CN115920128A - 注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂及其制备方法,该面部填充剂包括辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球。该制备方法包括:步骤一、将无水乙醇滴加到人血白蛋白溶液中,加入1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液后搅拌,离心,分散,离心洗涤,冷冻干燥,得到人血白蛋白微球;步骤二、无菌条件下,将人血白蛋白微球和重组胶原蛋白溶解于磷酸缓冲液中后经钴60或电子加速器辐照交联,得到注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂。本发明的面部填充剂可实现延长重组胶原蛋白凝胶的降解、达到长效填充的效果。
Description
技术领域
本发明属于美容填充材料技术领域,具体涉及注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂及其制备方法。
背景技术
胶原蛋白和弹性蛋白是人皮肤真皮层和一些皮下组织的重要组成成分,随着年龄的增长,胶原蛋白和弹性蛋白的含量逐年递减,既可能降低真皮层的厚度和弹性,引起皱纹的出现,又会加剧皮肤的松弛。此外,由手术切除、严重创伤、先天性疾病等导致的面部凹陷或畸形给患者的日常生活、事业和心理健康带来了很大的负面影响,如何美化容颜、延缓衰老一直是人类不断探求和解决的问题。
通过注射美容整形用面部填充剂可有效的解决上述问题,目前常用的可注射软组织填充物可分为三类:替代型填充物比如胶原蛋白或透明质酸、半永久型填充物比如可降解生物材料和永久型填充物比如聚甲基丙烯酸甲酯、有机硅或甲基丙烯酸羟乙酯。其中替代型填充物安全性高,但在体内降解速度快,持续时间很短,通常只有3-6个月;永久型填充物只需一次注射即可产生长期效果,但是在体内不能完全降解且不能被人体组织完全吸收,常与不良事件相关,而永久型填充物往往具有安全性不高实用度较差的缺陷。
提供一种基于可降解且安全、有效、实用的半永久型软组织填充材料是解决目前填充难题的关键。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足,提供注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂及其制备方法,该面部填充剂含有通过钴60或电子加速器辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球,相对于物理混合,二者之间形成酰胺键,实现延长重组胶原蛋白凝胶的降解、达到长效填充的效果。同时,人血白蛋白微球作为一种刺激物,会使得填充部位先发生急性炎症反应随后转变为慢性炎症反应,在此过程中单核细胞、巨噬细胞和成纤维细胞积聚,形成纤维囊,微球降解且纤维囊沉积,实现利用自体胶原蛋白填充的目的。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,其特征在于,包括辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球。
本发明还提供一种制备注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的方法,其特征在于,
步骤一、将无水乙醇滴加到pH为8.2~8.5的人血白蛋白溶液中,加入 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液后搅拌,离心,将离心所得沉淀物分散于磷酸盐缓冲液中,离心洗涤,冷冻干燥,得到人血白蛋白微球;
步骤二、提供注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,具体包括:
步骤201、无菌条件下,将所述人血白蛋白微球和重组胶原蛋白溶解于磷酸缓冲液中,得到体系A;
步骤202、将所述体系A辐照交联,得到注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂;所述辐照交联为经钴60辐照交联或电子加速器辐照交联。
上述的方法,其特征在于,步骤一中,所述无水乙醇的体积为人血白蛋白溶液的4~6倍。
上述的方法,其特征在于,步骤一中,所述无水乙醇体积为1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液体积的20倍~40倍;所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的浓度为2mg/mL~5mg/mL。
上述的方法,其特征在于,步骤一中,所述离心速率为 5000rpm~8000rpm。
上述的方法,其特征在于,步骤201中,所述体系A中人血白蛋白微球浓度为1.25mg/mL~5mg/mL,重组胶原蛋白浓度为20mg/mL~80mg/mL。
上述的方法,其特征在于,步骤202中,所述辐照强度为 10kgy~100kgy。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明提供一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,该面部填充剂含有通过钴60或电子加速器辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球,相对于物理混合,二者之间形成酰胺键,实现延长重组胶原蛋白凝胶的降解、达到长效填充的效果。同时,人血白蛋白微球作为一种刺激物,会使得填充部位先发生急性炎症反应随后转变为慢性炎症反应,在此过程中单核细胞、巨噬细胞和成纤维细胞积聚,形成纤维囊,微球降解且纤维囊沉积,实现利用自体胶原蛋白填充的目的。
2、本发明提供一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,以重组胶原蛋白为基质,相比动物源胶原蛋白,具有免疫原性低、生物相容性高且可以促进细胞增殖的特点。
3、本发明提供一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的制备方法,包括制备得到人血白蛋白微球以及将所述人血白蛋白微球重组胶原蛋白的磷酸缓冲液经辐照交联,可有效实现人血白蛋白微球与重组胶原蛋白通过酰胺键交联,安全性更高,且可实现长效填充。
下面结合附图和实施例,对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
图1为实施例3的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的外观。
图2为实施例3的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂扫描电镜图。
图3为实施例3的人血白蛋白微球的扫描电镜图。
图4为实施例3的人血白蛋白微球的透射电镜图。
图5为通过激光粒度仪对实施例3的人血白蛋白微球粒径测定结果。
图6为实施例1~3的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂对细胞活力影响示意图。
图7为交联剂EDC残留测定的标准曲线图。
具体实施方式
以下实施例中,所述重组胶原蛋白为大分子I型重组胶原蛋白,所述重组胶原蛋白由来自天然人I型胶原蛋白的短氨基酸序列作为重复单元进行多次重复而构成,其中,所述短氨基酸序列如SEQ ID No.:1(G A P G A P G S Q G A P G L Q)所示,重复次数为52次,该胶原蛋白具有良好水溶性,分子量为78862Da。
所述人血白蛋白为医药级人血白蛋白,购自博雅生物制药集团股份有限公司。
实施例1
本实施例提供一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,所述面部填充剂包括辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球。该面部填充剂含有通过钴60或电子加速器辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球,相对于物理混合,二者之间形成酰胺键,实现延长重组胶原蛋白凝胶的降解、达到长效填充的效果。同时,人血白蛋白微球作为一种刺激物,会使得填充部位先发生急性炎症反应随后转变为慢性炎症反应,在此过程中单核细胞、巨噬细胞和成纤维细胞积聚,形成纤维囊,微球降解且纤维囊沉积,实现利用自体胶原蛋白填充的目的。
本实施例提供一种制备上述注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的方法,具体包括:
步骤一、提供人血白蛋白微球,具体包括:
步骤101、向5mL人血白蛋白水溶液中加入NaOH溶液,至pH为8.2;所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量百分含量为2%wt,所述NaOH 溶液的浓度可以为0.5M;
步骤102、搅拌条件下,将20mL无水乙醇逐滴加入步骤101调节pH 后人血白蛋白溶液中,加入1mL的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液,搅拌3h;所述搅拌的速率为600rpm;1-乙基-(3-二甲基氨基丙基) 碳酰二亚胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的浓度为 3mg/mL;
步骤103、将搅拌后体系离心,得到沉淀物;所述离心速率为8000rpm,离心时间为1min;
步骤104、将所述沉淀物分散于10mL磷酸盐缓冲液中,离心,洗涤,得到悬浮液;所述磷酸盐缓冲液pH为7.0,所述磷酸缓冲液为将18mg磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤105、真空冷冻干燥所述悬浮液,得到人血白蛋白微球;所述真空冷冻干燥的温度为-25℃,时间为72h,真空度为28Kpa;
步骤二、提供注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,具体包括:
步骤201、无菌条件下,将所述人血白蛋白微球和重组胶原蛋白溶解于磷酸缓冲液中,得到体系A;所述体系A中人血白蛋白微球浓度为 1.25mg/mL,重组胶原蛋白浓度为20mg/mL;所述磷酸缓冲液为将18mg 磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤202、将所述体系A经钴60辐照交联,得到注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂;所述辐照强度为30kgy,辐照的时间为30min。
实施例2
本实施例提供一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,所述面部填充剂包括辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球。
本实施例提供一种制备上述注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的方法,具体包括:
步骤一、提供人血白蛋白微球,具体包括:
步骤101、向10mL人血白蛋白水溶液中加入NaOH溶液,至pH为8.4;所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量百分含量为2%wt,所述 NaOH溶液的浓度可以为1M;
步骤102、搅拌条件下,将40mL无水乙醇逐滴加入步骤101调节pH 后人血白蛋白溶液中,加入1mL的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液,搅拌3h;所述搅拌的速率为600rpm;1-乙基-(3-二甲基氨基丙基) 碳酰二亚胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的浓度为 5mg/mL;
步骤103、将搅拌后体系离心,得到沉淀物;所述离心速率为5000rpm,离心时间为1min;
步骤104、将所述沉淀物分散于10mL磷酸盐缓冲液中,离心,洗涤,得到悬浮液;所述磷酸盐缓冲液pH为7.0,所述磷酸缓冲液为将18mg磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤105、真空冷冻干燥所述悬浮液,得到人血白蛋白微球;所述真空冷冻干燥的温度为-25℃,时间为72h,真空度为28Kpa;
步骤二、提供注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,具体包括:
步骤201、无菌条件下,将所述人血白蛋白微球和重组胶原蛋白溶解于磷酸缓冲液中,得到体系A;所述体系A中人血白蛋白微球浓度为 2.5mg/mL,重组胶原蛋白浓度为30mg/mL;所述磷酸缓冲液为将18mg 磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤202、将所述体系A经钴60辐照交联,得到注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂;所述辐照强度为50kgy,辐照的时间为30min。
实施例3
本实施例提供一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,所述面部填充剂包括辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球。
本实施例提供一种制备上述注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的方法,具体包括:
步骤一、提供人血白蛋白微球,具体包括:
步骤101、向5mL人血白蛋白水溶液中加入NaOH溶液,至pH为8.5;所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量百分含量为2%wt,所述NaOH 溶液的浓度可以为0.5M;
步骤102、搅拌条件下,将30mL无水乙醇逐滴加入步骤101调节pH 后人血白蛋白溶液中,加入1mL的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液,搅拌3h;所述搅拌的速率为600rpm;1-乙基-(3-二甲基氨基丙基) 碳酰二亚胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的浓度为 2mg/mL;
步骤103、将搅拌后体系离心,得到沉淀物;所述离心速率为6000rpm,离心时间为1min;
步骤104、将所述沉淀物分散于10mL磷酸盐缓冲液中,离心,洗涤,得到悬浮液;所述磷酸盐缓冲液pH为7.0,所述磷酸缓冲液为将18mg磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤105、真空冷冻干燥所述悬浮液,得到人血白蛋白微球;所述真空冷冻干燥的温度为-25℃,时间为72h,真空度为28Kpa;
步骤二、提供注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,具体包括:
步骤201、无菌条件下,将所述人血白蛋白微球和重组胶原蛋白溶解于磷酸缓冲液中,得到体系A;所述体系A中人血白蛋白微球浓度为 5mg/mL,重组胶原蛋白浓度为40mg/mL;所述磷酸缓冲液为将18mg磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤202、将所述体系A经电子加速器辐照交联,得到注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂;所述辐照强度为60kgy,辐照的时间为30min。
性能评价:
图1为实施例3的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的外观,图2为其扫描电镜图。结合图1和图2可见,该面部填充剂呈乳白色凝胶状,内部呈现多孔状结构。
图3为实施例3的人血白蛋白微球的扫描电镜图。图4为实施例3的人血白蛋白微球的透射电镜图。图5为通过激光粒度仪对实施例3的人血白蛋白微球粒径测定结果。根据图3~5可知,本实施例的人血白蛋白微球呈规整球型,粒径范围在1~100μm。
图6为实施例1~3的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂对细胞活力影响示意图。其测试方法为CCK-8法。首先依据 GB/T16886.5-2003/ISO 10993-5:199,将所述面部填充剂配置得到浸提液,将细胞接种于96孔板上(接种密度为1×104个/孔)后,将实施例1~3对应浸提液分别加入到对应孔板中进行培养(100μL/孔)的作为实验组,将1640培养液加入对应孔板的作为对照组,只含1640培养液不接种细胞的作为空白组;将实验组、对照组和空白组放入培养箱恒温培养24h后,每孔中加入10μL的CCK-8,于37℃孵育3h后用酶标仪检测各孔在波长450nm处的吸光度(OD)值,结果如图6所示。
细胞相对活力(Relative Cell Growth)计算公式:
根据图6可见,各组细胞相对增殖率均在150%以上,根据《美国药典》毒性分级法,实施例1~3的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂细胞毒性评级均为0级。表明本发明的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂没有细胞毒性,同时可以在一定程度上促进细胞的生长和增殖,具有良好的细胞相容性。
对实施例1~3的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂交联剂EDC残留量检测结果显示,碳二亚胺残留量低于10μmol/L,符合《中国药典》2020 标准。其测试方法包括:
步骤一、样品的制备:将胰酶置于注射用水中配制得到2mg/ml的胰酶溶液,将0.2mL胰酶溶液分别与0.2mL实施例1~3的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂混合,于37℃放置24h,使得填充剂中的蛋白凝胶被胰酶消化为溶于水的肽段,得到消化后填充剂体系;
步骤二、将1g二甲基巴比妥酸溶于16mL吡啶中,加水至20mL,混匀,得到二甲基巴比妥酸试液:
步骤三、将冰醋酸和吡啶等体积混合,得到醋酸吡啶溶液;
步骤四、配制碳二亚胺对照品贮备液,具体包括:称取0.0192g碳二亚胺,以水溶解并定容至100mL,取1mL定容后溶液于10mL量瓶中,加水定容,得到碳二亚胺对照品贮备液;所述碳二亚胺对照品贮备液的浓度为 100μmol/L;
步骤五、配制碳二亚胺对照品工作液,具体包括:取100μmol/L碳二亚胺对照品贮备液,用水分别稀释至10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L 和80μmol/L,得到碳二亚胺对照品工作液;
步骤六、向0.2mL步骤一的消化后填充剂体系中加入1.8mL二甲基巴比妥酸试液作为试验组,以加入1.8mL二甲基巴比妥酸试液的碳二亚胺对照品工作液作为标准品组,将试验组和标准品组于室温条件下暗处静置30分钟,加入2.0mL醋酸吡啶溶液,混匀,测定波长599nm处吸光度;对照组为0.2mL 水;
步骤七、结果计算:以碳二亚胺对照品工作液的浓度对其相应的吸光度作直线回归,求得直线回归方程,将试验组的吸光度代入直线回归方程,求出含量,取其平均值;样品液碳二亚胺残留量(μmol/L)=样品液溶液碳二亚胺的平均浓度×稀释倍数;
计算结果显示,实施例1、2、3碳二亚胺的残留量的吸光度平均数分别为0.0502、0.0536和0.0636,对照组吸光度平均数为0.0452,根据交联剂EDC 残留测定的标准曲线图(图7)确定标准EDC浓度与吸光度之间的关系为 y=0.0027x-0.0002,相关系数R2为0.9998,将样品的吸光度带入标准曲线,计算可得其碳二亚胺残留量分别为1.9259、3.1852、6.8889μmol/L,《中国药典》2020版三部预防类b型流感嗜血杆菌结合疫苗的规定的N.Wilchek方法测定碳二亚胺残留量应低于10μmol/L,本发明的填充剂EDC残留量符合规定。
实施例4
本实施例提供一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,所述面部填充剂包括辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球。
本实施例提供一种制备上述注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的方法,具体包括:
步骤一、提供人血白蛋白微球,具体包括:
步骤101、向5mL人血白蛋白水溶液中加入NaOH溶液,至pH为8.5;所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量百分含量为2%wt,所述NaOH 溶液的浓度可以为0.5M;
步骤102、搅拌条件下,将30mL无水乙醇逐滴加入步骤101调节pH 后人血白蛋白溶液中,加入1mL的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液,搅拌3h;所述搅拌的速率为600rpm;1-乙基-(3-二甲基氨基丙基) 碳酰二亚胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的浓度为 2.5mg/mL;
步骤103、将搅拌后体系离心,得到沉淀物;所述离心速率为6000rpm,离心时间为1min;
步骤104、将所述沉淀物分散于10mL磷酸盐缓冲液中,离心,洗涤,得到悬浮液;所述磷酸盐缓冲液pH为7.0,所述磷酸缓冲液为将18mg磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤105、真空冷冻干燥所述悬浮液,得到人血白蛋白微球;所述真空冷冻干燥的温度为-25℃,时间为72h,真空度为28Kpa;
步骤二、提供注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,具体包括:
步骤201、无菌条件下,将所述人血白蛋白微球和重组胶原蛋白溶解于磷酸缓冲液中,得到体系A;所述体系A中人血白蛋白微球浓度为 5mg/mL,重组胶原蛋白浓度为80mg/mL;所述磷酸缓冲液为将18mg磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤202、将所述体系A经电子加速器辐照交联,得到注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂;所述辐照强度为10kgy,辐照的时间为30min。
本实施例的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂与实施例3性能基本一致。
实施例5
本实施例提供一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,所述面部填充剂包括辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球。
本实施例提供一种制备上述注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的方法,具体包括:
步骤一、提供人血白蛋白微球,具体包括:
步骤101、向5mL人血白蛋白水溶液中加入NaOH溶液,至pH为8.5;所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量百分含量为2%wt,所述NaOH 溶液的浓度可以为0.5M;
步骤102、搅拌条件下,将30mL无水乙醇逐滴加入步骤101调节pH 后人血白蛋白溶液中,加入1mL的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液,搅拌3h;所述搅拌的速率为600rpm;1-乙基-(3-二甲基氨基丙基) 碳酰二亚胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的浓度为 4mg/mL;
步骤103、将搅拌后体系离心,得到沉淀物;所述离心速率为8000rpm,离心时间为1min;
步骤104、将所述沉淀物分散于10mL磷酸盐缓冲液中,离心,洗涤,得到悬浮液;所述磷酸盐缓冲液pH为7.0,所述磷酸缓冲液为将18mg磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤105、真空冷冻干燥所述悬浮液,得到人血白蛋白微球;所述真空冷冻干燥的温度为-25℃,时间为72h,真空度为28Kpa;
步骤二、提供注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,具体包括:
步骤201、无菌条件下,将所述人血白蛋白微球和重组胶原蛋白溶解于磷酸缓冲液中,得到体系A;所述体系A中人血白蛋白微球浓度为 5mg/mL,重组胶原蛋白浓度为20mg/mL;所述磷酸缓冲液为将18mg磷酸二氢钾、60mg磷酸氢二钠和900mg氯化钠溶解于100mL注射用水中后经121℃灭菌960min制备得到的磷酸缓冲液;
步骤202、将所述体系A经钴60辐照交联,得到注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂;所述辐照强度为100kgy,辐照的时间为30min。
本实施例的注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂与实施例3性能基本一致。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例,并非对本发明做任何限制,凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化,均仍属于本发明技术方案的保护范围内。
Claims (7)
1.一种注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,其特征在于,包括辐照交联的重组胶原蛋白和人血白蛋白微球。
2.一种制备注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂的方法,其特征在于,
步骤一、将无水乙醇滴加到pH为8.2~8.5的人血白蛋白溶液中,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液后搅拌,离心,将离心所得沉淀物分散于磷酸盐缓冲液中,离心洗涤,冷冻干燥,得到人血白蛋白微球;
步骤二、提供注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂,具体包括:
步骤201、无菌条件下,将所述人血白蛋白微球和重组胶原蛋白溶解于磷酸缓冲液中,得到体系A;
步骤202、将所述体系A辐照交联,得到注射用可促进自体胶原生成的面部填充剂;所述辐照交联为经钴60辐照交联或电子加速器辐照交联。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤一中,所述无水乙醇的体积为人血白蛋白溶液的4倍~6倍。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤一中,所述无水乙醇体积为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液体积的20倍~40倍;所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的浓度为2mg/mL~5mg/mL。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤一中,所述离心速率为5000rpm~8000rpm。
6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤201中,所述体系A中人血白蛋白微球浓度为1.25mg/mL~5mg/mL,重组胶原蛋白浓度为20mg/mL~80mg/mL。
7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤202中,所述辐照强度为10kgy~100kgy。
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