CN116059147A

CN116059147A - 金针花萃取物用于护肤的用途

Info

Publication number: CN116059147A
Application number: CN202211189729.9A
Authority: CN
Inventors: 林咏翔
Original assignee: TCI Co Ltd
Current assignee: TCI Co Ltd
Priority date: 2019-10-18
Filing date: 2020-02-12
Publication date: 2023-05-05
Also published as: CN112675248A; TW202116344A; TWI789553B

Abstract

本发明涉及植物提取物领域，尤其涉及金针花萃取物用于护肤的用途。本发明提供一种金针花萃取物用于提升抗醣化活性、抑制黑色素生成、提升皮肤抗紫外线能力、提升SOD活性或降低ROS表现量的用途，所述金针花萃取物是以溶剂萃取金针花所获得，所述溶剂为水、醇、或醇水混合物。

Description

金针花萃取物用于护肤的用途

本申请为申请人根据母案申请(申请号：202010088439.X，申请日：2020年2月12日，发明名称：金针花萃取物用于减脂及提升基础代谢率的用途)所提出的分案申请。

技术领域

本发明涉及植物提取物领域，尤其涉及金针花萃取物用于护肤的用途。

背景技术

脂肪为人体内的必要成分，但过度的脂肪成分对人体会造成损害。国家经济愈来愈起飞的国家，肥胖(又称为代谢症候群)问题只增不减，因此以亚洲区来看，中国会是下一波肥胖问题增加幅度大幅上升的国家。

因此肥胖是目前亟需解决的问题。

除此之外，醣化反应(glycation)与皮肤与体内老化相关，更与危害国人健康甚巨的糖尿病有关。醣化反应的本质就是梅纳反应(Maillard reaction)或称为羰胺褐变反应(carbonyl-amine browning)，这是糖的醛(酮)基与含胺基物质(例如蛋白质、胜肽、胺基酸、磷脂、核酸或上述的衍生物)的胺基之间的一种非酵素性醣化(nonenzymaticglycosylation；glycation)反应。长期处于高血糖症状下，会引起葡萄糖自动氧化与蛋白质糖化作用，形成高度醣化终产物(advanced glycation end products,AGEs)。而AGEs更可引起多种老化疾病，例如皮肤皱纹、白内障、粥状动脉硬化、肾脏衰竭等。

近年来，为忧郁症所苦的人数正增加中。此外，若包含未显现精神症状的所谓假性忧郁症，则其人数增加到相当高的比例。

忧郁症的原因现今仍未明确了解，惟不限于生物学因素、性格因素。例如：现代社会环境的激烈变化、舍弃弱者的社会构造、受单一价值观所支配而排除异端的风潮等被认为与忧郁症患者的增加脱不了关系。

忧郁症的治疗可举例如：首先多休养、其次药物治疗、或者组合两者。然而，在现实情况中并不轻易允许休养等，而实际上多以抗忧郁剂掩饰。

皮肤是保护人类个体的最大屏障，它具有对抗水分散失、病原菌以及各种环境损害的功能。暴露于大量的紫外线(ultraviolet,UV)、游离辐射(ionizing radiation)、药物或异生物质(xenobiotics)会促使皮肤生成活性氧族(reactive oxygen species,ROS)以及自由基(free radicals)。当所累积的活性氧族以及自由基的数量超过细胞或组织本身的抗氧化能力时，便会形成氧化性压力(oxidative stress)。接着，活性氧族以及自由基会与细胞内的组合物(包括DNA、蛋白质以及脂质等)相反应，进而对皮肤产生非所欲的影响。

黑色素生成(melanogenesis)(亦即黑色素合成(melanin synthesis))是指当皮肤黑色素细胞(dermal melanocyte)在受到环境因素(诸如紫外线(ultraviolet,UV))或生理因素(诸如疲劳(fatigue)、压力(stress)、慢性发炎(chronic inflammation)以及体内不正常的α-促黑素细胞素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)的释放)的诱发之后，在黑色素细胞内的酪胺酸(tyrosine)经由酪胺酸酶(tyrosinase)的催化(它是黑色素生成的速率-限制步骤(rate-limiting step))以及一系列的氧化还原反应而被转化为黑色素(melanin)的过程。黑色素可以保护皮肤的下皮层(hypodermis)免于紫外线所造成的光损害(photodamage)，但是当黑色素被大量地累积于皮肤上或不正常地分布时可能会导致皮肤疾病(skin disorders)，诸如雀斑(lentigines)、斑点(freckle)、黑皮病(melasma)、老人斑(age spots)以及色素过多(hyperpigmentation)等。

为了达到皮肤美白(skin whitening)的目的，目前已有许多黑色素生成抑制剂(melanogenesis inhibitors)被使用来淡化或去除累积于皮肤上的黑色素或是黑斑，而这些黑色素生成抑制剂大多是经由下列的作用机制来调控黑色素的生成：(1)在黑色素生成之前：例如抑制酪胺酸酶的mRNA转录(mRNA transcription)(诸如C2-神经酰胺(C2-ceramide)、维生素A酸(tretinoin)以及香草酸(vanillic acid))与醣化(glycosylation)(诸如泛硫醇磺酸钙(calcium D-pantetheine-S-sulfonate,PaSSO3Ca))；(2)在黑色素生成的期间：例如抑制酪胺酸酶的活性(诸如对苯二酚(hydroquinone)、熊果苷(arbutin)以及曲酸(kojic acid))、加速酪胺酸酶的降解(degradation)(诸如亚麻油酸(linoleicacid)以及苯硫脲(phenylthiourea))，以及促进多巴醌(dopaquinone)的还原(reduction)(诸如抗坏血酸(ascorbic acid))；以及(3)在黑色素生成之后：例如促进黑色素分解(诸如亚麻油酸(linoleic acid))、抑制黑色素体运输(melanosome transfer)(诸如烟碱酰胺(Niacinamide)以及丝胺酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor))，以及加速皮肤更新(turnover)(诸如甘草甙(liquiritin)以及乙醇酸(glycolic acid))。

近年来，人类对于皮肤美白与保养的需求与日俱增，然而目前所使用的黑色素合成抑制剂在淡化或去除黑色素上的效果仍不尽理想。此外，目前常见用来解决黑色素生成问题的方式大多为利用涂抹于皮肤表面的医药品或保养品。

脑血管病变目前占中国台湾死亡率第二，即使脑中风病变轻微，也使病患及家属经济上及精神上产生极大的负担，中风主要的病因是因血管栓塞造成脑组织缺血，使局部神经元因缺血而缺氧以至死亡。目前已经了解部份中枢神经损伤死亡的病理机转是脑缺血/缺氧后，神经元的能源供应系统受到干扰，大量释出神经传导素(麸氨酸)，经由活化NMDA接受器影响钙离子恒定系统，产生自由基及一氧化氮，导致细胞二度的伤害。最进几年的研究更发现氧化产生的自由基也是重要的神经细胞死亡原因，也发现了许多抗氧化基因及反应机制。

另一方面，粒线体(mitochondria)亦被称为细胞的发电站，因为它是细胞内合成三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)(一种传递能量的分子)的主要场所，为细胞的各项活动提供了化学能量。粒线体若损坏，对细胞以及生物个体的影响甚巨。粒线体在合成ATP的过程中会产生很多的自由基，自由基的活性极强，会与体内任何物质发生强烈的氧化反应而破坏其正常功能。自由基日积月累地伤害粒线体内的酵素与DNA，渐渐地使其功能下降进而使各器官组织的功能衰退。因此，如何提升神经细胞的粒线体活性，进而提升神经细胞的抗氧化能力以达到保护神经的效用，成为本领域的重要课题。

然而，目前用来解决上述问题的医药品、食品产品或保养品大多由化学成分所制成，长期使用不但对人体健康有害无益，且这些产品往往价格昂贵，并非为一般使用者所能负担。为了解决上述问题，本领域的技术人员亟需研发出具有提升抗醣化活性、抑制细胞脂肪堆积、促进脂肪分解、提升骨骼肌基础代谢率、抗忧郁、抑制黑色素生成、提升皮肤抗紫外线能力、提升超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、降低ROS表现量、提升粒线体活性、及提升抗氧化能力的功效的新颖食品产品或保养品以造福有此需求的广大族群。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的为提供一种金针花(Hemerocallis fulva Linn.)萃取物用于制备一调控X射线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementary protein1,XRCC1)基因、尿嘧啶DNA醣苷酶(uracil DNA glycosylase,UNG)基因、8-氧代鸟嘌呤DNA醣苷酶(8-oxoguanine DNA glycosylase,OGG1)基因、N-甲基化嘌呤DNA醣苷酶(N-methylpurine DNA glycosylase,MPG)基因、ERCC裁除式修复1，内核酸酶非催化次单元(ERCC excision repair 1,endonuclease non-catalytic subunit,ERCC1)基因、ERCC裁除式修复6，内核酸酶非催化次单元(ERCC excision repair 6,endonuclease non-catalytic subunit,ERCC6)基因、谷胱甘肽过氧化酶1(glutathione peroxidase1,GPX1)基因、mutL同源物1(mutL homolog 1,MLH1)基因、黑色素细胞刺激素6(melanocyte-stimulating hormone 6,MSH6)基因、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因、有丝分裂原-活化蛋白质激酶去磷酸化酶-1(mitogen-activated protein kinasephosphatase 1,MKP-1)基因、及多巴去羧酶(dopa decarboxylase,DDC)基因的表现量的组合物的用途，其中该金针花萃取物是以一溶剂萃取一金针花所获得，该溶剂为水、醇、或醇水混合物。

在本发明的一实施例中，该SOD基因是一SOD1基因或一SOD2基因。

在本发明的一实施例中，该XRCC1基因、该UNG基因、该OGG1基因、该MPG基因、该ERCC1基因、该ERCC6基因、该GPX1基因、该MLH1基因、该MSH6基因、该SOD基因、及该DDC基因被向上调控，该MKP-1基因被向下调控。

在本发明的一实施例中，该金针花萃取物的有效浓度为至少1mg/mL。

本发明的另一目的为提供一种金针花(Hemerocallis fulva Linn.)萃取物用于制备一提升抗醣化活性的组合物的用途，其中该金针花萃取物是以一溶剂萃取一金针花所获得，该溶剂为水、醇、或醇水混合物。

在本发明的一实施例中，该金针花萃取物的有效浓度为至少100mg/mL。

本发明的另一目的为提供一种金针花(Hemerocallis fulva Linn.)萃取物用于制备一抑制细胞脂肪堆积、促进脂肪分解及提升骨骼肌基础代谢率的组合物的用途，其中该金针花萃取物是以一溶剂萃取一金针花所获得，该溶剂为水、醇、或醇水混合物。

在本发明的一实施例中，该金针花萃取物的有效浓度为至少0.0625mg/mL。

本发明的另一目的为提供一种金针花(Hemerocallis fulva Linn.)萃取物用于制备一抑制黑色素生成、提升皮肤抗紫外线能力、提升超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性、及降低活性氧族(reactive oxygen species,ROS)表现量的组合物的用途，其中该金针花萃取物是以一溶剂萃取一金针花所获得，该溶剂为水、醇、或醇水混合物。

在本发明的一实施例中，该金针花萃取物的有效浓度为至少0.5mg/mL。

本发明的另一目的为提供一种金针花(Hemerocallis fulva Linn.)萃取物用于制备一提升粒线体活性及提升抗氧化能力的组合物的用途，其中该金针花萃取物是以一溶剂萃取一金针花所获得，该溶剂为水、醇、或醇水混合物。

本发明的另一目的为提供一种金针花(Hemerocallis fulva Linn.)萃取物用于制备一抗忧郁的组合物的用途，其中该金针花萃取物是以一溶剂萃取一金针花所获得，该溶剂为水、醇、或醇水混合物。

在本发明的一实施例中，该组合物是一食品产品或一保养品。

综上所述，本发明金针花萃取物的功效在于：能调控XRCC1基因、UNG基因、OGG1基因、MPG基因、ERCC1基因、ERCC6基因、GPX1基因、MLH1基因、MSH6基因、SOD基因、MKP-1基因、及DDC基因的表现量，达到提升抗醣化活性、抑制细胞脂肪堆积、促进脂肪分解及提升骨骼肌基础代谢率、抗忧郁、抑制黑色素生成、提升皮肤抗紫外线能力、提升SOD活性、及降低ROS表现量、提升粒线体活性及提升抗氧化能力的功效。

以下将进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

附图说明

图1是本发明金针花萃取物在抗醣化上的功效的数据图；

图2是本发明金针花萃取物在抑制脂肪堆积上的功效的数据图；

图3是本发明金针花萃取物在促进脂肪分解上的功效的数据图，其中“***”表示与对照组比较，p<0.001；

图4是本发明金针花萃取物在提升骨骼肌基础代谢率上的功效的数据图，其中“***”表示与对照组比较，p<0.001；

图5是本发明金针花萃取物在抑制与抑制忧郁相关的MKP-1基因表现上的功效的数据图，其中“**”表示与对照组比较，p<0.01；

图6是本发明金针花萃取物在提升与促进多巴胺相关的DDC基因表现上的功效的数据图，其中“*”表示与对照组比较，p<0.05；

图7是本发明金针花萃取物在抵抗及防御UVA能力上的功效的数据图，其中“*”表示与UVA组比较，p<0.05；

图8是本发明金针花萃取物在抑制黑色素生成上的功效的数据图，其中“*”表示与对照组比较，p<0.05；

图9是本发明金针花萃取物在提升皮肤纤维母细胞的SOD活性上的功效的数据图；

图10是本发明金针花萃取物在降低皮肤纤维母细胞的ROS表现量上的功效的数据图，其中“***”表示p<0.001；

图11是本发明金针花萃取物在提升神经细胞的粒线体活性上的效用的数据图，其中“***”表示与对照组比较，p<0.001；

图12是本发明金针花萃取物在提升神经细胞的抗氧化能力上的功效的数据图，其中“***”表示p<0.001；

图13是本发明金针花萃取物在提升与神经细胞抗氧化相关的基因表现上的功效的数据图，其中“*”表示与对照组比较，p<0.05；“**”表示与对照组比较，p<0.01；“***”表示与对照组比较，p<0.001。

具体实施方式

定义

本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。

使用Excel软件进行统计分析。数据以平均值±标准偏差(SD)表示，个此之间的差异以史徒登氏t-检定(student's t-test)分析。

依据本发明，金针花(Hemerocallis fulva Linn.)又称萱草、忘忧草或黄花菜，是百合科(Liliaceae)萱草属(Hemerocallis)的多年生草本植物，株高约60～80cm，地下根部多肉质；叶自根部簇生，呈线形狭长，可及80cm。金针花可供食用及药用，具有治水肿、小便不利、淋浊、带下、黄疸及便血的功效。

如本文中所使用的，用语「抑制黑色素生成(inhibition of melanogenesis)」与「抑制黑色素合成(inhibition of melanin synthesis)」、「去色素(depigmenting)」、「淡化黑色素(lightening the melanin)」、「美白(whitening)」、「肤色淡化(skin colorlightening)」、「漂白(bleaching)」、「净白」、「增白(brightening)」、「退黑」以及「驱黑」可被交换地使用。

依据本发明，保养品可进一步包含有一被广泛地使用于保养品制造技术的可接受的佐剂(acceptable adjuvant)。例如，该可接受的佐剂可包含有一或多种选自于下列的试剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂(screening agent)、螯合剂、界面活性剂、染色试剂(coloring agent)、增稠剂(thickening agent)、填料(filler)、香料以及气味吸收剂。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

依据本发明，保养品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于护肤(skincare)或化妆(makeup)的形式，这包括，但不限于：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或复合型的乳剂、凝胶、软膏、乳霜、面膜(mask)、贴片、贴布(pack)、擦剂、粉末、气溶胶、喷雾、乳液、乳浆、糊剂、泡沫、分散液、滴剂、慕斯(mousse)、防晒油(sunblock)、化妆水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妆产品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身体清洁产品(body cleansingproducts)等。

依据本发明，保养品亦可与一或多种选自于下列的已知活性的外用剂(externaluse agents)一起合并使用：美白剂(whitening agents)[诸如维生素A酸(tretinoin)、儿茶素(catechin)、曲酸、熊果苷以及维生素C]、保湿剂、抗发炎剂(anti-inflammatoryagents)、杀菌剂(bactericides)、紫外线吸收剂(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[诸如芦荟萃取物(aloe extract)]、皮肤营养剂(skin nutrients)、麻醉剂(anesthetics)、抗痘剂(anti-acne agents)、止痒剂(antipruritics)、止痛剂(analgesics)、抗皮肤炎剂(antidermatitis agents)、抗过角化剂(antihyperkeratolytic agents)、抗干皮肤剂(anti-dry skin agents)、抗汗剂(antipsoriatic agents)、抗老化剂(antiaging agents)、抗皱剂(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出剂(antiseborrheic agents)、伤口治疗剂(wound-healing agents)、皮质类固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有关这些外用剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

依据本发明，食品产品可被当作食品添加物(food additive)，藉由习知方法于原料制备时添加，或是于食品的制作过程中添加，而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品。

依据本发明，食品产品的种类包括但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食补充品(dietary supplements)。

实施例1.金针花萃取物的制备

首先，对金针花(由花莲玉里农民栽种)由干料进行均质处理，然后于50～100℃下，以萃取溶剂对经均质处理的金针花以5～20：1～5的体积比进行萃取0.5～3小时而得到一粗萃取物，其中萃取溶剂是水、醇类、含水醇类或其组合，较佳的萃取溶剂是水。接着，冷却至室温，然后对粗萃取物以400网目(mesh)的滤网过滤而得到一滤液，然后于45～70℃下对滤液进行减压浓缩而得到金针花萃取物。

实施例2.金针花萃取物在抗醣化上的效用评估

本实施例是为了测试本发明金针花萃取物的抗醣化活性，因此以抑制D-果糖(D-fructose)使胶原蛋白(Collagen)产生醣化的效率，进行醣化活性的定量。首先，分别取0.2mL的水作为对照组，或取0.2mL的浓度为100mg/mL的本发明金针花萃取物作为实验组，加入0.2mL的含有0.06％的NaN₃的60mg/mL的胶原蛋白溶液(以200mM的磷酸钠缓冲液配制，pH 7.4)，并与0.2mL的1.5MD-果糖(以200mM的磷酸钠缓冲液配制，pH 7.4)溶液均匀混合，取出0.1mL混合溶液作为原点产物，并将剩余的混合溶液于50℃下反应24小时后，取出0.1mL作为终点产物，再分别测量原点产物与终点产物于激发波长360nm、放射波长460nm的荧光数值。最后，以下列公式计算清除高度醣化终产物(Advanced glycation end-products,AGEs)能力的效率，以代表其抗醣化作用的活性，其中高度醣化终产物生成量越少表示抗醣化活性越高。

本实施例的结果显示于图1，抑制非酵素褐变，避免体内功能性蛋白质变性。图1是本发明金针花萃取物在抗醣化上的功效的数据图。由图1可见，与对照组相较之下，实验组的醣化比例百分比有显著的降低。其中，与对照组比较，实验组的醣化比例百分比减少约56％。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物能有效提升其清除高度醣化终产物的能力，并具有优异的抗醣化活性。

实施例3.金针花萃取物在抑制脂肪堆积上的效用评估

本实施例以小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell)进行本发明的金针花萃取物于抑制脂肪堆积的功效测试。该小鼠骨髓基质细胞是购自美国典型培养物保藏中心(美国

)，编号CRL-2749^TM。该细胞于分化前是培养于前脂肪细胞扩增培养液(Pre-adipocyte Expansion Medium)，其中包含90％的最低必需培养基Alpha培养基(minimum essential medium alpha medium，购自Gibco，美国，12100-046)、20％的胎牛血清(Fetal Bovine Serum，购自Gibco，美国)，且加入1％的青霉素/链霉素(Penicillin-streptomycin，购自Gibco，美国)；并使用分化培养液(Differentiation Medium)使小鼠骨髓基质细胞进行分化，其中包含90％最低必需培养基Alpha培养基、20％的胎牛血清，且加入1％的青霉素/链霉素。细胞中的脂质以油红O染色试剂(购自Sigma，美国)，其中以100％的异丙醇配制3mg/mL的油红O储备溶液，并将储备溶液以ddH₂O配制成60％的作用溶液。

为证实本发明的金针花萃取物具有抑制脂肪堆积的功效，首先将小鼠骨髓基质细胞分化成脂肪细胞，首先，将8×10⁴小鼠骨髓基质细胞OP9与500μL的前脂肪细胞扩增培养液接种于24孔培养盘中，并于37℃下培养7天，每3天更换新鲜的分化培养基。接着，使用显微镜(ZEISS)观察脂滴(lipid droplet)的形成，确保细胞已完全分化。

之后，将OP9细胞分成2组，其中包括1个对照组及1个实验组。将0.25mg/mL金针花萃取物添加至实验组的细胞中，至于对照组的细胞则不做任何处理。接着，将各组细胞培养7～10天，每3天更换培养基。

接着，使用油红O将细胞内的脂质染色，以评估本发明金针花萃取物是否确实能减少脂肪堆积，首先将培养基轻轻地取出，并以1mL的磷酸盐缓冲溶液(Phosphate bufferedsaline,PBS)清洗细胞两次，再加入1mL的10％甲醛(购自Echo chemical，中国台湾，Cat.TG1794-4-0000-72NI)并于室温下反应30分钟以固定细胞，接着移除甲醛后以1mL的PBS轻轻地清洗细胞两次，接着于每孔细胞内加入1mL的60％异丙醇(购自Echo chemical，中国台湾，PH-3101)反应1分钟后，移除异丙醇并加入1mL的油红O作用溶液，于室温下反应1小时，接着移除油红O作用溶液并迅速地以1mL的60％异丙醇进行脱色5秒钟，再使用显微镜拍照并进行量化。接着，加入100％异丙醇于染色的细胞中，并置于振荡器上反应10分钟以溶解油滴，接着取100μL至96孔培养盘中，以测量ELISA读取仪(BioTek)读取各组的OD₅₁₀ _nm读值，以量化油红O。

本实施例的结果显示于图2。图2是本发明金针花萃取物在抑制脂肪堆积上的功效的数据图。由图2可见，与对照组相较的下，实验组的相对脂肪油滴量有降低的情形。其中，与对照组比较，实验组的相对脂肪油滴量减少约15％。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有抑制细胞脂肪堆积的功效。

实施例4.金针花萃取物在促进脂肪分解上的效用评估

首先，将8×10⁴小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell)OP9(

CRL-2749^TM)与500μL的脂肪前细胞扩增培养基(pre-adipocyte expansion medium)(添加有90％最低必需培养基Alpha培养基(minimum essential medium alpha medium)(Gibco)、20％胎牛血清(fetal bovine serum)(Gibco)及1％青霉素/链霉素(penicillin/streptomycin)(Gibco))接种于24孔培养盘中，并于37℃下培养7天，每3天更换新鲜的分化培养基(differentiation medium)(添加有90％最低必需培养基Alpha培养基、20％胎牛血清及1％青霉素/链霉素)。接着，使用显微镜(ZEISS)观察油滴(lipid droplet)形成以确认细胞完全分化。

之后，将OP9细胞分成2组，其中包括对照组及实验组。将0.0625mg/mL金针花萃取物添加至实验组的细胞中，至于对照组的细胞则不做任何处理。接着，将各组细胞培养7～10天，每3天更换培养基。之后，以细胞甘油基测定试剂盒(Glycerol cell-based assaykit)(Cayman)对各组细胞进行甘油分析(glycerol assay)。

从每个孔收集细胞培养上清液，然后将每个孔及标准液中的25μL的细胞培养上清液转移到新的96孔培养盘中。接着，每孔添加100μL重组游离甘油分析试剂(reconstitutedFree Glycerol Assay Reagent)，然后于室温下作用15分钟。之后，以ELISA读取仪(BioTek)读取各组的OD₅₄₀ _nm读值。

本实施例的结果显示于图3。图3是本发明金针花萃取物在促进脂肪分解上的功效的数据图。由图3可见，与对照组相较之下，实验组的脂肪分解百分比有显著的提升。其中，与对照组比较，实验组的脂肪分解百分比提升约10％。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有促进脂肪分解的功效。

实施例5.金针花萃取物在提升骨骼肌基础代谢率上的效用评估

本实施例以小鼠骨骼肌细胞C2C12进行本发明的金针花萃取物于提升骨骼肌基础代谢率的功效测试。该小鼠骨骼肌细胞C2C12是购自美国典型培养物保藏中心(美国

)，编号CRL-1772^TM。

首先，将细胞培养于添加有3.7g/L碳酸氢钠(sodium bicarbonate)、10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)(Gibco)、100I.U.青霉素及100μg/mL链霉素的杜贝可氏改良的依格氏培养基(DMEM)中，接而将细胞接种于6孔细胞培养盘中。待细胞接近100％汇聚，将细胞与条件培养基(含有1％FBS及1％马血清的DMEM)一起培养，俾以将细胞分化成肌管(myotube)。

之后，将经分化的细胞分成2组，其中包括1个对照组及1个实验组。将0.0625mg/mL金针花萃取物添加至实验组的细胞中，至于对照组的细胞则不做任何处理。接着，对各组细胞培养48小时。之后，每孔用100μL的丙酮酸分析缓冲液来裂解细胞，然后在4℃以10,000g进行离心10分钟，并收集上清液。接着，在96孔培养盘中加入20μL的裂解液(三重复)，然后用丙酮酸分析缓冲液将体积调整至50μL/孔。之后，制作标准曲线以供丙酮酸比色测定(colorimetric assay)(BioVision)，将丙酮酸标准品稀释至1nmol/μL，然后制备0、2、4、6、8、10nmol/孔，总共50μL/孔。接着，对每孔中加入50μL的反应混合物(含有46μL的丙酮酸分析缓冲液、2μL的丙酮酸探针及2μL的酵素混合物)，充分混合并反应30分钟。之后，在570nm下测量吸光值，然后利用线性内插法(linear interpolation)计算丙酮酸含量。最后，将每个样品的总蛋白质浓度标准化(布拉德福分析(Bradford assay))(Bio-Rad)。

本实施例的结果显示于图4。图4是本发明金针花萃取物在提升骨骼肌基础代谢率上的功效的数据图。由图4可见，与对照组相较之下，实验组的相对丙酮酸浓度有显著的提升。其中，与对照组比较，实验组的相对丙酮酸浓度提升约80％。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有提升骨骼肌基础代谢率的功效。

实施例6.金针花萃取物在抗忧郁上的效用评估

本实施例藉由探讨金针花萃取物可否藉由调控与抑制忧郁及促进多巴胺相关的基因表现来达到抗忧郁的功效。

于DMEM培养基(含有10％胎牛血清及1％的青霉素/链霉素)中培养人类神经瘤母细胞(SH-SY5Y；购自(

CRL-2266^TM))于6-孔盘，2mL培养基的细胞浓度为1.5×10⁵细胞/孔。

之后，将细胞分成2组，其中包括1个对照组及1个实验组。将0.5mg/mL金针花萃取物添加至实验组的细胞中，至于对照组的细胞则不做任何处理。接着，于培养箱中培养各组细胞48小时，接而收取各组细胞培养物并拿来进行基因表现分析。

在本实施例中，用来分析与抑制忧郁相关的基因为有丝分裂原-活化蛋白质激酶去磷酸化酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase 1,MKP-1)基因，与促进多巴胺相关的基因为多巴去羧酶(dopa decarboxylase,DDC)基因。

以RNA萃取套组(Geneaid)对上面所得到的各组细胞培养物进行RNA的萃取。对由此所得到的各组RNA取2,000ng并以

III反转录酶(Invitrogen)将萃取出的RNA反转录为cDNA。接着，以cDNA作为模版，并且使用用来扩增目标基因的引物对，包括MKP-1、DDC及GAPDH(作为内部对照组)，它们的核苷酸序列显示于下表1，在StepOne Plus实时PCR系统(ABI)中利用KAPA SYBR FAST qPCR套组(2x)(KAPA Biosystems)来进行定量实时PCR，俾以对目标基因进行扩增及定量。PCR产物的熔化曲线是在定量实时PCR反应期间进行确认。

表1

目标基因的相对表现量是推导自方程式2^-△△Ct，并利用GAPDH基因(作为内部对照组)及基准基因的循环阈值及藉由标准偏差来计算相对倍数变化，其中△Ct＝Ct_{目标基因/基准基因}-Ct_GAPDH，△△Ct＝△Ct_目标基因-△Ct_基准基因，倍数变化＝2^-△△Ct _平均值。以对照组的目标基因表现量作为1的比较基准。各组之间的统计学显著差异是藉由单尾史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图5及图6。

图5是本发明金针花萃取物在抑制与抑制忧郁相关的MKP-1基因表现上的功效的数据图。由图5可见，与对照组相较之下，实验组的基因相对表现量有显著的降低，其中与对照组比较，实验组的基因相对表现量降低约16.5％。图6是本发明金针花萃取物在提升与促进多巴胺相关的DDC基因表现上的功效的数据图。由图6可见，与对照组相较之下，实验组的基因相对表现量有显著的提升，其中与对照组比较，实验组的基因相对表现量提升约10％。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物可藉由调控与抑制忧郁及促进多巴胺相关的基因表现来达到抗忧郁及改善情绪的功效。

实施例7.金针花萃取物在抵抗及防御UVA能力上的效用评估

首先，将人类皮肤纤维母细胞(human skin fibroblast)CCD-966Sk(对应于

CRL-1881)培养于最低基本培养基(minimum essential medium)[添加有10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、1％青霉素/链霉素(penicillin/streptomycin)以及1mM丙酮酸钠(sodium pyruvate)](Gibco)中。于96孔培养盘的每孔中加入200μL的培养基，使每孔具有5x 10³个人类皮肤纤维母细胞。在37℃下培养24小时后，移除培养基。

之后，将人类皮肤纤维母细胞分成3组，其中包括1个实验组、1个UVA组及1个对照组。实验组及UVA组的细胞是藉由使用紫外线辐射室于15J/cm²下对细胞照射UVA历时1小时，此条件会造成50％致死剂量(lethal dose 50％,LD₅₀)，表示导致50％细胞死亡的辐射照射剂量。接着，将1mg/mL金针花萃取物添加至实验组的细胞中，而UVA组的细胞则不做任何处理。至于对照组的细胞则未照射UVA。

各组细胞培养物在37℃培养箱中进行培养24小时后，于每孔加入15μL的3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯四唑溴化物{3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide}(MTT，4mg/mL，配于PBS)(AMERSCO/0793-5G)并于37℃下予以培养4小时。之后，移除各孔中的培养基，继而于每孔加入50μL的DMSO(ECHO/DA1101-000000-72EC)以分解甲臜结晶(formazan crystal)，接而将培养盘置于振荡器(shaker)上并培育10分钟，然后于570nm的波长下以ELISA读取仪(BioTek)来读取各孔的吸光值(OD₅₇₀)。

细胞可活性(％)是藉由将所测得的吸光值(OD₅₇₀)代入下列公式(1)而计算出：

细胞可活性(％)＝(各组所测得的OD₅₇₀吸光值/对照组所测得的OD₅₇₀吸光值)×100％ (1)

各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图7。

图7是本发明金针花萃取物在抵抗及防御UVA能力上的功效的数据图。由图7可见，与对照组相较之下，UVA组的细胞可活性(％)有降低的情形，这表示对人类皮肤纤维母细胞照射UVA会造成细胞死亡。而与UVA组相较之下，实验组的细胞可活性(％)有显著的提升(与UVA组比较，实验组的细胞可活性提升约8％)。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有抵抗及防御UVA损伤的能力，并提升皮肤细胞抗紫外线能力。

实施例8.金针花萃取物在抑制黑色素生成上的效用评估

首先，将老鼠皮肤黑色素瘤细胞株B16F10(对应于ATCC CRL-6475)培养于杜贝可氏改良的依格氏培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium,DMEM)[添加有1％青霉素/链霉素(Gibco)及10％FBS(Gibco)]中。于6孔培养盘的每孔中加入3mL的培养基，使每孔具有1.5x 10⁵个B16F10细胞。在37℃下培养24小时后，移除培养基。

之后，将B16F10细胞分成2组，其中包括1个实验组以及1个对照组。将0.5mg/mL金针花萃取物添加至实验组的细胞中，至于对照组的细胞则不做任何处理。

各组细胞培养物在37℃下培养48小时后，移除培养基并以1xPBS(Gibco)冲洗两次。之后，加入胰蛋白酶(trypsin)来处理细胞3分钟并将悬浮的细胞收集于15mL体积的离心管中，接而以400xg/5分钟进行旋转(spin)以沉淀细胞。在以1xPBS冲洗两次之后，以200μL的1XPBS再悬浮细胞沉淀物(cell pellet)。接着，将细胞溶液于液态氮中放置10分钟，接而于室温下静置30分钟进行解冻。在解冻完全之后，以12,000xg进行旋转30分钟，接而移除上清液并添加120μL的1N NaOH(配于ddH₂O)。在混合均匀之后，于60℃干浴槽中静置1小时。之后，取100μL的体积至96孔培养盘中并于450nm的波长下以ELISA读取仪来读取各孔的吸光值(OD₄₅₀)。

黑色素含量(％)是藉由将所测得的吸光值(OD₄₅₀)代入下列公式(2)而计算出：

黑色素含量(％)＝(各组所测得的OD₄₅₀吸光值/对照组所测得的OD₄₅₀吸光值)×100％ (2)

各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图8。

图8是本发明金针花萃取物在抑制黑色素生成上的功效的数据图。由图8可见，与对照组相较之下，实验组的黑色素含量有显著的降低(与对照组比较，实验组的黑色素含量降低约11％)。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有抑制黑色素生成的功效。

实施例9.金针花萃取物在提升皮肤纤维母细胞的超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性上的效用评估

人类皮肤纤维母细胞购自中国台湾生物资源保存及研究中心(BioresourceCollection and Research Center,BCRC)，编号BCRC 60153。将该细胞培养于添加10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(GIBCO公司，编号10438-026，美国)、0.1mM非必需胺基酸、1.5g/L碳酸氢钠(Sigma公司，编号S5761，美国)、1mM丙酮酸钠(GIBCO公司，编号11360-070，美国)的最低必需培养液(Minimum essential medium,MEM)(Eagle)(配于厄尔平衡盐溶液(Earle's Balanced Salt Solution,Earle's BSS))(GIBCO公司，编号41500-034，美国)。

在含有2mL上述培养基的6孔培养盘中每个孔洞接种2×10⁵个人类皮肤纤维母细胞，然后于37℃培养隔夜。在移除培养基之后，将细胞分成2组，其中包括1个对照组及1个实验组。将0.5mg/mL金针花萃取物及1mM H₂O₂添加至实验组的细胞中并于37℃作用6小时，至于对照组的细胞则不做任何处理。接着，将各组细胞于37℃下培养24小时。之后，移除培养基并以1X PBS(Gibco)清洗1次，然后加入胰蛋白酶(trypsin)来处理细胞3分钟，继而用培养基停止胰蛋白酶活性并转移至1.5mL离心管中。接着，以300xg离心5分钟，然后以PBS清洗，接而以300xg离心5分钟。之后，加入30μL的1X细胞萃取缓冲液，然后将细胞悬浮液在冰上反应30分钟，每10分钟涡旋(vortex)混合。接着，将破碎的细胞悬浮液在4℃以10,000xg离心10分钟以除去不溶物质，然后将25μL的1X SOD缓冲液加入活性对照孔的底部。之后，添加25μL制备的SOD标准品(S1～S7，参见表2)。

表2

之后，将25μL的样品加入适当孔的底部，然后对每孔添加150μL的Master Mix。接着，使用多道移液器(multichannel pipet)向所有孔中加入25μL的1X黄嘌呤溶液(Xanthine solution)以起始反应，然后立即将培养盘转移至微量滴定盘读取仪(microtiter plate reader)，并在室温下每分钟以450nm读取吸光值，持续10分钟。

各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图9。

图9是本发明金针花萃取物在提升皮肤纤维母细胞的SOD活性上的功效的数据图。由图9可见，与对照组相较之下，实验组的SOD活性有显著的提升(与对照组比较，实验组的SOD活性提升约30.7％)。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有提升皮肤纤维母细胞的SOD活性的功效。

实施例10.金针花萃取物在降低皮肤纤维母细胞的活性氧族(reactive oxygenspecies,ROS)表现量上的效用评估

首先，以添加有10％胎牛血清(FBS)、1％青霉素(penicillin)/链霉素(streptomycin)及1mM丙酮酸钠(sodium pyruvate)的最低必需培养基(MEM)(Gibco)培养人类皮肤纤维母细胞CCD-966SK(BCRC 60153)于6-孔盘，2mL培养基的细胞浓度为2×10⁵细胞/孔，接而于37℃进行培养24小时，并移除培养基。接着，将经培养的细胞分成3组，其中包括1个对照组、1个过氧化氢组，及1个实验组。将1mg/mL金针花萃取物及1mM H₂O₂添加至实验组的细胞中。过氧化氢组的细胞被添加以1mM H₂O₂，至于对照组的细胞则不做任何处理。之后，添加5μg/mL二氯二氢荧光黄二乙酸酯(Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)(Sigma/SI-D6883-50MG)(储备溶液为5mg/mL溶于DMSO中)并于37℃反应1小时，接而以1mL的1X PBS(Gibco)清洗每孔两次。接着，添加200μL胰蛋白酶(trypsin)并于避光环境反应5分钟，接而将细胞培养物收集至1.5mL体积的离心管，并以400×g进行离心10分钟。之后，移除上清液并以1X PBS清洗一次，接而以400×g进行离心10分钟。接着，移除上清液并以1mL的1X PBS再悬浮细胞沉淀物。之后，以流式细胞仪(BD Accuri)藉由激发波长(excitation wavelength)450～490nm及放射波长(emission wavelength)510～550nm来侦测DCFH-DA的荧光讯号，藉此计算出受到ROS伤害的细胞百分比。各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图10。

图10是本发明金针花萃取物在降低皮肤纤维母细胞的ROS表现量上的功效的数据图。由图10可见，与对照组相较之下，过氧化氢组测得的受到ROS伤害的细胞百分比(即氧化压力高表现细胞)有显著提升，这表示过氧化氢会对细胞产生大量ROS伤害；而与过氧化氢组相较之下，实验组测得的受到ROS伤害的细胞百分比有显著降低(降低ROS表现量约47％)。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有降低皮肤纤维母细胞的ROS表现量的功效，藉此来改善肤质。

实施例11.金针花萃取物在提升神经细胞的粒线体活性上的效用评估

本实施例以小鼠大脑神经母细胞瘤细胞(Brain neuroblastoma)Neuro-2a进行神经细胞粒线体活性分析，并利用流式细胞仪粒线体膜电位侦测套组(Flow cytometryMitochrondrial membrane potential detection kit,BD)进行实验。小鼠大脑神经母细胞瘤细胞Neuro-2a购自美国典型培养物保藏中心(美国

)，编号CCL-131^TM。将该细胞培养于添加10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(GIBCO公司，编号10438-026，美国)、1％青霉素/链霉素(Gibco)的DMEM。

在含有2mL上述培养基的6孔培养盘中每个孔洞接种1×10⁵个大脑神经母细胞(n＝2)。之后，将细胞分成2组，其中包括1个对照组及1个实验组。将1mg/mL金针花萃取物添加至实验组的细胞中，至于对照组的细胞则添加培养基。接着，将各组细胞于37℃下培养24小时，然后于37℃下预热10X分析缓冲液。之后，以无菌的1X PBS制备1X分析缓冲液，混合均匀并置于37℃，然后添加130μL的二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)至冻干JC-1粒线体染剂(BD^TM MitoScreen(JC-1)试剂套组)以制备JC-1储备溶液，储备溶液可储存于-20℃历时6个月。接着，将JC-1粒线体染剂与1X分析缓冲液以1：100的比例制备工作溶液，然后移除培养基并以1XPBS润洗两次。之后，加入胰蛋白酶(trypsin)/EDTA处理3分钟后，吸取悬浮的细胞至1.5mL的微离心管，以400g转速离心5分钟收集沈淀的细胞。

在移除上清液后，以1mL的1X PBS再悬浮细胞，然后转移至1.5mL的离心管，以400g转速离心5分钟。在移除上清液后，添加100μL的JC-1工作溶液，混合均匀后在避光下作用15分钟。之后，以400g转速离心5分钟，再以1mL的1X清洗缓冲液清洗并以400g转速离心5分钟，然后以1mL的1X清洗缓冲液清洗并以400g转速离心5分钟。以含有2％FBS的500μL的1X PBS再悬浮细胞，然后利用流式细胞仪(BD Accuri)分析观察细胞凋亡时粒线体膜电位改变，并以Excel进行史徒登氏t-检定统计分析样品群体之间差异的统计学意义。

图11是本发明金针花萃取物在提升神经细胞的粒线体活性上的效用的数据图。由图11可见，与对照组相较之下，实验组的神经母细胞的粒线体活性(即相对的JC-1聚合体(aggregate))有显著提升(与对照组比较，实验组提升神经细胞粒腺体活性约13％)。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有提升神经细胞的粒线体活性的功效。

实施例12.金针花萃取物在提升神经细胞的抗氧化能力上的效用评估

本实施例以小鼠大脑神经母细胞瘤细胞(Brain neuroblastoma)Neuro-2a进行神经细胞的抗氧化能力分析。小鼠大脑神经母细胞瘤细胞Neuro-2a购自美国典型培养物保藏中心(美国

)，编号CCL-131^TM。以添加10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(GIBCO公司，编号10438-026，美国)、1％青霉素/链霉素(Gibco)的DMEM培养大脑神经母细胞Neuro-2a于6-孔盘，2mL培养基的细胞浓度为1×10⁵细胞/孔，接而于37℃进行培养24小时，并移除培养基。接着，将经培养的细胞分成3组，其中包括1个对照组、1个过氧化氢组，及1个实验组。将1mg/mL金针花萃取物及1mM H₂O₂添加至实验组的细胞中并于37℃作用1小时。过氧化氢组的细胞被添加以1mM H₂O₂并于37℃作用1小时，至于对照组的细胞则不做任何处理。之后，添加5μg/mL二氯二氢荧光黄二乙酸酯(Dichloro-dihydro-fluoresceindiacetate,DCFH-DA)(Sigma/SI-D6883-50MG)(储备溶液为5mg/mL溶于DMSO中)并于37℃反应15分钟，接而以1mL的1X PBS(Gibco)清洗每孔两次。接着，添加200μL胰蛋白酶(trypsin)并于避光环境反应5分钟，接而将细胞培养物收集至1.5mL体积的离心管，并以400×g进行离心10分钟。之后，移除上清液并以1X PBS清洗一次，接而以400×g进行离心10分钟。接着，移除上清液并以1mL的1X PBS再悬浮细胞沉淀物。之后，以流式细胞仪(BD Accuri)藉由激发波长(excitation wavelength)450～490nm及放射波长(emission wavelength)510～550nm来侦测DCFH-DA的荧光讯号，藉此计算出受到ROS伤害的细胞百分比。各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图12。

图12是本发明金针花萃取物在提升神经细胞的抗氧化能力上的功效的数据图。由图12可见，与对照组相较之下，过氧化氢组测得的受到ROS伤害的细胞百分比(即相对ROS产生量)有显著提升，这表示过氧化氢会对细胞产生大量ROS伤害；而与过氧化氢组相较之下，实验组测得的受到ROS伤害的细胞百分比有显著降低(降低相对ROS产生量约73％)。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物具有提升神经细胞的抗氧化能力的功效。

实施例13.金针花萃取物在提升与神经细胞抗氧化相关的基因表现上的效用评估

本实施例藉由探讨金针花萃取物可否藉由提升与神经细胞抗氧化相关的基因表现来达到提升神经细胞的抗氧化能力的功效。

于DMEM培养基(含有10％胎牛血清及1％的青霉素/链霉素)中培养小鼠大脑神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a,购自美国典型培养物保藏中心(美国

)，编号CCL-131^TM)于6-孔盘，2mL培养基的细胞浓度为1.5×10⁵细胞/孔。

之后，将细胞分成2组，其中包括1个对照组及1个实验组。将1mg/mL金针花萃取物及200μM H₂O₂添加至实验组的细胞中，至于对照组的细胞则被添加以200μM H₂O₂。接着，于培养箱中培养各组细胞6小时，接而收取各组细胞培养物并拿来进行基因表现分析。

在本实施例中，用来分析与神经细胞抗氧化相关的基因包括X射线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementary protein 1,XRCC1)基因、尿嘧啶DNA醣苷酶(uracil DNA glycosylase,UNG)基因、8-氧代鸟嘌呤DNA醣苷酶(8-oxoguanine DNAglycosylase,OGG1)基因、N-甲基化嘌呤DNA醣苷酶(N-methylpurine DNA glycosylase,MPG)基因、ERCC裁除式修复1，内核酸酶非催化次单元(ERCC excision repair 1,endonuclease non-catalytic subunit,ERCC1)基因、ERCC裁除式修复6，内核酸酶非催化次单元(ERCC excision repair 6,endonuclease non-catalytic subunit,ERCC6)基因、谷胱甘肽过氧化酶1(glutathione peroxidase 1,GPX1)基因、mutL同源物1(mutL homolog1,MLH1)基因、黑色素细胞刺激素6(melanocyte-stimulating hormone 6,MSH6)基因、超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)基因及超氧化物歧化酶2(superoxidedismutase 2,SOD2)基因。

III反转录酶(Invitrogen)将萃取出的RNA反转录为cDNA。接着，以cDNA作为模版，并且使用用来扩增目标基因的引物对，包括XRCC1、UNG、OGG1、MPG、ERCC1、ERCC6、GPX1、MLH1、MSH6、SOD1、SOD2及GAPDH(作为内部对照组)，它们的核苷酸序列显示于下表3，在StepOne Plus实时PCR系统(ABI)中利用KAPA SYBRFAST qPCR套组(2x)(KAPA Biosystems)来进行定量实时PCR，俾以对目标基因进行扩增及定量。PCR产物的熔化曲线是在定量实时PCR反应期间进行确认。

表3

目标基因的相对表现量是推导自方程式2^-△△Ct，并利用GAPDH基因(作为内部对照组)及基准基因的循环阈值及藉由标准偏差来计算相对倍数变化，其中△Ct＝Ct_{目标基因/基准基因}-Ct_GAPDH，△△Ct＝△Ct_目标基因-△Ct_基准基因，倍数变化＝2^-△△Ct _平均值。以对照组的目标基因表现量作为1的比较基准。各组之间的统计学显著差异是藉由单尾史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图13。

图13是本发明金针花萃取物在提升与神经细胞抗氧化相关的基因表现上的功效的数据图。由图13可见，与对照组相较之下，实验组的基因相对表现量有显著的提升(提升多种神经细胞抗氧化相关基因表现约12.5～195％)。本实施例的结果显示，本发明金针花萃取物可藉由提升与神经细胞抗氧化相关的基因表现来提升神经细胞的抗氧化能力。

综上所述，本发明金针花萃取物能调控XRCC1基因、UNG基因、OGG1基因、MPG基因、ERCC1基因、ERCC6基因、GPX1基因、MLH1基因、MSH6基因、SOD基因、MKP-1基因、及DDC基因的表现量，达到提升抗醣化活性、抑制细胞脂肪堆积、促进脂肪分解及提升骨骼肌基础代谢率、抗忧郁、改善情绪、抑制黑色素生成、提升皮肤抗紫外线能力、提升SOD活性、降低ROS表现量、改善肤质肤况、提升粒线体活性、提升抗氧化能力、及保护神经细胞的功效。

以上所述仅为举例性，而非为限制性者。任何未脱离本发明的精神与范畴，而对其进行的等效修改或变更，均应包含于后附的申请专利范围中。

Claims

1.一种金针花萃取物用于制备提升抗醣化活性的组合物的用途，其特征在于，所述金针花萃取物是以溶剂萃取金针花所获得，所述溶剂为水、醇、或醇水混合物。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述金针花萃取物的有效浓度为至少100mg/mL。

3.一种金针花萃取物用于制备抑制黑色素生成、提升皮肤抗紫外线能力、提升超氧化物歧化酶活性、及降低活性氧族表现量的组合物的用途，其特征在于，所述金针花萃取物是以溶剂萃取金针花所获得，所述溶剂为水、醇、或醇水混合物。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述金针花萃取物的有效浓度为至少0.5mg/mL。

5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的用途，其特征在于，所述组合物是食品产品或保养品。