CN115925783B - 一种谷胱甘肽粗提物、复合天然抗氧化剂、应用及提高鱼油货架期的方法 - Google Patents

一种谷胱甘肽粗提物、复合天然抗氧化剂、应用及提高鱼油货架期的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种谷胱甘肽粗提物、复合天然抗氧化剂、应用及提高鱼油货架期的方法，所述谷胱甘肽粗提物是通过酿酒酵母发酵获得的。利用所述的谷胱甘肽粗提物的用于延长鱼油货架期的复合天然抗氧化剂，所述抗氧化剂由以下成分组成：植酸、谷胱甘肽粗提物和迷迭香。本发明通过单因素试验和正交试验相结合的方式，筛选获得一种复合天然抗氧化剂，该抗氧化剂能够有效维持鱼油氧化稳定性，该抗氧化剂能够实现鱼油的货架期由15天延长至30天。

Description

一种谷胱甘肽粗提物、复合天然抗氧化剂、应用及提高鱼油货 架期的方法
技术领域
本发明属于谷胱甘肽生产技术领域，尤其是一种谷胱甘肽粗提物、复合天然抗氧化剂、应用及提高鱼油货架期的方法。
背景技术
传统上，谷胱甘肽生产方法是动植物组织中提取或者化学合成。然而动植物组织中谷胱甘肽含量较低，并且原料不易获得，易受地理位置，天气等客观因素的影响，不易大规模推广。尽管化学合成法生产谷胱甘肽的工艺已经比较成熟，但是化学合成法合成谷胱甘肽往往反应步骤多，操作过程复杂，副产物难以分离，并且往往需要在高温高压的极端环境下进行化学合成谷胱甘肽。而利用微生物发酵获得谷胱甘肽，不仅原料丰富，不易受外部环境影响，而且反应条件温和，是绿色、可持续的获得谷胱甘肽的策略。
另外，鱼油中含有多种多不饱和脂肪酸，其中典型的代表是二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）。DHA对大脑发育至关重要，尤其是婴幼儿时期。EPA有助于降低血液中的胆固醇和甘油三酯，预防心血管疾病。因此，日常饮食中经常摄取鱼油对人们的健康有积极的作用。
由于鱼油中含有多个双键，因此其容易发生氧化，进而破坏其风味、质地甚至营养价值。在制备鱼油食品时，通常需要添加抗氧化剂，以确保食品的氧化稳定性，延长其货架期。抗氧化剂通常分为：化学合成抗氧化剂和天然抗氧化剂。通常化学合成抗氧化剂被添加到食品中时，消费者往往担心其存在毒性，影响自身健康。因此天然抗氧化剂更容易被消费者接受。
尽管目前也有相关天然复合抗氧化剂被应用于油脂的抗氧化中，例如为了增强双低菜籽油抗氧化功效，发明的一种复配天然抗氧化剂，其组分包含迷迭香提取物（CN113388451A）；为了增强亚麻籽油的稳定性发明了一种复配天然抗氧化剂，其组分包含植酸（CN110326673A）。然而目前关于植酸、谷胱甘肽粗提物以及迷迭香复配的三种复合天然抗氧化在增强脂质抗氧化性的相关研究未见报道。尤其是本发明所涉及的谷胱甘肽提取物是源自微生物发酵后，通过热水浸提法获得的。这不仅降低了工业化成本，而且绿色、环保，是可持续发展的策略。
通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术上存在的问题，提供一种复合天然抗氧化剂提高鱼油货架期。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是：
一种谷胱甘肽粗提物，所述谷胱甘肽粗提物是通过酿酒酵母发酵获得的，具体包括如下步骤：
步骤（1）：从-80℃冰箱取保菌管中的酿酒酵母10 μL于YPD培养基，30℃，220 rpm摇床过夜培养；
步骤（2）：按照菌液初始OD600=0.2转接至新鲜的YPD培养基，30℃，220 rpm摇床培养48 h，收集菌液；
步骤（3）：将收集的菌液3,000 g离心5 min，弃上清，收集菌体；
步骤（4）：利用热水抽提法制备酿酒酵母细胞中谷胱甘肽，具体操作为：向收集的菌体中先加入常温去离子水，然后加入沸水；在90℃恒温锅中浸提10 min，并使用2 M HCl调pH为3-4，迅速转移至冰水中冷却10 min，7,000 rpm，离心30 min，取上清液，得到谷胱甘肽粗提物。
进一步地，所述酿酒酵母为酿酒酵母CEN.PK113-7D，该酿酒酵母CEN.PK113-7D自BioVector NTCC典型培养物保藏中心购买；
所述YPD培养基的配方为：葡萄糖：20 g/L，蛋白胨：20 g/L，酵母提取物：20 g/L；
所述摇床过夜培养为摇床过夜培养12 h-16 h；
上清液中谷胱甘肽的浓度为：0.020 mg/mL。
利用如上所述的谷胱甘肽粗提物的用于延长鱼油货架期的复合天然抗氧化剂，所述抗氧化剂由以下成分组成：植酸、谷胱甘肽粗提物和迷迭香。
进一步地，所述复合天然抗氧化剂使用后能够使鱼油的货架期由原来的15天延长至30天。
如上所述的复合天然抗氧化剂在延长鱼油货架期方面中的应用。
如上所述的复合天然抗氧化剂的使用方法，其特征在于：每千克鱼油制备过程中添加60 mg植酸，30 mg谷胱甘肽粗提物以及70 mg迷迭香，将鱼油和天然抗氧化剂充分混合溶解，装罐密封。
如上所述的复合天然抗氧化剂的筛选方法，包括如下步骤：
S1：天然抗氧化剂的制备，其中植酸和迷迭香购买于市场，谷胱甘肽粗提物来源于实验室酿酒酵母发酵获得；
S2：测定鱼油过氧化值：将在市场购买的未处理的鱼油进行称重且等质量的进行分装；鱼油和天然抗氧化剂充分混合溶解；装罐密封；最后测定不同储存时间鱼油的过氧化值；通过单因素试验和正交试验，比较不同储存天数的鱼油过氧化值，筛选获得了一种延长鱼油货架期的最优天然抗氧化剂组合。
进一步地，包括如下步骤：
步骤（1）：称重：
取天然的、未氢化且不含防腐剂的鱼油作为实验对象，按照每份鱼油100 g进行分装，在每份中添加单一/复合天然抗氧化剂置于临时储存罐，以作备用；
步骤（2）：充分溶解：
将上述步骤（1）所得混合物，置于磁力搅拌器，以转速1,200 rpm/min，充分搅拌10min，确保抗氧化剂完全溶于鱼油；
步骤（3）：装罐密封；
将充分溶解天然抗氧化剂的鱼油通过人工罐装的方式，定量罐装至棕色玻璃瓶，密封，保存于室温；
步骤（4）：测定不同储存时间的鱼油过氧化值。
进一步地，所述方法包括单因素试验：植酸10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg，谷胱甘肽粗提物10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg以及迷迭香10 mg/kg、20 mg/kg、30mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg。
进一步地，所述方法包括正交试验。正交试验包括三因素三水平，三因素为：植酸，谷胱甘肽粗提物和迷迭香；三水平：水平1：植酸50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg，水平2：谷胱甘肽粗提物20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg，水平3：迷迭香50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg。
本发明取得的有益效果是：
1、本发明以酿酒酵母为原料，对酿酒酵母摇瓶培养一定时间后，离心菌液，弃除上清，收集菌体。进一步利用热水抽提法获得酿酒酵母细胞中谷胱甘肽粗提物。这种利用微生物获得谷胱甘肽的策略，不仅原料成本低，而且不易受外部环境的影响，是一种绿色、可持续发展的策略。
2、本发明通过单因素试验和正交试验相结合的方式，筛选获得一种复合天然抗氧化剂，该抗氧化剂能够有效维持鱼油氧化稳定性，该抗氧化剂能够实现鱼油的货架期由15天延长至30天。
3、本发明天然抗氧化剂的最优配方为：植酸（60 mg/kg），谷胱甘肽粗提物（30 mg/kg）以及迷迭香（70 mg/kg）。此外，天然抗氧化剂的三种组分即植酸、谷胱甘肽粗提物和迷迭香之间具有协同增效作用，能够协同增效延长鱼油的货架期。
4、本发明筛选并制备了有效延长鱼油货架期的复合天然抗氧化剂配方。本发明操作简便易行，具有较强的普适应。
附图说明
图1为本发明中谷胱甘肽（GSH）标准曲线；
图2为本发明中由添加不同含量的天然抗氧化剂植酸测定鱼油不同存储时间过氧化值的结果图；
图3为本发明中由添加不同含量的天然抗氧化剂谷胱甘肽粗提物测定鱼油不同存储时间过氧化值的结果图；
图4为本发明中由添加不同含量的天然抗氧化剂迷迭香测定鱼油不同存储时间过氧化值的结果图；
图5为本发明中由一组对照组（未添加任何抗氧化剂）和9组试验组（三种天然抗氧化剂不同配比），测定鱼油不同存储时间过氧化值的结果图；
图6为本发明中探究三种天然抗氧化剂是否存在协同作用的检测图。
具体实施方式
为更好理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步地详细说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例所表示的范围。
本发明中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规市售产品，本发明中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域常规方法，本发明所使用的各物质质量均为常规使用质量。
一种谷胱甘肽粗提物，所述谷胱甘肽粗提物是通过酿酒酵母发酵获得的，具体包括如下步骤：
步骤（1）：从-80℃冰箱取保菌管中的酿酒酵母10 μL于YPD培养基，30℃，220 rpm摇床过夜培养；
步骤（2）：按照菌液初始OD600=0.2转接至新鲜的YPD培养基，30℃，220 rpm摇床培养48 h，收集菌液；
步骤（3）：将收集的菌液3,000 g离心5 min，弃上清，收集菌体；
步骤（4）：利用热水抽提法制备酿酒酵母细胞中谷胱甘肽，具体操作为：向收集的菌体中先加入常温去离子水，然后加入沸水；在90℃恒温锅中浸提10 min，并使用2 M HCl调pH为3-4，迅速转移至冰水中冷却10 min，7,000 rpm,离心30 min，取上清液，得到谷胱甘肽粗提物。
较优地，所述酿酒酵母为酿酒酵母CEN.PK113-7D；
所述YPD培养基的配方为：葡萄糖：20 g/L，蛋白胨：20 g/L,酵母提取物：20 g/L；
所述摇床过夜培养为摇床过夜培养12 h-16 h；
上清液中谷胱甘肽的浓度为：0.020 mg/mL。
利用如上所述的谷胱甘肽粗提物的用于延长鱼油货架期的复合天然抗氧化剂，所述抗氧化剂由以下成分组成：植酸、谷胱甘肽粗提物和迷迭香。
较优地，所述复合天然抗氧化剂使用后能够使鱼油的货架期由原来的15天延长至30天。
如上所述的复合天然抗氧化剂在延长鱼油货架期方面中的应用。
如上所述的复合天然抗氧化剂的使用方法，其特征在于：每千克鱼油制备过程中添加60 mg植酸，30 mg谷胱甘肽粗提物以及70 mg迷迭香，将鱼油和天然抗氧化剂充分混合溶解，装罐密封。
如上所述的复合天然抗氧化剂的筛选方法，包括如下步骤：
S1：天然抗氧化剂的制备，其中植酸和迷迭香购买于市场，谷胱甘肽粗提物来源于实验室酿酒酵母发酵获得；
S2：测定鱼油过氧化值：将在市场购买的未处理的鱼油进行称重且等质量的进行分装；鱼油和天然抗氧化剂充分混合溶解；装罐密封；最后测定不同储存时间鱼油的过氧化值；通过单因素试验和正交试验，比较不同储存天数的鱼油过氧化值，筛选获得了一种延长鱼油货架期的最优天然抗氧化剂组合。
较优地，包括如下步骤：
步骤（1）：称重：
取天然的、未氢化且不含防腐剂的鱼油作为实验对象，按照每份鱼油100 g进行分装，在每份中添加单一/复合天然抗氧化剂置于临时储存罐，以作备用；
步骤（2）：充分溶解：
将上述步骤（1）所得混合物，置于磁力搅拌器，以转速1,200 rpm/min，充分搅拌10min，确保抗氧化剂完全溶于鱼油；
步骤（3）：装罐密封；
将充分溶解天然抗氧化剂的鱼油通过人工罐装的方式，定量罐装至棕色玻璃瓶，密封，保存于室温；
步骤（4）：测定不同储存时间的鱼油过氧化值。
较优地，所述方法包括单因素试验：植酸10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg，谷胱甘肽粗提物10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg以及迷迭香10 mg/kg、20 mg/kg、30mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg。
较优地，所述方法包括正交试验。正交试验包括三因素三水平，三因素为：植酸，谷胱甘肽粗提物和迷迭香；三水平：水平1：植酸50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg，水平2：谷胱甘肽粗提物20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg，水平3：迷迭香50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg。
具体地，相关的制备及检测如下：
实施例1
一种谷胱甘肽粗提物，所述谷胱甘肽粗提物是通过酿酒酵母发酵获得的，具体包括如下步骤：
步骤（1）：从-80℃冰箱取保菌管中的酿酒酵母CEN.PK113-7D 10 μL于5 mL YPD培养基（葡萄糖：20 g/L,蛋白胨：20 g/L,酵母提取物：20 g/L），30℃，220 rpm摇床过夜（12h-16 h）培养；
步骤（2）：按照初始OD600=0.2转接至50 mL新鲜的YPD培养基，30℃，220 rpm摇床培养48 h，收集菌液；
步骤（3）：将收集的菌液3,000 g离心5 min，弃上清，收集菌体；
步骤（4）：利用热水抽提法获得酿酒酵母细胞中谷胱甘肽（GSH）。具体操作为：将收集的菌体装入一个250 mL的烧杯中，先加入15 mL常温去离子水，然后加入30 mL沸水；在90℃恒温锅中浸提10 min，并使用2 M HCl调pH=3-4，迅速转移至冰水中冷却10 min，7,000rpm,离心30 min，取上清液，得到谷胱甘肽粗提物，备用。
步骤（5）：制作GSH标准曲线；
步骤（6）：利用分光光度计，在吸光度为412 nm处测定酿酒酵母中提取的谷胱甘肽粗提物；作为原料，添加至鱼油中
其中，制备GSH标准曲线具体为：配制：0.08mg/mL GSH标准溶液，DTNB溶液（50mmol/L Na2HPO4，2mmol/L DTNB），Tris-HCL缓冲溶液（1 moI/L，pH=8.0）。按照表1依次加入，在混合器中混合后，室温静置5 min，在412 nm处测定吸光值，如图1所示。标准曲线y=46.238x-0.0182，R2=0.9992。
进一步对上清液即谷胱甘肽粗提物用水稀释两倍，测定OD412=0.456，即上清液中谷胱甘肽的浓度为：0.020 mg/mL。
筛选一种用于延长鱼油食品货架期最优的复合抗氧化剂方法，包括以下步骤：
步骤（1），称重：
市场上购买天然的、未氢化且不含防腐剂的鱼油作为实验对象。按照每份鱼油100g进行分装。在每份中添加单一/复合天然抗氧化剂至于临时储存罐，以作备用；
步骤（2），充分溶解：
将上述步骤（1）所得混合物，置于磁力搅拌器，以转速300 rpm/min，充分搅拌10min。确保抗氧化剂完全溶于鱼油。
步骤（3），装罐密封；
将充分溶解天然抗氧化剂的鱼油通过人工罐装的方式，定量罐装至棕色玻璃瓶，密封，保存于室温。
其中，食品过氧化值的理化指标根据GB 15196-2015。过氧化值应≤0.10（以脂肪计，g/100g）。
筛选最优复合天然抗氧化剂，包括单因素试验：植酸（10 mg/kg，20 mg/kg, 30mg/kg，40 mg/kg, 50 mg/kg, 60 mg/kg, 70 mg/kg, 80 mg/kg）, 谷胱甘肽粗提物（10mg/kg，20 mg/kg, 30 mg/kg，40 mg/kg，50 mg/kg，60 mg/kg，70 mg/kg，80 mg/kg)以及迷迭香（10 mg/kg，20 mg/kg，30 mg/kg，40 mg/kg，50 mg/kg，60 mg/kg，70 mg/kg，80 mg/kg）。
筛选最优复合天然抗氧化剂，包括正交试验的三因素三水平。三因素：植酸，谷胱甘肽粗提物和迷迭香。三水平：水平1：植酸（50 mg/kg，60 mg/kg，70 mg/kg），水平2：谷胱甘肽粗提物（20 mg/kg，30 mg/kg，40 mg/kg），水平3：迷迭香（50 mg/kg，60 mg/kg，70 mg/kg）。
具体地，相关实施例如下：
实施例2
单因素试验筛选天然抗氧化剂最优的添加量，根据国标GB 5009.227-2016食品过氧化值测定的方法，对添加了不同含量天然抗氧化剂植酸的鱼油，在相应的存放时间点进行取样测定。包括植酸（10 mg/kg，20 mg/kg，30 mg/kg，40 mg/kg，50 mg/kg，60 mg/kg, 70mg/kg，80 mg/kg）。测定过氧化值的时间点为鱼油密封常温存放15天，20天，25天，30天，35天。每组试验测定三个平行样。
实施例3
单因素试验筛选天然抗氧化剂最优的添加量，根据国标GB 5009.227-2016食品过氧化值测定的方法，对添加了不同含量天然抗氧化剂谷胱甘肽粗提物的鱼油，在相应的存放时间点进行取样测定。包括谷胱甘肽（10 mg/kg，20 mg/kg，30 mg/kg，40 mg/kg，50 mg/kg，60 mg/kg, 70 mg/kg，80 mg/kg)。测定过氧化值的时间点为鱼油密封常温存放15天，20天，25天，30天，35天。每组试验测定三个平行样。
实施例4
单因素试验筛选天然抗氧化剂最优的添加量，根据国标GB 5009.227-2016食品过氧化值测定的方法，对添加了不同含量天然抗氧化剂迷迭香的鱼油，在相应的存放时间点进行取样测定。包括迷迭香（10 mg/kg，20 mg/kg，30 mg/kg，40 mg/kg，50 mg/kg，60 mg/kg, 70 mg/kg，80 mg/kg）。测定过氧化值的时间点为鱼油密封常温存放15天，20天，25天，30天，35天。每组试验测定三个平行样。
实施例5
正交因素试验筛选天然抗氧化剂最优的添加量，根据国标GB 5009.227-2016食品过氧化值测定的方法，对添加不同复合天然抗氧化剂鱼油，在相应的存放时间点进行取样测定。包括三因素（植酸，谷胱甘肽和迷迭香），三水平：水平1：植酸（50 mg/kg，60 mg/kg，70mg/kg），水平2：谷胱甘肽粗提物（20 mg/kg，30 mg/kg，40 mg/kg），水平3：迷迭香（50 mg/kg，60 mg/kg，70 mg/kg）。测定过氧化值的时间点为鱼油密封常温存放15天，20天，25天，30天，35天。
为了验证三种组分是否存在协同效应，设计了一个实施例6和三个对比例试验。
实施例6中使用前期筛选获得的最优复合天然抗氧化剂配方：植酸（60 mg/kg），谷胱甘肽粗提物（30 mg/kg）以及迷迭香（70 mg/kg）；
提高鱼油货架期的方法为：
每千克鱼油制备过程中添加60 mg植酸，30 mg谷胱甘肽粗提物以及70 mg迷迭香，将鱼油和天然抗氧化剂充分混合溶解，装罐密封。
三个对比例即对比例1、对比例2、对比例3，3个对比例与实施例6相同，不同之处在于：
对比例1中谷胱甘肽粗提物（30 mg/kg），迷迭香（70 mg/kg），不添加植酸；对比例2中植酸（60 mg/kg），迷迭香（70 mg/kg），不添加谷胱甘肽粗提物；对比例3中植酸（60 mg/kg），谷胱甘肽粗提物（30 mg/kg），不添加迷迭香。测定鱼油储存时间，判定三种组分是否存在协同增效作用。
相关检测结果如下：
根据图2所示，添加不同含量的植酸，鱼油在储存20天时，除了对照组和添加20mg/kg植酸的试验组以外，其余实验组鱼油的过氧化值≤10 g/100 g，即在货架期内。然而当鱼油保存25天时，仅有5组实验组鱼油的过氧化值≤10 g/100 g，选择三组过氧化值最小的实验组用于后续正交实验（植酸添加量：50 mg/kg，60 mg/kg，70 mg/kg）。
根据图3所示，添加不同含量的谷胱甘肽粗提物，鱼油在储存20天时，除了对照组和添加80 mg/kg谷胱甘肽粗提物的试验组以外，其余实验组鱼油的过氧化值≤10 g/100g，即在货架期内。当鱼油保存25天时，仅有3组实验组鱼油的过氧化值≤10 g/100 g，选择这三组实验组用于后续正交实验（谷胱甘肽添加量：20 mg/kg，30 mg/kg，40 mg/kg）。
根据图4所示，添加不同含量的迷迭香，鱼油在储存20天时，除了对照组和添加80mg/kg迷迭香的试验组以外，其余实验组鱼油的过氧化值≤10 g/100 g，即在货架期内。当鱼油保存25天时，仅有3组实验组鱼油的过氧化值≤10 g/100 g，选择这三组实验组被用于后续正交实验（迷迭香添加量：50 mg/kg，60 mg/kg，70 mg/kg）。
根据单因素试验结果，确定了正交试验的三因素和三水平，见表2。
设计正交试验，如表3所示。
正交试验结果如图5所示。在鱼油储存25天时，除了对照组（不添加任何抗氧化剂），其余试验组鱼油的过氧化值≤10 g/100g。鱼油在储存30天时，试验5鱼油的过氧化值为8.67 g/100 g（≤10 g/100g）。
本发明结合单因素试验和正交试验，筛选了一组复合天然抗氧化剂（植酸：60 g/kg，谷胱甘肽粗提物：30 g/kg，迷迭香：70 g/kg）。
结果表明，在未添加抗氧化剂时，鱼油货架期仅为15天。本发明的复合天然抗氧化剂鱼油的货架期为30天，提高2倍。
本发明为了进一步探究三种天然抗氧化剂是否存在协同作用，试验结果如图6所示，从图6中可以看出，在鱼油储存25天时，实施例6中鱼油的过氧化值仅为5.33 g/100 g。而对比例1-3中鱼油的过氧化值范围在10 g/100 g - 11 g/100 g，其过氧化值高于实施例6中的数值。在鱼油储存30天时，仅有实施例6中鱼油的过氧化值仅为8.33 g/100 g（＜10g/100 g）。由此可以看出，每千克鱼油制备过程中添加的60 mg植酸、30 mg谷胱甘肽粗提物以及70 mg迷迭香三者之间具有协同作用，能够协同增效延长鱼油的货架期。
本发明未添加抗氧化剂和添加最优抗氧化剂，鱼油货架期提高2倍。由此可见，本发明制备的复合天然抗氧化剂可以较优的延长鱼油等脂类食品的货架期。
目前，现有技术中专利申请号CN201510343543.8公开一种用天然抗氧剂提高食用植物油或鱼油抗氧化性能的方法。专利申请号CN201911372196.6公开一种含天然抗氧化剂组合物的鱼油微囊粉及其制备方法。这两篇专利公开文献虽然均在一定程度上提高了鱼油的抗氧化性，延长了其货架期。但是相对于本发明直接将天然抗氧化剂加入鱼油中，充分搅拌后混合密封保存还是操作流程较为复杂。因此，本发明为鱼油生产加工中延长其货架期提供了一种重复性高及简单方便的一种方法。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例所公开的内容。

Claims (6)

1.一种用于延长鱼油货架期的复合天然抗氧化剂，其特征在于：复合天然抗氧化剂的配方为：植酸60 mg/kg鱼油，谷胱甘肽粗提物30 mg/kg鱼油以及迷迭香70 mg/kg鱼油；
延长鱼油货架期的方法为：
每千克鱼油制备过程中添加60 mg植酸，30 mg谷胱甘肽粗提物以及70 mg迷迭香，将鱼油和天然抗氧化剂充分混合溶解，装罐密封；
所述谷胱甘肽粗提物是通过酿酒酵母发酵获得的，具体包括如下步骤：
步骤（1）：从-80℃冰箱取保菌管中的酿酒酵母CEN.PK113-7D 10 μL于5 mL YPD培养基30℃、220 rpm摇床过夜培养12 h-16 h；所述 YPD培养基的配方为：葡萄糖：20 g/L，蛋白胨：20 g/L,酵母提取物：20 g/L；
步骤（2）：按照初始OD600=0.2转接至50 mL新鲜的YPD培养基，30℃、220 rpm摇床培养48h，收集菌液；
步骤（3）：将收集的菌液在3000×g离心5 min，弃上清，收集菌体；
步骤（4）：利用热水抽提法获得酿酒酵母细胞中谷胱甘肽GSH，具体操作为：将收集的菌体装入一个250 mL的烧杯中，先加入15 mL常温去离子水，然后加入30 mL沸水；在90℃恒温锅中浸提10 min，并使用2 M HCl调pH=3-4，迅速转移至冰水中冷却10 min，7000 rpm离心30 min，取上清液，得到谷胱甘肽粗提物，备用；
所述复合天然抗氧化剂使用后能够使鱼油的货架期由原来的15天延长至30天。
2.如权利要求1所述的复合天然抗氧化剂在延长鱼油货架期中的应用。
3.如权利要求1所述的用于延长鱼油货架期的复合天然抗氧化剂的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1：天然抗氧化剂的制备，其中植酸和迷迭香购买于市场，谷胱甘肽粗提物来源于酿酒酵母发酵获得；
S2：测定鱼油过氧化值：将在市场购买的未处理的鱼油进行称重且等质量的进行分装；鱼油和天然抗氧化剂充分混合溶解；装罐密封；最后测定不同储存时间鱼油的过氧化值；通过单因素试验和正交试验，比较不同储存天数的鱼油过氧化值，筛选获得所述用于延长鱼油货架期的复合天然抗氧化剂。
4.根据权利要求3所述的复合天然抗氧化剂的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤（1）：称重：
取天然的、未氢化且不含防腐剂的鱼油作为实验对象，按照每份鱼油100 g进行分装，在每份中添加单一/复合天然抗氧化剂置于临时储存罐，以作备用；
步骤（2）：充分溶解：
将上述步骤（1）所得混合物，置于磁力搅拌器，以转速1200 rpm，充分搅拌10 min，确保抗氧化剂完全溶于鱼油；
步骤（3）：装罐密封：
将充分溶解天然抗氧化剂的鱼油通过人工灌装的方式，定量灌装至棕色玻璃瓶，密封，保存于室温；
步骤（4）：测定不同储存时间的鱼油过氧化值。
5.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于：所述单因素试验为：植酸10 mg/kg鱼油、20 mg/kg鱼油、30 mg/kg鱼油、40 mg/kg鱼油、50 mg/kg鱼油、60 mg/kg鱼油、70 mg/kg鱼油、80 mg/kg鱼油，谷胱甘肽粗提物10 mg/kg鱼油、20 mg/kg鱼油、30 mg/kg鱼油、40 mg/kg鱼油、50 mg/kg鱼油、60 mg/kg鱼油、70 mg/kg鱼油、80 mg/kg鱼油以及迷迭香10 mg/kg鱼油、20 mg/kg鱼油、30 mg/kg鱼油、40 mg/kg鱼油、50 mg/kg鱼油、60 mg/kg鱼油、70 mg/kg鱼油、80 mg/kg鱼油。
6.根据权利要求3至5任一项所述的筛选方法，其特征在于：所述正交试验为：正交试验包括三因素三水平，三因素为：植酸、谷胱甘肽粗提物和迷迭香；三水平为：植酸50 mg/kg鱼油、60 mg/kg鱼油、70 mg/kg鱼油，谷胱甘肽粗提物20 mg/kg鱼油、30 mg/kg鱼油、40 mg/kg鱼油，迷迭香50 mg/kg鱼油、60 mg/kg鱼油、70 mg/kg鱼油。
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