CN111474347A - 一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法 - Google Patents
一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111474347A CN111474347A CN202010311994.4A CN202010311994A CN111474347A CN 111474347 A CN111474347 A CN 111474347A CN 202010311994 A CN202010311994 A CN 202010311994A CN 111474347 A CN111474347 A CN 111474347A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- gold
- detection kit
- pad
- volume ratio
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 77
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 title claims abstract description 50
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 92
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 50
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 32
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims abstract description 32
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims abstract description 32
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 14
- 229920006267 polyester film Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims abstract description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 81
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 18
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 18
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 18
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 17
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 14
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 12
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 12
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 12
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 12
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 12
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 6
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 6
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 6
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 3
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 6
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 5
- SWGJCIMEBVHMTA-UHFFFAOYSA-K trisodium;6-oxido-4-sulfo-5-[(4-sulfonatonaphthalen-1-yl)diazenyl]naphthalene-2-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].C1=CC=C2C(N=NC3=C4C(=CC(=CC4=CC=C3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=C1 SWGJCIMEBVHMTA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanetriol Chemical compound CNC(O)(O)O FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法，检测试剂盒包括手柄区，其由吸水纸制备而成；测试区，其以硝酸纤维素膜为载体，硝酸纤维素膜由上至下分别包被抗兔IgG多克隆抗体、抗人IgG抗体、抗人IgM抗体；金垫：其包括聚酯膜，聚酯膜上涂抹有胶体金与新冠病毒重组抗原结合形成的金标结合物；样品垫，其包括缓冲溶液浸泡过的玻璃纤维；滤血膜，其贴在所述样品垫上。本发明的新型冠状病毒检测试剂盒采用免疫胶体金层析技术，以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。在体外定性检测人血清、血浆、全血样本中的新冠病毒IgG/IgM抗体，检测过程操作简单。
Description
技术领域
本发明属于病毒检测技术领域，具体来说涉及一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法。
背景技术
精准检测是新冠肺炎疫情防控中的重要一环，目前来看，新冠病毒检测主要有两种类型，一种为核酸检测，另一种为免疫检测。核酸检测主要是PCR，通过对病毒RNA进行提取、逆转录、扩增病毒保守序列，扩增体系中的荧光蛋白会结合扩增出的双链DNA序列从而发出荧光，根据检测到的荧光值判断是否有病毒存在并定量。这种检测要求比较高，需要专业的仪器和分子检测实验室以及专业的操作人员，操作不当或者实验室条件不足可能会因气溶胶污染而造成假阳性。此外，整个检测流程需要几个小时，检测效率低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法，以解决现有新型冠状病毒检测存在的检测要求高，检测效率低的缺陷。
为此，本发明提供了一种新型冠状病毒检测试剂盒，包括手柄区，其由吸
水纸制备而成；测试区，其以硝酸纤维素膜为载体，硝酸纤维素膜由上至下分别包被抗兔IgG多克隆抗体、抗人IgG抗体、抗人IgM抗体；金垫：其包括聚酯膜，聚酯膜上涂抹有胶体金与新冠病毒重组抗原结合形成的金标结合物；或者，金垫包括聚酯膜，聚酯膜上涂抹有胶体金与兔IgG结合形成的金标结合物；样品垫，其包括缓冲溶液浸泡过的玻璃纤维；滤血膜，其贴在所述样品垫上。
所述的新型冠状病毒检测试剂盒的测试方法包括：测试区的制备步骤包括
使用三头的连续划膜机将阴性液、T1阳性液、T2阳性液同时包被到硝酸纤维素膜上，将膜放到37℃的恒温环境中干燥18-24h，得到测试区。
优选的，所述阴性液由抗兔IgG多克隆抗体经CR-1溶液稀释而成；所述T1阳性液由抗人IgG抗体经CR-2溶液稀释而成；所述T2阳性液由抗人IgM抗体经CR-2溶液稀释而成。
优选的，所述CR-1溶液包括10mM磷酸盐缓冲溶液（PBS）、质量体积比为0.2%-0.8%蔗糖、体积比为0.01%-0.05% 防腐剂Proclin 300；所述CR-2溶液包括10mM磷酸盐缓冲溶液（PBS）、质量体积比为0.2%-0.8%蔗糖、质量体积比为0.1%-0.4%牛血清白蛋白（BSA）、体积比为0.01% -0.05% 防腐剂Proclin 300。
优选的，所述金垫的制备包括胶体金制备、金标结合物制备和金垫制备；
所述胶体金制备的步骤包括：万分之二的氯金酸水溶液加热煮沸，加入万分之1.8的柠檬酸三钠，待溶液变色后，持续煮沸5min，停止加热，冷却后定容至原体积，得到胶体金溶液；所述金标结合物制备步骤包括：在胶体金溶液中加入体积比为0.5%的LR-1溶液，充分搅拌混匀；加入9-12µg/ml的新冠病毒重组抗原，充分搅拌混匀；加入体积比为2%的LR-2溶液，充分搅拌混匀；离心去上清，沉淀中加入10%的LR-3溶液进行复溶，混合后即得到金标结合物，测OD值，OD值为60d-100d，冷藏保存；或者，所述金标结合物制备步骤包括：在胶体金溶液中加入体积比为0.5%的LR-1溶液，充分搅拌混匀；加入5-7µg/ml的兔IgG，充分搅拌混匀；加入体积比为2%的LR-2溶液，充分搅拌混匀；离心去上清，沉淀中加入10%的LR-3溶液进行复溶，混合后即得到金标结合物，测OD值，OD值为60d-100d，冷藏保存；所述金垫制备的步骤包括：金标结合物用LR-3溶液稀释至OD值为5-15d，在聚酯膜涂抹12ml金标结合物，正反面涂抹均匀；然后放到37℃的恒温环境中干燥18-24h，得到金垫。
优选的，所述LR-1溶液包括0.2M K2CO3；所述LR-2溶液包括质量体积比为8%-12%牛血清白蛋白（BSA）；所述LR-3溶液包括质量体积比为0.4%-0.8%三羟甲基氨基甲烷（Tris）、质量体积比为3%-5%蔗糖、质量体积比为0.3%-0.7%牛血清白蛋白（BSA）、质量体积比为0.1%-0.4%干酪素（Casein）、体积比为0.01% -0.05% 防腐剂Proclin300，调pH=8。
优选的，所述样品垫的制备步骤包括：将玻璃纤维放入SR-1溶液中浸泡5min，取出沥去多余溶液，放到37℃的恒温环境中干燥18-24h，得到样品垫。
优选的，所述SR-1溶液包括10mM磷酸盐缓冲溶液（PBS）、体积比为0.2%-0.7%吐温20、质量体积比为0.1%-0.4%干酪素（Casein）、质量体积比为0.8%-1.2% 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、体积比为0.01%-0.05%防腐剂 Proclin300。
优选的，所述新型冠状病毒检测试剂盒的制备步骤包括：在塑料基板上先贴包被好的所述硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜下缘距所述塑料基板下缘18mm；在所述硝酸纤维素膜上面贴所述吸水纸，所述吸水纸压所述硝酸纤维素膜1-2mm，所述吸水纸上缘与所述塑料基板上缘平齐；在所述硝酸纤维素膜下面贴金垫，所述金垫压所述硝酸纤维素膜1-2mm；在所述金垫下面贴所述样品垫，样品垫压金垫2mm；在所述样品垫下面贴所述滤血膜，滤血膜压样品垫1mm，滤血膜下缘与基板下缘平齐；将塑料基板切条、放入模具、包装即可。
所述的新型冠状病毒检测试剂盒的测试方法包括：将所述检测试剂盒平放，取5ul血清、血浆或者10ul全血滴入所述检测试剂盒的样孔中，再滴入2滴样本稀释液；15分钟内观察显示结果，20分钟后显示的结果无效。
本发明的有益技术效果包括：本发明提供了一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法，新型冠状病毒检测试剂盒包括手柄区，其由吸水纸制备而成；测试区，其以硝酸纤维素膜为载体，硝酸纤维素膜由上至下分别包被抗兔IgG多克隆抗体、抗人IgG抗体、抗人IgM抗体；金垫：其包括聚酯膜，聚酯膜上涂抹有胶体金与新冠病毒重组抗原结合形成的金标结合物；样品垫，其包括缓冲溶液浸泡过的玻璃纤维；滤血膜，其贴在所述样品垫上。本发明的新型冠状病毒检测试剂盒采用免疫胶体金层析技术，以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。在体外定性检测人血清、血浆、全血样本中的新冠病毒IgG/IgM抗体，检测过程操作简单，10-15分钟即可肉眼判读结果，为新冠患者提供快速检测手段，可以实现高效便捷的检测。
结合附图阅读本发明的具体实施方式后，本发明的其他特点和优点将变得更加清楚。
附图说明
图1是本发明新型冠状病毒检测试剂盒的结构示意图；
图2是本发明新型冠状病毒检测试剂盒的测试结果图；
图3是本发明新型冠状病毒检测试剂盒的测试结果图；
图4是本发明新型冠状病毒检测试剂盒的测试结果图；
图5是本发明新型冠状病毒检测试剂盒的测试结果图；
图6是本发明新型冠状病毒检测试剂盒的测试结果图。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明，应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
如图1所示，本发明的新型冠状病毒检测试剂盒包括手柄区1，其由吸水纸
制备而成；测试区2，其以硝酸纤维素膜为载体，硝酸纤维素膜由上至下分别包被抗兔IgG多克隆抗体、抗人IgG抗体、抗人IgM抗体；金垫：其包括聚酯膜，聚酯膜上涂抹有胶体金与新冠病毒重组抗原结合形成的金标结合物；或者，金垫包括聚酯膜，聚酯膜上涂抹有胶体金与兔IgG结合形成的金标结合物；样品垫，其包括缓冲溶液浸泡过的玻璃纤维；滤血膜，其贴在样品垫上；还包括样孔3。
本发明的新型冠状病毒检测试剂盒采用免疫胶体金层析技术，以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。在体外定性检测人血清、血浆、全血样本中的新冠病毒IgG/IgM抗体，检测过程操作简单，10-15分钟即可肉眼判读结果，为新冠患者提供快速检测手段，可以实现高效便捷的检测。
测试区的制备步骤包括：使用三头的连续划膜机将阴性液、T1阳性液、T2阳性液同时包被到20mm-30mm宽的硝酸纤维素膜上，将硝酸纤维素膜放到37℃的恒温环境中干燥18-24h，得到测试区。
阴性液由抗兔IgG多克隆抗体经CR-1溶液稀释而成；T1阳性液由抗人IgG抗体经CR-2溶液稀释而成；T2阳性液由抗人IgM抗体经CR-2溶液稀释而成。
CR-1溶液包括10mM磷酸盐缓冲溶液（PBS）、质量体积比为0.2%-0.8%的蔗糖、体积比为0.01% -0.05%的防腐剂Proclin 300。
CR-2溶液包括10mM磷酸盐缓冲溶液（PBS）、质量体积比为0.2%-0.8%的蔗糖、质量体积比为0.1%-0.4%的牛血清白蛋白（BSA）、体积比为0.01%-0.05% 的防腐剂Proclin 300。
金垫的制备包括胶体金制备、金标结合物制备和金垫制备：
胶体金制备的步骤包括：将质量体积比为万分之二的氯金酸水溶液加热煮沸，加入质量体积比为万分之1.8的柠檬酸三钠，待溶液变色后，持续煮沸5min，停止加热，冷却后定容至原体积，得到胶体金溶液。
金标结合物制备步骤包括：在胶体金溶液中加入体积比为0.5%的LR-1溶液，充分搅拌混匀；加入9-12µg/ml的新冠病毒重组抗原，充分搅拌混匀；加入体积比为2%的LR-2溶液，充分搅拌混匀；离心去上清，沉淀中加入质量体积比为10%的LR-3溶液进行复溶，混合后即得到金标结合物，测OD值，OD值为60d-100d，冷藏保存。
或者，金标结合物制备步骤还可以为：在胶体金溶液中加入体积比为0.5%的LR-1溶液，充分搅拌混匀；加入5-7µg/ml的兔IgG，充分搅拌混匀；加入体积比为2%的LR-2溶液，充分搅拌混匀；离心去上清，沉淀中加入质量体积比为10%的LR-3溶液进行复溶，混合后即得到金标结合物，测OD值，OD值为60d-100d，冷藏保存。
金垫制备的步骤包括：金标结合物用LR-3溶液稀释至OD值为5-15d，在聚
酯膜涂抹12ml金标结合物，正反面涂抹均匀；然后放到37℃的恒温环境中干燥18-24h，得到金垫。
LR-1溶液包括0.2M K2CO3；LR-2溶液包括质量体积比为8%-12%的牛血清白
蛋白（BSA）；LR-3溶液包括质量体积比为0.4%-0.8%的三羟甲基氨基甲烷（Tris）、质量体积比为3%-5% 蔗糖、质量体积比为0.3%-0.7%牛血清白蛋白（BSA）、质量体积比为0.1%-0.4%干酪素（Casein）、体积比为0.01% -0.05% 防腐Proclin300，调 pH=8。
样品垫的制备步骤包括：将玻璃纤维放入SR-1溶液中浸泡5min，取出沥去多余溶液，放到37℃的恒温环境中干燥18-24h，得到样品垫。
SR-1溶液包括10mM磷酸缓冲盐溶液（PBS）、质量体积比为0.2% -0.7%吐温20、质量体积比为0.1%-0.4%干酪素（Casein）、质量体积比为0.8%-1.2% 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、质量体积比为0.13%-0.05%防腐剂 Proclin300。
新型冠状病毒检测试剂盒的制备步骤包括：在塑料基板上先贴包被好的硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜下缘距塑料基板下缘18mm；在硝酸纤维素膜上面贴所述吸水纸，吸水纸压硝酸纤维素膜1-2mm，吸水纸上缘与塑料基板上缘平齐；在硝酸纤维素膜下面贴金垫，金垫压硝酸纤维素膜1-2mm；在金垫下面贴所述样品垫，样品垫压金垫2mm；在样品垫下面贴滤血膜，滤血膜压样品垫1mm，滤血膜下缘与基板下缘平齐；板将塑料基切条、放入模具、包装即可。
本发明的新型冠状病毒检测试剂盒适用于血清、血浆、全血样本的检测，测试方法包括：将检测试剂盒平放，取5ul血清或者5ul血浆或者10ul全血滴入检测试剂盒的样孔中，再滴入2滴样本稀释液；15分钟内观察显示结果，20分钟后显示的结果无效。
样本稀释液可以为磷酸缓冲盐溶液（PBS）和质量体积比为0.5%的牛血清白蛋白（BSA），在此不做具体限制。
测试区2中，自上而下依次为质控线C、质控线C和检测线G。质控线C上包被的是抗兔IgG多克隆抗体，用于检测样本中相应的抗兔IgG多克隆抗体。检测线G包被的是抗人IgG抗体，用于检测样本中相应的抗人IgG抗体。检测线M包被的是抗人IgM抗体，用于检测样本中相应的抗人IgM抗体。
如图2所示，测试结果为阳性，质控线C和检测线G、检测线M都出现紫红色条带，表示样品中含有新冠病毒IgG/IgM抗体。
如图3所示，测试结果为阳性，质控线C和检测线G都出现紫红色条带，表示样品中含有新冠病毒IgG抗体。
如图4所示，测试结果为阳性，质控线C和检测线M都出现紫红色条带，表示样品中含有新冠病毒IgM抗体。
如图5所示，测试结果为阴性，仅在质控线C出现紫红色条带，检测线G、
检测线M均未出现紫红色条带，表示样品中没有新冠病毒抗体或抗体浓度低于试剂的检出水平。
如图6所示，测试结果为无效，质控线C未出现紫红色条带，表示操作不当或者试剂失效，应重新试验。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，包括
手柄区，其由吸水纸制备而成；
测试区，其以硝酸纤维素膜为载体，硝酸纤维素膜由上至下分别包被抗兔IgG多
克隆抗体、抗人IgG抗体、抗人IgM抗体；
金垫：其包括聚酯膜，聚酯膜上涂抹有胶体金与新冠病毒重组抗原结合形成的
金标结合物；或者，金垫包括聚酯膜，聚酯膜上涂抹有胶体金与兔IgG结合
形成的金标结合物；
样品垫，其包括缓冲溶液浸泡过的玻璃纤维；
滤血膜，其贴在所述样品垫上。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述测试区的制备步骤包括：使用三头的连续划膜机将阴性液、T1阳性液、T2阳性液同时包被到硝酸纤维素膜上，将膜放到37℃的恒温环境中干燥18-24h，得到测试区。
3.根据权利要求2所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述阴性液由抗兔IgG多克隆抗体经CR-1溶液稀释而成；
所述T1阳性液由抗人IgG抗体经CR-2溶液稀释而成；
所述T2阳性液由抗人IgM抗体经CR-2溶液稀释而成。
4.根据权利要求3所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述CR-1溶液包括10mM磷酸盐缓冲溶液（PBS）、质量体积比为0.2%-0.8%蔗糖、体积比为0.01%-0.05% 防腐剂Proclin 300；
所述CR-2溶液包括10mM磷酸盐缓冲溶液（PBS）、质量体积比为0.2%-0.8%蔗糖、质量体积比为0.1%-0.4%牛血清白蛋白（BSA）、体积比为0.01% -0.05% 防腐剂Proclin 300。
5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述金垫的制备包括胶体金制备、金标结合物制备和金垫制备；
所述胶体金制备的步骤包括：质量体积比万分之二的氯金酸水溶液加热煮沸，
加入质量体积比万分之1.8的柠檬酸三钠，待溶液变色后，持续煮沸5min，停止
加热，冷却后定容至原体积，得到胶体金溶液；
所述金标结合物制备步骤包括：在胶体金溶液中加入体积比为0.5%的LR-1
溶液，充分搅拌混匀；加入9-12µg/ml的新冠病毒重组抗原/5-7µg/ml的兔IgG，
充分搅拌混匀；加入体积比为2%的LR-2溶液，充分搅拌混匀；离心去上清，
沉淀中加入10%的LR-3溶液进行复溶，混合后即得到金标结合物，测OD值，
OD值为60d-100d，冷藏保存；
或者，所述金标结合物制备步骤包括：在胶体金溶液中加入体积比为0.5%的LR-1
溶液，充分搅拌混匀；加入5-7µg/ml的兔IgG，充分搅拌混匀；加入体积比为2%
的LR-2溶液，充分搅拌混匀；离心去上清，沉淀中加入10%的LR-3溶液进行复
溶，混合后即得到金标结合物，测OD值，OD值为60d-100d，冷藏保存；
所述金垫制备的步骤包括：金标结合物用LR-3溶液稀释至OD值为5-15d，在聚酯
膜涂抹12ml金标结合物，正反面涂抹均匀；然后放到37℃的恒温环境中干燥
18-24h，得到金垫。
6.根据权利要求5述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述LR-1溶液包括0.2M K2CO3；
所述LR-2溶液包括质量体积比为8%-12%牛血清白蛋白（BSA）；
所述LR-3溶液包括质量体积比为0.4%-0.8%三羟甲基氨基甲烷（Tris）、质量体积比为3%-5% 蔗糖、质量体积比为0.3%-0.7%牛血清白蛋白（BSA）、质量体积比为0.1%-0.4%干酪素（Casein）、体积比为0.01% -0.05% 防腐剂Proclin300，调 pH=8。
7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述样品垫的制备步骤包括：将玻璃纤维放入SR-1溶液中浸泡5min，取出沥去多余溶液，放到37℃的恒温环境中干燥18-24h，得到样品垫。
8.根据权利要求7所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述SR-1溶液包括10mM磷酸盐缓冲溶液（PBS）、体积比为0.2%-0.7%吐温20、质量体积比为0.1%-0.4%干酪素（Casein）、质量体积比为0.8%-1.2% 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、体积比为0.01%-0.05%防腐剂Proclin300。
9.根据权利要求2-8中任何一项所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述新型冠状病毒检测试剂盒的制备步骤包括：
在塑料基板上先贴包被好的所述硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜下缘距所述塑料基板下缘18mm；
在所述硝酸纤维素膜上面贴所述吸水纸，所述吸水纸压所述硝酸纤维素膜1-2mm，所述吸水纸上缘与所述塑料基板上缘平齐；
在所述硝酸纤维素膜下面贴所述金垫，所述金垫压所述硝酸纤维素膜1-2mm；
在所述金垫下面贴所述样品垫，所述样品垫压所述金垫2mm；
在所述样品垫下面贴所述滤血膜，所述滤血膜压所述样品垫1mm，所述滤血膜下缘与所述基板下缘平齐；
将所述塑料基板切条、放入模具、包装即可。
10.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的测试方法，其特征在于：
所述测试方法包括：将所述检测试剂盒平放，取5ul血清、血浆或者10ul全血滴入所述检测试剂盒的样孔中，再滴入2滴样本稀释液；15分钟内观察显示结果，20分钟后显示的结果无效。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010311994.4A CN111474347A (zh) | 2020-04-20 | 2020-04-20 | 一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010311994.4A CN111474347A (zh) | 2020-04-20 | 2020-04-20 | 一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111474347A true CN111474347A (zh) | 2020-07-31 |
Family
ID=71755464
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010311994.4A Pending CN111474347A (zh) | 2020-04-20 | 2020-04-20 | 一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111474347A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112649603A (zh) * | 2020-08-31 | 2021-04-13 | 深圳容金科技有限公司 | 一种检测covid-19抗体的免疫层析试剂盒及制备方法 |
| USD938607S1 (en) | 2020-04-01 | 2021-12-14 | Sense Biodetection Limited | Diagnostic test device |
| CN114113587A (zh) * | 2020-08-26 | 2022-03-01 | 华中科技大学 | 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫层析检测卡及应用 |
| USD959693S1 (en) | 2021-03-31 | 2022-08-02 | Sense Biodetection Limited | Diagnostic test device |
| CN115951043A (zh) * | 2023-03-09 | 2023-04-11 | 天津博奥赛斯生物科技股份有限公司 | 一种用于新冠抗原胶体金检测的样本处理液 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100120061A1 (en) * | 2006-12-11 | 2010-05-13 | The Jordanian Pharmaceutical Manufacturing Co. | Rapid immunochromatographic detection by amplification of the colloidal gold signal |
| CN106290813A (zh) * | 2016-07-22 | 2017-01-04 | 北京怡成生物电子技术股份有限公司 | 滤血膜及其制备方法与包括滤血膜的液体样品检测装置 |
| CN107365364A (zh) * | 2016-05-12 | 2017-11-21 | 兰州雅华生物技术有限公司 | 一种腺病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测腺病毒抗体的快速检测试剂盒 |
| CN111024954A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-04-17 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法 |
-
2020
- 2020-04-20 CN CN202010311994.4A patent/CN111474347A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100120061A1 (en) * | 2006-12-11 | 2010-05-13 | The Jordanian Pharmaceutical Manufacturing Co. | Rapid immunochromatographic detection by amplification of the colloidal gold signal |
| CN107365364A (zh) * | 2016-05-12 | 2017-11-21 | 兰州雅华生物技术有限公司 | 一种腺病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测腺病毒抗体的快速检测试剂盒 |
| CN106290813A (zh) * | 2016-07-22 | 2017-01-04 | 北京怡成生物电子技术股份有限公司 | 滤血膜及其制备方法与包括滤血膜的液体样品检测装置 |
| CN111024954A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-04-17 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USD938607S1 (en) | 2020-04-01 | 2021-12-14 | Sense Biodetection Limited | Diagnostic test device |
| CN114113587A (zh) * | 2020-08-26 | 2022-03-01 | 华中科技大学 | 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫层析检测卡及应用 |
| CN112649603A (zh) * | 2020-08-31 | 2021-04-13 | 深圳容金科技有限公司 | 一种检测covid-19抗体的免疫层析试剂盒及制备方法 |
| USD959693S1 (en) | 2021-03-31 | 2022-08-02 | Sense Biodetection Limited | Diagnostic test device |
| CN115951043A (zh) * | 2023-03-09 | 2023-04-11 | 天津博奥赛斯生物科技股份有限公司 | 一种用于新冠抗原胶体金检测的样本处理液 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111474347A (zh) | 一种新型冠状病毒检测试剂盒及其制备方法和检测方法 | |
| DK160108C (da) | Fremgangsmåde og udstyr til direkte eller indirekte påvisning af reaktion mellem et specifikt bindingsmiddel og den tilsvarende acceptorsubstans | |
| US5541069A (en) | Assay having improved dose response curve | |
| CN111398603B (zh) | 一种用于检测新型冠状病毒抗体的试纸条、制备方法及其应用 | |
| US4962023A (en) | Single incubation immuno sorbent assay method using particle labels to detect test antigen specific antibodies in presence of other antibodies | |
| US8404479B2 (en) | Simple membrane assay method and kit | |
| CN111751527A (zh) | 新型冠状病毒IgG和IgM抗体检测试剂盒及其制备方法和应用 | |
| JP2008501124A (ja) | マクロおよびミクロマトリックスの迅速な検出および定量方法および装置 | |
| CN110095599B (zh) | 无细胞损失的微量免疫荧光检测方法 | |
| CN113533736B (zh) | 肺炎支原体IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN113447652A (zh) | 一种用于检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗原的试剂卡盒及其制备方法和应用 | |
| WO2017222998A1 (en) | Dry-down processes for dye-conjugated reagents | |
| CN113030467B (zh) | 一种自放大精准控制的间接竞争免疫层析试纸条及应用 | |
| CA2076592A1 (en) | Method, test device and kit for assay of specific binding ligand using controlled flow through filtration membrane | |
| CN109765381B (zh) | 一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子pdgf-bb试纸条及检测方法 | |
| Xu et al. | Multiplex biomarker analysis biosensor for detection of hepatitis B virus | |
| Richman et al. | Summary of a workshop on new and useful methods in rapid viral diagnosis | |
| Forghani | Diagnosis by viral antigen detection | |
| CN116148463A (zh) | 一种磁珠-抗体-膜糖蛋白复合物、应用及试剂盒 | |
| EP1340085B1 (en) | Assay for directly detecting a biological cell in a body fluid sample | |
| JP2001305139A (ja) | 特異的結合体 | |
| CN111521787A (zh) | 新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡及其制备方法 | |
| CN117849346B (zh) | 抗中性粒细胞胞浆抗体检测方法、试剂盒及其制备方法 | |
| CN108490171A (zh) | 一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒 | |
| WO2012127473A1 (en) | Method and kit for estimating human immunodeficiency virus (hiv) incidence |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200731 |