CN115951043A - 一种用于新冠抗原胶体金检测的样本处理液 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种用于新冠抗原胶体金检测的样本处理液，包括缓冲物、可溶性盐离子、非离子表面活性剂和防腐剂，通过本发明的样本处理液与待检样本发生抗原抗体反应免疫检测中，使待检样本与含有可溶性盐离子的样本处理液接触，既可以保持良好的特异性，还可以提高检测灵敏度，有助于新冠抗原检测在市场上的推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种用于新冠抗原胶体金检测的样本处理液。
背景技术
目前，新型冠状病毒的检测仍以核酸检测为主，核酸检测具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点，使用最为广泛的是实时荧光定量RT-PCR技术，但是由于采样不当、样本保存不当以及样本类型不同易造成假阴性结果，并且操作复杂、对实验室级别和实验操作人员要求高，检测时间久；相较于核酸检测，抗原检测无窗口期，兼具方便、快速和低价三项优势。
本发明基于抗原抗体特异性结合的免疫学原理，常用的方法主要有免疫层析检测、化学发光法检测或ELISA检测。由于不同样本成分复杂且变化较大，如果对其不进行相应处理，则易发生抗原抗体结合之外的非特异性反应，造成检测结果的不准确性。以检测新冠病毒为例，当样本通过免疫层析进行检测时，样本中存在的高粘性物质会堵塞多孔膜的孔；另外，这些高粘性物质还可能会与人体脱落的上皮粘膜细胞结合在一起，进一步堵塞多孔膜，造成检测结果不准确甚至无法层析。
因此，本领域迫切需要开发一种既可以保持良好的特异性，还可以提高检测灵敏度的样本处理液。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于新冠抗原胶体金检测的样本处理液，用以实现在新冠检测中的样本处理液既可以保持良好的特异性，还可以提高检测灵敏度的技术效果。
本发明通过以下技术方案实现：
一种用于新冠抗原胶体金检测的样本处理液，包括缓冲物、可溶性盐离子、非离子表面活性剂和防腐剂。
通过以上方案，本发明的样本处理液与待检样本发生抗原抗体反应免疫检测中，使待检样本与含有可溶性盐离子的样本处理液接触，以提高检测的灵敏度，既可以保持良好的特异性，还可以提高检测灵敏度的样本处理液，有助于新冠抗原检测在市场上的推广使用。
为了更好的实现本发明，进一步的，可溶性盐离子为钠盐和/或镁盐。
为了更好的实现本发明，进一步的，钠盐为NaCl，浓度为150mM~200mM；镁盐为MgSO4，浓度为150mM~200mM。
为了更好的实现本发明，进一步的，非离子表面活性剂为Triton x-100和/或S9，Triton x-100浓度为0.05~0.3（v/v）%，S9浓度为0.05~0.3（v/v）%。
为了更好的实现本发明，进一步的，缓冲物为Tris，Tris的浓度为100mM~150mM，防腐剂为Proclin300。
为了更好的实现本发明，进一步的，样本处理液包括：Tris、NaCl、Triton x-100、S9和/或MgSO4、Proclin300、超纯水，pH值为8.0。
为了更好的实现本发明，进一步的，样本处理液为质量体积比：1.5g:1.0g:0.1mL:0.1mL:0.1mL:100mL的Tris、NaCl、Triton x-100、S9、Proclin300、超纯水。
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为了更好的实现本发明，进一步的，样本处理液用于与不同类型样本混合，不同类型样本包括口咽拭子、鼻咽拭子、鼻前庭拭子、唾液样本，样本处理液与不同样本类型混合时的体积为200μL~500μL。
本发明的有益效果是：
本发明的样本处理液与待检样本发生抗原抗体反应免疫检测中，使待检样本与含有可溶性盐离子的样本处理液接触，既可以保持良好的特异性，还可以提高检测灵敏度，有助于新冠抗原检测在市场上的推广使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对本发明中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为实施例1中样本处理液配方优化后在口咽拭子的检测结果；
图2为实施例1中样本处理液配方优化后在鼻咽拭子的检测结果；
图3为实施例1中样本处理液配方优化后在鼻前庭拭子的检测结果；
图4为实施例1中样本处理液配方优化后在唾液样本的检测结果；
图5为实施例2中样本处理液组合使用不同比例S9和MgSO4的结果。
具体实施方式
下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行描述。
应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。同时，在本发明的描述中，术语“第一”、“第二”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
为提高现有免疫检测产品的灵敏度，本发明公开一种在与待检样本发生抗原抗体反应的免疫检测中，使待检样本与含有可溶性镁盐的样本处理液接触，以提高检测的灵敏度。
本发明提供了一种提高新冠抗原胶体金检测灵敏度的样本处理液，样本处理液包括：缓冲物、可溶性盐离子、非离子表面活性剂和防腐剂。
缓冲物为三羟甲基氨基甲烷，即Tris，三羟甲基氨基甲烷的浓度为100mM~150mM，优选的，三羟甲基氨基甲烷的浓度为100mM。
可溶性盐离子为钠盐和/或镁盐，钠盐选自氯化钠，即NaCl，浓度为150mM~200mM；镁盐选自硫酸镁，即MgSO4，浓度为50mM~150mM，较佳地，50mM~100mM，更佳地，80mM~90mM。
非离子表面活性剂为Triton x-100和/或S9，Triton x-100浓度为0.05~0.3（v/v）%，S9浓度为0.05~0.3（v/v）%，较佳地，0.05~0.2（v/v）%，更佳地，0.1~0.15（v/v）%。
防腐剂为Proclin300，样本处理液pH值为8.0。
将本发明的样本处理液与不同类型样本混合，不同类型样本包括口咽拭子、鼻咽拭子、鼻前庭拭子、唾液样本，样本处理液与上述不同类型样本混合时的体积为200μL~500μL，较佳地，300μL~500μL，更佳地，300μL~400μL。
样本处理液的配方：Tris、NaCl、Triton x-100、S9和/或MgSO4、Proclin300、超纯水，pH值为8.0。
实施例1
为探究样本处理液中的S9和MgSO4单独使用和组合使用的差异，按照下面设计的试验方案制备不同配方的样本处理液，并进行多次分组试验，分别按照200μL、300μL、400μL、500μL四个体积分装于样本处理液管中，再将采集样本后的拭子置于采样管中，旋转混匀至少30秒，同时用手隔着采样管外壁挤压拭子头至少5次，确保样本充分洗脱于采样管中，最后将拭子弃去，采样管盖盖后，将液体垂直滴入检测卡样本孔中进行检测，不同配方的样本处理液如下：
样本处理液1#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.05mL S9、0.1mLProclin300、100mL超纯水；
样本处理液2#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.1mL S9、0.1mLProclin300、100mL超纯水；
样本处理液3#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.3mL S9、0.1mLProclin300、100mL超纯水；
样本处理液4#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.05g MgSO4、0.1mLProclin300、100mL超纯水；
样本处理液5#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.1 g MgSO4、0.1mLProclin300、100mL超纯水；
样本处理液6#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.3 g MgSO4、0.1mLProclin300、100mL超纯水；
样本处理液7#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.3mL S9、0.05 gMgSO4、0.1mL Proclin300、100mL超纯水；
样本处理液8#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.05mL S9、0.3 gMgSO4、0.1mL Proclin300、100mL超纯水；
样本处理液9#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.1mL S9、0.3 gMgSO4、0.1mL Proclin300、100mL超纯水；
灵敏度（TPR/True Positive Rate）：真阳性样本在实际阳性样本中的占比；计算公式为：TPR=TP/(TP+FN)
特异性（TNR/True Negative Rate）：真阴性样本在实际阴性样本中的占比；计算公式为：TNR=TN/(FP+TN)
通过以上分组试验，并结合上述计算公式得出：使用样本处理液1#、样本处理液2#、样本处理液3#检测不同类型的样本时，随着样本处理液中S9添加量的增加，灵敏度有所提升，但特异性呈下降趋势；使用样本处理液4#、样本处理液5#、样本处理液6#检测不同类型的样本时，随着样本处理液中MgSO4添加量的增加，特异性有所提升，但灵敏度无显著变化；使用样本处理液7#、样本处理液8#、样本处理液9#检测不同类型的样本时，样本处理液中0.1%MgSO4和0.3%S9组合使用时, 即样本处理液9#，灵敏度和特异性优于MgSO4的单独使用或S9的单独使用，结果如图1-4所示。
实施例2
样本处理液的配方：Tris、NaCl、Triton x-100、S9、MgSO4、Proclin300、超纯水，pH值为8.0。
为探究样本处理液中的S9和MgSO4组合使用时的比例，对本实施例的配比进行多组试验，具体试验内容如下：
样本处理液91#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.3mL S9、0.05gMgSO4、0.1mL Proclin300、100mL超纯水，按照200μL、300μL、400μL、500μL不同体积与采集样本混合；
样本处理液92#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.05mL S9、0.3gMgSO4、0.1mL Proclin300、100mL超纯水，按照200μL、300μL、400μL、500μL不同体积与采集样本混合；
样本处理液93#：1.5g Tris、1.0g NaCl、0.1mLTriton x-100、0.3mL S9、0.1gMgSO4、0.1mL Proclin300、100mL超纯水，按照200μL、300μL、400μL、500μL不同体积与采集样本混合；
同样结合上述计算公式以及约登指数（约登指数=灵敏度+特异性-1”）得出：使用不同体积的样本处理液91#、样本处理液92#、样本处理液93#与不同类型的样本（口咽拭子、鼻咽拭子、鼻前庭拭子及唾液样本）混合后进行检测，结果如图5所示，样本处理液中0.1%MgSO4和0.3%S9组合使用的约登指数最高，灵敏度和特异性最优，且使用体积为300μL与400μL的样本处理液与不同类型的样本混合时，其灵敏度和特异性最优。
本发明的样本处理液中的可溶性盐离子和非离子表面活性剂与不同类型的样本接触后，在保持良好特异性的同时，还可以提高检测的灵敏度，避免与抗原抗体结合之外的非特异性反应，提高检测结果的准确性。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种用于新冠抗原胶体金检测的样本处理液，其特征在于，包括缓冲物、可溶性盐离子、非离子表面活性剂和防腐剂。
2.根据权利要求1所述的样本处理液，其特征在于，可溶性盐离子为钠盐和/或镁盐。
3.根据权利要求2所述的样本处理液，其特征在于，钠盐为NaCl，浓度为150mM~200mM；镁盐为MgSO4，浓度为150mM~200mM。
4.根据权利要求3所述的样本处理液，其特征在于，非离子表面活性剂为Triton x-100和/或S9，Triton x-100浓度为0.05~0.3（v/v）%，S9浓度为0.05~0.3（v/v）%。
5.根据权利要求4所述的样本处理液，其特征在于，缓冲物为Tris，Tris的浓度为100mM~150mM，防腐剂为Proclin300。
6.根据权利要求5所述的样本处理液，其特征在于，样本处理液包括：Tris、NaCl、Triton x-100、S9和/或MgSO4、Proclin300、超纯水，pH值为8.0。
7.根据权利要求6所述的样本处理液，其特征在于，样本处理液为质量体积比：1.5g:1.0g:0.1mL:0.1mL:0.1mL:100mL的Tris、NaCl、Triton x-100、S9、Proclin300、超纯水。
8.根据权利要求6所述的样本处理液，其特征在于，样本处理液为质量体积比：1.5g:1.0g:0.1mL:0.05~0.3mL:0.05~0.3g:0.1mL:100mL的Tris、NaCl、Triton x-100、S9、MgSO4、Proclin300、超纯水。
9.根据权利要求8所述的样本处理液，其特征在于，样本处理液为质量体积比：1.5g:1.0g:0.1mL:0.3mL:0.1g:0.1mL:100mL的Tris、NaCl、Triton x-100、S9、MgSO4、Proclin300、超纯水。
10.根据权利要求7或9所述的样本处理液，其特征在于，样本处理液用于与不同类型样本混合，不同类型样本包括口咽拭子、鼻咽拭子、鼻前庭拭子、唾液样本，样本处理液与不同类型样本混合时的体积为200μL~500μL。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20230411 |