CN115920053A - Crx在肺癌诊断、治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了CRX在肺癌诊断、治疗中的应用。本发明首次发现CRX在肺癌中差异表达且CRX的表达水平与肺癌患者生存率相关，对CRX进行敲低可以抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭，提示CRX可用于肺癌的诊断、治疗及预后风险评估。

Description

CRX在肺癌诊断、治疗中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及CRX在肺癌诊断、治疗中的应用。

背景技术

在全球范围内，肺癌是发病率和死亡率均居于首位的恶性肿瘤，每年有160万患者被诊断为肺癌，同时有140余万的患者被肺癌夺取生命，肺腺癌是肺恶性肿瘤中常见的一种类型。目前治疗肺癌的常规方法有手术治疗、铂二联化疗、放疗和靶向治疗等，但是这些常规治疗方法对中晚期肿瘤患者来说不能达到治愈的目的，因此，多数患者治疗后生存期仍很短。肺癌的早期症状隐匿，不易发现。到目前为止，肺癌的早期诊断仍存在一定程度的难度，有统计称80％的肺癌患者首次诊断已属晚期，无法外科手术治疗。在肺癌的精确治疗中，其发病、进展及耐药的分子机制是目前的研究热点问题，也是药物治疗肺癌的关键所在，而生物标志物的筛选对癌症的精确早期诊断和治疗至关重要。

发明内容

本发明的目的是提供用于肺癌诊断、治疗及预后风险评估的标志物；

本发明的另一目的是提供用于肺癌诊断或预后风险评估的试剂盒。

本发明还有一个目的是提供用于肺癌预防和治疗的药物组合物。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案:

本发明第一方面提供了一种治疗肺癌的药物组合物，所述的药物组合物包含CRX的抑制剂。

在本发明中，所述的CRX(Gene ID:1406)包括基因及其编码的蛋白及其同源物，突变，和同等型。

在本发明中，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，更为优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌。在本发明的具体实施例中，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

作为一种实施方式，所述的抑制剂包括核酸抑制剂，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子。

作为一种优选的实施方式，所述的抑制剂为核酸抑制剂，更为优选的，所述的核酸抑制剂包括shRNA、siRNA(小干扰RNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸及其构建物。在本发明的具体实施例中，所述的核酸抑制剂为siRNA。

如本文所用的术语“siRNA(小干扰RNA)”意指介导RNA干扰或基因沉默的约20个核苷酸的小核酸分子。当将siRNA引入细胞时，其被dicer识别从而降解编码CRX的基因，导致CRX基因的特异性抑制(knockdown)。

在本发明的具体实施方式中，抑制CRX的siRNA的序列如SEQ ID NO：5-6所示。

术语“shRNA”是指短发夹RNA，其是能够形成发夹结构的非编码小RNA分子，短发夹RNA能够通过RNA干扰途径来抑制基因的表达。

作为一种实施方式，所述的药物组合物还包括药学上可接受的载体，

作为一种优选的实施方式，所述的药学上可接受的载体包括溶剂、稀释剂、分散剂、悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂。

术语“载体”包括适用于制备所需特定剂型的任何和所有溶剂、稀释剂或其他液体媒介物、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。可用作药学上可接受的载体的材料的一些示例包括，但不限于，糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏液；乙醇和磷酸盐缓冲液，以及根据配制人员的判断，组合物中还可以存在其他无毒相容的润滑剂诸如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。

本发明第二方面提供了本发明第一方面所述的药物组合物在制备治疗肺癌的药物中的应用。

在本发明中，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，更为优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌。在本发明的具体实施例中，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

本发明第三方面提供了一种筛选治疗肺癌的药物的方法，所述的方法包括：

(1)在测试组中，向待测对象施用测试化合物，检测测试组中来源于所述对象的样品中CRX的表达水平V1；在对照组中，向待测对象施用空白对照，检测对照组中来源于所述对象的样品中CRX的表达水平V2；

(2)比较上一步骤检测得到的表达水平V1和表达水平V2，从而确定所述测试化合物是否是治疗肺癌的候选化合物；

在本发明中，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，更为优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌。在本发明的具体实施例中，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

作为本发明的一种可选择的实施方式，还可以将通过本发明的筛选治疗肺癌的候选药物方法分离的化合物作为药物施用于人或其它哺乳动物，其包括但不限于小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猫、犬、羊、猪、牛、猴子、狒狒、黑猩猩时，分离的化合物可以直接施用，或者可以利用已知的药物制备方法配制成各种剂型。例如，根据需要，所述药物可以作为糖衣片剂、胶囊剂、酏剂和微胶囊口服施用；或者用水或任何其它药物可接受的液体配制成无菌溶液或悬浮液，以注射剂的形式非口服施用。例如，可以将化合物以一般接受的药物施用方式所需的单位剂型(unit dose)、与药学可接受的载体或介质混合在一起，所述载体或介质包括但不限于无菌水、生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、调味剂、赋形剂(excipient)、媒介物(vehicle)、防腐剂、粘合剂等。根据这些制剂中有效成分的含量，可以获得在指定范围内的合适的给药量。

本发明第四方面提供了一种用于肺癌诊断或预后风险评估的试剂盒，所述的试剂盒包含检测样品中标志物表达水平的试剂，所述的标志物包括CRX。

如本文所用的术语“样品”或“样本”意指从中可以测量CRX的基因或蛋白表达水平的样品。本发明中有用的生物样本的实例包括组织、细胞、全血、血清、血浆、唾液、痰、脑脊液和尿液，但不局限于此。在本发明的具体实施例中，所述的样品为组织。

在本发明中，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，更为优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌。在本发明的具体实施例中，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

作为一种实施方式，所述的试剂包括通过数字成像技术、蛋白免疫技术、染料技术、核酸测序技术、核酸杂交技术、色谱技术、质谱技术检测标志物表达水平的试剂。

在本发明中，所述的试剂包括用于检测标志物的mRNA或蛋白表达水平的试剂。

如本文所用的术语“mRNA表达水平的测量”或相应短语意指评价生物样品中标志物基因的mRNA的存在和表达水平以诊断肺癌的过程，其中测量mRNA的量。用于测量mRNA水平的分析方法包括但不限于，RT-PCR、竞争性RT-PCR、实时RT-PCR、RNA酶保护试验(RPA)、Northern印迹和DNA芯片检测。

如本文所用的术语“蛋白表达水平的测量”或相应短语意指评价生物样品中从标志物基因的蛋白产物的存在和表达水平以诊断肺癌的过程，其中使用与所述蛋白特异性地结合的抗体测量所述标志物基因的蛋白产物的量。用于测量蛋白水平的分析方法包括但不限于，Western印迹、酶联免疫吸附检测(ELISA)、放射免疫检测(RIA)、放射免疫扩散、Ouchterlony免疫扩散、火箭免疫电泳、免疫组织染色、免疫沉淀检测、补体结合检测、FACS(荧光激活的细胞分类仪)和蛋白芯片检测。

作为一种实施方式，所述的试剂包括抗体、引物、探针、测序文库、核酸芯片或蛋白质芯片。

如本文所用的术语“抗体”是指指示抗原区的特异性蛋白分子。对于本发明的目的而言，所述抗体与本发明的标志物，即CRX多肽特异性地结合。该抗体可以使用常规方法自蛋白产生，通常克隆到表达载体的标志物基因编码所述蛋白。此外，可产生自由所述标志物基因编码的蛋白的部分肽，落入所述抗体的范围。为了作为抗体而发挥功能，所述部分肽需要含有至少7个氨基酸残基，优选地9个或更多氨基酸残基，以及更优选地12个或更多氨基酸残基。不给予本发明的抗体的形式特定的限制。其中有多克隆抗体、单克隆抗体及其含有互补位的片段以及所有免疫球蛋白抗体。此外，诸如人源化抗体的特殊抗体也在本发明的范围内。因此，只要可以使用本领域已知的方法产生，针对本发明的CRX蛋白的任何抗体都可以用于本发明中。

此外，用于检测本发明标志物的抗体包括抗体分子的功能性片段以及具有两个全长轻链和两个全长重链的完整形式。所述抗体分子的功能性片段是指，至少保留抗原结合功能的片段，并且包括Fab、F(ab′)、F(ab′)2、Fv等。

如本文所用的术语“引物”是指具有游离的3′羟基基团的短核酸链，其与互补模板形成碱基对，以便作为产生新模板链的起点。除引物外，DNA合成或复制需要合适的缓冲液、适当的温度、聚合酶(DNA聚合酶或逆转录酶)和4种三磷酸核苷酸。在本发明中，对CRX多核苷酸具有特异性的有义和反义引物可以用于PCR扩增，以便用PCR产物诊断肺癌。根据本领域的已知信息，可以适当改变所述有义和反义引物的长度。

在本发明的具体实施方式中，引物包括用于定量检测如QPCR检测的引物。

用于QPCR检测的示例性引物的序列如SEQ ID NO：1-2所示。

如本文所用的术语“探针”意指诸如RNA或DNA的核苷酸序列的片段，其长度范围从短至1个碱基至长至数百个碱基，其可以与目的mRNA特异性地结合并且用标签进行标记用于检测所述目的mRNA。本发明中有用的探针可以构建为寡核苷酸探针、单链DNA探针、双链DNA探针或RNA探针的形式。在本发明的实施方案中，通过测定与本发明的CRX多核苷酸互补的探针是否与目的核苷酸序列杂交，可以实现肺癌的诊断。按照本领域已知的信息可以更改合适的探针和杂交条件的选择。

本发明中有用的引物或探针可以使用亚磷酰胺固相载体法或其他熟知技术化学合成。使用本领域已知的各种手段可以修饰它们的核苷酸序列。修饰的示例性、非限制性实例包括甲基化、加帽、用一个或多个同系物取代天然核苷酸和核苷酸之间的改变，例如不带电荷的连接物(例如甲基磷酸、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)或带电荷的连接物(例如磷硫酰，二硫代磷酸酯等)。

作为一种实施方式，所述的试剂盒包括RT-PCR试剂盒、竞争性RT-PCR试剂盒、实时RT-PCR试剂盒、DNA芯片试剂盒或蛋白芯片试剂盒。

通过使用本发明的试剂盒测定所述CRX多肽或编码其的多核苷酸的表达水平可以实现肺癌标志物的检测。本发明的试剂盒可以包含用于测量所述肺癌诊断标志物的表达水平的引物或探针，选择性地识别所述肺癌标志物的抗体或其保留抗原结合功能的片段和/或一种或多种适于分析所述多肽或多核苷酸的试剂或组合物。例如，用于定量分析本发明的多核苷酸或基因的诊断试剂盒可以包含至少一个与编码所述CRX多肽的多核苷酸特异性地结合的寡核苷酸。在优选的实施方案中，本发明的诊断试剂盒特征为，包括实施RT-PCR所需要的必需元件。RT-PCR试剂盒包括对CRX的核苷酸序列或其部分序列具有特异性的引物对、逆转录酶、Taq聚合酶、PCR引物和dNTP。只要其利用“mRNA表达水平的测量”的上下文中已知的分析方法，可以使用任何试剂盒而没有限制。

在另一优选的实施方案中，本发明的肺癌诊断试剂盒可以包含与本发明的CRX蛋白特异性地结合的抗体。只要其利用“蛋白表达水平的测量”的上下文中已知的分析方法，可以使用任何试剂盒而没有限制。优选的是ELISA试剂盒或蛋白芯片试剂盒。

本发明第五方面提供了检测标志物表达水平的试剂在制备疾病诊断或预后风险评估的试剂盒中的应用，所述的标志物包括CRX，所述的疾病为肺癌。

在本发明中，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，更为优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌。在本发明的具体实施例中，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

附图说明

图1是CRX在肺癌中的表达水平图；其中，图1A是免疫组化检测结果图；图1B是QPCR的检测结果图。

图2是si-Crx的干扰效率图；其中，图2A是QPCR检测si-Crx的干扰效率图；

图2B是western blot检测si-Crx的干扰效率图。

图3是CCK8检测CRX对肺癌细胞增殖的影响图。

图4是划痕实验检测CRX对肺癌细胞迁移的影响图。

图5是Transwell小室检测CRX对肺癌细胞侵袭的影响图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1检测肺腺癌中CRX的表达的水平

1、样本收集

分别收集20例肺腺癌组织样本及距离肿瘤2cm以上的正常肺组织，对半组织室温浸泡10％中性甲醛用于石蜡包埋组织；另外一半组织马上放入冻存管并置于便携式液氮罐中冻存，将冻存管置于液氮罐中长期保存，仔细登记患者信息。

2、免疫组化检测CRX的表达水平

制备5μm切片并粘附在聚l-赖氨酸涂层的载玻片上。在60℃烤片30min，二甲苯中脱蜡。内源性过氧化物酶活性在9:1的甲醇/30％过氧化氢溶液中室温孵育10min。免疫组化分析使用试剂盒(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)。切片在室温下PBS(pH 7.4)中再水化10min，10％正常血清室温中孵育10min封闭，4℃下用抗CRX抗体在1:100稀释孵育过夜。PBS洗涤三次，将切片与生物素偶联的二抗在室温下孵育10min。再PBS洗涤后，切片与链霉亲和素结合的辣根过氧化物酶在室温下孵育10min。在PBS中最后洗涤后，用含氨基乙基咔唑显色剂的过氧化氢底物溶液孵育检测抗原-抗体复合物。载玻片在蒸馏水中漂洗，中性树胶封片，并在室温下干燥。完成的免疫组化反应的相对强度由三位不了解患者临床资料的独立的、训练有素的病理医师在光镜下观察和评估棕褐色颗粒表达摄片，采用图像分析软件(Image Pro-Plus6.0)分析CRX阳性染色细胞。

3、QPCR检测CRX的表达水平

使用Trizol试剂以及总RNA提取试剂盒从肺组织中提取总RNA。依据第一链cDNA合成试剂盒(Invitrogen)说明书操作反转录cDNA。采用Platinum SYBR Green qPCR试剂(Super Mix UDG Kit，Invitrogen公司)进行qRT-PCR实验，用ABI 7500FAST系统(LifeTechnologies公司)检测。

采用20μlPCR反应体系进行操作，取1μl模板cDNA，引物各1μl，其余反应试剂17μl。PCR仪设定程序为：热处理95℃2min、95℃15s、59℃15s、72℃1min、共循环35次，72℃延伸5min。最后，以GAPDH表达量作为内参，使用2^-△△Ct公式计算CRX mRNA在LUAD组织和癌旁肺组织中的相对表达量，所有qRT-PCR实验进行3次重复。

其中，引物的序列设计如下

CRX：5’-GAGTCCAGGGTTCAGGTTTGG-3’(SEQ ID NO:1)；

5’-GACACACATCTGTGGAGGGT-3’(SEQ ID NO:2)

NAPDH:5’-GAAAGCCTGCCGGTGACTAA-3’(SEQ ID NO:3)；

5’-AGGAAAAGCATCACCCGGAG-3’(SEQ ID NO:4)

4、结果

免疫组化检测结果(图1A)和qRT-PCR检测结果(图1B)显示，CRX在肺腺癌中表达上调。

实施例2CRX对肺腺癌细胞的影响

1、细胞培养

在37℃、5％CO₂的培养箱中培养肺癌细胞H1299，收集对数生长期的细胞进行细胞转染。

2、细胞转染

针对CRX合计合成siRNA，siRNA由上海吉玛制药技术有限公司化学合成。siRNA序列如下：

si-Crx：5’-GCCTGGAAGTTTCAGATCTTG-3’(SEQ ID NO：5)；

5’-AAUACCAGAUCUGUCAAUCT-3’(SEQ ID NO：6)

si-Con:5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’(SEQ ID NO：7)；

5’-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3’(SEQ ID NO：8)

人H1299细胞接种到6孔板或细胞培养瓶中，在37℃、5％CO2湿润环境中培养24h，待细胞贴壁生长至70％-80％时进行转染。使用

Reagent对细胞进行转染，具体步骤参照

Reagent说明书。简要操作如下：将si-Crx、si-Con或Lipofectamine 2000分别溶于Opti-MEM培养基中并充分混匀，分别将si-Crx、si-Con与Lipofectamine 2000混在一起，短暂离心后室温静置15min。培养的H1299细胞换为新鲜Opti-MEM培养基，根据培养基体积将脂质体和质粒的混合液加入细胞培养基中并轻轻摇匀，放入37℃培养箱中培养。转染后6h，将Opti-MEM培养基更换为含2％ FBS的DMEM低糖培养基，培养24h后，按实验设计给予相应的细胞刺激，24h后收集细胞，提取总RNA或蛋白进行qRT-PCR或Western blot分析。

3、Real-time PCR检测si-Crx的干扰效率

使用Trizol试剂以及总RNA提取试剂盒从转染处理后的H1299细胞中提取总RNA，并进行QPCR检测，QPCR检测的步骤同实施例1。

4、western blot检测si-Crx的干扰效率

对数生长期细胞室温用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤，将细胞收集于RIPA缓冲液中(150mM NaCl,5mM EDTA,50mM Tris HCl,1％ NP-40,0.5％去氧胆酸钠，0.1％十二烷基硫酸钠pH 8.0)，添加1mM苯基-甲基磺酰氟(PMSF)，1*cOmpleteTM蛋白酶抑制剂(Roche)和1％Triton X-100(Merck)。每个泳道加入10％十二烷基钠硫酸盐溶解上样25μg蛋白质，将SDS-聚丙烯酰胺电泳凝胶和中心分离的蛋白转移到硝基纤维素膜上(Whatman Protran BA85,GE Healthcare Life Sciences,Chicago,IL,USA)。将PVDF膜置于含0.1％吐温-20的磷酸盐缓冲液中洗膜，用含5％牛血清白蛋白PBS洗膜三次。加入第一抗体37℃孵育24h，Anti-CRX抗体[EPR9582]和β-actin抗体(β肌动蛋白抗体，ab8227)分别以1:1000和1:5000稀释。用PBS多次洗涤后，用辣根过氧化物酶偶联二抗1:2000倍比稀释后孵育2h，用PBS洗膜3次。用SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate或Pierce ECL WesternBlot发光液(Thermo Fischer Scientific)孵育2分钟显色。蛋白质检测使用ImageQuantLAS4000 mini(Ge Healthcare Life Sciences)，采用Image J软件(National Institutesof health)定量条带的相对强度。

5、CCK8检测转染处理后的细胞增殖能力变化

以2500个/孔(100μl/孔)的浓度将处于对数期的转染si-Crx及对照si-Con的H1299细胞分别接种96孔板。待细胞贴壁后，每孔加入10μL CCK8，温育。用自动酶标仪在450nm波长处，于0、24h、48h、72h以及96h测定各孔吸光度(A)值，取各样本平均值进行比较，绘制出生长曲线。

6、划痕实验检测转染处理后的细胞迁移能力变化

将转染si-Crx及其对照si-Con的H1299细胞接种至6孔板,加入含有10％的胎牛血清DMEM培养基。用移液管尖在培养细胞中划痕，细胞饥饿培养24小时，倒置显微镜摄片并分析细胞迁移情况。使用ImageJ软件的划痕面积分析模块得到划痕面积S，并按下列公式计算划痕愈合率。

划痕愈合率＝[1-(S24h/S0h)]×100％

7、Transwell小室检测转染处理后细胞的侵袭功能的变化

将转染si-Crx及其对照si-Con的5×10⁵H1299细胞接种到Transwell小室的上部，Transwell实验下室采用含10％胎牛血清的无血清培养基，转染处理的细胞加入上室含10％胎牛血清的无血清培养基培养培养24h。用100％甲醇固定细胞，通过计算迁移到滤膜下方细胞(使用显微镜×400)。每一个滤膜要至少计数5个视野并重复分析。

8、结果

检测结果显示，si-Crx显著降低了肺癌细胞中CRX mRNA的水平(图2A)和蛋白水平(图2B)。且降低CRX的表达水平后，肺癌细胞的增殖能力(图3)、迁移能力(图4)、侵袭能力(图5)都显著降低。说明CRX可作为药物靶点应用于肺癌的治疗。

Claims (10)

1.一种治疗肺癌的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含CRX的抑制剂，

优选的，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌，优选的，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的抑制剂包括核酸抑制剂，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子，

优选的，所述的抑制剂为核酸抑制剂，优选的，所述的核酸抑制剂包括shRNA、siRNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸及其构建物，

优选的，所述的核酸抑制剂为siRNA；

优选的，所述siRNA的序列如SEQ ID NO：5-6所示。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物还包括药学上可接受的载体，

优选的，所述的药学上可接受的载体包括溶剂、稀释剂、分散剂、悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂。

4.权利要求1-3任一项所述的药物组合物在制备治疗肺癌的药物中的应用，

优选的，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌，优选的，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

5.一种筛选治疗肺癌的药物的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(1)在测试组中，向待测对象施用测试化合物，检测测试组中来源于所述对象的样品中CRX的表达水平V1；在对照组中，向待测对象施用空白对照，检测对照组中来源于所述对象的样品中CRX的表达水平V2；

(2)比较上一步骤检测得到的表达水平V1和表达水平V2，从而确定所述测试化合物是否是治疗肺癌的候选化合物；

优选的，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌，优选的，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

6.一种用于肺癌诊断或预后风险评估的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含检测样品中标志物表达水平的试剂，所述的标志物包括CRX，

优选的，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌，优选的，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂包括通过数字成像技术、蛋白免疫技术、染料技术、核酸测序技术、核酸杂交技术、色谱技术、质谱技术检测标志物表达水平的试剂。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂包括抗体、引物、探针、测序文库、核酸芯片或蛋白质芯片；

优选的，所述引物包括用于QPCR检测的引物；

优选的，用于QPCR检测的引物的序列如SEQ ID NO：1-2所示。

9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括RT-PCR试剂盒、竞争性RT-PCR试剂盒、实时RT-PCR试剂盒、DNA芯片试剂盒或蛋白芯片试剂盒。

10.检测标志物表达水平的试剂在制备疾病诊断或预后风险评估的试剂盒中的应用，其特征在于，所述的标志物包括CRX，所述的疾病为肺癌，

优选的，所述的肺癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌，优选的，所述的肺癌为非小细胞肺癌，优选的，所述的非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞癌、类癌，优选的，所述的非小细胞肺癌为肺腺癌。

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