CN115944644B - 一种具有改善卵巢功能减退功效的组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药成分组合物及其用途，所述组合物由芍药苷、没食子酸、阿魏酸组成。本发明通过大量实验筛选中药复方中的活性成分，优选出特定重量份数比的芍药苷40份、没食子酸20份、阿魏酸10份。实验结果表明本发明提供的组合物能有效改善大鼠卵巢组织形态，使闭锁卵泡减少，初级卵泡及次级卵泡数量增加，并可见较多的原始卵泡，能有效改善模型大鼠的激素水平及相关组织蛋白的表达，具有很好的改善卵巢功能减退的功效。并且本发明组合物，成分清楚，质量可控，毒副作用弱。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种具有改善卵巢功能减退功效的组合物。
背景技术
卵巢功能反映女性的生殖内分泌功能，卵巢功能低下在生育期常见于卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)、卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)等疾病，表现为月经初潮后到40岁前出现月经稀发，经量减少，渐至闭经以及生育能力减退，进一步可发展为卵巢早衰，同时骨质疏松、骨折、心血管疾病、抑郁、认知功能障碍、不孕不育等疾病的发病率也随之增加，给患者及家人带来了巨大的困扰。生育年龄推迟已成为全球性问题，伴随着女性工作压力的增加、环境的变化等多种因素，DOR的发病率呈逐年上升和低龄化的趋势。目前西医在治疗DOR方面主要是采用激素替代疗法(hormonereplacement therapy,HRT)，但存在有较大副作用的风险，如停药后易复发、长期使用激素会增加子宫内膜癌、乳腺癌等的发病率，而中医药在卵巢功能减退的治疗上具有独特的疗效优势，且没有激素治疗的副作用。
本发明通过对现有中药复方进行研究，筛选出最佳的活性成分组合物，应用于改善卵巢功能减退，具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种有效成分明确、质量可控、使用安全有效的用于改善卵巢功能减退的中药成分组合物。该中药成分组合物对卵巢功能减退模型大鼠有较好的改善作用。
技术方案：为实现本发明的目的，本发明采用的技术方案为：
一种具有改善卵巢功能减退功效的组合物，其特征在于，所述组合物由下述成分组成：芍药苷1～99份，没食子酸1～99份，阿魏酸1～99份。
作为优选方案，以上所述的一种具有改善卵巢功能减退功效的组合物，所述组合物由下述成分组成：取芍药苷40份、没食子酸20份、阿魏酸10份，
一种具有改善卵巢功能减退功效的组合物，所述组合物由下列质量百分比的原料组成：芍药苷为30～70％，没食子酸为10～40％，阿魏酸为1～20％。
作为优选方案，以上所述的具有改善卵巢功能减退功效的组合物，所述组合物由下列质量百分比的原料组成：芍药苷为57.14％、没食子酸为28.57％、阿魏酸为14.29％。
一种具有改善卵巢功能减退功效的制剂，其特征在于：它包括芍药苷1～99份，没食子酸1～99份，阿魏酸1～99份。
作为优选方案，以上所述的具有改善卵巢功能减退功效的制剂，将上述中药组合物按照相应的重量份数混合，加入适量的载体后混匀，可制备药学上可接受的剂型，如注射剂、合剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、滴丸剂、贴剂和巴布剂等。
本发明提供的组合物可用于制备改善卵巢功能减退药物。所述的卵巢功能减退包括卵巢早衰、卵巢功能低下。
所述中药成分组合物的使用方法和使用剂量取决于多种因素，如患者的年龄、体重、健康状况、饮食以及病征的持续时间和严重程度等。
有益效果：本发明具有以下优点：
本发明通过大量实验筛选中药复方中的活性成分，优选出特定重量份数比的芍药苷40份、没食子酸20份、阿魏酸10份。实验结果表明本发明提供的组合物可有效改善卵巢功能减退模型大鼠的化合物组合组(H)能显著增加E2水平(P<0.05)，降低FSH水平。并且能改善大鼠卵巢组织形态，使闭锁卵泡减少，初级卵泡及次级卵泡数量增加，并可见较多的原始卵泡。并且能有效改善模型大鼠的激素水平及相关组织蛋白的表达。
附图说明
图1为大鼠卵巢组织形态比较(×100，HE染色)。注：圆圈为初级卵泡，空心三角为次级卵泡，实心三角为闭锁卵泡
图2为WB检测HIF-1α，p62,PINK1的相对表达。
具体实施方式
下面结合具体的实例阐述本发明的中药成分组合物及其作用。除特殊说明以外，下述实施例中的实验方法均为本领域技术人员所熟知的常规方法；所述试剂和实验材料均可从商业途径获得。
实施例1药效学试验
1、对卵巢功能减退大鼠的作用
1.1材料
中药成分组合物制备：取芍药苷40重量份、没食子酸20重量份和阿魏酸10重量份混合均匀。阳性药芬吗通片(Abbott，批号：363701)，雷公藤多苷片(浙江得恩德制药股份有限公司，批号：22021028)。SPF级雌性SD大鼠(体重200-220g)，购自南通大学，许可证号SYXK(苏)2019-0001。
1.2实验方法
1.2.1动物造模、分组及给药
SD大鼠随机分为空白组、阳性药组、中药成分组合物组。阳性组和中药成分组合物组，先造卵巢功能减退大鼠模型(参照文献方法：按50mg/kg雷公藤多苷连续灌胃15天，第16天开始，停止造模，同时开始给药，给药18天)。阳性药组按人剂量换算成大鼠剂量为0.13mg/kg，中药成分组合物组给药剂量为10ml/kg(每ml分别含芍药苷1mg,没食子酸0.5mg,阿魏酸0.25mg)，空白组给予生理盐水。末次给药后禁食不禁水12h，第35天，10％水合氯醛0.3ml/100g麻醉后，腹主动脉取血，静置1小时后，3000r/min离心10min，取上清血浆分装后，-80℃保存，供Elisa检测激素指标，取双侧卵巢，一个置于多聚甲醛组织固定液中保存，供石蜡包埋切片作HE染色观察，另一个-80℃保存，用于PCR，免疫组化及western-blot检测。
1.2.2卵巢激素水平的检测
所取大鼠血清样，按Elisa检测试剂盒操作(FSH，批号：L211230561；E2，批号：L220318861；LH，批号：L211228439；AMH，批号：L211201956，均购自武汉优尔生科技股份有限公司)。
1.2.3卵巢组织形态的观察
动物实验末，取大鼠卵巢组织，剔除脂肪后用组织固定液固定，经常规脱水后，石蜡包埋制片切片，HE染色，光学显微镜观察卵巢组织形态学变化。
1.2.4氧化应激相关蛋白的表达情况
应用蛋白提取试剂盒(thermo，美国)收集经处理的细胞并提取蛋白，以BCA蛋白定量试剂盒(thermo，美国)进行蛋白定量。取相同总量蛋白溶液以SDS-PAGE胶电泳分离，分离的蛋白质条带被转移至PVDF膜(Millipore，美国)，并以5％脱脂牛奶封闭。将PVDF膜置于HIF-1A、p62、PINK1的一抗稀释液中4℃孵育过夜，以磷酸盐缓冲液洗膜3次，再将膜置于连接辣根过氧化物酶的二抗稀释液中室温孵育2小时，一抗及二抗的稀释比按相应说明书，以磷酸盐缓冲液洗膜3次，再以ECL-Plus试剂盒按照说明书显色蛋白条带。每组独立进行3次实验。
1.3实验结果与讨论
1.3.1对大鼠卵巢激素水平的影响
与正常组(K)比较，造模后各组的E2(雌二醇)水平降低，FSH(卵泡刺激素)和LH(黄体生成素)水平均有不同程度增加，与模型组(M)比较，中药成分组合组(H)能显著增加E2水平(P<0.05)，降低FSH水平(P<0.05)。
表1大鼠血清性激素水平比较(n＝6,)
注：与正常组比较1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较3)P<0.05，4)P<0.011.3.2对大鼠卵巢组织形态的影响
如图1所示，正常组(K)大鼠卵巢可见不同发育阶段的卵泡(初级卵泡和次级卵泡)和黄体，模型组(M)卵巢组织卵泡大多闭锁，中药成分组合物组(H)闭锁卵泡减少，初级卵泡及次级卵泡数量增加，并可见较多的原始卵泡。
1.3.3对氧化应激相关蛋白表达的影响
实验结果显示(如图2所示)，中药成分组合物给药后能提高氧化应激相关蛋白(HIF-1α，p62，PINK1)的表达水平。
以上实验结果表明，本发明提供的中药成分组合物作用于卵巢功能减退模型大鼠，能有效改善模型大鼠的激素水平，卵巢组织状态以及相关组织蛋白的表达。
Claims (3)
1.一种具有改善卵巢功能减退功效的组合物，其特征在于，所述组合物由下述成分组成：芍药苷40份、没食子酸20份、阿魏酸10份。
2.权利要求1所述的组合物在制备改善卵巢功能减退药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的卵巢功能减退包括卵巢早衰、卵巢功能低下。
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Non-Patent Citations (2)
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| 中药干预女性促性腺激素分泌水平及相关调节机制的研究进展;周伯如等;中国中西医结合杂志;第37卷(第06期);759-762 * |
| 四物汤对小鼠离体子宫收缩模型的生物效应及物质基础评价研究;朱敏等;南京中医药大学学报;第24卷(第04期);245-247，附图2页 * |
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