CN115554198B - 一种抗炎舒缓组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种抗炎舒缓组合物及其应用。一种抗炎舒缓组合物，按重量份计，原料包括以下组分：皮肤调理剂20‑30份、抗氧化剂35‑45份、抑菌剂30‑35份。通过本发明制备得到的抗炎舒缓组合物具有抗炎舒缓性，改善肌肤敏感性，使敏感性肌肤的不适感得到缓解，抑制黑色素的形成，改善肌肤耐光老化的问题，并能对炎症因子具有抑制效果，具有舒缓功效。

Description

一种抗炎舒缓组合物及其应用
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种抗炎舒缓组合物及其应用。
背景技术
随着城市化进程，空气质量降低及其彩妆的使用越来越频繁，不正确的护肤，不良饮食习惯，不规律的作息等原因，增加了皮肤敏感性问题，敏感性肌肤越来越多，中国专利CN201810977829.5公开了一种具有抗炎功能的祛痘精华液，需要长期使用抗炎功能的祛痘精华液，才能对皮肤的炎症有改善效果，短期内不能缓解皮肤的炎症问题；市面上大多数修复精华，都侧重在敏感肌的修护维稳上，针对油痘肌和油敏肌这一块的修复产品极少；单纯的祛痘控油产品或刷酸等护肤形式，可以短期内起到控油和祛痘的效果，但并不能从根本上缓解经常长痘、出油过多、面部经常泛红等问题；且盲目地刷酸或猛药护肤，反而会加重敏感肌的问题。
针对这一情况，制备一种快速缓解皮肤敏感性的抗炎舒缓组合物，为解决敏感肌肤的护肤品提供一种原料，是目前抗炎化妆品中需要解决的技术问题。
发明内容
为解决上面问题，本发明提供了一种抗炎舒缓组合物，按重量份计，原料包括以下组分：皮肤调理剂20-30份、抗氧化剂35-45份、抑菌剂30-35份。
优选地，所述皮肤调理剂、抗氧化剂、抑菌剂的重量比为1︰(1-2.5)︰(1-1.75)。
优选地，所述抗炎舒缓组合物的制备方法包括，将皮肤调理剂、抗氧化剂、抑菌剂加入到搅拌装置中搅拌均匀至澄清透明得到抗炎舒缓组合物。
优选地，所述皮肤调理剂选自金银花提取物、番红花花提取物、玫瑰花提取物、雪莲花提取物、白兰花提取物、小果皂荚籽提取物中的一种或多种。
优选地，所述皮肤调理剂为番红花花提取物。
优选地，所述番红花花提取物购买厂家为优然(上海)生物科技有限公司，型号为藏红花360°舒敏因子。
为了提升肌肤的抗炎舒缓性，改善肌肤敏感性，减缓皮肤不适感，本申请人将皮肤调理剂、抗氧化剂、抑菌剂进行相互协同作用时，特别是皮肤调理剂选用番红花花提取物可以改善肌肤问题，本申请人还发现番红花花提取物能增强对皮肤的屏障功能，并且番红花花提取物中含有的有效成分，特别是含有的维生素B2时能促进丝聚合蛋白原的表达，有助于皮肤的保湿，并且有助于角化细胞的分化，维持角质细胞间的稳定结构，以维持皮肤屏障的稳定性，并且番红花花提取物能拮抗TRPV1受体，在皮肤受到外界刺激时，TRPV1受体会被激活后会导致细胞活力下降，使皮肤产生不适感，当番红花花提取物作用在皮肤上时，能增强细胞活性，减缓了对皮肤产生的不适感。
优选地，所述抗氧化剂选自苦瓜提取物、红景天提取物、罗汉果提取物、柑橘果提取物、玉兰花提取物、灯盏花提取物中的一种或多种。
优选地，所述抗氧化剂为柑橘果提取物。
优选地，所述柑橘果提取物购买厂家为上海珈凯生物科技有限公司，型号为悦肤宁CR。
为了缓解肌肤的刺痛、瘙痒、灼热等不适感，本申请人将皮肤调理剂、抗氧化剂、抑菌剂进行相互协同作用时，特别是抗氧化剂为柑橘果提取物，能有效的抑制角质细胞TRPV1的表达，激活，效应，同时抑制神经细胞TRPV1的激活，使敏感性肌肤的不适感得到缓解，本申请人还发现柑橘果提取物能调节皮肤神经对刺激的反应，快速压制皮肤的不适反应。
优选地，所述抑菌剂选自白花蛇舌草提取物、忍冬花提取物、油橄榄叶提取物、黄花蒿水提取物、积雪草提取物中的一种或多种。
优选地，所述抑菌剂为油橄榄叶提取物。
所述油橄榄叶提取物中包含羟基酪醇。
所述包含羟基酪醇的油橄榄叶提取物的购买厂家为枫杨生物研发(南京)有限公司，牌号为油橄榄叶提取物。
为了改善皮肤的炎症、抑菌、修复皮肤屏障、光老化，以及皮肤菌群失衡等肌肤问题，本申请人将油橄榄叶提取物与番红花花提取物、柑橘果提取物进行协同作用时，能解决上述问题，可能的原因是油橄榄叶提取物中含有的羟基酪醇能使细胞中的谷胱甘肽含量增加，在与番红花花提取物、柑橘果提取物进行协同作用下能抑制黑色素的形成，改善了皮肤炎症、抑菌、修复皮肤屏障、光老化，以及皮肤菌群失衡等肌肤问题。
优选地，所述番红花花提取物、柑橘果提取物、油橄榄叶提取物的重量比为1︰(1.1-1.8)︰(1.1-1.5)。
本申请人在实验中单独使用油橄榄叶提取物时，对皮肤抑菌性和抑制炎症因子作用的效果会差，当番红花花提取物、柑橘果提取物、油橄榄叶提取物的重量比为1︰(1.1-1.8)︰(1.1-1.5)配合使用时，可以提高抗炎舒缓组合物的稳定性，提升含有羟基酪醇的油橄榄叶提取物对皮肤抑菌性和抑制炎症因子作用，同时抗炎舒缓组合物抑制痤疮丙酸杆菌，消除多种自由基，并进一步促进皮肤新陈代谢、抑制黑色素沉积，改善皮肤问题，当皮肤细胞受刺激后，能对炎症因子具有显著的抑制效果，具有舒缓功效。
本发明第二方面提供了一种抗炎舒缓组合物的制备方法，包括以下步骤：将皮肤调理剂、抗氧化剂、抑菌剂进行混合后得到抗炎舒缓组合物。
本发明第三方面提供了一种抗炎舒缓组合物在化妆品中的应用。
优选地，所述抗炎舒缓组合物在精华液、乳液、霜、面膜中应用。
有益效果
本发明中采用番红花花提取物能提升肌肤的抗炎舒缓性，改善肌肤敏感性，减少皮肤不适感。
本发明中采用柑橘果提取物能有效的抑制神经细胞TRPV1的表达，有效的抑制角质细胞TRPV1的表达，激活，效应，使敏感性肌肤的不适感得到缓解。
本发明中采用油橄榄叶提取物在与番红花花提取物、柑橘果提取物进行协同作用下能抑制黑色素的形成，改善肌肤耐光老化的问题，并且能改善了皮肤炎症、皮肤屏障受损，以及皮肤菌群失衡等问题。
通过本发明制备得到的抗炎舒缓组合物对炎症因子具有显著的抑制效果，可以改善肌肤敏感性，使敏感性肌肤的不适感得到缓解；可以抑制黑色素的形成，改善肌肤耐光老化等问题。
具体实施方式
实施例1
一种抗炎舒缓组合物，按重量份计，原料包括以下组分：柑橘果提取物40份、番红花花提取物26.7份、油橄榄叶提取物33.3份。
一种抗炎舒缓组合物的制备方法，包括将柑橘果提取物40份、番红花花提取物26.7份、油橄榄叶提取物33.3份加入到搅拌装置中搅拌20min，搅拌均匀至澄清透明得到抗炎舒缓组合物。
一种精华液的制备方法，包含以下步骤：
S1.按重量百分数计，将5wt％的丁二醇和0.5wt％的对羟基苯乙酮加入不锈钢锅中，升温至55℃，搅拌溶解均匀得到混合物a备用；
S2.按重量百分数计，将0.12wt％的精氨酸和1.2wt％的去离子水加入不锈钢锅中，升温至50℃，搅拌溶解均匀得到混合物b备用；
S3.按重量百分数计，将78.08wt％的去离子水、0.2wt％的卡波姆、0.1wt％的尿囊素、2wt％的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷投入乳化锅，加热到75℃，搅拌10min后进行均质8min，均质转速为2000转/min至溶解均匀；
S4.将乳化锅降温至55℃，将混合物a、混合物b投入乳化锅，搅拌15min后进行均质8min至溶解均匀；
S5.将乳化锅降温至40℃，按重量百分数计，将2wt％的组合物a、5wt％的抗炎舒缓组合物、1wt％的组合物b、1wt％的组合物c、2wt％的组合物d、0.5wt％的组合物e、0.5wt％的双-二乙氧基二甘醇环己烷1，4-二羧酸酯、0.6wt％的1，2-己二醇、0.2wt％的组合物f投入乳化锅中进行搅拌20min后进行均质8min至溶解均匀，乳化锅温度低于38℃时停止搅拌得到精华液。
所述番红花花提取物购买厂家为优然(上海)生物科技有限公司，型号为藏红花360°舒敏因子。
所述柑橘果提取物购买厂家为上海珈凯生物科技有限公司，型号为悦肤宁CR。
所述油橄榄叶提取物中包含羟基酪醇。
所述油橄榄叶提取物的购买厂家为枫杨生物研发(南京)有限公司，牌号为油橄榄叶提取物。
所述卡波姆的购买厂家为上海兆衡实业有限公司，型号为uLTREZ30POLYMER。
所述尿囊素的购买厂家为上海秋彦商贸有限公司，型号为Allantion。
所述双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷的购买厂家为上海禾琅化工有限公司，型号为1018。
所述对羟基苯乙酮购买厂家为上海汉美生物科技有限公司，型号为979940SymSave H馨鲜酮。
所述精氨酸购买厂家为上海紫邦生物医药有限公司，型号为AR。
所述组合物a中含有赤松叶提取物、乳酸杆菌发酵产物、双丙甘醇、羟丙基环糊精、丁二醇及水。
所述组合物a购买厂家为上海砝恩恺实业有限公司，型号为善肤均。
所述组合物b中含有丁二醇10-羟基癸酸、癸二酸、1，10-癸二醇。
所述组合物b购买厂家为上海百好博化工有限公司，型号为AcnacidolTM BG。
所述组合物c中含有葡糖氨基葡聚糖和水。
所述组合物c购买厂家为上海至柔化工有限公司，型号为MDI ComplexTM(海洋粘多糖)。
所述组合物d中含有水、丁二醇、日本紫珠果提取物。
所述组合物d购买厂家为上海言臻贸易有限公司，型号为JAPANESE BEAUTYBERRY。
所述组合物e中含有水、甘油、肉豆蔻酰六肽-5。
所述组合物e购买厂家为东莞市维琪科技有限公司，型号为Anti-acnepeptide 01。
所述组合物f中含有羟基积雪草甙和环糊精。
所述组合物f购买厂家为上海绿蝶实业有限公司，型号为Total CicaTM 90。
所述双-二乙氧基二甘醇环己烷1，4-二羧酸酯购买厂家为上海虹久企业发展有限公司，型号为Neosolue-AquLio。
实施例2
一种抗炎舒缓组合物，按重量份计，原料包括以下组分：柑橘果提取物40份、番红花花提取物26.7份、油橄榄叶提取物33.3份。
一种抗炎舒缓组合物的制备方法，包括将柑橘果提取物40份、番红花花提取物26.7份、油橄榄叶提取物33.3份加入到搅拌装置中搅拌20min，搅拌均匀至澄清透明得到抗炎舒缓组合物。
一种精华液制备方法，包含以下步骤：
S1.按重量百分数计，将0.005wt％的季铵盐-73、5wt％的丁二醇、0.5wt％的对羟基苯乙酮加入不锈钢锅中，升温至60℃，搅拌溶解均匀得到混合物c。
S2.按重量百分数计，将1wt％的白柳树皮提取物、5wt％的去离子水加入不锈钢锅中进行搅拌得到混合物d；
S3.按重量百分数计，将1wt％的胶态硫、5wt％的去离子水加入不锈钢锅中进行搅拌得到混合物e；
S4.按重量百分数计，将49.795wt％的去离子水、0.25wt％的黄原胶、0.05wt％的银耳子实体提取物、3wt％的甘油、1wt％的组合物g投入乳化锅，加热到80℃，搅拌15min后进行均质5min至分散溶解均匀的到混合物f；
S5.按重量百分数计，将0.5wt％的山嵛醇聚醚-20、0.1wt％的山嵛醇聚醚-10、0.5wt％的甲基葡糖倍半硬脂酸酯、0.2wt％的组合物l、5.5wt％的异十六烷投入油相锅升温至80℃搅拌10min至溶解均匀得到混合物g；
S6.将混合物g加入乳化锅中通过搅拌与混合物f进行混合，搅拌10min后进行均质5min至乳化均匀；
S7.将乳化锅降温至55℃，加入混合物c进行搅拌，直至溶解均匀；
S8.将乳化锅降温至40℃，按重量百分数计，将10wt％的抗炎舒缓组合物、5wt％的组合物m、5wt％的组合物n、1wt％的组合物p、0.6wt％的1，2-己二醇、6wt％的组合物d、6wt％的混合物e进行搅拌直至溶解均匀，乳化锅温度低于38℃时停止搅拌得到精华液。
所述番红花花提取物购买厂家为优然(上海)生物科技有限公司，型号为藏红花360°舒敏因子。
所述柑橘果提取物购买厂家为上海珈凯生物科技有限公司，型号为悦肤宁CR。
所述油橄榄叶提取物中包含羟基酪醇。
所述包含羟基酪醇的油橄榄叶提取物的购买厂家为枫杨生物研发(南京)有限公司，牌号为油橄榄叶提取物。
所述黄原胶的购买厂家为上海虹久企业发展有限公司，型号为CG-SFT。
所述银耳子实体提取物的购买厂家为上海浩泰生物科技有限公司，型号为银耳异聚多糖(WSK)。
所述组合物g含有PCA锌和水。
所述组合物g购买厂家为上海汇欣生物科技有限公司，型号为PCA-ZN(PCA锌)。
所述山嵛醇聚醚-20购买厂家为日光化学贸易(上海)有限公司，型号为NIKKOLBB-20。
所述山嵛醇聚醚-10购买厂家为日光化学贸易(上海)有限公司，型号为NIKKOLBB-10。
所述甲基葡糖倍半硬脂酸酯购买厂家为上海乾飞实业有限公司，型号为GLUCATETMSS EmuLsifier。
所述组合物l中含有C14-22醇、C12-20烷基葡糖苷、水、葡萄糖。
所述组合物l购买厂家为上海百好博化工有限公司，型号为MONTANOVL。
所述异十六烷购买厂家为上海博烁实业有限公司，型号PUROLAN IHD SAMPLE。
所述季铵盐-73购买厂家为上海雅黛生物科技有限公司，型号为皮傲宁。
所述对羟基苯乙酮购买厂家为上海汉美生物科技有限公司，型号为979940SymSave H馨鲜酮。
所述组合物m中含有水和葡糖氨基葡聚糖。
所述组合物m购买厂家为上海至柔化工有限公司，型号为MDI ComplexTM(海洋粘多糖)。
所述组合物n中含有水、丁二醇、日本紫珠果提取物。
所述组合物n购买厂家为上海言臻贸易有限公司，型号为JAPANESE BEAUTYBERRY。
所述组合物p中含有1，2-戊二醇和4-叔丁基环己醇。
所述组合物p购买厂家为上海汉美生物科技有限公司，型号为SymSitive 1609。
所述白柳树皮提取物购买厂家为上海久谦化工有限公司，型号为ABS WhiteWillow Bark Extract Powder。
所述胶态硫购买厂家为上海尤文化工有限公司，型号为ColloidalSuLfur。
试验测试
1、痤疮丙酸杆菌测试：
通过痤疮皮肤中痤疮丙酸杆菌异常增殖的现象，采用抑菌圈和MIC体外测试法共同测定实施例1制备的抗炎舒缓组合物、实施例1制备得到的精华液、实施例2制备得到的精华液对痤疮丙酸杆菌生长的抑制效果。
采用痤疮丙酸杆菌ATCC11827，使用最低抑菌浓度试验和预加菌液倾注平板法及打孔法，测定受试物在菌平板上的抑菌圈直径大和MIC(最低抑菌浓度)，测试结果见表1-4。
试验用样：
细菌：痤疮丙酸杆菌ATCC11827，代数为P2-P5；
完全培养基：梭菌强化液体培养基、梭菌强化+琼脂粉固体培养基；
培养条件：37℃培养箱中静置培养48h；
检测指标：抑菌圈直径、MIC、OD 620；
阳性对照物：采用无菌水稀释季按盐-73得到浓度为0.01％的季按盐-73溶液；
阴性对照物：无菌水。
采用实施例1制备的抗炎舒缓组合物、实施例1制备得到的精华液、实施例2制备得到的精华液、阳性对照物、阴性对照物作为受试物；其中抗炎舒缓组合物和精华液需要分别使用无菌水进行稀释至50％、10％浓度，或两倍梯度稀释至7个浓度点，现配现用。
具体实验步骤如下：
(1)培养基配制：称取38g梭菌强化液体培养基或梭菌强化+琼脂粉固体培养基，加入1L去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15min，4℃保存。液体培养基pH6.8±0.1，固体培养基中再加入1.5％琼脂粉。
取一支制备的菌株甘油管接种到50mL液体培养基中，厌氧环境下37℃恒温静止培养48h的对数生长期，于酶标仪620nm处检测吸光度，计算出原始菌落浓度。
(2)抑菌圈实验
往已经冷却60℃左右的固体培养基中注入活化好的菌液，使其终浓度为0.5-1.0×107CFU/mL，混合均匀后倾注平板(约20mL/平板)，水平静置，凝固后备用。
用不锈钢圆管(外径6mm)在制备好的菌平板上打孔，每皿1-4个孔，小心挑出孔内培养基小块。每孔分别加入100μL受试物后于4℃条件下扩散2h，再于培养箱中37℃厌氧培养48h。每次测试时每个浓度组至少2复孔。受试物中精华液测试浓度分别为100％、50％，测试结果见表2和表3。
(3)MIC(最低抑菌浓度)实验
根据标准曲线，将细菌稀释至0.9×106CFU/mL，取100μL加入96孔板，再分别加入100μL不同的受试物，振荡混匀，放入厌氧罐，于37℃恒温厌氧培养48h。每个培养板均设置空白对照(仅培养基)、阴性对照、阳性对照，每个浓度分别5复孔。受试物终浓度为0.78-50％，测试结果见表3。
抑菌圈的评价标准如下表1：
表1
注︰“-”代表无菌落生长“+”代表有菌落生长。
表2
表3
所述表3中实施例1中的抗炎舒缓组合物的对照物的抑菌圈直径图像中，右侧孔为阳性对照物，左侧孔为阴性对照物。
所述表3中实施例1中的精华液的对照物抑菌圈直径图像中，右上、右下、左下侧孔为阳性对照物，左上侧孔为阴性对照物。
所述表3中实施例2中的精华液的对照物抑菌圈直径图像中，右上、右下、左下侧孔为阳性对照物，左上侧孔为阴性对照物。
从上表2和3中可知阴性对照物、阳性对照物(0.01％)及精华液受试物的抑菌圈直径中可以看出，精华液在50％-100％的浓度下，抑菌圈直径为10-14mm，具有减缓痤疮丙酸杆菌生长的作用。
将实施例2制备得到的精华液进行稀释浓度至0.78％-50％，测试MIC值，测试结果见表4。
表4
所述“-”代表无菌生长，“+”代表有菌生长
从表中结果可知，阴性对照里细菌正常生长，阳性对照(0.01％)处理下，细菌不生长。浓度在6.25％-50％的精华液中，细菌也不生长，酶标仪620nm下检测发现，浓度在6.25％-50％的精华液受试物组，扣除样品空白对照后的检测值接近于零，无菌生长；综合来看，精华液受试物处理组的最低抑菌浓度为6.25％。
2、舒缓修复测试
测试依据：参照GB17149.2-1997《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》和T/ZHCA003-2018《化妆品影响经表皮水分流失测试方法》改良后的人体测试方法。
皮肤斑贴试验是寻找由化妆品引起的接触性皮炎的刺激物或致过敏原一个简单、可靠的方法。其将可疑的刺激物或致敏原配置成—定浓度，放置在一特制的小室内敷贴于人体遮盖部(常在后背、前臂屈侧)，经过—定时间根据有否阳性反应来确定受试物是否系致敏原(即致敏物质)。SLS(十二烷基硫酸钠)是刺激性反应的常用阳性成分，将—定浓度的SLS置于斑试器小室内，作用于皮肤可导致皮肤屏障损伤，诱发炎症，可表现为局部真皮小血管扩张、血流量增加，皮肤血红素、经表皮水分流失升高，皮肤含水量下降。所以通过将SLS与受试物同时至于斑试器小室，或在皮肤受到刺激后涂抹受试物，在指定时间、指定区域检测皮肤血红素、TEWL、含水量的变化，可一定程度上反映受试物的舒缓修复功效。
测试方案：于恒温恒湿测试室进行试验，试验周期效果为即时舒缓。共选择3个测试区域，分为空白对照组、SLS处理组、SLS联合受试物处理组，空白对照组不加任何处理。
检测方案：选择适合斑试器的3个测试区域，于一个指定区域先涂抹受试物，再进行斑贴测试。24h去除斑试器后，检测各指标变化；使用CM825皮肤探头、MX18皮肤探头和TM300皮肤探头对使用前、使用后指定时间的皮肤含水量、红斑值、TEWL进行检测，再使用第七代VISIA对受试区域进行拍照，分析红区的变化。
测试过程：选用102名年龄为18-60岁的志愿者作为受试者(男女不限)，将受试者平均分为3组，受试部位选择前臂屈侧，3个标记区域，具体测试步骤如下：
a.使用清水清洗整个手臂，室内(温度20-22℃，湿度40-60％)平衡30min；
b.使用CM825探头检测初始皮肤含水量，每个区域重复检测3次，取平均值作为最终测试值；TM300探头检测初始TEWL，取后20s检测值的平均值作为最终测试值；MX18探头检测初始血红素，每个区域重复检测3次，取平均值作为最终测试值；同时使用第七代VISIA进行拍照，分析初始红区；
c.指定受试部位分别涂抹25uL实施例1制备得到的抗炎舒缓组合物、实施例1制备得到的精华液、实施例2制备得到的精华液作为不同实验组的受试物；其中实验组1涂抹实施例1制备得到的抗炎舒缓组合物，实验组2涂抹实施例1制备得到的精华液，实验组3涂抹实施例2制备得到的精华液；
d.30min后吸取25uL 5％的SLS溶液滴加于斑试器所附的滤纸片上，置于小室内；
e.将斑试器用无刺激胶带贴敷于受试者前臂屈侧皮肤，用手掌轻压使之均匀，持续24h；
f.去除斑试器，洗净受试部位，于室内平衡30min，待压痕消失后观察皮肤反应；
g.重复步骤b，记录各检测值。
l.实验组2和实验组3中的受试者收到1支产品，使用后第3天进行清洁手臂，平衡20min后再进行检测，检测步骤同b，实验结束后，进行数据分析。
试验结果见表5-8。
计算公式：皮肤含水量增加率％＝(CM2-CM1)/CM1x100％；
TEWL减少率％＝(TEWL1-TEWL2)/TEWL1x100％；
血红素减少率％＝(MX1-MX2)/MX1x100％；
血红素＝MXS试验组-MX本底值；
式中：CM1：SLS组皮肤含水含量；CM2：SLS+受试物组皮肤含水含量；
TEWL1：SLS组TEWL；TEWL2：SLS+受试物组TEWL；
MX1：SLS组血红素；MX2：SLS+受试物组血红素。
表5
从表5中可以看出实验组1的受试者经过SLS斑贴后，皮肤含水量显著降低，TEWL显著升高，血红素也有升高，受试物处理组与SLS组相比，皮肤含水量增长率为41.1％，血红素减少率为57.1％，具有显著的统计学差异；TEWL无显著变化。
从表5中可以看出实验组2的受试者经过SLS处理组的皮肤含水最从35.43下降至29.98，TEWL、血红素分别从9.65、195.76上升至18.01、237.23，具有显著性变化(P<0.01)。而与SLS组相比，受试物处理后，皮肤含水量从29.98下降至27.04，减少率为9.8％，无显著性差异；TEWL从18.01下降至12.58，减少率达到30.2％，有显著性差异；血红素从237.23下降至231.77，减少率为2.3％，也无显著性差异。
从表5中可以看出实验组3的受试者经过SLS处理组的皮肤含水最从35.43下降至29.98，TEWL、血红素分别从9.65、195.76上升至18.01、237.23，具有显著性变化(P<0.01)。而与SLS组相比，受试物处理后，皮肤含水量从29.98下降至26.97，减少率为10.0％，无显著性差异；TEWL从18.01下降至13.03，减少率达到27.6％，有显著性差异；血红素从237.23下降至214.49，减少率为9.6％，有显著性差异。
表6
从表6中可以看出SLS处理组可诱导皮肤红斑的产生，受试物联合SLS处理组可显著降低SLS诱导的皮肤红斑，本发明提供的抗炎舒缓组合物具有抵抗SLS造成的皮肤损伤功效，并对受损皮肤的含水量血红素的恢复有促进效果。
表7
从表7中可以看出实验组2中的受试者VISIA拍照中从左至右分别为使用前和斑贴24h后的标准照片、红区照片、棕色斑照片。其中，红色越深，棕色越深，代表剌激性损伤越严重。从图中可以看出，SLS处理组可诱导皮肤红斑的产生，受试物联合SLS处理，可一定程度减少SLS诱导的皮肤红斑。
表8
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从表8中可以看出实验组3中的受试者的VISIA拍照中从左至右分别为使用前和斑贴24h后的标准照片、红区照片、棕色斑照片。其中，红色越深，棕色越深，代表剌激性损伤越严重。从图中可以看出，SLS处理组可诱导皮肤红斑的产生，受试物联合SLS处理，可一定程度减少SLS诱导的皮肤红斑。
3、THP-1细胞炎症因子测试：
THP-1细胞在佛波酯(PMA)和细菌脂多糖(LPS)的共同刺激下产生炎症反应，通过ELISA(酶联免疫吸附剂测定)法检测抗炎舒缓组合物对细胞炎症因子表达量的抑制效果测试。
所述ELISA中使用到的试剂为白介素6ELISA kit、TNF-αELISA kit、前列腺E2ELISA kit。
所述白介素6ELISA kit的购买品牌为欣博盛，型号为ECH007(96T)。
所述TNF-αELISA kit的购买品牌为欣博盛，型号为ECH103(96T)。
所述前列腺E2 ELISA kit的购买品牌为Cayman，型号为514010。
试验用样：
细胞系：THP-1细胞，代数为P3；
完全培养基：RPMI培养基+10％胎牛血清(FBS)+1％青链霉素双抗(PS)；
培养条件：37℃、5％CO2的细胞培养箱中培养；
刺激物(模型组)：50ng/mL PMA和1μg/mL LPS；
检测指标：OD 450(ELISA试剂盒)；
阳性对照组(PC)：10μM地塞米松(Dex)；
阴性对照组(NC)：完全培养基。
所述THP-1细胞株是一种来源于1岁婴童外周血的单核白细胞株，具有类似皮肤树突状细胞的标志，是真皮层介导炎症级联放大的主要细胞系，与炎症的发生程度密切相关。
采用实施例1制备的抗炎舒缓组合物1600μL，加入400μL完全培养基，混匀配置成浓度为80％的2×受试物，采用完全培养基进行多倍梯度稀释，稀释至不同的浓度，共6个浓度的测试浓度点，待用。
具体实验步骤如下：
(1)细胞铺板及前处理
取对数期生长的THP-1细胞，以5x105/mL的密度100μL/孔接种到96孔板中，周围孔不加细胞，以200μL孔的PBS代替；同时，加入终浓度为50ng/mL PMA100μL或完全培养基，继续孵育48h。
(2)受试物处理
轻轻弃去细胞培养上清，每孔再加入100μL不同浓度的受试物和100μL已配置成浓度为2μg/mL的LPS，继续处理24h。阴性对照(NC)为完全培养基，模型组(MO)为PMA和LPS联合刺激，阳性对照为地塞米松(PC)，受试物终浓度为0.039％-40％。
处理结束后，收集细胞上清液至新的96孔板，选择对细胞形态无明显影响的受试物浓度点进行后续测试。将上清液稀释至合适的浓度，根据炎症因子的ELISA检测试剂盒操作手册进行炎症因子含进的检测。
(3)计算公式
对检测数据进统计分析，采用配对TTest计算统计学差异。各炎症因子的抑制率计算公式如下：
抑制率％＝(表达量模型组-表达量受试物组)/表达量模型组×100％；
测试结果：
各组TNF-α表达量(pg/mL)的测试结果见表9。
表9
各组IL-6表达量(pg/mL)的测试结果见表10。
表10
各组PGE-2表达量(pg/mL)的测试结果见表11。
表11
各组炎症因子抑制率的测试结果见表12。
表12
通过表12中数据可以看出模型组里PMA联合LPS刺激THP-1细胞，可极大促进TNF-α、IL-6、PGE-2炎症因子的表达量。与模型组相比，10μM地塞米松对TNF-α、IL-6、PGE-2的抑制率分别为82.71％、93.25％、91.00％。而浓度为0.625％-40％的抗炎舒缓组合物对TNF-α、IL-6、PGE-2的抑制率均达到90％以上，特别是对于PGE-2，浓度为0.039％的抗炎舒缓组合物，抑制率仍然达到97.38％，具有明显的剂量依赖性及显著性差异，抗炎舒缓组合物对THP-1细胞受刺激后的TNF-α、IL-6、PGE-2炎症因子表达量具有显著的抑制效果，具有舒缓功效。

Claims (1)

1.一种精华液的制备方法，其特征在于，步骤如下：
S1.按重量百分数计，将5wt%的丁二醇和0.5wt%的对羟基苯乙酮加入不锈钢锅中，升温至55℃，搅拌溶解均匀得到混合物a备用；
S2.按重量百分数计，将0.12wt%的精氨酸和1.2wt%的去离子水加入不锈钢锅中，升温至50℃，搅拌溶解均匀得到混合物b备用；
S3.按重量百分数计，将78.08wt%的去离子水、0.2wt%的卡波姆、0.1wt%的尿囊素、2wt%的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷投入乳化锅，加热到75℃，搅拌10min后进行均质8min，均质转速为2000转/min至溶解均匀；
S4.将乳化锅降温至55℃，将混合物a、混合物b投入乳化锅，搅拌15min后进行均质8min至溶解均匀；
S5.将乳化锅降温至40℃，按重量百分数计，将2wt%的组合物a、5wt%的抗炎舒缓组合物、1wt%的组合物b、1wt%的组合物c、2wt%的组合物d、0.5wt%的组合物e、0.5wt%的双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.6wt%的1,2-己二醇、0.2wt%的组合物f投入乳化锅中进行搅拌20min后进行均质8min至溶解均匀，乳化锅温度低于38℃时停止搅拌得到精华液；
所述抗炎舒缓组合物按重量份计的原料组成为：柑橘果提取物40份、番红花花提取物26.7份、油橄榄叶提取物33.3份；
所述抗炎舒缓组合物的制备方法为：将柑橘果提取物40份、番红花花提取物26.7份、油橄榄叶提取物33.3份加入到搅拌装置中搅拌20min，搅拌均匀至澄清透明得到抗炎舒缓组合物；
所述油橄榄叶提取物中包含羟基酪醇；
所述组合物a组成为赤松叶提取物、乳酸杆菌发酵产物、双丙甘醇、羟丙基环糊精、丁二醇及水；
所述组合物b组成为丁二醇、10-羟基癸酸、癸二酸、1,10-癸二醇；
所述组合物c组成为葡糖氨基葡聚糖和水；
所述组合物d组成为水、丁二醇、日本紫珠果提取物；
所述组合物e组成为水、甘油、肉豆蔻酰六肽-5；
所述组合物f组成为羟基积雪草甙和环糊精。
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