测值/第二测值的比值持续上升并呈现出一定的线性关系。据此原理本发明测定装置的处理器能够通过执行以下两种方法计算样本中待测靶分子浓度的方法，分别如下：
计算方法1、直接由第一测值/第二测值的比值计算样本中待测靶分子的浓度：
如图2所示，根据第一测值/第二测值的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，处理器将待测靶分子检测的第一测值/第二测值的比值代入所述曲线算得其浓度。
计算方法2、使用反应曲线A或者反应曲线B计算样本中待测靶分子的浓度：
在抗原-抗体的剂量反应曲线(图1)中，当抗体量固定时，反应信号会随着抗原量的增加呈现出先上升后下降的现象。将反应信号随抗原量增加而上升的区域称为前带区域，反应信号随抗原量增加而下降的区域称为后带区域，前带与后带之间衔接的区域称为等价带。
如图3所示，反应曲线A和反应曲线B分别为根据第一测值和第二测值与标准物质浓度获得的反应曲线。在反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域存在浓度重叠的部分(如图3中虚线框中部分)，在上述浓度重叠的部分中取一点，该点对应的第一测值/第二测值的比值(如图中A/B＝15)作为临界点c，并储存。
当处理器判定待测样本的第一测值/第二测值的比值≤临界点c时，使用反应曲线A的前带区域计算其浓度。
当处理器判定待测样本的第一测值/第二测值的比值＞临界点c时，使用反应曲线B的后带区域计算其浓度。
对应于上述计算方法1，本发明提供的免疫测定装置执行如下步骤：
首先所述装置通过执行如下步骤获得测值a/测值a’的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线：
A1：试剂臂将检测试剂(试剂1和试剂2)分别加入到包括同一待测靶分子浓度的标准物质的反应容器1和反应容器2中，以对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质中的每个标准物质进行两个平行的免疫反应检测；
A2：免疫测定组件记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值a和测值a’，所述测值a大于测值a’，且所述测值a与所述待测样本的第一测值的检测方式相同，所述测值a’与所述待测样本的第二测值的检测方式相同；
A3：处理器计算测值a/测值a’的比值，并根据计算的测值a/测值a’的比值做测值a/测值a’的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，并存储。
然后，所述装置通过执行如下步骤确定待测样本中待测靶分子的浓度：
S1：试剂臂将检测试剂(试剂1和试剂2)分别加入到包括待测样本的反应容器1和反应容器2中，以对同一待测样本进行两个平行的免疫反应检测；
S2：免疫测定组件记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为第一测值和第二测值；其中，反应容器1中的读数计为第一测值，反应容器2中的读数计为第二测值，且两个平行的免疫反应检测中第一测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值大于第二测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值；
S3：处理器计算待测样本的第一测值/第二测值的比值，并调取存储的所述相关性标准曲线；然后将所述待测样本的第一测值/第二测值的比值代入所述相关性标准曲线进行计算，来确定待测样本中待测靶分子的浓度。
对应于上述计算方法2，本发明提供的免疫测定装置执行如下步骤：
首先所述装置通过执行如下步骤获得反应曲线A、反应曲线B以及临界点c：
B1：试剂臂将检测试剂(试剂1和试剂2)分别加入到包括同一待测靶分子浓度的标准物质的反应容器1和反应容器2中，以对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质中的每个标准物质进行两个平行的免疫反应检测；
B2：免疫测定组件记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值b和测值b’，且所述测值b与所述待测样本的第一测值的检测方式相同，所述测值b’与所述待测样本的第二测值的检测方式相同；
B3：处理器根据已知的一系列不同浓度标准物质的测值b，做测值b与标准物质浓度的反应曲线A，并存储；同时根据已知的一系列不同浓度标准物质的测值b’，做测值b’与标准物质浓度的反应曲线B，并存储；
B4：在反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域存在浓度重叠的部分(如图3中虚线框中部分)，处理器在上述浓度重叠的部分中取一点，将该点对应的测值b和测值b’的比值记为临界点c，并存储。
然后，所述装置通过执行如下步骤确定待测样本中待测靶分子的浓度：
S1：试剂臂将检测试剂(试剂1和试剂2)分别加入到包括待测样本的反应容器1和反应容器2中，以对同一待测样本进行两个平行的免疫反应检测；
S2：免疫测定组件记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为第一测值和第二测值；其中，反应容器1中的读数计为第一测值，反应容器2中的读数计为第二测值，且两个平行的免疫反应检测中第一测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值大于第二测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值；
S3：处理器调取存储的所述反应曲线A、反应曲线B与临界点c，并对测样本的第一测值/第二测值的比值与临界点c的大小进行判断；当处理器判定所述待测样本的第一测值/第二测值的比值≤c时，使用反应曲线A的前带区域计算样本浓度；当处理器判定待测样本的第一测值/第二测值的比值＞c时，使用反应曲线B的后带区域计算样本浓度。
本发明所述的“标准物质”是指所含待测靶分子含量已知或者能够对其所含的待测靶分子进行定量测定赋值的待测靶分子溶液。
实施例
为使本发明更加容易理解，下面通过以AFP项目为例的具体实施例来进一步详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围。本发明中所使用的原料或组分若无特殊说明均可以通过商业途径或常规方法制得。
甲胎蛋白(AFP)是一种糖蛋白，也叫胎儿甲种球蛋白，属于白蛋白家族。在原发性肝癌(PLC)患者血清中的AFP(甲胎蛋白)值高低悬殊极大，正常值与病理值极差可以达到7个数量级。有文献报道，用IEMA直接测定一名原发性肝癌患者原血清AFP浓度为29ng/mL，然而将血清标本做一系列稀释后测定并计算出AFP实际浓度为5.9×106ng/mL。可见，常规技术中对于AFP的检测仍有很大的缺陷。
实施例1：采用常规免疫测定装置检测AFP样本
测试样本(收集自临床血清样本)：
样本1：阴性血清样本(真实测值约5ng/mL)
样本2：低值阳性血清样本(真实测值约100ng/mL)
样本3：强阳性血清样本(真实测值约2×106ng/mL)
所采用的试剂盒为科美博阳诊断技术(上海)有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒(化学发光法)(批号：L2001)，其主要组分为：
试剂1：包被AFP抗体的发光微粒；
试剂2：生物素标记的AFP抗体。
测试方法：
1.向反应孔中分别添加25μl待测样本，25μl试剂1，25μl试剂2，37℃温育15min；
2.向反应孔中添加175μl光激化学发光分析系统通用溶液(供体试剂)，37℃温育10min，使用
Figure BDA0003332208790000101
分析仪进行读数。
检测结果如表1所示。
表1
初测值 测值ng/mL
样本1 7.41
样本2 109.43
样本3 11.79
表1所示的结果为采用常规装置直接检测的结果，样本3测值仅为11.79ng/mL，若不结合临床表现则极易将其误判为弱阳性样本。在已知样本3为强阳性样本的情况下，使用稀释液将其50倍稀释后重新检测，其检测结果如表2所示。
表2
50倍稀释 测值ng/mL
稀释样本 >1000
如上，50倍稀释后的样本3测值>1000ng/mL，可以确定其为HOOK样本，且依然不能得到具体的测值。将稀释后的样本再次使用稀释液稀释50倍后，测值如下表3所示。
表3
2500倍稀释 测值ng/mL
稀释样本 849.51
如上，2500倍稀释后的样本测值为849.51ng/mL，经反算可得样本3的真实浓度约为2.12×106ng/mL。
实施例2：采用本发明的免疫测定装置检测AFP样本
测试标准物质：浓度范围为0ng/mL-4×106ng/mL的纯化AFP抗原溶液
测试样本(收集自临床血清样本)：
样本1：阴性血清样本(真实测值约5ng/mL)
样本2：低值阳性血清样本(真实测值约100ng/mL)
样本3：强阳性血清样本(真实测值约2×106ng/mL)
所采用的试剂盒为科美博阳诊断技术(上海)有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒(化学发光法)(批号：L2001)，其主要组分为：
试剂1：包被AFP抗体的发光微粒；
试剂2：生物素标记的AFP抗体。
测定装置执行的检测步骤如下：
设定两个反应容器为同一样本测试组，不同样本测试组重复下列加液步骤1和2：
1.样本臂在反应容器1和反应容器2中各加入10μl相同待测样本；
2.试剂臂将50ul试剂1和50ul试剂2加入到反应容器1中；
3.试剂臂将5ul试剂1和5ul试剂2加入到反应容器2中；
4.各反应容器同时37℃温育15min；
5.向各反应容器中分别添加175μl光激化学发光分析系统通用溶液(供体试剂)，37℃温育10min；
6.使用免疫测定组件记录免疫反应的检测结果，将同一样本的两个平行免疫反应结果分别计为第一测值和第二测值；其中，反应容器1中的读数计为第一测值，反应容器2中的读数计为第二测值；
7.处理器计算同一待测样本的第一测值/第二测值的比值，并调取储存的数据进行判断，然后计算待测样本中靶分子的浓度。
按照上述测试方法对梯度稀释的AFP标准物质(编号1-20)进行检测，检测结果如表4所示。
根据表4数值分别做标准物质浓度与反应孔1信号和反应孔2信号的反应曲线A和反应曲线B，如图4；可见标准物质1-11对应的为反应曲线A的前带区域，标准物质9-20对应的为反应曲线B的后带区域，因此，反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域存在的浓度重叠的部分为标准物质9-11的浓度范围，其对应的A/B信号比值为14.90-25.53，取其中间一点A/B信号比＝19作为临界点。
根据表4数值做A/B信号比值与标准物质浓度的相关性标准曲线。
将上述标准物质测试结果存入免疫测定装置。
按照上述测试方法对三组样本进行测试，检测结果如表5所示。计算方法1为调用相关性标准曲线所得测试结果，计算方法2为调用临界点所得测试结果。
表4
Figure BDA0003332208790000121
Figure BDA0003332208790000131
表5
Figure BDA0003332208790000132
由表5所示的结果可以看出，本发明的装置能够避免HOOK效应带来的样本测值偏低的问题，可以直接得到高达2×106ng/mL的检测结果。所述方法不受检测范围限制，且两种计算方式均可行。
实施例3：采用本发明的免疫测定装置检测AFP样本
实验材料同实施例2。
测定装置执行的检测步骤如下：
设定两个反应容器为同一样本测试组，不同样本测试组重复下列加液步骤1和2：
1.样本臂在反应容器1中加入10μl待测样本，在反应容器2中加入20μl待测样本；
2.试剂臂将50ul试剂1和50ul试剂2加入到反应容器1中；
3.试剂臂将50ul试剂1和50ul试剂2加入到反应容器2中；
4.各反应容器同时37℃温育15min；
5.向各反应容器中分别添加175μl光激化学发光分析系统通用溶液(供体试剂)，37℃温育10min；
6.使用免疫测定组件记录免疫反应的检测结果，将同一样本的两个平行免疫反应结果分别计为第一测值和第二测值；其中，反应容器1中的读数计为第一测值，反应容器2中的读数计为第二测值；
7.处理器计算同一待测样本的第一测值/第二测值的比值，并调取储存的数据进行判断，然后计算待测样本中靶分子的浓度。
按照上述测试方法对梯度稀释的AFP标准物质(编号1-20)进行检测，检测结果如表6所示。根据表6数值做A/B信号比值与标准物质浓度的相关性标准曲线。将上述标准物质测试结果存入免疫测定装置。
按照上述测试方法对三组样本进行测试，测试结果如下表7所示(使用本发明计算方法1计算)。
表6
Figure BDA0003332208790000141
表7
Figure BDA0003332208790000142
Figure BDA0003332208790000151
结果显示，本发明的装置可以检测超高值AFP样本，检测范围宽，能够简便、快捷、精确地计算出待测物浓度。
实施例4：采用本发明的免疫测定装置检测AFP样本
实验材料同实施例2。
测定装置执行的检测步骤如下：
设定两个反应容器为同一样本测试组，不同样本测试组重复下列加液步骤1和2：
1.样本臂在反应容器1中加入10μl待测样本，在反应容器2中加入20μl待测样本；
2.试剂臂将50ul试剂1和50ul试剂2加入到反应容器1中；
3.试剂臂将5ul试剂1和5ul试剂2加入到反应容器2中；
4.各反应容器同时37℃温育15min；
5.向各反应容器中分别添加175μl光激化学发光分析系统通用溶液(供体试剂)，37℃温育10min；
6.使用免疫测定组件记录免疫反应的检测结果，将同一样本的两个平行免疫反应结果分别计为第一测值和第二测值；其中，反应容器1中的读数计为第一测值，反应容器2中的读数计为第二测值；
7.处理器计算同一待测样本的第一测值/第二测值的比值，并调取储存的数据进行判断，然后计算待测样本中靶分子的浓度。
按照上述测试方法对梯度稀释的AFP标准物质(编号1-20)进行检测，检测结果如表8所示。根据表8数值做A/B信号比值与标准物质浓度的相关性标准曲线。将上述标准物质测试结果存入免疫测定装置。
按照上述测试方法对三组样本进行测试，测试结果如下表9所示(使用本发明计算方法1计算)。
表8
Figure BDA0003332208790000161
表9
Figure BDA0003332208790000162
结果显示，本发明装置可以检测超高值AFP样本，检测范围宽，能够简便、快捷、精确地计算出待测物浓度。
实施例5：超高端测值精密度验证
所采用的试剂盒为科美博阳诊断技术(上海)有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒(化学发光法)(批号：L2001)，其主要组分为：
试剂1：包被AFP抗体的发光微粒；
试剂2：生物素标记的AFP抗体。
测定装置执行的检测步骤同实施例2。
测试结果如下表10所示(使用本发明计算方法1计算)。
表10
Figure BDA0003332208790000171
结果显示：本发明的测定装置对三例高值样本的测值重复10次测定CV均在10％范围内，表明其精密度结果良好。
应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明作出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。

Claims (11)

1.一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置，其包括免疫反应组件，所述免疫反应组件包括至少两个反应容器和试剂臂，其中所述试剂臂用于向两个反应容器中分别加入相同检测试剂，所述两个反应容器用于对同一待测样本进行两个平行的免疫反应检测；
其中，检测所述同一待测样本的反应容器1中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值与反应容器2中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值不同。
2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，通过下述方式中的任意一种实现所述反应容器1中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值与所述反应容器2中特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量的比值不同：
方式1：反应容器1和反应容器2中加入的待测样本的量相同，且加入的检测试剂量不同；
方式2：反应容器1中加入的待测样本的量与反应容器2中加入的待测样本的量不同，且加入的检测试剂量相同；
方式3：反应容器1中加入的待测样本的量与反应容器2中加入的待测样本的量不同，且加入的检测试剂量不同。
3.根据权利要求1或2所述的装置，其特征在于，所述装置包括免疫测定组件，所述免疫测定组件用于记录同一待测样本的两个平行的免疫反应的检测结果，分别为第一测值和第二测值；其中，反应容器1中的读数计为第一测值，反应容器2中的读数计为第二测值；优选地，两个平行的免疫反应检测中第一测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值大于第二测值对应的特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值。
4.根据权利要求3所述的装置，其特征在于，所述装置包括处理器，所述处理器用于计算第一测值/第二测值的比值并确定待测样本中待测靶分子的浓度。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的装置，其特征在于，所述检测试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1包含第一抗体(或抗原)包被的发光微粒，所述试剂2包含标记物标记的第二抗体(或抗原)。
6.根据权利要求5所述的装置，其特征在于，所述待测靶分子为抗原或抗体；和/或
所述第一抗体(或抗原)和第二抗体(或抗原)能够与待测靶分子特异性结合。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的装置，其特征在于，所述装置执行如下步骤：
A1：对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质进行检测，其中对每个标准物质均进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值a和测值a’，且所述测值a与所述待测样本的第一测值的检测方式相同，所述测值a’与所述待测样本的第二测值的检测方式相同；
A2：计算测值a/测值a’的比值；
A3：做测值a/测值a’的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，并存储。
8.根据权利要求7所述的装置，其特征在于，所述装置执行如下步骤：
处理器调取存储的所述相关性标准曲线，将待测样本的第一测值/第二测值的比值代入所述相关性标准曲线进行计算，来确定待测样本中待测靶分子的浓度。
9.根据权利要求1-6中任意一项所述的装置，其特征在于，所述装置执行如下步骤：
B1：对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质进行检测，其中对每个标准物质均进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值b和测值b’，且所述测值b与所述待测样本的第一测值的检测方式相同，所述测值b’与所述待测样本的第二测值的检测方式相同；
B2：做测值b与标准物质浓度的反应曲线A，并存储；
B3：做测值b’与标准物质浓度的反应曲线B，并存储；
B4：在反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域所对应的标准物质浓度重叠的部分中取一点，将该点对应的测值b/测值b’的比值记为临界点c，并存储。
10.根据权利要求9所述装置，其特征在于，所述装置执行如下步骤：
处理器调取存储的所述反应曲线A、反应曲线B与临界点c，对测样本的第一测值/第二测值的比值与临界点c的大小进行判断；当待测样本的第一测值/第二测值的比值≤临界点c时，使用反应曲线A的前带区域计算待测样本中待测靶分子的浓度；当待测样本的第一测值/第二测值的比值＞临界点c时，使用反应曲线B的后带区域计算待测样本中待测靶分子的浓度。
11.一种计算机可读取的存储介质，其上存储有计算机程序产品，其特征在于，所述计算机程序产品使得如权利要求1-10中任意一项所述装置执行相应的步骤。
CN202111283722.9A 2021-11-01 2021-11-01 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置 Pending CN116068182A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111283722.9A CN116068182A (zh) 2021-11-01 2021-11-01 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111283722.9A CN116068182A (zh) 2021-11-01 2021-11-01 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116068182A true CN116068182A (zh) 2023-05-05

Family

ID=86175573

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111283722.9A Pending CN116068182A (zh) 2021-11-01 2021-11-01 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116068182A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106872420B (zh) 一种时间分辨荧光定量检测尿微量白蛋白的试剂盒及方法
US20240159758A1 (en) Prostate antigen standards and uses thereof
CN109470869B (zh) 免疫测定方法、用于鉴定免疫测定的系统和试剂盒
US8956823B2 (en) Anti-antibody reagent
CN102411050A (zh) 多种小分子化合物的同步量子点荧光免疫检测法及试剂盒
CN109470874B (zh) 免疫测定方法、用于鉴定免疫测定的系统和试剂盒
CN103698535A (zh) 脂蛋白相关磷脂酶a2定量检测试剂盒及制备、操作方法
CN111007269A (zh) 总ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN109001471A (zh) 游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位化学发光检测试剂盒及其制备方法和使用方法
NO149864B (no) Immunologisk reagens.
CN101046479B (zh) 不含目标蛋白质人血清基体物质的制备方法
CN106645745A (zh) 一种快速定量检测微量白蛋白的均相荧光免疫试剂及制备与检测方法
CN112379091A (zh) 一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶ck-mb检测试剂盒
CN110618280A (zh) 一种促甲状腺素测定试剂盒及其制备方法
CN116068182A (zh) 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置
CN113113079B (zh) 一种识别定量免疫层析试验中钩状效应的方法
CN116068185A (zh) 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置
CN116068181A (zh) 一种免疫测定试剂盒、测定方法和系统
CN116068184A (zh) 一种免疫测定试剂盒的使用方法及其检测系统
CN116068183A (zh) 一种免疫测定方法及其应用
CN108204959B (zh) 鉴别hd-hook效应样本的方法和鉴定免疫测定中的hd-hook效应的系统
CN116068186A (zh) 一种鉴定免疫测定中hook效应样本的方法、系统和应用
CN116068180A (zh) 一种用于免疫测定的系统
CN115541873B (zh) 测定三联吡啶钌浓度的方法和组合物
CN114509574A (zh) 适用于末梢血抗缪勒氏管激素检测用免疫荧光法试剂盒及其检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination