CN115948342B - 一种cho细胞株、d-二聚体单克隆抗体及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医学检验体外诊断技术领域，公开了一种CHO细胞株、D‑二聚体单克隆抗体及其应用，CHO细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202202，其稳定表达D‑二聚体（D‑Dimer）单克隆抗体，采用本发明制备的D‑Dimer单克隆抗体具有良好的准确性和精密度，线性范围宽，适合免疫比浊法测定D‑Dimer推广使用。
Description
技术领域
本发明属于医学检验体外诊断技术领域，特别涉及CHO细胞株、D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体及其应用。
背景技术
D-Dimer是血液中的纤维蛋白单体在活化后的凝血因子XIII作用下相互交联成稳定的纤维蛋白聚合体后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是特异性的纤溶过程标记物。临床上D-Dimer的水平升高常见于纤溶系统激活或亢进，如深静脉血栓（DVT）、肺动脉栓塞（PE）和弥散性血管内凝血（DIC）等。在正常妊娠后期，由于生理性高凝，D-Dimer水平也会升高，但异常高的D-Dimer水平多提示并发症。D-Dimer阴性结果对疑似血栓性疾病有很高的阴性预测价值，从而可以减少有创的检查，避免盲目的抗凝治疗。目前D-Dimer水平检测在灵敏度和检测限方面效果还不够理想。
免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。相比于传统ELISA法,免疫比浊法具有灵敏度高、线性范围更大、高通量、自动化程度高、简便快速等特点，适合大批量标本的检测。因此本领域迫切需要一种能够应用于免疫比浊法的准确度高、检测范围大的D-Dimer体外诊断试剂盒，而试剂盒创新性研发的核心在于抗体的制备。
发明内容
本发明针对传统应用于免疫比浊法的抗体缺乏的问题，提供了一种CHO细胞株、D-二聚体单克隆抗体及其应用。
为了达到上述目的，本发明是采用下述的技术方案实现的：
一种CHO细胞株，其命名为中国仓鼠卵巢细胞CHO DD，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述CHO细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202202，保藏日期为2022年01月12日，保藏地址为：中国 武汉 武汉大学。其稳定表达D-Dimer单克隆抗体。
本发明还提供了D-Dimer单克隆抗体A包括如SEQ ID NO:7所示的轻链氨基酸序列和如SEQ ID NO:9所示的重链氨基酸序列。
本发明CHO细胞株分泌产生的D-Dimer单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用。
该试剂盒包括R1试剂和R2试剂，R2试剂中包含D-Dimer单克隆抗体乳胶、牛血清白蛋白和ProClin 300，R1试剂包括3-双（2-羟乙基）氨基-2-羟基丙磺酸（DIPSO）缓冲液、氯化钠，、曲拉通X-100和ProClin 300。
本发明同时提供了CHO细胞株的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：用完全弗氏佐剂和天然抗原对小鼠进行免疫，分离小鼠的脾脏细胞，使其在PEG融合剂作用下与SP2/0细胞融合，在HAT选择培养基上进行筛选，获得杂交瘤细胞；
步骤2：提取杂交瘤细胞系的RNA，RT-PCR扩增抗体轻链和重链可变区DNA的序列，对扩增后的DNA序列进行测序；
步骤3：将测序获得的轻链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgK保守区的DNA序列，测序获得的重链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgG1保守区DNA序列；
步骤4：利用基因工程技术构建抗体轻链和重链表达载体；将载体转染进入CHO细胞系，获得稳定表达单克隆抗体的CHO细胞株。
进一步的，步骤3中，轻链混合引物：
5’-ACAGT TGGTG CAGCA TCTGC-3’（IgK保守区5’端反向引物）
5’-GGCGA AGACT TGGGC TGGCC-3’（IgL1保守区5’端反向引物）
5’-GGAGT GGACT TGGGC TGACC-3’（IgL2保守区5’端反向引物）
重链混合引物：
5’-CTAGG GGGTG TCGTT TTAGC-3’ （IgG1 保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT TTAGC-3’ （IgG2a 保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGGTG TTGTT TTAGC-3’ （IgG2b 保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT GTAGC-3’ （IgG3 保守区5’端反向引物）
进一步的，所述步骤1中，与骨髓瘤细胞的融合的脾脏细胞为末次免疫后第三天取脾制成的细胞悬，其骨髓瘤细胞的混合比例为1：6到1：10。
进一步的，所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，R2试剂中包含D-Dimer单克隆抗体乳胶、牛血清白蛋白和ProClin 300。
进一步的，R1试剂包括3-双（2-羟乙基）氨基-2-羟基丙磺酸（DIPSO）缓冲液、氯化钠，、曲拉通X-100和ProClin 300。
与现有技术相比，本发明的有益之处为：
本发明提供的抗体具有良好的特异性、线性范围宽、重复性好，与标准诊断方法西门子试剂盒的检测水准相一致，适合免疫比浊法测定D-Dimer，并推广使用。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步的说明。
附图1为本发明ELISA检测D-Dimer mAb3与纤维蛋白交叉反应曲线图。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明目的、特征和优点，下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
在下面的描述中阐述了具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明并不限于下面公开说明书的具体实施例的限制。
实施例1
一种CHO细胞株，其命名为中国仓鼠卵巢细胞CHO DD，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述CHO细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202202，保藏日期为2022年01月12日，保藏地址为：中国 武汉 武汉大学。其稳定表达D-Dimer单克隆抗体。
D-Dimer单克隆抗体A包括如SEQ ID NO:7所示的轻链氨基酸序列和如SEQ ID NO:9所示的重链氨基酸序列。
实施例2
本实施例提供CHO细胞株的具体制备方法，未特殊说明之处，为抗体制备或检测的常规操作。
1. D-Dimer抗体的制备
1.1用常规的方法对BALB/c小鼠进行免疫，免疫原为天然D-Dimer蛋白；
1.2初次免疫将100μg抗原与等体积弗氏完全佐剂充分乳化后，腹腔或皮下多点注射，注射体积2ml。以后每隔两周，将50μg抗原与等体积不完全佐剂混合后注射，注射体积1ml，共免疫四次；
1.3融合前3天加强免疫一次，然后取出脾脏，制备脾细胞悬液；
1.4在PEG融合剂作用下与SP2/0细胞融合，并在HAT选择培养基上筛选单克隆；
1.5经3次融合，得到9株抗D-Dimer特异的单克隆抗体株，分别按序号命名为命名为D-DimermAb 1至D-Dimer mAb 9。
2. 抗体的质量控制
骨髓瘤细胞：SP2/0本身不合成或不分泌免疫球蛋白，保存条件符合要求。
细胞融合：末次免疫后第三天取脾制成细胞悬液，与骨髓瘤细胞按1：6到1：10的比例混合，在PEG作用下进行细胞融合。
克隆化：用ELISA法筛选出分泌目的抗体的杂交瘤细胞，经有限稀释法对其进行克隆，直至获得的杂交瘤细胞系具备分泌单克隆抗体的能力。
3. 杂交瘤细胞的鉴定
抗体分泌稳定性：经克隆化及连续传代检查，连续克隆化至检测单克隆抗体的阳性率达100%。
4.单克隆抗体的鉴定
将所得到的单克隆抗体与系列无关抗原进行ELISA反应，检测所得抗体是否与无关免疫原产生交叉反应。
5.单克隆抗体的鉴定结果
检测结果如图1所示，本实施例制得的D-Dimer mAb 3与其他抗原基本没有交叉反应。
6. 抗体DNA序列的获得
6.1按Invitrogen™ PureLink™ RNA 小提试剂盒说明书的方法，从单克隆细胞中提取总RNA。
6.2然后按照Thermo Scientific™ RevertAid RT 逆转录试剂盒说明书，按表1中的体系将抗体轻链可变区和重链可变区的RNA逆转录为cDNA。
表1 反应体系（42℃，30min）
6.3按照Invitrogen™ 末端脱氧核苷酸转移酶 （TdT） 说明书在逆转录产物后端加入polyC尾，具体反应体系如表2。
表2 反应体系（37℃，15min）
6.4按Thermo Scientific™PCR Master Mix （2X） 说明书利用PCR技术分别进行抗体轻链、重链DNA扩增，反应体系如表3。
PCR反应条件为：预热95℃ 5min，循环（变性95℃ 30s，退火55℃ 30s，延伸72℃30s），长时延伸（72℃ 10min）。
表3 反应体系
5’端引物序列为：ATTGT CCTTA ATGGG GGG；
轻链混合引物：
5’-ACAGT TGGTG CAGCA TCTGC-3’（IgK保守区5’端反向引物）
5’-GGCGA AGACT TGGGC TGGCC-3’（IgL1保守区5’端反向引物）
5’-GGAGT GGACT TGGGC TGACC-3’（IgL2保守区5’端反向引物）
重链混合引物：
5’-CTAGG GGGTG TCGTT TTAGC-3’ （IgG1 保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT TTAGC-3’ （IgG2a 保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGGTG TTGTT TTAGC-3’ （IgG2b 保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT GTAGC-3’ （IgG3 保守区5’端反向引物）
6.5按照ChargeSwitch™ PCR 纯化试剂盒说明书，纯化PCR产物。
7.DNA的测序
利用Sanger测序法对上述纯化后的PCR产物进行DNA测序，测序结果见序列表。
D-Dimer mAb 3轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其DNA序列如SEQ IDNO:2 所示。
D-Dimer mAb 3的重链可变区氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示，其DNA序列如SEQ IDNO:4 所示。
8. 抗体基因的改造
在抗体轻链可变区DNA序列后加入小鼠抗体IgK轻链保守区DNA序列SEQ ID NO:5，即获得改造后的抗体轻链序列。
在抗体重链可变区Fab端DNA序列后加入小鼠重链IgG1保守区DNA序列SEQ ID NO:6 ，即获得改造后的抗体重链序列。
D-Dimer单克隆抗体A（改造后D-Dimer mAb 3抗体）轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，其DNA序列如SEQ ID NO:8 所示。
D-Dimer单克隆抗体A（改造后D-Dimer mAb 3抗体）重链氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，其DNA序列如SEQ ID NO:10 所示。
9.D-Dimer单克隆抗体A的制备
人工合成DNA序列SEQ ID NO:8进行连接到pcDNA3.1质粒中。
人工合成DNA序列SEQ ID NO:10进行连接到pcDNA3.1质粒中。
10. CHO细胞株转染
将以上两个质粒进行1:1混合，按Gibco™ ExpiFectamine™ CHO 转染试剂盒说明书将质粒转染到CHO细胞系中表达。
实施例3
本实施例提供免疫比浊反应试剂的配制过程。
1. R1试剂配制
3-双（2-羟乙基）氨基-2-羟基丙磺酸（DIPSO）缓冲液浓度为0.05mol/L，用0.1mol/L HCl溶液调节pH至7.5。再加入0.15mol/L氯化钠，0.1％曲拉通X-100，0.02％ProClin300。其中，DIPSO缓冲液起到稳定反应体系pH值的作用，而氯化钠为反应体系提供离子环境，曲拉通X-100为表面活性剂，ProClin 300为防腐剂。
2. R2试剂配制
2.1 0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.2）的配制
首先单独配制0.05mol/L的NaH2PO4溶液和0.05mol/LNa2HPO4溶液，其中0.05mol/L的NaH2PO4配制如下：称取7.8015g的NaH2PO4-2H2O，加入到1L水中。同理，将17.911gNa2HPO4-12H2O溶于1L水中配制0.05mol/L Na2HPO4的溶液。之后取28ml NaH2PO4溶液与72mlNa2HPO4溶液，搅拌混合。
2.2 0.5mol/L MES缓冲液（pH6.0）的配制
称取2-吗啉乙磺酸97.6g，加入1L纯化水中，室温下充分溶解，用氢氧化钠调节pH至6.0（0.5mol/L）。
2.3其他物料的称量
2.3.1 NHS：称取NHS 2g，加入5mL纯化水搅拌溶解，搅拌5min使其充分溶解；
2.3.2 EDC：称取EDC 1.4g，加入3mL纯化水搅拌溶解；搅拌5min使其充分溶解；
2.3.3聚苯乙烯乳胶珠：量取聚苯乙烯乳胶珠2.5mL；
2.3.4牛血清白蛋白：称取牛血清白蛋白10g；
2.3.5 ProClin 300：量取ProClin 300 0.2mL；
2.4聚苯乙烯乳胶微球的活化
2.4.1将溶解的EDC溶液加入NHS溶液中混合均匀。
2.4.2将量取的聚苯乙烯乳胶珠加入溶解好的EDC和NHS混合溶液中，再加入2.5mL0.5mol/L MES缓冲液（pH6.0），然后加入5倍体积（聚苯乙烯乳胶珠）纯化水进行充分溶解，室温反应30min，不断搅拌。
2.4.3将配制好的聚苯乙烯乳胶溶液转移至离心瓶中，配平后离心，15000rpm，8℃，50min。
2.4.4弃上清，收集离心沉淀；加入40mL磷酸盐缓冲液，充分重悬聚苯乙烯乳胶珠，配平后离心，15000rpm，8℃，40min；连续两次。
2.4.5弃上清，收集离心沉淀；加入40mL磷酸盐缓冲液重新悬浮聚苯乙烯乳胶珠，超声20min（150W，3秒，间隔10秒，30次）使其分散。
2.5D-Dimer单克隆抗体的偶联
2.5.1将量取的40mg D-Dimer单克隆抗体，加入聚苯乙烯胶乳溶液中室温搅拌30min；然后将烧杯移至2-8℃过夜搅拌。
2.5.2 15000rmp离心50min，弃上清。用磷酸盐缓冲液洗涤两次，离心沉淀后，弃上清；用40mL磷酸盐缓冲液重新悬浮D-Dimer单克隆抗体乳胶，超声20min（150W，3秒，间隔10秒，30次）使其分散。
2.5.3往D-Dimer单克隆抗体乳胶中加入牛血清白蛋白和ProClin 300，充分溶解，加入460mL磷酸盐缓冲液，即得R2试剂。
实验室检测结果：
A、检测试剂的准确性
取50例临床标本，将本发明试剂盒与西门子试剂盒做临床比对，结果如下表4：
表4 准确性检测结果
本发明试剂盒准确性高，与标准诊断方法西门子试剂盒相比，具有较好的阳性符合率和阴性符合率。
B、检测试剂的线性范围
将西门子试剂盒检测值为4.27μg/mLFEU的血样，用去除D-Dimer的人基质血清溶液作为稀释液，配置浓度为4μg/mLFEU，3μg/mLFEU，2μg/mLFEU，1μg/mLFEU，0.5μg/mLFEU，0μg/mLFEU的D-Dimer标准品，使用本发明试剂盒进行检测，检测结果如表5：
表5 线性范围检测结果
本发明试剂盒线性范围宽，与标准诊断方法西门子试剂盒相比，本发明试剂盒检测值与抗原理论浓度值高度一致。
C、检测试剂的精密度
将西门子试剂盒检测值为2.41 μg/mLFEU和0.58 μg/mLFEU的血样用本发明试剂盒测试10次，检测本发明试剂盒的精密度，结果如下表6：
表6 精密度检测结果
本发明试剂盒精密度高，与西门子试剂盒相对比，2.41 μg/mLFEU和0.58 μg/mLFEU的血样的相对偏差分别为-2.32%和3.45%，变异系数分别为2.09%和2.22%。
序列表：
SEQ ID NO.1:
DVVMTQTPLSLSVSLGDQASISCRSSQSLIYSNRHTTYLYQKSGTSPKRWQLLIQVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYFCSQSTHLPFTFGSGTKLEIK
SEQ ID NO.2:
GATGTTGTTATGACTCAAACTCCTTTATCTTTATCTGTTTCTTTAGGAGATCAAGCTTCTATTTCTTGTCGTTCTTCTCAATCTTTAATTTATTCTAATCGTCATACTACTTATTTATATCAAAAATCTGGAACTTCTCCTAAACGTTGGCAATTATTAATTCAAGTTTCTAATCGTTTTTCTGGAGTTCCTGATCGTTTTTCTGGATCTGGATCTGGAACTGATTTTACTTTAAAAATTAATCGTGTTGAGGCTGAGGATTTAGGAGTTTATTTTTGTTCTCAATCTACTCATTTACCTTTTACTTTTGGATCTGGAACTAAATTAGAGATTAAA
SEQ ID NO.3:
EVQLQQSGAELVKPGASVKYLHWYLQKPGQSPKLLIFMKQRTEQGLDWIGRIDPEDGETKYAPEFQGKATITADTSSNTAYLQLSTLTSEDTAVYYCARYYSSYVPFVYWGQGTLVTASAK
SEQ ID NO.4:
GAGGTTCAATTACAACAATCTGGAGCTGAGTTAGTTAAACCTGGAGCTTCTGTTAAATATTTACATTGGTATTTACAAAAACCTGGACAATCTCCTAAATTATTAATTTTTATGAAACAACGTACTGAGCAAGGATTAGATTGGATTGGACGTATTGATCCTGAGGATGGAGAGACTAAATATGCTCCTGAGTTTCAAGGAAAAGCTACTATTACTGCTGATACTTCTTCTAATACTGCTTATTTACAATTATCTACTTTAACTTCTGAGGATACTGCTGTTTATTATTGTGCTCGTTATTATTCTTCTTATGTTCCTTTTGTTTATTGGGGACAAGGAACTTTAGTTACTGCTTCTGCTAAA
SEQ ID NO.5:
CGTGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
SEQ ID NO.6:
GCTAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCGCAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA
SEQ ID NO.7:
DVVMTQTPLSLSVSLGDQASISCRSSQSLIYSNRHTTYLYQKSGTSPKRWQLLIQVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYFCSQSTHLPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
SEQ ID NO.8:
GATGTTGTTATGACTCAAACTCCTTTATCTTTATCTGTTTCTTTAGGAGATCAAGCTTCTATTTCTTGTCGTTCTTCTCAATCTTTAATTTATTCTAATCGTCATACTACTTATTTATATCAAAAATCTGGAACTTCTCCTAAACGTTGGCAATTATTAATTCAAGTTTCTAATCGTTTTTCTGGAGTTCCTGATCGTTTTTCTGGATCTGGATCTGGAACTGATTTTACTTTAAAAATTAATCGTGTTGAGGCTGAGGATTTAGGAGTTTATTTTTGTTCTCAATCTACTCATTTACCTTTTACTTTTGGATCTGGAACTAAATTAGAGATTAAACGTGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
SEQ ID NO.9:
EVQLQQSGAELVKPGASVKYLHWYLQKPGQSPKLLIFMKQRTEQGLDWIGRIDPEDGETKYAPEFQGKATITADTSSNTAYLQLSTLTSEDTAVYYCARYYSSYVPFVYWGQGTLVTASAKAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
SEQ ID NO.10:
GAGGTTCAATTACAACAATCTGGAGCTGAGTTAGTTAAACCTGGAGCTTCTGTTAAATATTTACATTGGTATTTACAAAAACCTGGACAATCTCCTAAATTATTAATTTTTATGAAACAACGTACTGAGCAAGGATTAGATTGGATTGGACGTATTGATCCTGAGGATGGAGAGACTAAATATGCTCCTGAGTTTCAAGGAAAAGCTACTATTACTGCTGATACTTCTTCTAATACTGCTTATTTACAATTATCTACTTTAACTTCTGAGGATACTGCTGTTTATTATTGTGCTCGTTATTATTCTTCTTATGTTCCTTTTGTTTATTGGGGACAAGGAACTTTAGTTACTGCTTCTGCTAAAGCTAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCGCAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例应用于其它领域，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (4)
1.一种CHO细胞株，其特征在于，所述CHO细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202202，其稳定表达D-Dimer单克隆抗体；所述D-Dimer单克隆抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述D-Dimer单克隆抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。
2.根据权利要求1所述的CHO细胞株分泌产生的D-Dimer单克隆抗体在制备免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用。
3.根据权利要求2所述的CHO细胞株分泌产生的D-Dimer单克隆抗体在制备免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，R2试剂中包含D-Dimer单克隆抗体乳胶、牛血清白蛋白和ProClin 300。
4.根据权利要求3所述的CHO细胞株分泌产生的D-Dimer单克隆抗体在制备免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用，其特征在于：R1试剂包括3-双（2-羟乙基）氨基-2-羟基丙磺酸（DIPSO）缓冲液、氯化钠、曲拉通X-100和ProClin 300。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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