CN116068180A - 一种用于免疫测定的系统 - Google Patents

一种用于免疫测定的系统 Download PDF

Info

Publication number
CN116068180A
CN116068180A CN202111282853.5A CN202111282853A CN116068180A CN 116068180 A CN116068180 A CN 116068180A CN 202111282853 A CN202111282853 A CN 202111282853A CN 116068180 A CN116068180 A CN 116068180A
Authority
CN
China
Prior art keywords
measured value
sample
reaction
detected
detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111282853.5A
Other languages
English (en)
Inventor
韩双亭
张黎明
李临
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kemei Boyang Diagnostic Technology Shanghai Co ltd
Original Assignee
Kemei Boyang Diagnostic Technology Shanghai Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kemei Boyang Diagnostic Technology Shanghai Co ltd filed Critical Kemei Boyang Diagnostic Technology Shanghai Co ltd
Priority to CN202111282853.5A priority Critical patent/CN116068180A/zh
Publication of CN116068180A publication Critical patent/CN116068180A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57476—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving oncofetal proteins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
    • G01N33/5304—Reaction vessels, e.g. agglutination plates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/471—Pregnancy proteins, e.g. placenta proteins, alpha-feto-protein, pregnancy specific beta glycoprotein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明提供了一种用于免疫测定的系统，其包括：免疫反应装置，所述免疫反应装置上有反应杯，所述反应杯用于装载待测样本和检测试剂以进行免疫反应；免疫测定装置，所述免疫测定装置上设置有数据采集器；控制器，所述控制器用于将免疫反应装置中装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯移送到免疫测定装置处，数据采集器对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集并评估采集的数据，获得两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为第一测值和第二测值；处理器，所述处理器用于计算第一测值/第二测值的比值并确定待测样本中待测靶分子的浓度。所述系统能够解决HOOK效应样本的问题，不受检测范围限制，重复性良好，检测速度快。

Description

一种用于免疫测定的系统
技术领域
本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种用于免疫测定的系统。
背景技术
免疫学检测是基于抗原-抗体特异性反应的原理进行的，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被测物进行显示或信号的放大，常被用于检测蛋白质、激素等微量生物活性物质。
光激化学发光法是化学发光分析技术的常用方法之一，可用于研究生物分子间的相互作用，临床上主要用于疾病的检测。该技术整合了高分子微粒技术、有机合成、蛋白质化学及临床检测等相关领域的研究。光激化学发光分析技术的技术原理为:敏化剂在激光照射下能将周围环境中的氧分子激发为单线态氧分子，单线态氧分子能够与相距200nm左右的发光组合物反应，产生一定波长的光信号；当样品中包含待测抗原或抗体时，该抗原抗体的免疫反应能够使包含敏化剂的供体颗粒与包含发光组合物的受体颗粒结合，从而产生特定波长的光信号，检测该光信号即可检测待测抗原或抗体的含量。
在抗原-抗体的剂量反应曲线中，当抗体量固定时，反应信号会随着抗原量的增加呈现出先上升后下降的现象。将反应信号随抗原剂量增加而上升的区域称为“前带”区域，反应信号随抗原剂量增加而下降的区域称为“后带”区域，前带与后带之间衔接的区域称为“等价带”。
在免疫反应中，随着抗原与抗体的比例上升其反应性呈现出先上升后下降现象，被称为“钩状效应”或“HOOK效应”。在临床上，钩状效应会导致高值样本产生错误的低值结果，甚至是阴性结果，也就是“假阴性”。
目前的免疫检测方法通常是利用剂量-反应曲线的前带区域，通过待测物含量与反应信号的线性关系计算待测物的浓度。而这种检测方法有诸多缺陷，例如：
检测范围狭窄：传统的免疫检测试剂只能利用剂量反应曲线的前带区段进行检测，检测浓度范围狭窄。超出检测范围的样本需要经过稀释后检测，操作复杂、耗时长、对稀释的精度要求高；
HOOK效应：传统的免疫检测试剂因为缺少识别HOOK效应的手段，常需要临床医师结合患者临床表现采用稀释血清样本的方法来鉴别样本是否存在HOOK效应，其操作复杂、耗时长，易造成漏检。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种新的用于免疫测定的系统。采用本发明的测定系统能够简便、快捷、精确地计算出待测物浓度。
为了实现上述目的及其他相关目的，本发明采用如下的技术方案：
本发明的第一方面提供了一种用于免疫测定的系统，其包括：
免疫反应装置，所述免疫反应装置上有反应杯，所述反应杯用于装载待测样本和检测试剂以进行免疫反应；
免疫测定装置，所述免疫测定装置上设置有数据采集器；
控制器，所述控制器用于将所述免疫反应装置中装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯移送到所述免疫测定装置处，所述数据采集器对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集并评估采集的数据，以获得两个平行的免疫反应的检测结果，分别为第一测值和第二测值；
处理器，所述处理器用于计算第一测值/第二测值的比值并确定待测样本中待测靶分子的浓度。
在本发明的一些实施方式中，所述用于装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯放置在所述免疫反应装置上的任意指定位置；优选地，所述用于装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯在所述免疫反应装置上的位置相邻。
在本发明的另一些实施方式中，所述免疫测定装置先后对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集；优选地，所述免疫测定装置同时对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集。
在本发明的一些实施方式中，所述两个平行的免疫反应检测中，所述待测样本中的待测靶分子的含量/所述检测试剂中的特异性捕获分子的含量的比值不同；其中所述特异性捕获分子能够与待测靶分子特异性结合。
在本发明的另一些实施方式中，所述两个平行的免疫反应检测中，所述检测试剂中的特异性捕获分子的含量/所述待测样本中的待测靶分子的含量的比值更大的免疫反应的检测结果计为第一测值，另一个为第二测值。
在本发明的一些实施方式中，所述待测靶分子选自抗原或抗体。
在本发明的另一些实施方式中，所述特异性捕获分子包括与固相物质结合的第一捕获分子和标记物标记的第二捕获分子。
在本发明的一些具体实施方式中，所述特异性捕获分子的含量为第一捕获分子的含量、第二捕获分子的含量或者第一捕获分子与第二捕获分子的含量之和；优选为第一捕获分子的含量。
在本发明的一些实施方式中，所述系统执行如下步骤：
A1：对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质进行检测，其中对每个标准物质均进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值a和测值a’；优选地，所述两个平行的免疫反应检测中，特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值更大的免疫反应的检测结果计为测值a；
A2：计算测值a/测值a’的比值；
A3：做测值a/测值a’的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，并存储。
在本发明的另一些实施方式中，所述系统执行如下步骤：
调取存储的所述相关性标准曲线，将待测样本的第一测值/第二测值的比值代入所述相关性标准曲线进行计算，来确定待测样本中待测靶分子的浓度。
在本发明的一些实施方式中，所述系统执行如下步骤：
B1：对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质进行检测，其中对每个标准物质均进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值b和测值b’；优选地，所述两个平行的免疫反应检测中，特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值更大的免疫反应的检测结果计为测值b；
B2：做测值b与标准物质浓度的反应曲线A，并存储；
B3：做测值b’与标准物质浓度的反应曲线B，并存储；
B4：在反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域所对应的标准物质浓度重叠的部分中取一点，将该点对应的测值b/测值b’的比值记为临界点c，并存储。
在本发明的另一些实施方式中，所述系统执行如下步骤：
调取存储的所述反应曲线A、反应曲线B与临界点c，对测样本的第一测值/第二测值的比值与临界点c的大小进行判断；当待测样本的第一测值/第二测值的比值≤临界点c时，使用反应曲线A的前带区域计算待测样本中待测靶分子的浓度；当待测样本的第一测值/第二测值的比值＞临界点c时，使用反应曲线B的后带区域计算待测样本中待测靶分子的浓度。
本发明第二方面提供了一种计算机可读取的存储介质，其上存储有计算机程序产品，所述计算机程序产品使得本发明第一方面所述系统执行相应的步骤。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)利用本发明的系统进行免疫测试时，能够解决HOOK效应问题，避免HOOK效应造成漏检，所述方法不受检测范围限制；
(2)利用本发明的系统进行免疫测试时，可直接使用经典剂量-反应曲线计算，重复性良好，测定速度快；
(3)利用本发明的系统进行免疫测试时，检测范围大大超过常规检测方法。
附图说明
图1为抗原-抗体的剂量反应曲线。
图2为利用本发明的系统进行免疫测定时的计算方法1的原理图。
图3为利用本发明的系统进行免疫测试时的计算方法2的原理图。
图4为实施例2中标准物质浓度与A试剂信号和B试剂信号的反应曲线图。
图5为本发明所述的用于免疫测定的系统的结构示意图。
具体实施方式
为使本发明容易理解，下面将详细说明本发明。但在详细描述本发明前，应当理解本发明不限于描述的具体实施方式。还应当理解，本文中使用的术语仅为了描述具体实施方式，而并不表示限制性的。
在提供了数值范围的情况下，应当理解所述范围的上限和下限和所述规定范围中的任何其他规定或居间数值之间的每个居间数值均涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立包括在较小的范围中，并且也涵盖在本发明内，服从规定范围中任何明确排除的限度。在规定的范围包含一个或两个限度的情况下，排除那些包括的限度之任一或两者的范围也包含在本发明中。
除非另有定义，本文中使用的所有术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以在本发明的实施或测试中使用，但是现在描述了优选的方法和材料。
本发明提供了一种用于免疫测定的系统，其包括：免疫反应装置、免疫测定装置、控制器以及处理器，能够对每个样本均进行两个平行的测试，并根据得到的两个平行测试结果进行计算，最终得到待测样本中靶分子的浓度。所述系统无检测范围限制，能够避免HOOK效应造成的漏检。
本发明所述免疫反应装置上有反应杯，所述反应杯用于装载待测样本和检测试剂以进行免疫反应。本发明中，对反应杯的形式没有特殊限定，所述反应杯可以是单个的，也可以将多个反应杯组装在一起，形成条式(排式)或板式反应杯组。本发明中，用于装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯可以在所述免疫反应装置上的任意指定位置。在本发明一些实施例中，用于装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯在所述免疫反应装置上的位置相邻。
本发明所述免疫测定装置上设置有数据采集器；所述数据采集器可以是采集光信号的装置，所述光信号可以为被激发光照射后发光组合物发出的光信号、被化学能激发后发光组合物发出的光信号、电极表面发生电化学反应后产生的光信号或者透过悬浮质点介质的光信号等，因此本发明所述的系统可以应用于光激化学发光免疫测定、荧光免疫测定、电化学发光免疫测定、酶联免疫测定和比浊法免疫测定等。本发明所述数据采集器还可以对采集到的数据进行评估。
在本发明的一些具体实施方式中，所述系统用于光激化学发光免疫测定。此时，所述数据采集器为光子计数器，进一步地，所述免疫测定装置还包括光激发器，用于发出激发光并照射到反应杯中，进而激发免疫反应形成的复合物发出光信号，光子计数器接收光信号并记录读数。
本发明所述控制器按照设定指令将所述免疫反应装置中装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯移送到所述免疫测定装置处，之后所述数据采集器对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集。
在本发明的一些实施例中，所述免疫测定装置先后对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集；在本发明的另一些实施例中，所述免疫测定装置同时对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集。
所述数据采集器评估采集的数据后获得两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为第一测值和第二测值，测值传输到处理器后，处理器计算第一测值/第二测值的比值并确定待测样本中待测靶分子的浓度。
本发明用于免疫测定的系统能够对每个样本均进行两个平行的测试，两个测试中样本中待测靶分子的含量与检测试剂中特异性捕获分子的含量的比例存在差异，最终产生两个不同的信号，分别为第一测值和第二测值。随着待测靶分子含量(浓度)的增加，第一测值/第二测值的比值持续上升并呈现出一定的线性关系。据此原理本发明用于免疫测定的系统的处理器能够通过执行以下两种方法计算样本中待测靶分子浓度的方法，分别如下：
计算方法1、直接由第一测值/第二测值的比值计算样本中待测靶分子的浓度：
如图2所示，根据第一测值/第二测值的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，处理器将待测靶分子检测的第一测值/第二测值的比值代入所述曲线算得其浓度。
计算方法2、使用反应曲线A或者反应曲线B计算样本中待测靶分子的浓度：
在抗原-抗体的剂量反应曲线(图1)中，当抗体量固定时，反应信号会随着抗原量的增加呈现出先上升后下降的现象。将反应信号随抗原量增加而上升的区域称为前带区域，反应信号随抗原量增加而下降的区域称为后带区域，前带与后带之间衔接的区域称为等价带。
如图3所示，反应曲线A和反应曲线B分别为根据第一测值和第二测值与标准物质浓度获得的反应曲线。在反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域存在浓度重叠的部分(如图3中虚线框中部分)，在上述浓度重叠的部分中取一点，该点对应的第一测值/第二测值的比值(如图中A/B＝15)作为临界点c，并储存。
当处理器判定待测样本的第一测值/第二测值的比值≤临界点c时，使用反应曲线A的前带区域计算其浓度。
当处理器判定待测样本的第一测值/第二测值的比值＞临界点c时，使用反应曲线B的后带区域计算其浓度。
对应于上述计算方法1，本发明提供的用于免疫测定的系统执行如下步骤：
首先所述系统通过执行如下步骤获得测值a/测值a’的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线：
A1：控制器将所述免疫反应装置中装载同一待测靶分子浓度的标准物质和相应检测试剂的两个反应杯移送到免疫测定装置处，数据采集器对同一待测靶分子浓度的标准物质的两个平行的免疫反应检测进行数据采集，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值a和测值a’；
A2：处理器计算测值a/测值a’的比值；
A3：处理器根据待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质的测值a和测值a’，做测值a/测值a’的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，并存储。
整个测试流程中，可以设定检测试剂中特异性捕获分子的含量/待测样本中待测靶分子的含量比值更大的测值为测值a，另一个为a’；反之亦可。
然后，所述系统通过执行如下步骤确定待测样本中待测靶分子的浓度：
S1：控制器将所述免疫反应装置中装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯移送到免疫测定装置处，数据采集器对同一待测靶分子浓度的标准物质的两个平行的免疫反应检测进行数据采集，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别为第一测值和第二测值；在本发明一些实施例中，所述检测试剂中的特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量比值更大的测值计为第一测值，另一个为第二测值；
S2：处理器计算待测样本的第一测值/第二测值的比值；
S3：处理器调取存储的所述相关性标准曲线，将所述待测样本的第一测值/第二测值的比值代入所述相关性标准曲线进行计算，来确定待测样本中待测靶分子的浓度。
整个测试流程中，可以设定特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量比值更大的测值为第一测值，另一个为第二测值；反之亦可。
对应于上述计算方法2，本发明提供的用于免疫测定的系统执行如下步骤：
首先所述系统通过执行如下步骤获得反应曲线A、反应曲线B以及临界点c：
B1：控制器将所述免疫反应装置中装载同一待测靶分子浓度的标准物质和相应检测试剂的两个反应杯移送到免疫测定装置处，数据采集器对同一待测靶分子浓度的标准物质的两个平行的免疫反应检测进行数据采集，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值b和测值b’；
B2：处理器根据待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质的测值b，做测值b与标准物质浓度的反应曲线A，并存储；
B3：处理器根据待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质的测值b’，做测值b’与标准物质浓度的反应曲线B，并存储；
B4：在反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域存在浓度重叠的部分(如图3中虚线框中部分)，在上述浓度重叠的部分中取一点，将该点对应的测值b和测值b’的比值记为临界点c，并存储。
整个测试流程中，可以设定特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量比值更大的测值为测值b，另一个为b’；反之亦可。
然后，所述系统通过执行如下步骤确定待测样本中待测靶分子的浓度：
S1：控制器将所述免疫反应装置中装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯移送到免疫测定装置处，数据采集器对同一待测靶分子浓度的标准物质的两个平行的免疫反应检测进行数据采集，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别为第一测值和第二测值；在本发明一些实施例中，所述检测试剂中的特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量比值更大的测值计为第一测值，另一个为第二测值；
S2：处理器计算待测样本的第一测值/第二测值的比值；
S3：处理器调取存储的所述反应曲线A、反应曲线B与临界点c，并对测样本的第一测值/第二测值的比值与临界点c的大小进行判断；当处理器判定所述待测样本的第一测值/第二测值的比值≤c时，使用反应曲线A的前带区域计算样本浓度；当处理器判定待测样本的第一测值/第二测值的比值＞c时，使用反应曲线B的后带区域计算样本浓度。
整个测试流程中，可以设定特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量比值更大的测值为第一测值，另一个为第二测值；反之亦可。
在本发明的一些实施方式中，所述两个平行的免疫反应检测中，检测试剂中特异性的捕获分子的含量/待测样本中待测靶分子的含量比值存在差异，可以参考但不限于如下方式达到此相似的效果：
Figure BDA0003331849030000091
本发明所述的待测靶分子指任何可以用免疫方式检测的无机或有机分子，包括任何目标生物物质。代表所述待测靶分子的实例是细胞、病毒、亚细胞颗粒、蛋白质、脂蛋白、糖蛋白、肽、多肽、核酸、寡糖、多糖、脂多糖、细胞代谢物、半抗原、激素、药物物质、生物碱、甾族化合物、维生素、氨基酸和糖。
本发明所述的特异性捕获分子指能够由于分子之间的相互吸引作用而分子键合到另一分子(待测靶分子)上的分子。所述特异性捕获分子的实例包括，但不限于，蛋白质、核酸、碳水化合物、脂质和有机小分子。所述特异性捕获分子是指能够识别并结合特定待测靶分子而非任意靶分子的捕获分子。
在本发明的一些实施方式中，所述待测靶分子选自抗原或抗体。根据本发明的一些实施方式，所述抗原指具有免疫原性的任意物质。包括但不限于具有免疫原性的上述靶分子的实例中列举的物质。根据本发明的一些实施方式，所述特异性捕获分子选自特异性结合对的一个成员，如抗体，而待测靶分子为该特异性结合对的另一成员，如其配对的抗原。术语“抗体”在本文中以最广义使用，并明确涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两个完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)，以及抗体片段(例如Fab区、Fc区、单链抗体)。
在本发明的另一些实施方式中，免疫反应检测中采用的所述特异性捕获分子包括固相物质结合的第一捕获分子和标记物标记的第二捕获分子。所述第一捕获分子和第二捕获分子可以相同也可以不同，可以是同种或不同种捕获分子，但均能够特异性结合待测靶分子。
在本发明的一些实施方式中，所述第一捕获分子结合的固相物质选自颗粒、微粒、珠子、电极和多孔板。在一些实施例中，所述第一捕获分子发光微球结合，其含有发光基团，能够迅速吸收单线态氧，然后发射出一定波长(如500-615nm)的光。
本发明所述的“标准物质”是指所含待测靶分子含量已知或者能够对其所含的待测靶分子进行定量测定赋值的待测靶分子溶液。
本发明第二方面涉及一种计算机可读取的存储介质，所述计算机可读取的存储介质上存储有计算机程序产品，所述计算机程序产品使得所述系统执行上述免疫检测的相关步骤。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述系统还包括上述计算机可读取的存储介质。
实施例
为使本发明更加容易理解，下面通过以光激化学发光法免疫检测系统检测AFP项目为例的具体实施例来进一步详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围。本发明中所使用的原料或组分若无特殊说明均可以通过商业途径或常规方法制得。
光激化学发光分析技术的技术原理为：敏化剂在激光照射下能将周围环境中的氧分子激发为单线态氧分子，单线态氧分子能够与相距200nm左右的发光组合物反应，产生一定波长的光信号；当样品中包含待测抗原或抗体时，该抗原抗体的免疫反应能够使包含敏化剂的供体颗粒与包含发光组合物的受体颗粒结合，从而产生特定波长的光信号，检测该光信号即可检测待测抗原或抗体的含量。
甲胎蛋白(AFP)是一种糖蛋白，也叫胎儿甲种球蛋白，属于白蛋白家族。在原发性肝癌(PLC)患者血清中的AFP(甲胎蛋白)值高低悬殊极大，正常值与病理值极差可以达到7个数量级。有文献报道，用IEMA直接测定一名原发性肝癌患者原血清AFP浓度为29ng/mL，然而将血清标本做一系列稀释后测定并计算出AFP实际浓度为5.9×106ng/mL。可见，常规技术中对于AFP的检测仍有很大的缺陷。
实施例1：常规光激化学发光免疫检测系统检测AFP样本
测试样本(收集自临床血清样本)：
样本1：阴性血清样本(真实测值约5ng/mL)
样本2：低值阳性血清样本(真实测值约100ng/mL)
样本3：强阳性血清样本(真实测值约2×106ng/mL)
所采用的试剂盒为科美博阳诊断技术(上海)有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒(化学发光法)(批号：L2001)，其主要组分为：
试剂1：包被AFP抗体的发光微粒；
试剂2：生物素标记的AFP抗体。
测试系统：
Figure BDA0003331849030000111
分析仪。
检测结果如表1所示。
表1
初测值 测值ng/mL
样本1 7.41
样本2 109.43
样本3 11.79
表1所示的结果为常规系统直接检测的结果，样本3测值仅为11.79ng/mL，若不结合临床表现则极易将其误判为弱阳性样本。在已知样本3为强阳性样本的情况下，使用稀释液将其50倍稀释后重新检测，其检测结果如表2所示。
表2
50倍稀释 测值ng/mL
稀释样本 >1000
如上，50倍稀释后的样本3测值>1000ng/mL，可以确定其为HOOK样本，但依然不能得到具体的测值。将稀释后的样本再次使用稀释液稀释50倍后，测值如下表3所示。
表3
2500倍稀释 测值ng/mL
稀释样本 849.51
如上，2500倍稀释后的样本测值为849.51ng/mL，经反算可得样本3的真实浓度约为2.12×106ng/mL。
实施例2：系统1检测AFP样本
测试标准物质：浓度范围为0ng/mL-4×106ng/mL的纯化AFP抗原溶液
测试样本(收集自临床血清样本)：
样本1：阴性(真实测值约5ng/mL)
样本2：低值阳性(真实测值约100ng/mL)
样本3：强阳性(真实测值约2×106ng/mL)
所采用的试剂盒的主要组分：
试剂A：包被AFP抗体的发光微粒(浓度100μg/mL)，生物素标记的AFP抗体(浓度2μg/mL)；
试剂B：包被AFP抗体的发光微粒(浓度20μg/mL)，生物素标记的AFP抗体(浓度0.4μg/mL)。
系统1：
设定免疫反应装置上相邻的两个反应杯为同一样本测试组，检测试剂中的特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量比值更大的测值计为第一测值，另一个为第二测值。
所述系统执行的检测步骤如下：
1.控制器将免疫反应装置中装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯移送到免疫测定装置处；
2.光激发器发出激光并照射到反应杯中，进而激发待测样本中的待测靶分子与检测试剂中的特异性捕获分子所形成的复合物发出光信号；
3.计数器接收光信号同时对两个平行的免疫反应检测进行数据采集，记录免疫反应的检测结果分别为第一测值和第二测值；
4.处理器计算同一待测样本的第一测值/第二测值的比值，并调取储存的数据进行判断，计算待测样本中靶分子的浓度。
采用上述系统对梯度稀释的AFP标准物质(编号1-20)进行检测，检测结果如表4所示。
处理器根据表4数值分别做标准物质浓度与A试剂信号和B试剂信号的反应曲线A和反应曲线B，如图4；可见标准物质1-11对应的为反应曲线A的前带区域，标准物质9-20对应的为反应曲线B的后带区域，因此，反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域存在的浓度重叠的部分为标准物质9-11的浓度范围，其对应的A/B信号比值为15.05-24.31，设定其中间一点A/B信号比＝19作为临界点并存入所述系统的计算机可读取的存储介质中。
对三组样本进行测试，检测结果如表5所示。
表4
Figure BDA0003331849030000131
表5
Figure BDA0003331849030000141
由表5所示的结果可以看出，采用本发明的系统1进行免疫测定的方法能够避免HOOK效应带来的样本测值偏低的问题，可以直接得到高达2×106ng/mL的检测结果，采用本发明的系统1进行免疫测定的方法不受检测范围限制。
实施例3：系统2检测AFP样本
测试标准物质：浓度范围为0ng/mL-4×106ng/mL的纯化AFP抗原溶液
测试样本(收集自临床血清样本)：
样本1：阴性(真实测值约5ng/mL)
样本2：低值阳性(真实测值约100ng/mL)
样本3：强阳性(真实测值约2×106ng/mL)
所采用的试剂盒的主要组分：
试剂A：包被AFP抗体的发光微粒(浓度100μg/mL)，生物素标记的AFP抗体(浓度2μg/mL)；
试剂B：包被AFP抗体的发光微粒(浓度20μg/mL)，生物素标记的AFP抗体(浓度0.4μg/mL)。
系统2：
设定免疫反应装置上中心对称的两个反应杯为同一样本测试组，检测试剂中的特异性捕获分子的含量/待测样本中的待测靶分子的含量比值更大的测值计为第一测值，另一个为第二测值。
所述系统执行的检测步骤如下：
1.控制器将免疫反应装置中装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯移送到免疫测定装置处；
2.光激发器发出激光并照射到反应杯中，进而激发待测样本中的待测靶分子与检测试剂中的特异性捕获分子所形成的复合物发出光信号；
3.计数器接收光信号同时对两个平行的免疫反应检测进行数据采集，记录免疫反应的检测结果分别为第一测值和第二测值；
4.处理器计算同一待测样本的第一测值/第二测值的比值，并调取储存的数据进行判断，计算待测样本中靶分子的浓度。
采用上述系统对梯度稀释的AFP标准物质(编号1-20)进行检测，检测结果如表6所示。
处理器根据表6数值做A/B信号比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，并将标准曲线存入所述系统的计算机可读取的存储介质中。
对三组样本进行测试，检测结果如表7所示。
表6
Figure BDA0003331849030000151
表7
Figure BDA0003331849030000152
Figure BDA0003331849030000161
由表7所示的结果可以看出，采用本发明的系统2进行免疫测定的方法能够避免HOOK效应带来的样本测值偏低的问题，可以直接得到高达2×106ng/mL的检测结果，采用本发明的系统2进行免疫测定的方法不受检测范围限制。
实施例4：超高值样本测值精密度验证
所采用的试剂盒的主要组分：
试剂A：包被AFP抗体的发光微粒(浓度100μg/mL)，生物素标记的AFP抗体(浓度2μg/mL)；
试剂B：包被AFP抗体的发光微粒(浓度20μg/mL)，生物素标记的AFP抗体(浓度0.4μg/mL)。
测试系统：实施例2中的系统1
测试结果如下表8所示。
表8
Figure BDA0003331849030000162
根据表8的结果可以看出，采用本发明所述系统进行时，三例高值样本的测值重复10次测定CV均在10％范围内，表明其精密度结果良好。
应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明作出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。

Claims (12)

1.一种用于免疫测定的系统，其包括：
免疫反应装置，所述免疫反应装置上有反应杯，所述反应杯用于装载待测样本和检测试剂以进行免疫反应；
免疫测定装置，所述免疫测定装置上设置有数据采集器；
控制器，所述控制器用于将所述免疫反应装置中装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯移送到所述免疫测定装置处，所述数据采集器对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集并评估采集的数据，获得两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为第一测值和第二测值；
处理器，所述处理器用于计算第一测值/第二测值的比值并确定待测样本中待测靶分子的浓度。
2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述用于装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯放置在所述免疫反应装置上的任意指定位置；优选地，所述用于装载同一待测样本和相应检测试剂的两个反应杯在所述免疫反应装置上的位置相邻。
3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述免疫测定装置先后对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集；优选地，所述免疫测定装置同时对同一待测样本的两个平行的免疫反应检测进行数据采集。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的系统，其特征在于，所述两个平行的免疫反应检测中，所述待测样本中的待测靶分子的含量/所述检测试剂中的特异性捕获分子的含量的比值不同；其中所述特异性捕获分子能够与待测靶分子特异性结合。
5.根据权利要求4所述的系统，其特征在于，所述两个平行的免疫反应检测中，所述检测试剂中的特异性捕获分子的含量/所述待测样本中的待测靶分子的含量比值更大的免疫反应的检测结果计为第一测值，另一个为第二测值。
6.根据权利要求4或5所述的系统，其特征在于，所述待测靶分子选自抗原或抗体；和/或
所述特异性捕获分子包括与固相物质结合的第一捕获分子和标记物标记的第二捕获分子。
7.根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述特异性捕获分子的含量为第一捕获分子的含量、第二捕获分子的含量或者第一捕获分子与第二捕获分子的含量之和；优选为第一捕获分子的含量。
8.根据权利要求1-7中任意一项所述的系统，其特征在于，所述系统执行如下步骤：
A1：对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质进行检测，其中对每个标准物质均进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值a和测值a’；优选地，所述两个平行的免疫反应检测中，特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值更大的免疫反应的检测结果计为测值a；
A2：计算测值a/测值a’的比值；
A3：做测值a/测值a’的比值与标准物质浓度的相关性标准曲线，并存储。
9.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，所述系统执行如下步骤：
调取存储的所述相关性标准曲线，将待测样本的第一测值/第二测值的比值代入所述相关性标准曲线进行计算，来确定待测样本中待测靶分子的浓度。
10.根据权利要求1-7中任意一项所述的系统，其特征在于，所述系统执行如下步骤：
B1：对待测靶分子含量已知的一系列不同浓度标准物质进行检测，其中对每个标准物质均进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为测值b和测值b’；优选地，所述两个平行的免疫反应检测中，特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值更大的免疫反应的检测结果计为测值b；
B2：做测值b与标准物质浓度的反应曲线A，并存储；
B3：做测值b’与标准物质浓度的反应曲线B，并存储；
B4：在反应曲线A的前带区域与反应曲线B的后带区域所对应的标准物质浓度重叠的部分中取一点，将该点对应的测值b/测值b’的比值记为临界点c，并存储。
11.根据权利要求10所述系统，其特征在于，所述系统执行如下步骤：
调取存储的所述反应曲线A、反应曲线B与临界点c，对测样本的第一测值/第二测值的比值与临界点c的大小进行判断；当待测样本的第一测值/第二测值的比值≤临界点c时，使用反应曲线A的前带区域计算待测样本中待测靶分子的浓度；当待测样本的第一测值/第二测值的比值＞临界点c时，使用反应曲线B的后带区域计算待测样本中待测靶分子的浓度。
12.一种计算机可读取的存储介质，其上存储有计算机程序产品，其特征在于，所述计算机程序产品使得权利要求1-11中任一项所述系统执行相应的步骤。
CN202111282853.5A 2021-11-01 2021-11-01 一种用于免疫测定的系统 Pending CN116068180A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111282853.5A CN116068180A (zh) 2021-11-01 2021-11-01 一种用于免疫测定的系统

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111282853.5A CN116068180A (zh) 2021-11-01 2021-11-01 一种用于免疫测定的系统

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116068180A true CN116068180A (zh) 2023-05-05

Family

ID=86180786

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111282853.5A Pending CN116068180A (zh) 2021-11-01 2021-11-01 一种用于免疫测定的系统

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116068180A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106872420B (zh) 一种时间分辨荧光定量检测尿微量白蛋白的试剂盒及方法
US8956823B2 (en) Anti-antibody reagent
CN105403698A (zh) 采用内部校正系统的诊断性试验试剂盒
JPH0754324B2 (ja) 液体試料中の抗原および／または抗体を測定するための試験用剤
US6551788B1 (en) Particle-based ligand assay with extended dynamic range
CN109975559B (zh) 一种时间分辨荧光定量检测25羟基维生素d的试剂盒及方法
CN109470869B (zh) 免疫测定方法、用于鉴定免疫测定的系统和试剂盒
KR101718485B1 (ko) 면역크로마토그래피의 형광반응 또는 유색반응을 측정하기 위한 디바이스
CN110018307A (zh) 一种光激化学发光检测仪及其使用方法
JP2020526742A (ja) 高濃度の分析物等、分析物を測定するための用量反応曲線の減少信号部分を使用したサンドイッチ型アッセイ
US20230305001A1 (en) Ultra-sensitive digital rapid chromatographic assay system and method for analytes detection
CN116068180A (zh) 一种用于免疫测定的系统
CN113113079B (zh) 一种识别定量免疫层析试验中钩状效应的方法
CN116068186A (zh) 一种鉴定免疫测定中hook效应样本的方法、系统和应用
CN116068183A (zh) 一种免疫测定方法及其应用
CN116413445A (zh) 一种检测总甲状腺素含量的检测卡、试剂盒及其检测方法
CN116068185A (zh) 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置
CN116068182A (zh) 一种用于检测待测靶分子浓度的免疫测定装置
JP4556605B2 (ja) 標的物質の測定方法および測定試薬
CN116068181A (zh) 一种免疫测定试剂盒、测定方法和系统
CN116068184A (zh) 一种免疫测定试剂盒的使用方法及其检测系统
JPS6281566A (ja) 微粒子の螢光強度測定による定量方法
RU2710262C1 (ru) Способ проведения биологического микроанализа
JPS6336151A (ja) 微粒子の螢光強度測定による定量方法
KR102378634B1 (ko) 신속 면역 진단 방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination