CN116041426B - 玉米蛋白源抗粘附肽及其制备方法和应用 - Google Patents

玉米蛋白源抗粘附肽及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于活性肽制备技术领域，具体涉及玉米蛋白源抗粘附肽及其制备方法和应用。本发明提供了一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的玉米蛋白源抗粘附肽，所述玉米蛋白源抗粘附肽的序列包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明所述玉米蛋白源抗粘附肽从玉米蛋白粉中分离得到，为一种新的玉米蛋白源抗粘附肽，其具有抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的作用，可以用于制备抑制幽门螺旋杆菌粘附的产品，为幽门螺旋杆菌感染的防治提供技术支持。实施例结果表明当玉米蛋白源抗粘附肽(TFIPQ)的浓度为4mg/mL时，其抑制幽门螺旋杆菌粘附活性为50.59％。

Description

玉米蛋白源抗粘附肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于活性肽制备技术领域，具体涉及玉米蛋白源抗粘附肽及其制备方法和应用。
背景技术
幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori，H.pylori)常寄生在胃黏膜组织中，感染后主要引起慢性胃炎和消化性溃疡等疾病，与胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病有密切的关系，被世界卫生组织(WHO)列为I类生物致癌因子。目前，最常见的治疗幽门螺旋杆菌的方法是抗生素治疗，如含有抗生素的三联疗法和四联疗法。但随着幽门螺旋杆菌对抗生素的耐药性逐年上升，其根除率也在下降，并且服用抗生素具有很多副作用，如肠道不适、过敏等。因此，开发抗生素的替代疗法对于防治幽门螺旋杆菌感染、保持人类胃肠道菌群健康具有重要意义。
近年来，已经报道了一些可以抑制幽门螺旋杆菌粘附的天然来源的食源性组分，如蔓越莓中的黄酮类物质、多糖、卵黏蛋白肽和小麦胚芽蛋白肽等，但总体种类较少。因此研发天然、安全、价格低廉且更高效的具有抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的食源性组分意义是十分重大的。
玉米蛋白粉(corn gluten meal，CGM)是玉米湿法生产淀粉中产量最大、蛋白质含量最高的副产物(约占60％)，但是因其存在溶解性差和疏水性强等在食品行业应用的不利因素，限制了其在食品行业中的应用，致使大多玉米蛋白粉均作为饲料使用，造成了其粮食资源的极大浪费。因此，倘若能够对玉米蛋白进行改性，开发具有抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的功能食品，提高其附加值，对玉米蛋白的精深加工具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供玉米蛋白源抗粘附肽及其制备方法和应用，所述玉米蛋白源抗粘附肽具备抑制幽门螺旋杆菌粘附的作用，为一种新的玉米蛋白源抗粘附肽。
本发明提供了一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的玉米蛋白源抗粘附肽，所述玉米蛋白源抗粘附肽的序列包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
优选的，所述玉米蛋白源抗粘附肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明提供了上述技术方案所述的玉米蛋白源抗粘附肽的制备方法，包括如下步骤：
将玉米蛋白粉与中性蛋白酶混合进行酶解反应，得到的酶解液中包括所述玉米蛋白源抗粘附肽。
优选的，所述中性蛋白酶的用量为400U/g蛋白；所述酶解的温度为45℃，时间为150min，pH为7.0。
优选的，进行所述酶解反应前，还包括将所述玉米蛋白粉制备成悬浊液，所述悬浊液中玉米蛋白粉的质量浓度为15％(w/v)。
优选的，所述制备方法还包括对所述酶解液进行分离纯化，收集小于1000Da的组分，得到所述玉米蛋白源抗粘附肽。
优选的，用于所述分离纯化的方式包括凝胶色谱分离和离子交换色谱分离。
优选的，用于所述凝胶色谱分离的预装柱为Superdex Peptide 10/300GL；所述离子交换色谱分离包括依次进行的Q-Sepharose High Performance离子交换色谱分离和Mono Q离子交换色谱分离。
本发明还提供了上述技术方案所述的玉米蛋白源抗粘附肽或所述的制备方法制备得到的玉米蛋白源抗粘附肽在制备抑制幽门螺旋杆菌粘附的产品中应用。
本发明还提供了一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附的产品，所述产品的有效成分包括上述技术方案所述的玉米蛋白源抗粘附肽或所述的制备方法制备得到的玉米蛋白源抗粘附肽。
有益效果：
本发明提供了一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的玉米蛋白源抗粘附肽，所述玉米蛋白源抗粘附肽的序列包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明所述玉米蛋白源抗粘附肽从玉米蛋白粉中分离得到，为一种新的玉米蛋白源抗粘附肽，其具有抑制幽门螺旋杆菌粘附的作用，可以用于制备抑制幽门螺旋杆菌的产品，为幽门螺旋杆菌相关疾病的防治提供技术支持。实施例结果表明当玉米蛋白源抗粘附肽(TFIPQ)的浓度为4mg/mL时，其抑制幽门螺旋杆菌粘附活性为50.59％。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为实施例1中玉米蛋白源抗粘附肽制备的技术路线图；
图2为玉米蛋白源抗粘附肽(TFIPQ)的质谱检测图；
图3为菌落浓度与OD600的标准曲线；
图4为FITC荧光强度值和OD600的标准曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的玉米蛋白源抗粘附肽，所述玉米蛋白源抗粘附肽的序列包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
本发明所述玉米蛋白源抗粘附肽的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.1所示，具体为TFIPQ。本发明所述玉米蛋白源抗粘附肽从玉米蛋白粉中分离得到，可以抑制幽门螺旋杆菌粘附。
本发明提供了上述技术方案所述的玉米蛋白源抗粘附肽的制备方法，包括如下步骤：
将玉米蛋白粉与中性蛋白酶混合进行酶解反应，得到的酶解液中包括所述玉米蛋白源抗粘附肽。
本发明将所述玉米蛋白粉与中性蛋白酶混合前，优选还包括将所述玉米蛋白粉制备成悬浊液。本发明优选将所述玉米蛋白粉与水混合，得到所述悬浊液。本发明所述悬浊液中玉米蛋白粉的质量浓度优选为15％(w/v)。本发明所述玉米蛋白粉优选为经挤压膨化并去除淀粉的玉米蛋白粉，所述玉米蛋白粉可以充分的去掉与蛋白质紧密结合的淀粉物质，有利于蛋白质的酶解。本发明对所述玉米蛋白粉的来源没有特殊限定，从本领域中常规购买的经挤压膨化后去淀粉的玉米蛋白粉均可。
得到所述悬浊液后，本发明优选将所述悬浊液与中性蛋白酶混合进行酶解反应，得到酶解混合物。本发明所述中性蛋白酶的用量优选为400U/g蛋白。本发明所述蛋白优选以所述玉米蛋白粉中的蛋白量计。本发明所述酶解反应的温度优选为45℃，时间优选为150min，pH值优选为7.0。完成所述酶解反应后，本发明优选还包括对得到的所述酶解混合物进行灭酶反应，所述灭酶反应的温度优选为100℃，时间优选为10min。完成所述灭酶反应后，本发明优选还包括对所述灭酶反应后的混合物进行离心，所述离心得到的上清液，即为酶解液。本发明所述离心的转速优选为4000r/min，时间优选为10min。本发明所述酶解液中包括所述玉米蛋白源抗粘附肽。
得到所述酶解液后，本发明优选还包括对所述酶解液进行分离纯化，收集小于1000Da的组分，得到所述玉米蛋白源抗粘附肽。
本发明优选对所述酶解液进行凝胶色谱分离，收集抑制幽门螺旋杆菌粘附活性相对更强且分子量小于1000Da的组分。本发明所述所述凝胶色谱分离的预装柱为SuperdexPeptide 10/300GL。本发明所述凝胶色谱分离的条件优选包括：上样浓度为50mg/L，上样量为1mL；洗脱液为pH 7.0的含0.15mol/LNaCl的20mM PBS缓冲液；洗脱液的流速为0.25mL/min；检测波长为214nm。本发明优选还包括测定收集得到的各组分的抑制幽门螺旋杆菌粘附活性，得到抑制幽门螺旋杆菌粘附活性相对更强且分子量小于1000Da的组分。本发明优选采用实施例1中所述的方法测定所述抑制幽门螺旋杆菌粘附活性，下同，不再赘述。
完成所述凝胶色谱分离后，本发明优选对所述抑制幽门螺旋杆菌粘附活性相对更强且分子量小于1000Da的组分进行离子交换色谱分离。本发明所述离子交换色谱优选包括依次进行的Q-Sepharose HighPerformance离子交换色谱分离和Mono Q离子交换色谱分离。本发明进行所述Q-Sepharose High Performance离子交换色谱分离的条件优选包括上样量为50mL；洗脱液A优选为Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液的浓度优选为20mM，pH值优选为7.5；洗脱液B为pH 7.5的含1mol/L NaCl的20mM Tris-HCl缓冲液；洗脱液的流速为2mL/min，检测波长为214nm，梯洗体积60mL，峰组分收集的体积为6mL/管。本发明优选还包括测定收集得到的峰组分的抑制幽门螺旋杆菌粘附活性，得到抑制幽门螺旋杆菌粘附活性相对更强的组分，即为第一组分。本发明所述第一组分中的蛋白浓度优选为2mg/mL。
完成所述Q-Sepharose High Performance离子交换色谱分离后，本发明优选对所述第一组分进行Mono Q离子交换色谱分离。本发明所述Mono Q离子交换色谱分离的条件优选包括上样量为10mL；洗脱液A优选为Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液的浓度优选为20mM，pH值优选为7.0；洗脱液B为pH 7.0含1mol/L NaCl的20mM Tris-HCl缓冲液；洗脱液的流速为1mL/min，检测波长为214nm，梯洗体积20mL，峰组分收集的体积为1mL/管。本发明优选还包括测定收集得到的峰组分的抑制幽门螺旋杆菌粘附活性，得到抑制幽门螺旋杆菌粘附活性相对更强的组分，即为第二组分。
得到所述第二组分后，本发明优选对所述第二组分进行质谱测序，得到所述玉米蛋白源抗粘附肽。本发明所述玉米蛋白源抗粘附肽的氨基酸序列为TFIPQ。本发明优选采用LC-MS/MS进行所述质谱测序。本发明对所述质谱测序的过程和步骤没有特殊限定，采用本领域中常规质谱测序步骤即可。进行所述质谱测序前，本发明所述还包括对所述第二组分进行脱盐冻干。本发明对所述脱盐冻干的过程、步骤以及脱盐后的状态均没有特殊限定，采用本领域中常规脱盐冻干的过程和步骤即可。
本发明还提供了上述技术方案所述的玉米蛋白源抗粘附肽或所述的制备方法制备得到的玉米蛋白源抗粘附肽在制备抑制幽门螺旋杆菌粘附的产品中应用。本发明所述产品优选包括食品和药品。本发明对所述食品和药品的类型没有特殊限定，本领域中常规类型的食品和药品均可。
本发明还提供了一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附的产品，所述产品的有效成分包括上述技术方案所述的玉米蛋白源抗粘附肽或所述的制备方法制备得到的玉米蛋白源抗粘附肽。本发明所述产品优选包括药品和/或食品。本发明所述产品优选还包括辅料和/或其他活性成分。当所述产品中还包括其他活性成分时，本发明对所述其他活性成分的类型、功效和用量均没有特殊限定，依据制备的产品合理添加即可。本发明对所述产品中所述玉米蛋白源抗粘附肽的用量没有特殊限定，根据制备的产品常规添加即可。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
在下述实施例中所使用的方法，如无特殊说明，采用的均为本领域中的常规试验方法；所使用的生物材料和试验材料，如无特殊说明，均可通过本领域中常规购买渠道获得。
实施例1
一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的玉米蛋白源抗粘附肽，由以下步骤组成(技术路线图见图1)：
1、玉米蛋白酶解液的制备
取一定量经挤压膨化并去除淀粉的玉米蛋白粉(购自齐齐哈尔龙江阜丰生物科技有限公司)，加水配制成底物浓度为15％(w/v)的悬浊液，然后用中性蛋白酶进行酶解，酶解条件为：加酶量400U/g蛋白，酶解温度45℃，酶解时间150min，酶解pH 7.0，酶解结束后100℃加热灭酶10min，酶解物在4000r/min离心10min并弃去沉淀，所得上清液为玉米蛋白酶解液，通过测定其抑制幽门螺旋杆菌粘附活性，确认其为具有高抑制幽门螺旋杆菌粘附活性多肽混合物。抑制幽门螺旋杆菌粘附活性测定的方法均参照步骤5中进行，下同，不再赘述。
2、玉米蛋白酶解液的凝胶色谱分离
所使用的凝胶色谱柱为Superdex Peptide 10/300GL预装柱，将步骤1中具有高抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的多肽混合物采用凝胶色谱分离得到不同分子量组分的多肽混合物，上样浓度50mg/mL，上样量1mL，洗脱液为pH 7.0含0.15mol/LNaCl的20mM PBS缓冲溶液，流速为0.25mL/min，检测波长为214nm；测定各分子量组分的抑制幽门螺旋杆菌粘附活性，收集小于1000Da组分且抑制幽门螺旋杆菌粘附活性相对较高的组分用于离子交换色谱分离。
3、离子交换色谱分离
3.1Q-Sepharose High Performance强阴离子交换色谱分离
将凝胶色谱所得分子量小于1000Da且抑制幽门螺旋杆菌粘附活性相对较高的组分过0.22μm的微孔滤膜，所得样品蛋白浓度为4mg/mL，使用强阴离子交换剂为Q-SepharoseHigh Performance分离。上样量为50mL，所述强阴离子交换色谱的洗脱液A：pH 7.5的20mM的Tris-HCl缓冲液，洗脱液B：pH7.5含1mol/L NaCl的的20mMTris-HCl缓冲液，流速为2mL/min，检测波长214nm，梯洗体积为60mL，峰组分每管收集6mL；测定各管收集液的抑制幽门螺旋杆菌粘附活性，收集抑制幽门螺旋杆菌粘附活性相对较高的组分(第6管)用于Mono Q离子交换色谱分离。
3.2Mono Q离子交换色谱
步骤3.1中分离得到的高活性组分使用Mono Q离子交换色谱进一步分离。将上一步离子交换色谱所得高活性组分过0.22μm的微孔滤膜，所得样品蛋白浓度为2mg/mL，上样量10mL，所述Mono Q离子交换色谱的洗脱液A：pH 7.0的20mM的Tris-HCl缓冲液，洗脱液B：pH 7.0含1mol/L NaCl的的20mM Tris-HCl缓冲液，流速为1mL/min，检测波长214nm，梯洗体积为20mL，峰组分每管收集1mL；测定各管收集液的抑制幽门螺旋杆菌粘附活性，收集抑制幽门螺旋杆菌粘附活性较高的组分(第16管)备用。
4、LC-MS/MS质谱测序
将步骤3.2中得到的组分脱盐冻干后进行质谱测序得到氨基酸序列为TFIPQ的玉米蛋白源抗粘附肽，结果如图2所示。
5、玉米蛋白源抗粘附肽抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的测定
将步骤4中得到的玉米蛋白源抗粘附肽化学合成后(委托上海强耀生物科技有限公司合成)，测定其抑制幽门螺旋杆菌粘附活性。
5.1玉米蛋白源抗粘附肽抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的测定：
1)利用H.pylori ATCC43504菌株作为抗粘附活性试验测定菌株。在37℃条件下将经过冻存的H.pylori ATCC43504菌株解冻，先与液体培养基(3g大豆蛋白胨、2.5g K2HPO4、17g胰蛋白胨和5g NaCl，加入1L去离子水，混合摇匀溶解后调节pH值至7.2，121℃、0.1Mpa灭菌1h)混合，随后将其接种于斜面培养基(15g胰蛋白胨、5g大豆蛋白胨、15g琼脂、5g NaCl和950mL去离子水，搅拌溶解调节pH值至7.2，121℃、0.1Mpa灭菌1h，在培养基冷却至45℃左右，加入50mL无菌的脱纤维羊血，混匀后，倒入试管制作斜面培养基)上，在37℃微需氧(5％O2，85％N2，10％CO2)条件下，培养48～72h，得到的菌液可进行菌种传代和抗粘附活性检测。
将传代的H.pylori ATCC43504的菌液，进行四次10倍梯度稀释获得五种不同浓度的菌液，在600nm条件下测定幽门螺旋杆菌菌液的OD值，同时通过平板涂布法计算菌落浓度，建立菌落浓度与OD600的标准曲线，如图3所示。
2)冻存人胃粘膜上皮细胞(GES-1)解冻后移入细胞培养瓶中，细胞培养基组成为1％青链霉素混合液、10％胎牛血清和89％DMEM培养基。在37℃，5％CO2条件下孵育至单层细胞形成，胰蛋白酶-EDTA消化传代，离心，用不含抗生素的细胞培养基重悬，调整细胞浓度为3×105cells/mL。将细胞悬液接种到96孔板中，每孔100μL，在37℃，5％CO2培养箱中培养孵育24h，用于抑制H.pylori粘附活性的测定实验。
3)异硫氰酸荧光素(FITC)标记幽门螺旋杆菌
制备FITC浓度为2mg/mL的DMSO溶液，无菌滤膜过滤处理。按照1：1的体积比将步骤1)中制备得到的传代的H.pylori ATCC43504的菌液与其混匀，在避免光照的条件下，生化摇摆台上混合30min后，在4500r/min的转速下离心处理3min，除去上清液，经过1×PBS缓冲液洗涤3次，除去多余的FITC，最后将菌液在液体培养基(3g大豆蛋白胨、2.5g K2HPO4、17g胰蛋白胨和5g NaCl，加入1L去离子水，混合摇匀溶解后调节pH值至7.2，121℃、0.1Mpa灭菌1h)上稀释至OD600值在0.1左右(108cfu/mL)，备用。
4)FITC荧光强度值与OD600标准曲线的构建
将上步中经过FITC标记处理的幽门螺旋杆菌菌液，按照四次10倍梯度稀释，在激发波长485nm和发射波长530nm条件下，测量其荧光强度值，与此同时在600nm条件下测OD值，建立FITC荧光强度值和OD600的标准曲线，如图4所示。
5)玉米蛋白源抗粘附肽抑制幽门螺旋杆菌粘附活性试验
将实施例1中制备得到的玉米蛋白源抗粘附肽使用100％DMEM培养基，配制一定蛋白浓度的玉米蛋白源抗粘附肽溶液，按照1：1(v/v)的比例与步骤3)中经过FITC标记过的菌液在室温避光条件下进行混合30min，使实施例1所得玉米蛋白源抗粘附肽的终浓度为4mg/mL，得到混合后的菌液。
向带有胃粘膜上皮细胞(GES-1)的96孔板中分别加入100μL混合后的菌液，以加入100μL100％DMEM培养基为阴性对照组，在培养箱中放置90min。然后将溶液去除，用PBS缓冲液清洗3次，随即，将PBS缓冲液按照每孔100μL量加入，在发射波长530nm、激发波长485nm条件下进行荧光强度值的测定，根据实施例1中5.1的步骤3)和4)，计算出阴性对照组和试验组的菌落浓度，采用以下公式计算粘附抑制率：
结果为：当玉米蛋白源抗粘附肽(TFIPQ)的浓度为4mg/mL时，其抑制幽门螺旋杆菌粘附活性为50.59％。
由以上实施例可以得出，本发明提供的玉米蛋白源抗粘附肽具备抑制幽门螺旋杆菌粘附的作用。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (4)

1.一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附活性的玉米蛋白源抗粘附肽，其特征在于，所述玉米蛋白源抗粘附肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述的玉米蛋白源抗粘附肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将玉米蛋白粉制备成悬浊液，所述悬浊液中玉米蛋白粉的质量浓度为15% w/v；
将所述悬浊液与中性蛋白酶混合进行酶解反应，得到的酶解液；
对所述酶解液进行分离纯化，收集小于1000Da的组分，得到所述玉米蛋白源抗粘附肽；
所述中性蛋白酶的用量为400U/g蛋白；所述酶解的温度为45℃，时间为150min，pH为7.0；
用于所述分离纯化的方式包括凝胶色谱分离和离子交换色谱分离；
用于所述凝胶色谱分离的预装柱为Superdex Peptide 10/300 GL；所述离子交换色谱分离包括依次进行的Q-Sepharose High Performance离子交换色谱分离和Mono Q离子交换色谱分离。
3.权利要求1所述的玉米蛋白源抗粘附肽或权利要求2所述的制备方法制备得到的玉米蛋白源抗粘附肽在制备抑制幽门螺旋杆菌粘附的产品中应用。
4.一种具备抑制幽门螺旋杆菌粘附的产品，其特征在于，所述产品的有效成分包括权利要求1所述的玉米蛋白源抗粘附肽或权利要求2所述的制备方法制备得到的玉米蛋白源抗粘附肽。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN117603308B (zh) * 2024-01-19 2024-04-12 齐齐哈尔大学 一种抗幽门螺旋杆菌粘附的玉米肽及其制备方法与应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1665931A (zh) * 2002-05-31 2005-09-07 西根控股有限公司 从膜转运序列衍生的自身聚集或自身团聚嵌合蛋白
WO2011119484A1 (en) * 2010-03-23 2011-09-29 Iogenetics, Llc Bioinformatic processes for determination of peptide binding
CN111394326A (zh) * 2020-03-27 2020-07-10 中国农业大学 呕吐毒素降解酶ddh及其在单端孢霉烯族毒素脱毒中的应用
CN113423836A (zh) * 2019-01-11 2021-09-21 龙沙有限公司 重组宿主细胞中碳源调节的蛋白的产生

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4474581B2 (ja) * 2002-01-28 2010-06-09 日清ファルマ株式会社 ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1665931A (zh) * 2002-05-31 2005-09-07 西根控股有限公司 从膜转运序列衍生的自身聚集或自身团聚嵌合蛋白
WO2011119484A1 (en) * 2010-03-23 2011-09-29 Iogenetics, Llc Bioinformatic processes for determination of peptide binding
CN113423836A (zh) * 2019-01-11 2021-09-21 龙沙有限公司 重组宿主细胞中碳源调节的蛋白的产生
CN111394326A (zh) * 2020-03-27 2020-07-10 中国农业大学 呕吐毒素降解酶ddh及其在单端孢霉烯族毒素脱毒中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Zein-derived peptides as nanocarriers to increase the water solubility and stability of lutein;Jiao Y 等;《Food & Function》;第9卷(第1期);117-123 *
玉米六肽的酶法糖基化修饰对产物生物活性的影响;王晓杰 等;中国酿造(第3期);78-83 *
玉米活性肽的分离纯化及抑制体外脂质过氧化作用研究;陈红漫 等;食品科技;36(09);271-275 *
高分子量乳清蛋白抑制幽门螺旋杆菌黏附性研究;康慧 等;食品工业科技(10);98-100 *

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