CN116042482A - 一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用 - Google Patents

一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116042482A
CN116042482A CN202310123978.6A CN202310123978A CN116042482A CN 116042482 A CN116042482 A CN 116042482A CN 202310123978 A CN202310123978 A CN 202310123978A CN 116042482 A CN116042482 A CN 116042482A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lactobacillus
avium
hyperuricemia
reducing
product
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310123978.6A
Other languages
English (en)
Inventor
胡永飞
李德鹏
刘丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Agricultural University
Original Assignee
China Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Agricultural University filed Critical China Agricultural University
Priority to CN202310123978.6A priority Critical patent/CN116042482A/zh
Publication of CN116042482A publication Critical patent/CN116042482A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)

Abstract

本发明公开了一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用。本发明首次分离出一种鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)，其菌株号为CML180，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.26207，其16S rRNA基因含有序列表中SEQ ID NO.1。实验证明，该鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180具有降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平以及治疗/缓解小鼠高尿酸血症症状的作用，可应用于开发或制备治疗和/或缓解高尿酸血症或痛风或代谢性疾病的药物，进而降低痛风的发病率。

Description

一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鸟乳杆菌及其在制备治疗/缓解小鼠高尿酸血症的产品中的作用。
背景技术
高尿酸血症是人体由嘌呤代谢紊乱、尿酸排泄障碍导致的血清尿酸升高的一种代谢疾病。主要特点是机体内尿酸水平长期处于很高的水平，给机体内的器官造成不同程度的危害。
目前，高尿酸血症的缓解方法有很多，但是都在一定程度上存在问题。别嘌呤醇、苯溴马隆等治疗尿酸高的药物在一定程度上会对肝脏和肾脏造成一定的副作用，长期以往会造成实质性的损害。植物提取物木犀草素、芹菜素等可以缓解高尿酸血症，也有一定的缓解效果。但是具体机制不清楚，会存在一定的危险。另外通过添加抗生素的办法，抑制肠道内的有害菌来改变肠道微生物达到缓解高尿酸血症的目的，但是抗生素的使用使得肠道里的有益菌也在一定程度上减少，导致其他危险的发生。并且抗生素的使用会导致机体微生物耐药性的增强，会对其他物种以及环境造成影响。
越来越多的研究表明，高尿酸血症患者和健康者的肠道菌群存在很大的差异，究其原因是某些微生物丰度高低的原因。根据分析结果发现，发病率低的地区人群肠道中含有一些丰度比较高的菌，而高尿酸血症患者肠道中的这些菌丰度明显偏低。从而说明这些菌可能与健康者不易患高尿酸血症有关系。因此，有益菌的对高尿酸血症的保护成为了一种高效而安全的方法突破口。目前，微生物成为了一种新型的疗法，在治疗肠道疾病以及代谢性疾病中有很好的效果，且在治疗方法中突出了自身的优势。
由于缓解高尿酸血症其他方法的副作用和机理的不清楚。因此，本领域迫切需要开发一种新的，无副作用的，用于治疗/缓解高尿酸血症的益生菌。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何基于微生物制备治疗/缓解高尿酸血症的无副作用产品和/或如何基于微生物制备治疗/缓解高尿酸血症的产品和/或如何基于微生物制备治疗/缓解代谢性疾病的产品。
为了解决上述技术问题，本发明首先提供了鸟乳杆菌，所述鸟乳杆菌为鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)，其菌株号为CML180，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.26207。该鸟乳杆菌CML180的最佳生长条件为37℃、厌氧，在MRS固体培养基上培养48小时的菌落为浅白色，球状，直径约为1-2mm。该鸟乳杆菌CML180 24小时的生长曲线为在4h进入对数生长期，16h进入平台期，24h开始出现下降。
上文所述鸟乳杆菌的16S rRNA基因可含有序列表中SEQ ID NO.1所示的DNA分子。
上述鸟乳杆菌的培养物也属于本发明的保护范围。所述培养物可为将所述的鸟乳杆菌在微生物培养基中培养得到的物质。
为了解决上述技术问题，本发明还提供了一种菌剂，所述菌剂可含有上文所述的鸟乳杆菌或/和上文所述的鸟乳杆菌的代谢物或/和上文所述的培养物。
上述菌剂可具有下述至少一种特性：
A1)降低血清尿酸水平；
A2)降低血清肌酐水平；
A3)降低血清尿素氮水平；
A4)减轻高尿酸血症引起的肝脏损伤；
A5)减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤；
A6)缓解高尿酸血症；
A7)缓解代谢性疾病症状。
上文所述鸟乳杆菌的培养物是将鸟乳杆菌在微生物培养基中培养得到的物质(如含有鸟乳杆菌和分泌到液体培养基内的物质即发酵液，或如含有鸟乳杆菌和分泌到固体培养基内的物质)。
上述菌剂的活性成分可为鸟乳杆菌或/和鸟乳杆菌的代谢物，上述菌剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述菌剂的其他活性成分本领域技术人员可根据菌剂的效果确定。
所述菌剂还可包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体为矿物材料、生物材料；所述矿物材料可为草炭、粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述生物材料为各类作物的秸秆、松壳、稻草、花生壳、玉米粉、豆粉、淀粉、草炭和动物的粪便中的至少一种；所述液体载体可为水；所述菌剂中，鸟乳杆菌或/和鸟乳杆菌的代谢物可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述菌剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
上文中，所述鸟乳杆菌的代谢物可为鸟乳杆菌的发酵液。鸟乳杆菌的发酵液可按照如下方法制备：在液体发酵培养基中培养鸟乳杆菌，收集发酵液(含有鸟乳杆菌和分泌到液体培养基内的物质)，该发酵液即为鸟乳杆菌的代谢物。
上文所述菌剂可为活菌菌剂、巴氏灭活菌菌剂或冻干粉菌剂。所述菌剂中所述鸟乳杆菌的有效菌浓度可大于等于109CFU/mL。
上述所述鸟乳杆菌的下述至少一种应用也属于本发明的保护范围：
B1)在制备降低血清尿酸水平产品中的应用；
B2)在制备降低血清肌酐水平的产品中的应用；
B3)在制备降低血清尿素氮水平的产品中的应用；
B4)在制备减轻高尿酸血症引起的肝脏损伤的产品中的应用；
B5)在制备减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤的产品中的应用；
B6)在开发或制备治疗和/或缓解高尿酸血症或痛风的产品中的应用；
B7)在开发或制备治疗和/或缓解代谢性疾病的产品中的应用。
上述菌剂的下述至少一种应用也属于本发明的保护范围：
C1)在制备降低血清尿酸水平产品中的应用；
C2)在制备降低血清肌酐水平的产品中的应用；
C3)在制备降低血清尿素氮水平的产品中的应用；
C4)在制备减轻高尿酸血症引起的肝脏损伤的产品中的应用；
C5)在制备减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤的产品中的应用；
C6)在开发或制备治疗和/或缓解高尿酸血症或痛风的产品中的应用；
C7)在开发或制备治疗和/或缓解代谢性疾病的产品中的应用。
上述应用中，所述产品可为药物、动物饲料或动物饲料添加剂。上文所述代谢性疾病可包括高尿酸血症。
为了解决上述技术问题，本发明还提供了制备上文所述的菌剂的方法，包括将上述的鸟乳杆菌在微生物培养基中培养的步骤。
所述微生物培养基可为MRS固体发酵培养基。所述MRS固体发酵培养基的配制方法可为如下(1L)：
10g蛋白胨、5g牛肉粉、4g酵母粉、2g葡萄糖、1mL吐温80、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三铵、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰、15g琼脂粉、用蒸馏水补齐至1L，调节PH值为7.2±0.1，高温高压灭菌。
本发明首次从白羽肉鸡的盲肠食糜中发现了一种新的，无毒副作用的，安全高效的鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180，并将其保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.26207。实验证明鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180可降低血清尿酸水平，具有治疗/缓解高尿酸血症的作用，可用于缓解高尿酸血症的菌种，并期望开发成为一种新型有效的益生菌，在高尿酸血症人群中具有十分广阔的应用前景。
保藏说明
菌种名称：鸟乳杆菌
拉丁名：Lactobacillus aviarius
菌株编号：CML180
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2022年12月23日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.26207
附图说明
图1为是鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180的菌液PCR扩增序列在EzBioCloud数据库上比对的结果。
图2为鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180在培养48小时的图片。
图3为鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180在厌氧条件下绘制的生长曲线图。
图4为鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180降低小鼠血清尿酸的统计结果。纵坐标为小鼠血清尿酸浓度值。**代表P<0.01，*代表P<0.05。
图5为鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180降低小鼠血清肌酐的统计结果。纵坐标为小鼠血清肌酐浓度值。***代表P<0.001，*代表P<0.05。
图6为鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180降低小鼠血清尿素氮的统计结果。纵坐标为小鼠血清尿素氮浓度值。***代表P<0.001，*代表P<0.05。
图7为肝脏的病理切片图。标尺为200μm。
图8为肾脏的病理切片图。标尺为200μm。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明实施例中的MRS固体发酵培养基的配制方法如下(1L)：
10g蛋白胨、5g牛肉粉、4g酵母粉、2g葡萄糖、1mL吐温80、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三铵、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰、15g琼脂粉、用蒸馏水补齐至1L，调节PH值为7.2±0.1，高温高压灭菌。
本发明实施例中的试剂来源或配制方法如下：
腺嘌呤来源于：阿拉丁公司，货号：A108805；
氧嗪酸钾来源于：阿拉丁公司，货号：P137112；
0.5％的羧甲基纤维素钠溶液来源于：阿拉丁公司，货号：C104985。
腺嘌呤溶液(100mg/kg，根据小鼠体重来计算)的配制方法如下：将腺嘌呤溶解在0.5％的羧甲基纤维素钠溶液中得到100mg/kg的腺嘌呤溶液。
氧嗪酸钾溶液(300mg/kg，根据小鼠体重来计算)的配制方法如下：：将氧嗪酸钾溶解在0.5％的羧甲基纤维素钠溶液中得到300mg/kg的腺嘌呤溶液。
肌苷腺苷来源于：阿拉丁公司，货号：1104348；
肌苷腺苷溶液的配制方法如下：称取1g的肌苷或腺苷，溶解于磷酸缓冲液中，即可配得肌苷腺苷溶液。
本发明实施例中的实验均设置三个重复，实验数据使用SPSS 24.0软件进行统计分析,采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
实施例1鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180的分离、培养及鉴定
1.鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)CML180的分离和培养
将从白羽肉鸡的盲肠食糜中分离得到的样本，采用10倍梯度稀释涂布平板法对微生物进行分离纯化，采用改良MRS培养基(购自北京百旺通达生物科技有限公司)，在37℃的恒温厌氧操作箱(Whitley DG250 Anaerobic Workstation，百徕普惠(北京)科技有限公司)中进行厌氧培养48h，厌氧的气体成分为N2:CO2:H2＝80:10:10，挑取单菌落进行平板划线分纯，获得每株单菌的纯培养。参照试剂盒(Blood&Tissue Kit,QIAGEN)对分离出来的菌株进行基因组DNA的提取，以1％的琼脂糖凝胶电泳检测，无弥散或拖尾现象；并用紫外分光光度计对抽提的DNA进行质量检测和浓度测定。将A260/280nm比值在1.8～2.0，浓度不低于20ng/μL的DNA样品判为合格。
2.鸟乳杆菌CML180的鉴定
采用16S rDNA的通用引物对合格的菌株基因组DNA进行PCR扩增，引物是由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，具体序列如下：
上游引物27F：5'-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3'；
下游引物1492R：5'-TAGGGTTACCTTGTTACGACTT-3'。
PCR扩增体系和程序设置：
PCR反应体系：30μL体系中含菌株基因组DNA模板1.5μL，上、下游引物各1.5μL，25.5μL金牌Mix(购自北京擎科新业生物技术有限公司)。
PCR反应程序如下：
菌株16S rDNA的测序及鉴定：
将获得的16S rDNA扩增产物进行1.5％的凝胶电泳检测，将检验合格的扩增序列送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，获得长度为1560bp的16S rDNA序列(序列表中SEQ ID NO.1)，将CML180的16S rDNA序列在韩国EzBioCloud数据库上(https://www.ezbiocloud.net/identify)进行序列比对，获得与CML180同源性较高的菌是Ligilactobacillus aviarius DSM 20655，相似度为99.93％(图1)。确认分离得到的CML180菌株属于鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)，将其命名为Lactobacillusaviarius CML180，简称鸟乳杆菌CML180。
鸟乳杆菌CML180已于2022年12月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.26207。
SEQ ID NO.1：
5’-ATTGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATA CATGCAAGTCGAACGAGAATTTCTTACACCGAGTGCTTGCACTCACCGTAAGAAATTCGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAAAAGAAGGGGATAACATTTGGAAACAAATGCTAATACCGTATAACCATGATGACCGCATGGTCATTATGTAAAAGGTGGTTTTGCTATCGCTTTTGGATGGACCCGCGGCGTATTAACTAGTTGGTAGGGTAACGGCCTACCAAGGTGATGATACGTAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACAATGGGACTGAGACACGGCCCATACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGCAAGCCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAATGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAAATTCTGTTGTTAGAGAAGAATATGAGTAATAGTAACTGATTATTCACTGACGGTATCTAACCAGCAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGAACGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGGAGATGTGCATTGGAAACTGGAAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGTTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCAATAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTTTGACCACCTAAGAGATTAGGTTTTCCCTTCGGGGACAAAATGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTGTCAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTGGCGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGATACAACGAGTCGCGAGACCGCGAGGTTAAGCTAATCTCTTAAAGTCGTTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGCCGGTGGAGTAACCATTTGGAGCTAGCCGTCTAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTT-3’。
实施例2鸟乳杆菌CML180的理化特性及降解肌苷腺苷的效果
本实施例主要考察CML180菌株的理化特性及降解肌苷腺苷的效果。
1.鸟乳杆菌CML180的理化特性
1.1鸟乳杆菌CML180的菌落形态及特征
实施例1中分离得到的鸟乳杆菌CML180的最佳生长条件为37℃、厌氧，在MRS固体培养基上培养48小时的菌落为浅白色，球状，直径约为1-2mm(图2)。
1.2鸟乳杆菌CML180的生长曲线的绘制
检测鸟乳杆菌CML180 24小时的生长曲线(图3)可以看出，CML180在4h进入对数生长期，16h进入平台期，24h开始出现下降。具体过程如下：
1)将CML180菌株从-80℃冰箱取出，在平板上划线，将平板置于37℃厌氧操作箱中培养；
2)培养24h后从平板上挑取单个菌落接种至10mL改良MRS改良培养基中，37℃厌氧培养24h；
3)准备三个相同的含10mL MRS改良培养基厌氧管，构成技术重复，将培养好的菌液按1％的接种量转接入三个10mL培养液中；
4)所有的培养液置于37℃厌氧操作箱中培养，每隔2h用酶标仪(Epoch2，美国BioTek公司)监测OD600nm吸光值，直到OD600nm值不再上升，开始出现下降时，停止监测；以监测时间为横坐标，OD600nm值为纵坐标，绘制CML180的生长曲线(图3)。
2.鸟乳杆菌CML180在不同条件下降解肌苷腺苷的效果
实验操作如下：
1)含有30ml培养液的50ml离心管接1％新鲜鸟乳杆菌CML180种子菌液(活化两代)，在培养箱培养48小时，测OD600nm值，将菌离心浓缩至OD600nm＝1.5(109CFU)，得到鸟乳杆菌CML180的培养液，用于后续实验；
2)取20mL浓缩菌液(109CFU)在50mL离心管中离心(在4℃条件下，5000g离心10分钟)。用PBS洗涤两次，用于实验。
3)使用超纯水配制PH＝7.4的0.01M PBS溶液加入肌苷(阿拉丁；1104348)和腺苷(阿拉丁；A108806)，充分溶解后得到肌苷腺苷溶液；将20mL肌苷腺苷溶液过滤除菌后加至含有菌泥(将鸟乳杆菌活化两代后的菌液离心去掉上清，即得菌泥)的50mL离心管中，将菌泥重悬，吹打均匀，将菌吹散，转移至100mL锥形瓶中。
4)将锥形瓶封口，放置37℃恒温摇床，转速200rpm,孵育24小时(每隔两个小时取一次样品)，摇匀，取10mL液体于15mL离心管中，6000g离心10min,取上清液按照9：1的比例与终止液高氯酸混合，终止反应进行。
5)经过滤除杂后，采用安捷伦1200型HPLC进行腺苷和肌苷变化检测。根据峰图面积计算肌苷与腺苷含量，以此计算肌苷和腺苷降解率：
肌苷或腺苷降解率＝(肌苷或腺苷初浓度-肌苷或腺苷终浓度)/肌苷或腺苷终浓度。
实验结果如下：
鸟乳杆菌CML180对肌苷和腺苷的降解结果如表1所示，在孵育24小时时鸟乳杆菌CML180对肌苷的降解率为100％，对腺苷的降解率为99.7％。
表1.CML180对肌苷和腺苷的降解情况
实施例3鸟乳杆菌CML180在治疗/缓解小鼠高尿酸血症中的应用
本实施例所选取的小鼠模型为：灌胃腺嘌呤(100mg/kg)和腹腔注射氧嗪酸钾(300mg/kg)诱导高尿酸血症，持续给小鼠造模4周，期间予以灌胃鸟乳杆菌CML180。
具体实验方法如下：
1.小鼠分组处理
选用4周龄(体重20±2g)的昆明雄性小鼠(北京华阜康生物科技股份有限公司)30只，随机分为3组，每组10只小鼠。在室温下饲养，自由饮食采食，经过一周适应饲养后，将小鼠随机分成正常对照组(CON)、高尿酸血症模型组(HUA)、鸟乳杆菌组(CML180)。除正常对照组正常饲养外，高尿酸血症模型组(HUA)、鸟乳杆菌组(CML180)小鼠均在正常饲养的基础上按照灌胃腺嘌呤溶液(100mg/kg)和腹腔注射氧嗪酸钾溶液(300mg/kg)处理；此外，鸟乳杆菌组(CML180)灌菌组小鼠还使用109CFU/mL的鸟乳杆菌CML180进行灌胃，三组小鼠持续处理28天。
2.不同分组小鼠高尿酸血症指标测定和结果分析
2.1鸟乳杆菌CML180可以降低小鼠血清尿酸水平
三组小鼠持续处理28天后，使用南京建成尿酸检测试剂盒测定不同分组小鼠的血清尿酸水平(按照南京建成尿酸检测试剂盒，使用尿酸酶法进行检测)。
结果如图4所示，连续灌胃腺嘌呤(100mg/kg)和腹腔注射氧嗪酸钾(300mg/kg)28天后，高尿酸血症模型组的小鼠血清尿酸较正常对照组小鼠均显著升高，而通过灌胃鸟乳杆菌CML180干预的鸟乳杆菌组小鼠的血清尿酸较高尿酸血症模型组小鼠均显著降低。因此，鸟乳杆菌CML180可以降低小鼠血清尿酸水平。
2.2鸟乳杆菌CML180可以降低小鼠血清肌酐水平
三组小鼠持续处理28天后，使用南京建成肌酐检测试剂盒测定不同分组小鼠的血清肌酐水平(按照南京建成肌酐检测试剂盒，使用肌氨酸氧化酶法进行检测)。
结果如图5所示，连续灌胃腺嘌呤(100mg/kg)和腹腔注射氧嗪酸钾(300mg/kg)28天后，高尿酸血症模型组的小鼠血清肌酐较正常对照组小鼠均显著升高，而通过灌胃鸟乳杆菌干预小鼠的血清肌酐较高尿酸血症模型组小鼠均显著降低。说明Lactobacillusaviarius CML180可以降低小鼠血清肌酐水平。
2.3鸟乳杆菌CML180可以降低小鼠血清尿素氮水平
三组小鼠持续处理28天后，使用南京建成尿素氮检测试剂盒测定不同分组小鼠的血清尿素氮水平(按照南京建成尿素氮试剂盒，使用脲酶法进行检测)。
结果如图6所示，连续灌胃腺嘌呤(100mg/kg)和腹腔注射氧嗪酸钾(300mg/kg)28天后，高尿酸血症模型组的小鼠血清尿素氮较正常对照组小鼠均显著升高，而通过灌胃鸟乳杆菌CML180干预的鸟乳杆菌组小鼠的血清尿素氮较高尿酸血症模型组小鼠均显著降低。表明鸟乳杆菌CML180可以降低小鼠血清尿素氮水平。
2.4鸟乳杆菌CML180可以缓解小鼠高尿酸血症肝脏的损伤
三组小鼠持续处理28天后，使用光学显微镜观察不同分组小鼠的肝脏和肾脏组织切片的损伤情况。
肝脏和肾脏组织切片制备方法为：采集小鼠肝脏组织，然后迅速浸泡在多聚甲醛溶液(碧云天生物公司，货号：P0099)中进行固定，然后进行脱水/包埋/切片/染色等组织病理切片过程。如图7，在对照组中，肝脏组织细胞大小均一，胞浆丰富，中央静脉结构正常，肝组织整体结构正常，未见病理改变。在高尿酸血症模型组中，组织内可见大量肝细胞中胞浆淡染；组织局部可见部分肝血窦扩张，组织间隙增大，部分肝血窦内可见炎性细胞浸润。组织可见大量肝细胞轻度水肿，组织中有炎性液体。在鸟乳杆菌组中，组织内可见少量的肝细胞胞浆淡染，有轻微的炎性细胞浸润和水肿，并未见组织损伤和出血。说明鸟乳杆菌CML180可以缓解小鼠高尿酸血症肝脏的损伤。
如图8，在对照组中，肾脏组织结构完整，未见病理变化。在高尿酸血症模型组中，组织内可见部分肾小管上皮细胞水肿，胞浆淡染；近曲小管管腔狭窄；肾小管间质有炎性细胞；相邻近曲小管细胞之间边界不明显和细胞坏死；细胞质空泡化和扩张。在鸟乳杆菌组中，肾脏组织中病理变化基本有所减轻，未见肾脏细胞坏死，肾脏损害有所缓解。表明鸟乳杆菌CML180可以缓解小鼠高尿酸血症肾脏的损伤。
综上，本发明发现的鸟乳杆菌可以显著降低高尿酸血症小鼠模型的血清尿酸水平、血清肌酐水平和血清尿素氮水平，减轻高尿酸血症小鼠模型的肝脏损伤和肾脏损伤，在实际上产中，可应用于制备治疗或缓解高尿酸血症的产品。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

Claims (9)

1.鸟乳杆菌，其特征在于，所述鸟乳杆菌为鸟乳杆菌(Lactobacillus aviarius)，其菌株号为CML180，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.26207。
2.根据权利要求1所述的鸟乳杆菌，其特征在于：所述鸟乳杆菌的16S rRNA基因含有序列表中SEQ ID NO.1所示的DNA分子。
3.权利要求1或2所述的鸟乳杆菌的培养物，是将权利要求1或2所述的鸟乳杆菌在微生物培养基中培养得到的物质。
4.一种菌剂，其特征在于：所述菌剂含有权利要求1或2所述的鸟乳杆菌或/和权利要求1或2所述的鸟乳杆菌的代谢物或/和权利要求3所述的培养物。
5.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂具有下述至少一种特性：
A1)降低血清尿酸水平；
A2)降低血清肌酐水平；
A3)降低血清尿素氮水平；
A4)减轻高尿酸血症引起的肝脏损伤；
A5)减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤；
A6)缓解高尿酸血症；
A7)缓解代谢性疾病症状。
6.权利要求1或2所述的鸟乳杆菌的下述至少一种应用：
B1)在制备降低血清尿酸水平产品中的应用；
B2)在制备降低血清肌酐水平的产品中的应用；
B3)在制备降低血清尿素氮水平的产品中的应用；
B4)在制备减轻高尿酸血症引起的肝脏损伤的产品中的应用；
B5)在制备减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤的产品中的应用；
B6)在开发或制备治疗和/或缓解高尿酸血症或痛风的产品中的应用；
B7)在开发或制备治疗和/或缓解代谢性疾病的产品中的应用。
7.权利要求4或5所述菌剂的下述至少一种应用：
C1)在制备降低血清尿酸水平产品中的应用；
C2)在制备降低血清肌酐水平的产品中的应用；
C3)在制备降低血清尿素氮水平的产品中的应用；
C4)在制备减轻高尿酸血症引起的肝脏损伤的产品中的应用；
C5)在制备减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤的产品中的应用；
C6)在开发或制备治疗和/或缓解高尿酸血症或痛风的产品中的应用；
C7)在开发或制备治疗和/或缓解代谢性疾病的产品中的应用。
8.根据权利要求5所述的菌剂或权利要求6或7所述的应用，其特征在于：所述产品为药物、动物饲料或动物饲料添加剂。
9.制备权利要求4或5所述的菌剂的方法，包括将权利要求1或2所述的鸟乳杆菌在微生物培养基中培养的步骤。
CN202310123978.6A 2023-02-16 2023-02-16 一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用 Pending CN116042482A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310123978.6A CN116042482A (zh) 2023-02-16 2023-02-16 一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310123978.6A CN116042482A (zh) 2023-02-16 2023-02-16 一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116042482A true CN116042482A (zh) 2023-05-02

Family

ID=86118197

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310123978.6A Pending CN116042482A (zh) 2023-02-16 2023-02-16 一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116042482A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008212140A (ja) * 2007-02-09 2008-09-18 Crossfield Bio Inc 新規なラクトバチルス属微生物および乳酸菌製剤
CN113278547A (zh) * 2021-05-15 2021-08-20 吉林大学 一种禽乳杆菌y122及其对抗多种病原菌的医用用途
US20220152130A1 (en) * 2019-06-28 2022-05-19 Jiangnan University Multifunctional lactobacillus capable of relieving pfoa toxic effects and application thereof
CN115287240A (zh) * 2022-09-14 2022-11-04 天津科技大学 一株具有高尿酸血症及痛风防治作用的植物乳杆菌及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008212140A (ja) * 2007-02-09 2008-09-18 Crossfield Bio Inc 新規なラクトバチルス属微生物および乳酸菌製剤
US20220152130A1 (en) * 2019-06-28 2022-05-19 Jiangnan University Multifunctional lactobacillus capable of relieving pfoa toxic effects and application thereof
CN113278547A (zh) * 2021-05-15 2021-08-20 吉林大学 一种禽乳杆菌y122及其对抗多种病原菌的医用用途
CN115287240A (zh) * 2022-09-14 2022-11-04 天津科技大学 一株具有高尿酸血症及痛风防治作用的植物乳杆菌及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XIANGFENG MENG等: "Biochemical characterization of two GH70 family 4, 6-α-glucanotransferases with distinct product specificity from Lactobacillus aviarius subsp. aviarius DSM 20655", 《FOOD CHEMISTRY》, 1 July 2018 (2018-07-01) *
胡永飞等: "家禽肠道微生物组研究进展", 《中国家禽》, 15 November 2022 (2022-11-15) *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113980878B (zh) 一种抗幽门螺杆菌感染的植物乳杆菌及其应用
CN112813003B (zh) 一株植物乳杆菌及其在制备缓解高血脂症引发的疾病的药物或食品中的应用
CN107338198B (zh) 一种植物乳杆菌及其应用
CN116083325B (zh) 一种改善幽门螺杆菌相关性胃肠疾病的鼠李糖乳杆菌及其应用
CN113249255B (zh) 一种防控禽肠炎的枯草芽孢杆菌及其应用
CN115322932B (zh) 一株具有解酒醒酒能力的植物乳植杆菌和应用
CN116024130A (zh) 一株降血尿酸发酵乳杆菌a21215及其应用
CN113797232B (zh) 具有缓解胰岛素抵抗功能的组合物及其应用
CN114854638A (zh) 一株高效表达腺苷脱氨酶缓解结肠炎副干酪乳杆菌
CN116064324B (zh) 一株鼠李糖乳杆菌及其培养方法和在防治腹泻和肠炎方面的应用
CN115418332A (zh) 一种具有预防和改善化学性肝损伤的植物乳杆菌
CN114231472B (zh) 乳酸杆菌益生菌CGMCC No.23437及在制备降脂药物中的应用
CN116042482A (zh) 一种鸟乳杆菌及其在制备治疗或缓解高尿酸血症的产品中的应用
CN112813009B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN116286510B (zh) 一株产胞外多糖的植物乳杆菌及其应用
CN117016673B (zh) 一种枯草芽孢杆菌在改善蛋鸡的肠道菌群或肠道健康或营养吸收中的应用
CN115851538B (zh) 一株类肠膜魏斯氏菌MbWp-171及其产品与应用
CN115851537B (zh) 一株类肠膜魏斯氏菌MbWp-142及其产品与应用
CN116515674A (zh) 一种粪肠球菌及其在治疗或缓解高尿酸血症中的应用
CN113403225B (zh) 一株动物双歧杆菌nsy0201及其在用于制备增强机体免疫力的保健品或药品中的应用
CN115386523B (zh) 一株乳酸乳球菌及其在抗幽门螺杆菌感染的应用
CN115433700B (zh) 一株沙氏别样杆菌及其在制备防治炎症性肠病药物中的应用
CN116286515A (zh) 一株健康哺乳母猪肠道来源的鼠李糖乳杆菌及其应用
CN116790431A (zh) 能够缓解便秘与腹泻的婴儿源动物双歧杆菌乳亚种、微生物菌剂及其应用
CN117264812A (zh) 一株融合魏斯氏菌及其在制备降脂产品中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination