CN116019862A - 一种具备多功效位点的祛痘组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种具备多功效位点的祛痘组合物及其制备方法与应用，所述祛痘组合物包括黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物和桔梗提取物。四种提取物相互配合，协同增效，从抑制痤疮杆菌增殖、抑制金黄色葡萄球菌增殖、不影响表皮葡萄球菌的生长、下调痤疮杆菌诱导的TLR2和TLR4的表达、抑制IL‑8的分泌、以及抑制细胞因子TNF‑α、IL‑6和NO的分泌多方面发挥祛痘功效。得到的祛痘组合物用于制备化妆品或护肤品时，仅需极少的添加量即可实现良好的祛痘效果，可以安全广泛应用于多种化妆品剂型中。

Description

一种具备多功效位点的祛痘组合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于医药与日化产品技术领域，涉及一种具备多功效位点的祛痘组合物及其制备方法与应用。

背景技术

痤疮是一种皮脂腺单位的慢性炎症疾病，严重影响人们的生活质量和心理健康。痤疮杆菌的增殖和生态失调是痤疮发生与发展的原因之一，具体可归为以下四点：

1、O'Neill AM等人2018年在Microbiome发表的《Host-microbiome interactionsand recent progress into understanding the biology of acne vulgaris.》，表明在痤疮皮损处，痤疮杆菌与细胞外基质紧密粘连，使角质细胞难以脱落，促使粉刺形成，同时为痤疮杆菌提供一个厌氧和脂质丰富的环境，使其大量定值。

2、Wang等人2014年在Applied Microbiology and Biotechnology上发表的《Staphylococcus epidermidis in the human skin microbiome mediatesfermentation to inhibit the growth of Propionibacterium acnes: implicationsof probiotics in acne vulgaris.》，指出痤疮杆菌分泌的胞外脂肪酶可分解脂肪酸甘油酯，解离出的甘油可以作为痤疮杆菌和表皮葡萄球菌生长繁殖的碳来源。同时，表皮葡萄球菌可将甘油发酵成琥珀酸，琥珀酸进入痤疮杆菌细胞质，导致其细胞质酸度上升从而死亡。由此可见，痤疮杆菌与表皮葡萄球菌是一种竞争抑制关系，表皮葡萄球菌的定值量会影响痤疮的发生与发展。

3、Suvanprakorn P等人2019年在In Vivo发表的《Establishment of an Anti-acne Vulgaris Evaluation Method Based on TLR2 and TLR4-mediated Interleukin-8Production》发现痤疮杆菌的脂磷壁酸和肽聚糖通过激活角质细胞中的TLR(Toll-likereceptors, TLR) 2、TLR4，促使IL-8表达量升高。

4、柴景秀等人2019年在国际皮肤性病学杂志发表的《痤疮相关基因多态性的研究进展》，发现TNF-α、IL-6、NO等细胞因子参与痤疮的炎症反应，直接影响痤疮发展的严重程度。

此外，随着生活水平的提高，人们越来越关注安全、天然类化妆品成分的研究。王聪敏等人2017年在中国美容整形外科杂志发表的《化学换肤治疗轻中度痤疮的不良反应分析及护理对策》发现水杨酸类化妆品有较强的副作用，易引起皮肤发红、肿胀和烧灼感。

综上所述，为抑制痤疮的发生与发展，从以下四点进行植物类祛痘组合物的设计：1）抑制痤疮杆菌增殖；2）不影响表皮葡萄球菌的生长；3）下调痤疮杆菌诱导的TLR2、TLR4的表达，抑制IL-8的分泌；4）抑制细胞因子TNF-α、IL-6、NO的分泌。现阶段，在化妆品膏霜类产品所含植物成分，暂未见报道同时从上述四点设计的祛痘组合物。如：

CN111450006A公开了一种具有多靶点的祛痘功效的组合及其制备方法和应用，其中苦参、艾叶、金银花提取物不仅抑制痤疮杆菌的繁殖还抑制痤疮杆菌释放外膜囊泡和IL-8的分泌，具有抑制痤疮炎症的功效。

CN113318002A公开了一种消炎祛痘组合物，由白头翁皂苷B4、B5、BD、B3、B7组成。组合物能有效抑制炎症因子IL-6、IL-1β和IL-8的释放，抑制MAPK和NF-κB相关炎症通路。

CN109394598A公开了一种祛痘浓缩物及其应用，其中祛痘浓缩物能通过有效抑制痤疮杆菌和角质形成细胞中TLR2、TNF-α、IL-1α的表达，平衡微生物组群从而达到治疗痤疮的效果。

CN105031159A公开了一种具有祛痘功效的中药提取物制剂，包括中药醇提取物、中药水提取物，其中中药醇提取物为黄柏、大黄、甘草、丹参、厚朴的组合物；中药水提取物为黄连、重楼、余甘子、丁香、赤芍的组合物。当中药醇提取物浓度在5~9wt. %，中药水提取物浓度在3~5wt. %时，中药提取物制剂能有效地抑制痤疮杆菌的生长，可达到痤疮消除的效果。

由于现有技术中的祛痘产品中仅能从抑制炎症因子这一方面来抑制痤疮，因而效果有限，而且往往需要添加比较高含量的功效成分才能实现一定的祛痘效果。因此，若能从上述四个方面共同着手，可能会大大提高产品的抑制痤疮的效果。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具备多功效位点的祛痘组合物及其制备方法与应用。

所述多功效位点是指：1）抑制痤疮杆菌增殖；2）抑制金黄色葡萄球菌增殖，不影响表皮葡萄球菌的生长；3）下调痤疮杆菌诱导的TLR2和TLR4的表达，抑制IL-8的分泌；4）抑制细胞因子TNF-α、IL-6和NO的分泌。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种具备多功效位点的祛痘组合物，所述祛痘组合物包括黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物和桔梗提取物。

优选地，所述祛痘组合物以重量份数计包括黄檗提取物0.1~3份、厚朴提取物0.1~3份、甘草提取物0.1~3份和桔梗提取物0.1~3份。

上述0.1~3份中的具体数值例如0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份、1.5份、1.6份、1.7份、1.8份、1.9份、2份、2.1份、2.2份、2.3份、2.4份、2.5份、2.6份、2.7份、2.8份、2.9份、3份等。

优选地，所述祛痘组合物以重量份数计包括黄檗提取物0.8~2.2份、厚朴提取物0.8~2.2份、甘草提取物0.8~2.2份和桔梗提取物0.8~2.2份。

优选地，所述祛痘组合物以重量份数计包括黄檗提取物0.8~1.2份、厚朴提取物1.8~2.2份、甘草提取物0.8~1.2份和桔梗提取物0.8~1.2份；

或者，所述祛痘组合物以重量份数计包括黄檗提取物1.8~2.2份、厚朴提取物0.8~1.2份、甘草提取物0.8~1.2份和桔梗提取物0.8~1.2份。

第二方面，本发明提供如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物的制备方法，所述制备方法包括：将黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物和桔梗提取物混合，即得。

优选地，所述黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物或桔梗提取物的制备方法包括：将黄檗、厚朴、甘草或桔梗的药材与溶剂混合，进行提取，干燥，即得。

优选地，所述溶剂为乙醇水溶液；

所述药材为黄檗时，溶剂重量为药材重量的8~10倍，乙醇浓度为10~30 vol.%；

所述药材为厚朴时，溶剂重量为药材重量的6~8倍，乙醇浓度为30~70 vol.%；

所述药材为甘草时，溶剂重量为药材重量的5~7倍，乙醇浓度为60~80 vol.%；

所述药材为桔梗时，溶剂重量为药材重量的7~9倍，乙醇浓度为10~30 vol.%。

上述8~10倍中的具体数值例如8倍、8.5倍、9倍、9.5倍、10倍等。

上述10~30 vol.%中的具体数值例如10 vol.%、12 vol.%、15 vol.%、17 vol.%、20vol.%、22 vol.%、25 vol.%、27 vol.%、30 vol.%等。

上述6~8倍中的具体数值例如6倍、6.5倍、7倍、7.5倍、8倍等。

上述30~70 vol.%中的具体数值例如30 vol.%、32 vol.%、35 vol.%、37 vol.%、40vol.%、42 vol.%、45 vol.%、47 vol.%、50 vol.%、52 vol.%、55 vol.%、57 vol.%、60vol.%、62 vol.%、65 vol.%、67 vol.%、70 vol.%等。

上述5~7倍中的具体数值例如5倍、5.5倍、6倍、6.5倍、7倍等。

上述60~80 vol.%中的具体数值例如60 vol.%、62 vol.%、65 vol.%、67 vol.%、70vol.%、72 vol.%、75 vol.%、77 vol.%、80 vol.%等。

上述7~9倍中的具体数值例如7倍、7.5倍、8倍、8.5倍、9倍等。

优选地，所述提取为回流提取，所述回流提取的温度为80~90℃，例如80℃、82℃、85℃、87℃、90℃等，所述回流提取的时间为1~5 h，例如1 h、1.2 h、1.5 h、1.8 h、2 h、2.2h、2.5 h、2.8 h、3 h、3.2 h、3.5 h、3.8 h、4 h、4.2 h、4.5 h、4.8 h、5 h等。

本领域技术人员可按照本发明方法或者自行选择常用的方法来制备各提取物，理论上，提取方法对提取物功效的发挥无显著影响。

第三方面，本发明提供如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物在制备化妆品或护肤品中的应用。

优选地，所述祛痘组合物占化妆品或护肤品总质量的0.001~1.5%。

优选地，所述化妆品或护肤品的剂型包括溶液、凝胶、面膜、霜、膏等。

在制备化妆品或护肤品时，可以将祛痘组合物直接添加，或者先将祛痘组合物与10~50 vol.%的溶媒（例如多元醇水溶液）混合，然后进行添加。

第四方面，本发明提供如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物在制备抑制痤疮杆菌增殖的药物、抑制金黄色葡萄球菌增殖的药物、TLR2抑制剂、TLR4抑制剂、IL-8抑制剂、TNF-α抑制剂、IL-6抑制剂或NO分泌抑制剂中的应用。

第五方面，本发明提供一种抑制痤疮杆菌增殖的方法，所述方法包括：将痤疮杆菌与如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物混合，来抑制其增殖。

第六方面，本发明提供一种抑制金黄色葡萄球菌增殖的方法，所述方法包括：将金黄色葡萄球菌与如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物混合，来抑制其增殖。

第七方面，本发明提供一种抑制TLR2表达的方法，所述方法包括：向目标细胞或组织给予如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物。

第八方面，本发明提供一种抑制TLR4表达的方法，所述方法包括：向目标细胞或组织给予如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物。

第九方面，本发明提供一种抑制IL-8表达的方法，所述方法包括：向目标细胞或组织给予如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物。

第十方面，本发明提供一种抑制TNF-α分泌的方法，所述方法包括：向目标细胞或组织给予如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物。

第十一方面，本发明提供一种抑制IL-6分泌的方法，所述方法包括：向目标细胞或组织给予如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物。

第十二方面，本发明提供一种抑制NO分泌的方法，所述方法包括：向目标细胞或组织给予如第一方面所述的具备多功效位点的祛痘组合物。

本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

1、本发明创造性地将黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物和桔梗提取物进行组合，四种提取物相互配合，协同增效，从抑制痤疮杆菌增殖、抑制金黄色葡萄球菌增殖、不影响表皮葡萄球菌的生长、下调痤疮杆菌诱导的TLR2和TLR4的表达、抑制IL-8的分泌、以及抑制细胞因子TNF-α、IL-6和NO的分泌的多作用位点，发挥祛痘功效。

2、本发明得到的祛痘组合物用于制备化妆品或护肤品时，仅需极少的添加量（0.0075wt. %）即可实现良好的祛痘效果。

3、本发明的祛痘组合物颜色浅，气味淡、用量少，功效强，通过人体斑贴实验，可以安全广泛应用于多种化妆品剂型中。

4、本发明的祛痘组合物，制备工艺简单，成本低廉，经济实惠，所述植物均市售常见，具有良好的产业化价值和应用前景。

附图说明

图1是祛痘组合物对TLR2的基因表达量的影响结果图。

图2是祛痘组合物对TLR4的基因表达量的影响结果图。

图3是祛痘组合物对IL-8的基因表达量的影响结果图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

以下实施例中，若无特殊说明，所有的试剂及耗材均购自本领域常规试剂厂商；若无特殊说明，所用的实验方法和技术手段均为本领域常规的方法和手段。

本领域技术人员可自行选择常用的方法来制备各提取物，理论上，提取方法对提取物功效的发挥无显著影响，示例性的，本发明中各提取物的制备方法如下：

黄檗提取物的制备：称取黄檗干药材，按照1:9的料液比，加入25 vol.%乙醇水溶液，进行回流提取，90℃，提取2次，每次2 h，得提取液，干燥，即得。

厚朴提取物的制备：称取厚朴干药材，按照1:6的料液比，加入55 vol.%乙醇水溶液，进行回流提取，80℃，提取2次，每次1.5 h，得提取液，干燥，即得。

甘草提取物的制备：称取甘草干药材，按照1:6的料液比，加入62 vol.%乙醇水溶液，进行回流提取，85℃，提取2次，每次1 h，得提取液，干燥，即得。

桔梗提取物的制备：称取桔梗干药材，按照1:8的料液比，加入17 vol.%乙醇水溶液，进行回流提取，90℃，提取2次，每次2 h，得提取液，干燥，即得。

实验01

四种植物提取物对痤疮杆菌、金黄葡萄球菌即表皮葡萄球菌生长的研究，以MIC（最低抑菌浓度）作为指标，测试方法如下：

用琼脂扩散法检测植物提取物抑制痤疮杆菌（ATCC 11827）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、表皮葡萄球菌（ATCC 11228）的MIC值，具体实施方法如下：利用含有提取物的培养基调整菌液浓度，使细菌浓度约在1×10⁸ CFU/mL，置于37℃恒温培养箱培养，其中痤疮杆菌厌氧培养72 h，表皮葡萄球菌有氧培养48 h，金黄色葡萄球菌有氧培养24 h，以不含提取物为空白对照。完全抑制细菌生长的植物提取物浓度为MIC。

四种植物提取物对痤疮杆菌、金黄葡萄球菌、表皮葡萄球菌的MIC结果如表1所示：

表1

从表1可得，厚朴、黄檗提取物对痤疮杆菌与金黄色葡萄球菌均具有较好的抑菌能力；甘草、桔梗提取物对痤疮杆菌与金黄色葡萄球菌也具有一定的抑菌能力。以上结果表明：四个提取物均具备一定的祛痘功效的潜力，但也会对表皮葡萄球菌产生一定的抑制作用，值得进一步深入研究。

实验02

四种植物提取物对细胞活力和炎症作用的研究。以细胞安全浓度和抑制TNF-α、IL-6、NO的分泌为指标：

1、用CCK-8法测定植物提取物无细胞毒性的浓度，具体实施方法如下：将细胞接种于96孔板中，用含10％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基调整细胞浓度为4×10⁶ CFU/mL，加入100 μg/mL的植物提取物溶液，置于37℃、5%CO₂培养箱中培养24 h，用CCK-8试剂盒（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）检测细胞活力。以不加植物提取物的空白组的细胞活力为100%。以细胞活力≥80%为无毒性浓度。

2、用ELISA法检测植物提取物对TNF-α、IL-6、NO表达的影响，具体实施方法如下：选取对数生长期，形态良好的RAW264.7细胞接种于24孔板于培养箱中孵育24 h。设置空白对照组，LPS诱导模型组，样品组，其中样品组选取无细胞毒性的浓度进行实验，于37℃，5%CO₂培养箱中孵育2 h，除空白对照组外，每孔加入LPS，于培养箱中孵育24 h。细胞上清液按照ELISA试剂盒（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）及NO检测试剂盒说明书（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）步骤进行检测，分别检测所收集细胞上清液中TNF-α、IL-6及NO的含量。通过数据处理软件分析实验结果，评估标准如表2所示。

表2

选取各植物提取物在最高细胞安全浓度，测试对TNF-α、IL-6、NO分泌的抑制作用，结果如表3所示。

表3

从表3可得，厚朴提取物只抑制NO分泌；黄檗提取物在0.005 wt.%时显著抑制TNF-α和NO分泌；甘草提取物显著抑制NO的分泌。桔梗提取物在0.005wt.%时显著抑制IL-6和NO分泌。以上结果表明：黄檗提取物和桔梗提取物下调炎症因子的表达强于厚朴提取物和甘草提取物，其中桔梗提取物对IL-6有抑制作用，而其余三种植物提取物在TNF-α和NO分泌均表现出一定的抑制作用，值得进一步尝试组合，进行后续探索。

实施例1

本实施例制备一种具有多功效位点的祛痘组合物：

（1）将上述制备的黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物、桔梗提取物按照质量比为1:2:1:1混合，即黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物、桔梗提取物分别为0.1 g、0.2 g、0.1 g、0.1 g。

（2）将上述提取物组合加入30 vol.%的丁二醇水溶液中，总质量控制在50 g（提取物组合占比为1%，以下实施例及对比例均采用此溶媒及比例），即得祛痘组合物记为A。

实施例2

本实施例制备一种具有多功效位点的祛痘组合物：

与实施例1相比，区别仅在于：将上述制备的黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物、桔梗提取物按照质量比为1:1:2:1混合，其他条件参照实施例1，所得祛痘组合物计为B。

实施例3

本实施例制备一种具有多功效位点的祛痘组合物：

与实施例1相比，区别仅在于：将上述制备的黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物、桔梗提取物按照质量比为2:1:1:1混合，其他条件参照实施例1，所得祛痘组合物计为C。

实施例4

本实施例制备一种具有多功效位点的祛痘组合物：

与实施例1相比，区别仅在于：将上述制备的黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物、桔梗提取物按照质量比为1:1:1:2混合，其他条件参照实施例1，所得祛痘组合物计为D。

对比例1

本对比例提供一种祛痘组合物：

与实施例1相比区别仅在于去掉桔梗提取物，并将缺少的量按比例分摊至其他三种提取物上，其他条件参照实施例1，所得组合物计为A1。

对比例2

本对比例提供一种祛痘组合物：

与实施例1相比区别仅在于去掉甘草提取物，并将缺少的量按比例分摊至其他三种提取物上，其他条件参照实施例1，所得组合物计为A2。

对比例3

本对比例提供一种祛痘组合物：

与实施例1相比区别仅在于去掉厚朴提取物，并将缺少的量按比例分摊至其他三种提取物上，其他条件参照实施例1，所得组合物计为A3。

对比例4

本对比例提供一种祛痘组合物：

与实施例1相比区别仅在于去掉黄檗提取物，并将缺少的量按比例分摊至其他三种提取物上，其他条件参照实施例1，所得组合物计为A4。

测试一、多功效位点：

抑制痤疮杆菌、金黄色葡萄球菌，不影响表皮葡萄球菌生长的实验；抑制TNF-α、IL-6、NO、TLR2、TLR4、IL-8表达的实验

1、样品准备：

A：实施例1制备得到的组合物

B：实施例2制备得到的组合物

C：实施例3制备得到的组合物

D：实施例4制备得到的组合物

A1：对比例1制备得到的组合物

A2：对比例2制备得到的组合物

A3：对比例3制备得到的组合物

A4：对比例4制备得到的组合物

2、实时荧光定量实验

用荧光定量PCR方法检测组合物对TLR2、TLR4和IL-8基因表达的影响，具体实施方法如下：Hacat细胞接种于6孔板，调整细胞浓度为3×10⁵ CFU/mL，分别加入10 μg/mL痤疮丙酸杆菌的脂磷壁酸和肽聚糖，培养24 h后，加入组合物，继续培养24 h。用荧光定量PCR检测细胞中TLR2、TLR4和IL-8基因表达量。以加入祛痘组合物及脂磷壁酸和肽聚糖为实验组，其中祛痘组合物测试浓度控制为0.75 wt.%，以不加祛痘组合物及脂磷壁酸和肽聚糖为空白对照组，以只加入脂磷壁酸和肽聚糖为模型组，以加地塞米松（DEX）为阳性对照组检测TLR2、TLR4和IL-8基因表达量作为抗炎指标。

3、细菌抑制率实验

用分光光度法检测组合物对痤疮杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的抑制情况，具体实施方法如下：用含有组合物的液体培养基调整菌液浓度，使细菌浓度约在1×10⁸CFU/mL，置于37℃恒温培养箱中，培养方式参考MIC实验，设为实验组，以不含组合物为空白对照。用紫外分光光度计测定600 nm处吸光值。按照国家卫生健康委员会2019年发布的WS/T 650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》中5.1.2规定和要求进行抑菌效果评价。抑菌效果评估：抑菌率低于50%，判为无抑菌作用；抑菌率为50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有较强抑菌作用。

细菌抑制率公式：细菌抑制率＝100%-（实验组吸光度-空白组吸光度）/（对照组吸光度-空白组吸光度）×100%

4、各组合物的细胞安全浓度如表4所示。

表4

从表4可得，上述祛痘组合物均在0.75 wt.%浓度时，不影响细胞的生长，因此选用0.75 wt.%浓度进行组合物后续的功效验证。

5、检测各组合物对TNF-α、IL-6、NO分泌的影响，检测浓度为0.75 wt.%，结果如表5所示。

表5

从表5可得，组合物A和C极其显著抑制TNF-α、IL-6、NO的分泌，抗炎效果最佳。此外，由上述数据可以发现，各个植物提取物之间在抗炎方向上具有显著协同作用，比如黄檗、桔梗在炎症因子的抑制方面，在0.005 wt.%才能抑制TNF-α、IL-6、NO炎症因子，而实际各祛痘组合物中各个植物提取物的浓度均没有达到这样的浓度，因此在炎症因子抑制方面均表现出很好的协同增效作用。而在总量不变的情况下，去除其中某个植物提取物后，这样的协同增效作用，即会受到不同程度的影响，此结果也进一步证实了四种提取物协同增效，缺一不可。

6、检测各组合物对抑制痤疮杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌生长的影响，检测浓度为0.75 wt.%，结果如表6所示。

表6

从表6可得，组合物A、B、C、D在痤疮杆菌和金黄色葡萄球菌的生长方面，均有抑制作用。而在去除其中某些植物提取物后，抑菌效果均有不同程度的降低，特别是去除黄檗、厚朴提取物后，组合物A3、A4不具备抑制痤疮杆菌和金黄色葡萄球菌的作用。此结果说明各提取物在抑制痤疮杆菌和金黄色葡萄球菌的生长方面具有协同增效的功效，缺一不可，此外，上述所有组合物在表皮葡萄球菌方面，均不会抑制表皮葡萄球菌的生长。

7、控制各祛痘组合物浓度为0.75 wt.%，探索其对TLR2、TLR4、IL-8表达的影响，结果如图1，图2，图3所示。

根据实验结果可以发现，组合物A、B、C、D可以抑制痤疮杆菌诱导的TLR2、TLR4的表达，从而抑制IL-8的分泌。而在去除某些植物提取物后，如在去除黄檗、厚朴提取物后，组合物A3、A4虽然在TLR2的表达上具有一定的显著抑制性，但可能因为在TLR-4的表达上抑制能力弱，最终均没有表现出抑制IL-8分泌的显著性。此结果也充分证实了各提取物在抑制痤疮杆菌诱导的TLR2、TLR4及IL-8表达方面的显著协同作用。

综上，虽然各提取物单独使用时其在抑制痤疮杆菌和金黄色葡萄球菌的生长以及抑制炎症因子方面的效果不是特别显著，但将其组合后，四种组分相互配合，在抑制痤疮杆菌和金黄色葡萄球菌的生长、抑制痤疮杆菌诱导的TLR2、TLR4的表达、抑制IL-8的分泌、抑制TNF-α、IL-6、NO炎症因子分泌方面具有显著的协同增效的功效，而且组合物并不影响表皮葡萄球菌生长，成功实现了多功效位点的目标。

测试二、祛痘功效：

将各祛痘组合物作为功效成分来制备膏霜剂化妆品，测试其祛痘功效，化妆品的配方如表7所示：

表7

制备方法：A相和B相分别加热至80~85℃。待两相完全溶解后，A相倒入B相，置于均质机均质5 min，6000 rpm。混合均匀后搅拌冷却至45~50℃，加入C相，继续搅拌，制成化妆品膏霜。

1、稳定性测试

将制备的化妆品膏霜置于-15℃、5℃、40℃、49℃环境中，90天后考察样品稳定性、pH值的变化。经考察，该化妆品膏霜pH值无明显变化，体系均一稳定，无变色析出等现象。

2、人体安全性实验

遵照《化妆品安全技术规范》(2015版)第七章第2节所规定的人体皮肤斑贴试验方法，进行人体斑贴测试，以化妆品膏霜为样品组，以不加祛痘组合物的膏霜为对照组，水为空白组。

测试结果：在去除受试物斑试器后1 h、24 h和48 h观察样品组和对照组的皮肤状况，结果显示，样品组1 h、24 h和48 h都未观察到皮肤不良反应，说明本发明的祛痘组合物对皮肤无刺激，致敏性低，安全性高。

3、祛痘功效测试

招募年龄20~35岁的油性或者混合性皮肤，面部存在粉刺的志愿者，随机分为8组，每组10人。经测试对象知情、同意，分别使用各组化妆品膏霜。具体使用方法为：洁面后取适量的化妆品膏霜，轻轻拍打至吸收。早晚各1次，连续使用1周后进行回访，计算各组志愿者在使用前后的平均粉刺减少率。结果见表8。

表8

由表8可知，组合物能够显著减少粉刺（即青春痘）数量，四种提取物相互配合，协同增效，缺少任一种组分均会导致祛痘功效的显著下降。

综上所述，本发明提供了一种具有多功效位点的祛痘组合物及其应用，通过合理筛选活性组分并优化配比，各组分协同增效，不仅添加量低，还通过多功效位点达到祛痘功效，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种具备多功效位点的祛痘组合物及其制备方法与应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (10)

1.一种具备多功效位点的祛痘组合物，其特征在于，所述祛痘组合物包括黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物和桔梗提取物。

2.如权利要求1所述的具备多功效位点的祛痘组合物，其特征在于，所述祛痘组合物以重量份数计包括黄檗提取物0.1~3份、厚朴提取物0.1~3份、甘草提取物0.1~3份和桔梗提取物0.1~3份。

3.如权利要求2所述的具备多功效位点的祛痘组合物，其特征在于，所述祛痘组合物以重量份数计包括黄檗提取物0.8~2.2份、厚朴提取物0.8~2.2份、甘草提取物0.8~2.2份和桔梗提取物0.8~2.2份。

4.如权利要求3所述的具备多功效位点的祛痘组合物，其特征在于，所述祛痘组合物以重量份数计包括黄檗提取物0.8~1.2份、厚朴提取物1.8~2.2份、甘草提取物0.8~1.2份和桔梗提取物0.8~1.2份；

或者，所述祛痘组合物以重量份数计包括黄檗提取物1.8~2.2份、厚朴提取物0.8~1.2份、甘草提取物0.8~1.2份和桔梗提取物0.8~1.2份。

5.如权利要求1-4中任一项所述的具备多功效位点的祛痘组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物和桔梗提取物混合，即得。

6.如权利要求5所述的具备多功效位点的祛痘组合物的制备方法，其特征在于，所述黄檗提取物、厚朴提取物、甘草提取物或桔梗提取物的制备方法包括：将黄檗、厚朴、甘草或桔梗的药材与溶剂混合，进行提取，干燥，即得。

7.如权利要求6所述的具备多功效位点的祛痘组合物的制备方法，其特征在于，所述溶剂为乙醇水溶液；

所述药材为黄檗时，溶剂重量为药材重量的8~10倍，乙醇浓度为10~30 vol.%；

所述药材为厚朴时，溶剂重量为药材重量的6~8倍，乙醇浓度为30~70 vol.%；

所述药材为甘草时，溶剂重量为药材重量的5~7倍，乙醇浓度为60~80 vol.%；

所述药材为桔梗时，溶剂重量为药材重量的7~9倍，乙醇浓度为10~30 vol.%。

8.如权利要求6或7所述的具备多功效位点的祛痘组合物的制备方法，其特征在于，所述提取为回流提取，所述回流提取的温度为80~90℃，所述回流提取的时间为1~5 h。

9.如权利要求1-4中任一项所述的具备多功效位点的祛痘组合物在制备化妆品或护肤品中的应用。

10.如权利要求1-4中任一项所述的具备多功效位点的祛痘组合物在制备抑制痤疮杆菌增殖的药物、抑制金黄色葡萄球菌增殖的药物、TLR2抑制剂、TLR4抑制剂、IL-8抑制剂、TNF-α抑制剂、IL-6抑制剂或NO分泌抑制剂中的应用。

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