CN115956638A

CN115956638A - 一种具有强肝抗逆效果的组合物及其应用

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Publication number: CN115956638A
Application number: CN202211580691.8A
Authority: CN
Inventors: 任炯
Original assignee: Wuxi Hanove Animal Health Products Co ltd
Current assignee: Wuxi Hanove Animal Health Products Co ltd
Priority date: 2022-12-09
Filing date: 2022-12-09
Publication date: 2023-04-14
Anticipated expiration: 2042-12-09
Also published as: CN115956638B

Abstract

本发明公开了一种具有强肝抗逆效果的组合物及其应用，涉及饲料技术领域。所述具有强肝抗逆效果的组合物包括胆汁酸、L‑肉碱、茶多酚、壳寡糖、牛磺酸。本发明的组合物能提高水产动物肝脏的抗氧化能力；具有降低肝脏脂肪、改善肝脏色泽、降血糖和抗炎症的效应；提高水产动物抗应激、抗病的能力，提高水产动物的生存率；并且提高水产动物品质。

Description

一种具有强肝抗逆效果的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及饲料技术领域，具体涉及一种具有强肝抗逆效果的组合物及其应用。

背景技术

凡纳滨对虾又称南美白对虾，是目前世界上最主要的养殖虾类之一，其产量占养殖虾类总产量的70％以上。

大口黑鲈(学名：Micropterus salmoides)又名加州鲈，隶属鲈形目太阳鱼科，是原产美国加利福尼亚州密西西比河流域的一种淡水肉食性鱼类。大口黑鲈具有生长快，病害少、耐低温，养殖周期短等特点，属凶猛的肉食性鱼类，肉质细嫩，肉多刺少，味道鲜美，营养丰富。然而，大口黑鲈肝胆疾病严重、高温下不耐应激。

在当前的人工养殖中，由于优质蛋白资源有限、价格昂贵，人们通常通过提高饲料中油脂和淀粉的比例、而降低养殖饲料中的蛋白比例，最终影响养殖鱼类健康生长，抗病力下降。在当前养殖环境下，加州鲈极易产生严重的脂肪肝疾病。肝胆疾病会导致鱼体的免疫力、机体的抗病能力下降，伴有烂嘴、烂身及烂尾等症状，严重影响养殖生产。同时，大口黑鲈在高温高密度养殖环境中不耐应激，常因应激而造成大量死亡。

因此，急需提供一种能预水产动物急性肝胰腺坏死综合征或脂肪肝疾病的组合物。

发明内容

本发明提供的一种具有强肝抗逆效果的组合物及其应用，旨在解决上述背景技术中存在的问题。

为了实现上述技术目的，本发明主要采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种具有强肝抗逆效果的组合物，所述组合物包括胆汁酸、L-肉碱、茶多酚、壳寡糖、牛磺酸。

在一些实施例中，所述组合物中，包括如下重量份的原料：胆汁酸1-5份、L-肉碱1-5份、茶多酚1-3份、壳寡糖1-3份、牛磺酸1-3份。

在一些实施例中，所述组合物中，包括如下重量份的原料：胆汁酸3份、L-肉碱3份、茶多酚1份、壳寡糖1份、牛磺酸2份。

第二方面，本发明还提供了一种水产饲料，包括基础饲料及如上所述的具有强肝抗逆效果的组合物。

其中，按重量份计算，所述强肝抗逆效果的组合物加入量为所述基础饲料的0.1-0.3％。

第三方面，本发明还提供了所述的组合物在制备预防或治疗水产动物急性肝胰腺坏死综合征饲料或药物中的应用。

进一步的，所述饲料或药物提高水产动物肝胰腺的抗氧化能力。

进一步的，所述饲料或药物提高水产动物抗氨氮胁迫能力和抗病力。

第四方面，本发明还提供了所述的组合物在制备预防或治疗水产动物高血糖、高血脂或炎症饲料或药物中的应用。

优选的，所述水产动物为凡纳滨对虾或大口黑鲈。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明的组合物能提高水产动物肝脏的抗氧化能力；具有降低肝脏脂肪、改善肝脏色泽、降血糖和抗炎症的效应；且该组合物能提高水产动物抗应激、抗病的能力，提高水产动物的生存率。

附图说明

图1为本申请对照组与实验组在氨氮胁迫下，凡纳滨对虾的死亡率对比图；

图2为本申请对照组与实验组在副溶血弧菌攻毒条件下，凡纳滨对虾的死亡率对比图；

图3为本申请对照组与实验组中，凡纳滨对虾肝胰腺AKP活性及MDA含量的对比图；

图4为本申请对照组与实验组在高温密度应激实验中，大口黑鲈的死亡率对比图；

图5为本申请对照组与实验组在高温密度应激实验中，大口黑鲈的增重率对比图；

图6为本申请对照组与实验组中，大口黑鲈的全鱼蛋白质含量对比图；

图7为本申请对照组与实验组中，大口黑鲈的肝脏脂肪含量对比图；

图8为本申请对照组与实验组中，大口黑鲈的肝脏色泽对比图；

图9为本申请对照组与实验组中，大口黑鲈的血糖含量及血清游离脂肪酸含量的对比图；

图10为本申请对照组与实验组中，大口黑鲈的血清AST活力对比图；

图11为本申请对照组与实验组中，大口黑鲈肝脏中抑制炎症因子基因TGF-β的相对表达量对比图。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

具有强肝抗逆效果的组合物1的制备。

取胆汁酸5份、L-肉碱1份、茶多酚2份、壳寡糖3份、牛磺酸1份，混合均匀，即得具有强肝抗逆效果的组合物1。

实施例2

具有强肝抗逆效果的组合物2的制备。

取胆汁酸3份、L-肉碱3份、茶多酚1份、壳寡糖1份、牛磺酸2份，混合均匀，即得具有强肝抗逆效果的组合物2。

实施例3

具有强肝抗逆效果的组合物3的制备。

取胆汁酸1份、L-肉碱5份、茶多酚3份、壳寡糖2份、牛磺酸3份，混合均匀，即得具有强肝抗逆效果的组合物3。

试验例1

以实施例2制备得到的具有强肝抗逆效果的组合物2制备凡纳滨对虾水产饲料。

其中，凡纳滨对虾水产基础饲料配方如下表1所示。

表1：纳滨对虾水产基础饲料配方(单位：份)

实验设计方案如下：

在基础饲料中添加3种不同梯度的具有强肝抗逆效果的组合物2：0、0.1％、0.3％；每个梯度分别设置4组重复例。

凡纳滨对虾养殖密度：40尾/桶；

凡纳滨对虾养殖方式：养殖桶(300L)；

凡纳滨对虾投喂时间：8:00，13:00，17:00；

凡纳滨对虾养殖周期：42天；

对照组：仅饲喂基础饲料，即具有强肝抗逆效果的组合物2的添加量为0；

实验组1：饲喂基础饲料+0.1％具有强肝抗逆效果的组合物2；

实验组2：饲喂基础饲料+0.3％具有强肝抗逆效果的组合物2。

实验计算方法如下：

增重率：根据公式(末体重-初体重)/初体重*100计算得出

死亡率：根据公式(初始数量-终末数量)/初始数量*100计算得出

AKP活性测定：通过使用商业AKP活性检测试剂盒，利用碱性条件下对硝基酚显色法进行测定。

MDA含量：通过使用商业MDA含量检测试剂盒，利用硫代巴比妥酸显色法进行测定。全鱼蛋白含量：利用凯式定氮法测定全鱼蛋白质含量。

肝脏脂肪含量测定：采用甲醇氯仿(1：2,V/V)抽提法进行测定。

血糖含量测定：采用葡萄糖氧化酶法进行测定，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化为葡萄糖酸生成H₂O₂，过氧化物酶催化H₂O₂与4-氨基安替吡啉氧化还原偶联反应，产生显色反应。

血清中游离脂肪酸含量的测定：使用商用试剂盒进行测定，脂肪酸被转化为辅酶A衍生物(辅酶A)，随后被氧化产生有颜色的物质，最后用比色法进行测定。

血清中天冬氨酸转氨酶AST活力测定：使用商业试剂盒进行测定，该酶可以将天冬氨酸的氨基转移到-酮戊二酸，产生草酰乙酸和谷氨酸，通过谷氨酸显色来检测AST酶活力。肝脏TGF-β基因相对表达量测定：提取肝脏中RNA，并测定RNA浓度，使用反转录试剂盒(TaKaRa,Japan)合成cDNA，根据大口黑鲈TGF-β序列的保守区设计特异性引物，以β-actin作为内参基因，在CFX Connect Real-Time System(Bio-Rad)的96孔板上进行RT-qPCR，采用2^-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。

试验例1(1)用浓度约为58.86mg/L的氨氮胁迫对照组、实验组1和实验组2中的凡纳滨对虾，统计24h死亡率，如图1所示。从图1中可知，实验组2，即饲喂基础饲料+具有基础饲料重量0.3％的具有强肝抗逆效果的组合物2的凡纳滨对虾的死亡率显著降低。

(2)用浓度为2.5*10^9CFU/ml的副溶血弧菌攻毒对照组、实验组1和实验组2中的凡纳滨对虾，统计7天死亡率，如图2所示。从图2中可知，实验组1和实验组2中的凡纳滨对虾的死亡率显著降低。

(3)统计对照组、实验组1和实验组2中的凡纳滨对虾肌肉物理性质指标，结果如下表2所示。

表2：各组中凡纳滨对虾肌肉物理性质指标

指标	对照组	实验组1	实验组2
				硬度/g	140.52±10.01b	203.60±17.21a	220.81±23.14a
粘性	13.29±1.30b	23.92±2.22a	22.97±1.88a
				弹性	1.23±0.15c	1.53±0.15a	1.57±0.06a
胶着性	0.45±0.05	0.53±0.03	0.55±0.04
				咀嚼性/g	227.62±10.35b	278.78±18.41a	277.82±15.15a

由以上数据可知，实验组对虾肌肉的硬度、粘性、弹性和咀嚼性均显著性上升，说明本发明具有强肝抗逆效果的组合物可使对虾肉质的物理性状改善明显。

(4)统计对照组、实验组1和实验组2中的凡纳滨对虾的增重率和饲料系数，其结果如下表3所示。

表3：各组中凡纳滨对虾的增重率和饲料系数

指标	对照组	实验组1	实验组2
				增重率(％)	412.67±9.88	362.27±49.19	396.24±47.29
饲料系数	1.30±0.01a	1.28±0.19a	1.17±0.04b

从以上表中，可以看出，添加0.3％具有强肝抗逆效果的组合物可显著降低饲料系数，说明饲料转化率更高，饲料效果更好。

(5)统计对照组、实验组1和实验组2中的凡纳滨对虾的肝胰腺AKP活性及MDA含量，如图3所示。从图3中可知，实验组对虾肝胰腺AKP活性显著提高，MDA含量显著降低，说明本发明饲料添加剂可以提高肝胰腺的抗氧化能力。

因此，从试验例1数据可知：饲料中添加0.1％和0.3％的具有强肝抗逆效果的组合物能显著提高对虾抗氨氮胁迫能力和抗病力，改善对虾肝胰腺抗氧化能力，提高南美白对虾饲料利用效率。

试验例2

以实施例2制备得到的具有强肝抗逆效果的组合物2制备大口黑鲈水产饲料。

实验设计方案如下：

设计4组饲料分组如下表4所示。

大口黑鲈初重(23±2.5)g；养殖59天；水温：(28.8±1.5)℃；养殖密度0.6kg/m³饲料投喂量按照大口黑鲈体重4％进行投喂。

表4：各组饲料分组(单位：份)

对经过表4中对照组、实验组1-3中饲料饲喂的大口黑鲈进行高温密度应激实验。

(1)统计对照组、实验组1-3中，大口黑鲈的存活率，结果如图4所示。从图4中可知，与对照组相比，低蛋高糖高脂饲料组大口黑鲈的存活率显著下降，但添加具有基础饲料重量0.1-0.3％的具有强肝抗逆效果的组合物2可提高其抗应激能力，其中0.3％添加量的抗应激效果最佳。

(2)统计对照组、实验组1-3中，大口黑鲈的增重率，结果如图5所示。从图5中可知，低蛋高糖高脂饲料显著降低大口黑鲈的增重率，但添加具有基础饲料重量0.1-0.3％具有强肝抗逆效果的组合物2可部分提高增重率，但在各剂量组间无差异。

(3)统计对照组、实验组1-3中，大口黑鲈的全鱼蛋白含量，结果如图6所示。从图6中可知，高蛋低糖低脂与低蛋高糖高脂组的全鱼蛋白无差异，但添加具有基础饲料重量0.1-0.3％具有强肝抗逆效果的组合物2可以提高全鱼的蛋白质含量，说明该组合物可以使大口黑鲈体内更倾向于合成蛋白质，最终提高养殖鱼类的营养价值、提升鱼肉品质。

(4)统计对照组、实验组1-3中，大口黑鲈的肝脏脂肪含量，结果如图7所示。从图7中可知，低蛋高糖高脂饲料显著加剧大口黑鲈肝脏脂肪积累，但添加具有基础饲料重量0.1-0.3％具有强肝抗逆效果的组合物2可缓解肝脏脂肪的沉积，但在各剂量组间无差异。

(5)统计对照组、实验组1-3中，大口黑鲈的肝脏色泽，结果如图8所示。从图8中可知，低蛋高糖高脂饲料导致加州鲈肝脏色泽发黄，但添加具有基础饲料重量0.1-0.3％具有强肝抗逆效果的组合物2可部分恢复肝脏色泽，但在各剂量组间无差异.

(6)统计对照组、实验组1-3中，大口黑鲈的血清含量和血清中游离脂肪含量，结果如图9所示。从图9中可知，低蛋高糖高脂组显著提高血糖和血游离脂肪酸含量，但添加具有基础饲料重量0.1-0.3％具有强肝抗逆效果的组合物2可以有效地降低大口黑鲈血糖含量，也能部分降低血游离脂肪酸含量。

(7)统计对照组、实验组1-3中，大口黑鲈的血清AST活力，结果如图10所示。从图10中可知，低蛋高糖高脂组提高血清的AST活性，提示肝功能下降，但添加具有基础饲料重量0.1-0.3％具有强肝抗逆效果的组合物2显著降低AST活性。

(8)统计对照组、实验组1-3中，大口黑鲈肝脏TGF-β基因的相对表达量，结果如图11所示。从图11中可知，低蛋高糖高脂饲料显著加剧炎症因子基因的表达，但添加具有基础饲料重量0.1-0.3％具有强肝抗逆效果的组合物2可以抑制炎症因子基因TGF-β的表达，但在各剂量组间无差异。

因此，从试验例2数据可知：在大口黑鲈低蛋(41％)高糖(12％)高脂(13％)膨化饲料中添加具有基础饲料重量0.1-0.3％的具有强肝抗逆效果的组合物2可在6周内显著提升其抗高温密度应激性能，显著提高其存活率；在存活后的各组实验鱼中，具有基础饲料重量0.1-0.3％的具有强肝抗逆效果的组合物2都具有提高全鱼蛋白含量、降低肝脏脂肪、改善肝脏色泽、降血糖和抗炎症的效应。其中0.3％的具有强肝抗逆效果的组合物2对提升大口黑鲈抗高温密度应激性能的效果好于0.1％剂量。

在本说明书的描述中，参考术语“第一”、“具体实施例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims

1.一种具有强肝抗逆效果的组合物，其特征在于：所述组合物包括胆汁酸、L-肉碱、茶多酚、壳寡糖、牛磺酸。

2.根据权利要求1所述的具有强肝抗逆效果的组合物，其特征在于，所述组合物中，包括如下重量份的原料：胆汁酸1-5份、L-肉碱1-5份、茶多酚1-3份、壳寡糖1-3份、牛磺酸1-3份。

3.根据权利要求2所述的具有强肝抗逆效果的组合物，其特征在于，所述组合物中，包括如下重量份的原料：胆汁酸3份、L-肉碱3份、茶多酚1份、壳寡糖1份、牛磺酸2份。

4.一种水产饲料，其特征在于：包括基础饲料及如权利要求1-3任一项所述的具有强肝抗逆效果的组合物。

5.根据权利要求4所述的水产饲料，其特征在于：按重量份计算，所述强肝抗逆效果的组合物加入量为所述基础饲料的0.1-0.3％。

6.如权利要求1-3任一项所述的组合物在制备预防或治疗水产动物急性肝胰腺坏死综合征、提高水产动物肉质品质的饲料或药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述饲料或药物提高水产动物肝胰腺的抗氧化能力。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述饲料或药物提高水产动物抗氨氮胁迫能力和抗病力。

9.如权利要求1-3任一项所述的组合物在制备预防或治疗水产动物高血糖、高血脂或炎症饲料或药物中的应用。

10.根据权利要求6或9所述的应用，其特征在于：所述水产动物为凡纳滨对虾或大口黑鲈。