CN115894602B - 从雷公藤中提取雷公藤甲素 - Google Patents
从雷公藤中提取雷公藤甲素 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115894602B CN115894602B CN202211668768.7A CN202211668768A CN115894602B CN 115894602 B CN115894602 B CN 115894602B CN 202211668768 A CN202211668768 A CN 202211668768A CN 115894602 B CN115894602 B CN 115894602B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- triptolide
- tripterygium wilfordii
- ionic liquid
- parts
- extracting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000830536 Tripterygium wilfordii Species 0.000 title claims abstract description 95
- 235000015398 thunder god vine Nutrition 0.000 title claims abstract description 93
- DFBIRQPKNDILPW-CIVMWXNOSA-N Triptolide Chemical compound O=C1OCC([C@@H]2C3)=C1CC[C@]2(C)[C@]12O[C@H]1[C@@H]1O[C@]1(C(C)C)[C@@H](O)[C@]21[C@H]3O1 DFBIRQPKNDILPW-CIVMWXNOSA-N 0.000 title claims abstract description 91
- YKUJZZHGTWVWHA-UHFFFAOYSA-N triptolide Natural products COC12CC3OC3(C(C)C)C(O)C14OC4CC5C6=C(CCC25C)C(=O)OC6 YKUJZZHGTWVWHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 91
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 239000002608 ionic liquid Substances 0.000 claims abstract description 84
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 66
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 claims abstract description 43
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims abstract description 8
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 26
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- -1 sodium hexafluorophosphate Chemical compound 0.000 claims description 19
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 12
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 claims description 12
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 11
- ZTOKUMPYMPKCFX-CZNUEWPDSA-N (E)-17-[(2R,3R,4S,5S,6R)-6-(acetyloxymethyl)-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(acetyloxymethyl)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxyoctadec-9-enoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCC/C=C/CCCCCCC(C)O[C@@H]1O[C@H](COC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(C)=O)O1 ZTOKUMPYMPKCFX-CZNUEWPDSA-N 0.000 claims description 10
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 10
- 238000013329 compounding Methods 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 42
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 41
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 6
- 239000002120 nanofilm Substances 0.000 description 5
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-3-methyloxirane Chemical compound CC1OC1Cl LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- PBIDWHVVZCGMAR-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-3-prop-2-enyl-2h-imidazole Chemical compound CN1CN(CC=C)C=C1 PBIDWHVVZCGMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 241000208365 Celastraceae Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- 241000545405 Tripterygium Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N octoxybenzene Chemical compound CCCCCCCCOC1=CC=CC=C1 ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/54—Improvements relating to the production of bulk chemicals using solvents, e.g. supercritical solvents or ionic liquids
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
本申请涉及天然药物化学技术领域，具体公开了从雷公藤中提取雷公藤甲素，所述从雷公藤中提取雷公藤甲素，包括以下步骤：S1、将雷公藤粉末、复合酶加入水中进行酶解，得雷公藤浆液；S2、向雷公藤浆液中加入离子液体微乳液，进行超声处理后，离心收集提取液；S3、先将提取液用纳米膜进行过滤，再将滤液进行均质，最后经超滤膜过滤并截留，得透析液；S4、将透析液加入溶剂进行萃取，收集有机相，进行减压浓缩至干，得粗品；S5、将粗品加入乙酸乙酯中，随后用硅胶柱层析纯化，减压浓缩，冷冻干燥，得精品；上述提取工艺，操作简单安全，所得雷公藤甲素的纯度和提取率都得到了提高，且品质优异。
Description
技术领域
本申请涉及天然药物化学技术领域，更具体地说，它涉及从雷公藤中提取雷公藤甲素。
背景技术
雷公藤，卫茅科雷公藤属植物，本属植物在我国共有三种，产于浙江、湖南、安徽、福建、台湾等省，主要分布在长江中下游地区。雷公藤化学成分复杂，药理作用广泛，主要药用部分是根，具有活血化瘀、清热解毒、消肿散结、杀虫止血等功效，具有重要的临床应用价值，目前已广泛应用于治疗类风湿性关节炎、肾炎、红斑狼疮及各种皮肤病，均取得良好的疗效。其中，雷公藤甲素是雷公藤植物的主要有效成分之一，研究表明具有抗氧化，抗类风湿，抗老年性痴呆症、抗癌等功效。
目前，从雷公藤中提取雷公藤甲素的工艺操作较为复杂、工艺效率较低，导致雷公藤甲素的提取率和纯度低、雷公藤甲素品质差，无法达到理想的药用要求。因此，亟需提出一种从雷公藤中提取雷公藤甲素的提取工艺，以解决现有的提取工艺，所得雷公藤甲素的提取率和纯度低、品质差等问题，利于提高雷公藤甲素的临床应用价值。
发明内容
为了解决现有的从雷公藤中提取雷公藤甲素的提取工艺，所得雷公藤甲素的提取率和纯度低、品质差等问题，本申请提供了一种从雷公藤中提取雷公藤甲素的提取工艺。
从雷公藤中提取雷公藤甲素，采用如下的技术方案：
从雷公藤中提取雷公藤甲素，包括以下步骤：
S1、将雷公藤粉末、复合酶加入水中，并调节pH至5-6，进行酶解，得雷公藤浆液；
S2、向步骤S1所得的雷公藤浆液中加入离子液体微乳液，进行超声处理后，离心收集提取液；
S3、先将步骤S2所得的提取液用100-200nm纳米膜进行过滤，收集滤液，再将滤液进行均质，最后经1000-2000分子量的超滤膜过滤并截留，得透析液；
S4、将步骤S3所得的透析液加入溶剂进行萃取，收集有机相，进行减压浓缩至干，得雷公藤甲素粗品；
S5、将步骤S4所得的雷公藤甲素粗品加入乙酸乙酯中，随后用硅胶柱层析纯化，所得收集液减压浓缩，冷冻干燥，得雷公藤甲素精品。
通过采用上述技术方案，本申请从雷公藤中提取雷公藤甲素，先将雷公藤粉末进行酶解，利用复合酶破坏雷公藤的细胞壁，加入离子液体，并采用超声波协助处理，能够有效提高雷公藤甲素的提取率，减少有机溶剂的使用量，随后提取液经纳米膜过滤和经超滤膜截留，进一步除去大分子杂质，最后进行溶剂萃取获得雷公藤甲素粗品，雷公藤甲素粗品经硅胶柱层析纯化，得雷公藤甲素精品；本申请的提取工艺，大大改善了雷公藤甲素的提取效果，提高了提取效率，获得雷公藤甲素的纯度高，产品品质优异，使得雷公藤甲素具有广阔的市场前景。
优选的，所述步骤S1中，雷公藤粉末通过将雷公藤根依次经干燥、研磨及过150-250目筛网而得。
优选的，所述步骤S1中，雷公藤粉末、复合酶、水的质量比为1:0.02-0.05:3.5-4.5。
优选的，所述步骤S1中的酶解条件：温度为50-60℃，时间为1-2h。
通过采用上述技术方案，本申请在步骤S1中，采用的雷公藤粉末是选用雷公藤甲素含量较高的雷公藤根制得，且雷公藤根经过干燥、研磨、过筛制成粉末状，更加利于雷公藤甲素的提取；在步骤S1中控制了雷公藤粉末、复合酶、水的质量比，以及酶解条件，一方面使得雷公藤粉末充分酶解，另一方面能够节约原料，降低生产成本，适合工业化生产。
优选的，所述复合酶由质量比为3:2-5的纤维素酶与木聚糖酶复配而得。
通过采用上述技术方案，雷公藤甲素存在于雷公藤根的表皮之中，表皮是由致密的纤维构成，因此需要复合酶破坏雷公藤根的表皮细胞，使得雷公藤甲素能够充分释放出来；本申请的复合酶是由纤维素酶与木聚糖酶复配而得，且二者的质量比控制在一定的范围内，二者协同增效，能够有效提高雷公藤甲素的提取率，同时能够保持雷公藤甲素的生物活性。
优选的，所述步骤S2中的超声条件：功率为60-80W，时间为40-80min；离心条件：转速为9000-11000rpm，时间为5-10min。
优选的，所述步骤S2中，离子液体微乳液的质量为雷公藤粉末的2-3倍。
通过采用上述技术方案，本申请在步骤S1酶解后的雷公藤浆液中加入离子液体微乳液，雷公藤浆液中雷公藤甲素向离子液体微乳液中迁移，可以很好地萃取更多的雷公藤甲素成分；并利用超声波作用，协助离子液体微乳液，进一步提高雷公藤甲素的提取率。
优选的，所述离子液体微乳液，由以下方法制得：
按重量份，将40-60份离子液体、10-30份槐糖脂、4-6份正戊醇加入20-60份水中，进行均匀混合，得离子液体微乳液。
通过采用上述技术方案，本申请采用以离子液体作为主体，以蒸馏水作为核，同时用槐糖脂和正戊醇作为混合界面膜，构成离子液体/表面活性剂/水型离子液体微乳液，使得离子液体内部形成一个极性核，本申请采用离子液体微乳液，能够充分提取雷公藤的浆液中雷公藤甲素，而且有效减少有机溶剂的使用，降低有机溶剂带来的环境污染。
优选的，所述离子液体，包括以下重量份原料：26-30份1-甲基咪唑、35-40份环氧氯丙烷、40-50份甲苯、40-60份六氟磷酸钠、50-60份丙酮。
优选的，所述离子液体，由以下方法制得：
在氮气的保护下，先将1-甲基咪唑与甲苯混合均匀后，升温至60-80℃，加入环氧氯丙烷，反应5-7h后，用旋转蒸发仪去除去除甲苯，得中间体；再将中间体与六氟磷酸钠加入丙酮中，以转速1600-2000r/min搅拌反应1-2h，抽滤，将滤液真空浓缩，得离子液体。
通过采用上述技术方案，本申请以1-甲基咪唑、环氧氯丙烷、六氟磷酸钠为主要原料，并控制各工艺参数，制得离子液体，环氧氯丙烷的引入不仅能够提高离子液体的疏水性，使得离子液体与表面活性剂槐糖脂作用时，能够使得离子液体的内部形成较大的极性核，而且环氧氯丙烷中含有环氧结构，更加利于雷公藤甲素地迁移进入离子液体微乳液内部，使制得离子液体微乳液能够显著提高雷公藤甲素的提取率。
优选的，所述步骤S3中的均质条件：压强为60-80MPa，温度为50-60℃，时间为30-60min。
通过采用上述技术方案，本申请步骤S3中控制均质的条件，使提取液中残余的复合酶能够尽可能的完全除去，有效提高雷公藤甲素的纯度，使得雷公藤甲素的产品品质更佳。
优选的，所述步骤S4中溶剂的体积为透析液的0.2-1倍；所述溶剂由体积比为1-5:3的环己烷和石油醚混合而得。
通过采用上述技术方案，本申请以环己烷和石油醚为溶剂进行透析液中的雷公藤甲素的萃取，能够获得纯度较高的雷公藤甲素。
优选的，所述步骤S5中的雷公藤甲素粗品与乙酸乙酯的质量比为1:100-200。
优选的，所述步骤S5中的硅胶层析采用梯度洗脱，梯度洗脱规律为乙酸乙酯与二氯甲烷的体积比从1:6-10到1:1-5。
通过采用上述技术方案，本申请对所得雷公藤粗品进行进一步地纯化，并采用硅胶层析法，选用乙酸乙酯与二氯甲烷为洗脱剂进行梯度洗脱，有效将杂质分离，提高雷公藤甲素的纯度。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1.本申请的从雷公藤中提取雷公藤甲素，先采用复合酶进行酶解和离子液体微乳液从雷公藤中充分提取雷公藤甲素；再采用纳米膜和超滤膜进行除杂；最后采用溶剂萃取和硅胶层析进行纯化，获得雷公藤甲素；本申请的提取工艺操作简单安全，所得雷公藤甲素的纯度较高，且整个过程中雷公藤甲素的损失较小，雷公藤甲素的提取率也得到了相应地提高。
2.本申请的离子液体微乳液以离子液体、槐糖脂、正戊醇与水为原料，且离子液体由1-甲基咪唑、环氧氯丙烷、六氟磷酸钠为主要原料制得，所获得离子液体微乳液能够有效提高雷公藤甲素的提取率。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
制备例1-5为离子液体及其制备方法。
制备例1
离子液体，包括以下原料：26g 1-甲基咪唑、35g环氧氯丙烷、40g甲苯、44g乙酸乙酯、40g六氟磷酸钠、50g丙酮。
离子液体，由以下方法制得：
在氮气的保护下，先将1-甲基咪唑与甲苯混合均匀后，升温至60℃，加入环氧氯丙烷，反应5h后，用旋转蒸发仪去除去除甲苯，得中间体；再将中间体与六氟磷酸钠加入丙酮，以转速1600r/min搅拌反应2h，抽滤，将滤液真空浓缩，得离子液体。
制备例2
离子液体，包括以下原料：27g 1-甲基咪唑、36g环氧氯丙烷、42g甲苯、46g乙酸乙酯、42g六氟磷酸钠、52g丙酮。
离子液体，由以下方法制得：
在氮气的保护下，先将1-甲基咪唑与甲苯混合均匀后，升温至65℃，加入环氧氯丙烷，反应5.5h后，用旋转蒸发仪去除去除甲苯，得中间体；再将中间体与六氟磷酸钠加入丙酮，以转速1700r/min搅拌反应1.8h，抽滤，将滤液真空浓缩，得离子液体。
制备例3
离子液体，包括以下原料：28g 1-甲基咪唑、38g环氧氯丙烷、45g甲苯、47g乙酸乙酯、50g六氟磷酸钠、55g丙酮。
离子液体，由以下方法制得：
在氮气的保护下，先将1-甲基咪唑与甲苯混合均匀后，升温至70℃，加入环氧氯丙烷，反应6h后，用旋转蒸发仪去除去除甲苯，得中间体；再将中间体与六氟磷酸钠加入丙酮，以转速1800r/min搅拌反应1.5h，抽滤，将滤液真空浓缩，得离子液体。
制备例4
离子液体，包括以下原料：29g 1-甲基咪唑、39g环氧氯丙烷、48g甲苯、48g乙酸乙酯、55g六氟磷酸钠、58g丙酮。
离子液体，由以下方法制得：
在氮气的保护下，先将1-甲基咪唑与甲苯混合均匀后，升温至75℃，加入环氧氯丙烷，反应6.5h后，用旋转蒸发仪去除去除甲苯，得中间体；再将中间体与六氟磷酸钠加入丙酮，以转速1900r/min搅拌反应1.2h，抽滤，将滤液真空浓缩，得离子液体。
制备例5
离子液体，包括以下原料：30g 1-甲基咪唑35-40g环氧氯丙烷、40-50g甲苯、50g乙酸乙酯、60g六氟磷酸钠、60g丙酮。
离子液体，由以下方法制得：
在氮气的保护下，先将1-甲基咪唑与甲苯混合均匀后，升温至80℃，加入环氧氯丙烷，反应5h后，用旋转蒸发仪去除去除甲苯，得中间体；再将中间体与六氟磷酸钠加入丙酮，以转速2000r/min搅拌反应1h，抽滤，将滤液真空浓缩，得离子液体。
制备例6-10及对比制备例1-4提供了离子液体微乳液的制备方法。
制备例6
离子液体微乳液，由以下方法制得：
将40g离子液体(制备例1)、10g槐糖脂、4g正戊醇加入20g水中，以转速600r/min搅拌1.5h，均匀混合后，得离子液体微乳液。
制备例7
离子液体微乳液，由以下方法制得：
将45g离子液体(制备例2)、15g槐糖脂、4.5g正戊醇加入30g水中，以转速650r/min搅拌1.4h，均匀混合后，得离子液体微乳液。
制备例8
离子液体微乳液，由以下方法制得：
将50g离子液体(制备例3)、20g槐糖脂、5g正戊醇加入40g水中，以转速700r/min搅拌1.3h，均匀混合后，得离子液体微乳液。
制备例9
离子液体微乳液，由以下方法制得：
将55g离子液体(制备例4)、25g槐糖脂、5.5g正戊醇加入50g水中，以转速750r/min搅拌1.2h，均匀混合后，得离子液体微乳液。
制备例10
离子液体微乳液，由以下方法制得：
将60g离子液体(制备例5)、30g槐糖脂、6g正戊醇加入60g水中，以转速800r/min搅拌1h，均匀混合后，得离子液体微乳液。
对比制备例1
对比制备例1，与制备例1，不同之处仅在于：离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐。
对比制备例2
对比制备例2，与制备例1，不同之处仅在于：离子液体为1-烯丙基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐。
对比制备例3
对比制备例3，与制备例1，不同之处仅在于：将槐糖脂替换成失水山梨醇脂肪酸酯。
对比制备例4
对比制备例4，与制备例1，不同之处仅在于：将槐糖脂替换成聚乙二醇辛基苯基醚。
实施例1-5提供了从雷公藤中提取雷公藤甲素。
实施例1
从雷公藤中提取雷公藤甲素，包括以下步骤：
S11、将雷公藤根依次经干燥、研磨、过150目筛网得雷公藤粉末；
S1、取1kg步骤S11所得的雷公藤粉末、0.02kg复合酶加入3.5kg水中，并调节pH至5，在50℃下，酶解1h，得雷公藤浆液；
其中，复合酶由质量比为3:2的纤维素酶与木聚糖酶复配而得；
S2、向步骤S1所得的雷公藤浆液中加入2kg离子液体微乳液，在功率为60W下，进行超声处理40min后，以转速9000rpm，离心10min，收集提取液；
其中，离子液体微乳液由制备例6制得；
S3、先将步骤S2所得的提取液用100nm的纳米膜进行过滤，收集滤液；再在压强为60MPa，温度为50℃下，将滤液均质60min，最后经1000分子量的超滤膜过滤并截留，得透析液；
S4、将步骤S3所得的透析液中，加入溶剂进行萃取，收集有机相，在60℃下真空浓缩至干，得65.2mg雷公藤甲素粗品；
其中，溶剂的体积为透析液的0.2倍；溶剂由体积比为1:3的环己烷和石油醚混合而得；S5、将步骤S4所得的雷公藤甲素粗品加入6.25g乙酸乙酯中，充分溶解后，用硅胶柱层析纯化，所得收集液减压浓缩，浓缩温度为80℃，压强为0.07Mpa，浓缩至溶液密度为1g/cm3，随后在温度为40℃进行冷冻干燥2h，得63.3mg雷公藤甲素精品；
其中，硅胶层析采用梯度洗脱，梯度洗脱规律为乙酸乙酯与二氯甲烷的体积比从1:6到1:1。
实施例2
从雷公藤中提取雷公藤甲素，包括以下步骤：
S11、将雷公藤根依次经干燥、研磨、过180目筛网得雷公藤粉末；
S1、取1kg步骤S11所得的雷公藤粉末、0.03kg复合酶加入3.8kg水中，并调节pH至5.2，在52℃下，酶解0.9h，得雷公藤浆液；
其中，复合酶由质量比为1:1的纤维素酶与木聚糖酶复配而得；
S2、向步骤S1所得的雷公藤浆液中加入2.3kg离子液体微乳液，在功率为65W下，进行超声处理50min后，以转速9500rpm，离心9min，收集提取液；
其中，离子液体微乳液由制备例7制得；
S3、先将步骤S2所得的提取液用300nm的纳米膜进行过滤，收集滤液；再在压强为65MPa，温度为52℃下，将滤液均质35min，最后经1200分子量的超滤膜过滤并截留，得透析液；
S4、将步骤S3所得的透析液中，加入溶剂进行萃取，收集有机相，在60-80℃下真空浓缩至干，得66.4mg雷公藤甲素粗品；
其中，溶剂的体积为透析液的0.4倍；溶剂由体积比为2:3的环己烷和石油醚混合而得；S5、将步骤S4所得的雷公藤甲素粗品加入7.96g乙酸乙酯中，充分溶解后，用硅胶柱层析纯化，所得收集液减压浓缩，浓缩温度为82℃，压强为0.075Mpa，浓缩至溶液密度为1.05g/cm3，随后在温度为35℃进行冷冻干燥1.8h，得64.5mg雷公藤甲素精品；
其中，硅胶层析采用梯度洗脱，梯度洗脱规律为乙酸乙酯与二氯甲烷的体积比从1:7到1:2。
实施例3
从雷公藤中提取雷公藤甲素，包括以下步骤：
S11、将雷公藤根依次经干燥、研磨、过200目筛网得雷公藤粉末；
S1、取1kg步骤S11所得的雷公藤粉末、0.035kg复合酶加入400kg水中，并调节pH至5.5，在55℃下，酶解0.8h，得雷公藤浆液；
其中，复合酶由质量比为6:7的纤维素酶与木聚糖酶复配而得；
S2、向步骤S1所得的雷公藤浆液中加入2.5kg离子液体微乳液，在功率为70W下，进行超声处理60min后，以转速10000rpm，离心8min，收集提取液；
其中，离子液体微乳液由制备例8制得；
S3、先将步骤S2所得的提取液用500nm的纳米膜进行过滤，收集滤液；再在压强为70MPa，温度为55℃下，将滤液均质45min，最后经1500分子量的超滤膜过滤并截留，得透析液；
S4、将步骤S3所得的透析液加入溶剂进行萃取，收集有机相，在60-80℃下真空浓缩至干，得68.3mg雷公藤甲素粗品；
其中，溶剂的体积为透析液的0.6倍；溶剂由体积比为1:1的环己烷和石油醚混合而得；S5、将步骤S4所得的雷公藤甲素粗品加入10.33g乙酸乙酯中，充分溶解后，用硅胶柱层析纯化，所得收集液减压浓缩，浓缩温度为85℃，压强为0.075Mpa，浓缩至溶液密度为1.1g/cm3，随后在温度为30℃进行冷冻干燥1.5h，得67.8mg雷公藤甲素精品；
其中，硅胶层析采用梯度洗脱，梯度洗脱规律为乙酸乙酯与二氯甲烷的体积比从1:8到1:3。
实施例4
从雷公藤中提取雷公藤甲素，包括以下步骤：
S11、将雷公藤根依次经干燥、研磨、过220目筛网得雷公藤粉末；
S1、取1kg步骤S11所得的雷公藤粉末、0.04kg复合酶加入4.2kg水中，并调节pH至5.8，在58℃下，酶解0.6h，得雷公藤浆液；
其中，复合酶由质量比为3:4的纤维素酶与木聚糖酶复配而得；
S2、向步骤S1所得的雷公藤浆液中加入2.8kg离子液体微乳液，在功率为75W下，进行超声处理70min后，以转速10500rpm，离心6min，收集提取液；
其中，离子液体微乳液由制备例9制得；
S3、先将步骤S2所得的提取液用700nm的纳米膜进行过滤，收集滤液；再在压强为75MPa，温度为58℃下，将滤液均质35min，最后经1800分子量的超滤膜过滤并截留，得透析液；
S4、将步骤S3所得的透析液加入溶剂进行萃取，收集有机相，在75℃下真空浓缩至干，得67.2mg雷公藤甲素粗品；
其中，溶剂的体积为透析液的0.8倍；溶剂由体积比为4:3的环己烷和石油醚混合而得；S5、将步骤S4所得的雷公藤甲素粗品加入12.32g乙酸乙酯中，充分溶解后，用硅胶柱层析纯化，所得收集液减压浓缩，浓缩温度为88℃，压强为0.075Mpa，浓缩至溶液密度为1.15g/cm3，随后在温度为25℃进行冷冻干燥1.2h，得66.4mg雷公藤甲素精品；
其中，硅胶层析采用梯度洗脱，梯度洗脱规律为乙酸乙酯与二氯甲烷的体积比从1:9到1:4。
实施例5
从雷公藤中提取雷公藤甲素，包括以下步骤：
S11、将雷公藤根依次经干燥、研磨、过250目筛网得雷公藤粉末；
S1、取1kg步骤S11所得的雷公藤粉末、0.05kg复合酶加入4.5kg水中，并调节pH至6，在60℃下，酶解0.5h，得雷公藤浆液；
其中，复合酶由质量比为3:5的纤维素酶与木聚糖酶复配而得；
S2、向步骤S1所得的雷公藤浆液中加入3kg离子液体微乳液，在功率为80W下，进行超声处理80min后，以转速11000rpm，离心5min，收集提取液；
其中，离子液体微乳液由制备例10制得；
S3、先将步骤S2所得的提取液用900nm的纳米膜进行过滤，收集滤液；再在压强为80MPa，温度为60℃下，将滤液均质30min，最后经2000分子量的超滤膜过滤并截留，得透析液；
S4、将步骤S3所得的透析液加入溶剂进行萃取，收集有机相，在80℃下真空浓缩至干，得雷公藤甲素粗品65.1mg；
其中，溶剂的体积为透析液的1倍；溶剂由体积比为5:3的环己烷和石油醚混合而得；
S5、将步骤S4所得的雷公藤甲素粗品加入13g乙酸乙酯中，充分溶解后，用硅胶柱层析纯化，所得收集液减压浓缩，浓缩温度为90℃，压强为0.08Mpa，浓缩至溶液密度为1.2g/cm3，随后在温度为-20℃进行冷冻干燥1h，得64.9mg雷公藤甲素精品；
其中，硅胶层析采用梯度洗脱，梯度洗脱规律为乙酸乙酯与二氯甲烷的体积比从1:10到1:5。
为了验证本申请提供的从雷公藤中提取雷公藤甲素，所获得的雷公藤甲素纯度和提取率，申请人设置了对比例1-10，其中：
对比例1
对比例1，同实施例1，不同之处仅在于：复合酶仅为纤维素酶。
对比例2
对比例2，同实施例1，不同之处仅在于：复合酶仅为木聚糖酶。
对比例3
对比例3，同实施例1，不同之处仅在于：雷公藤粉末不进行步骤S1的酶解，直接进行步骤S2。
对比例4
对比例4，同实施例1，不同之处仅在于：离子液体微乳液由对比制备例1制得。
对比例5
对比例5，同实施例1，不同之处仅在于：离子液体微乳液由对比制备例2制得。
对比例6
对比例6，同实施例1，不同之处仅在于：离子液体微乳液由对比制备例3制得。
对比例7
对比例7，同实施例1，不同之处仅在于：离子液体微乳液由对比制备例4制得。
对比例8
对比例8，同实施例1，不同之处仅在于：步骤S1所得雷公藤浆液不进行步骤S2处理，直接进行步骤S3。
对比例9
对比例9，同实施例1，不同之处仅在于：步骤S4中溶剂仅为环己烷。
对比例10
对比例10，同实施例1，不同之处仅在于：步骤S4中溶剂仅为石油醚。
分别测试实施例1-5和对比例1-10中的从雷公藤中提取雷公藤甲素，雷公藤甲素的提取率和纯度，得出如下结果，具体见表1：
雷公藤甲素的提取率：雷公藤甲素的提取率由获得的雷公藤甲素精品质量与雷公藤粉末质量的比值而得；
雷公藤甲素的纯度：利用高效液相色谱仪测定雷公藤甲素精品的纯度。
表1：
由上述表1显示数据可知：本申请实施例1-5中的从雷公藤中提取雷公藤甲素的工艺获得的雷公藤甲素的综合性能远优于对比例1-10，实施例1-5所获得的雷公藤甲素的提取率和纯度较高，且品质优良。
由实施例1和对比例1-3可知：实施例1中雷公藤粉末进行复合酶酶解，且复合酶由纤维素酶和木聚糖酶复配而得，较对比例1-3，实施例1的雷公藤甲素提取率更好，且纯度高。
由实施例1和对比例4-8可知，实施例1中步骤S1获得雷公藤浆液进行步骤S2的处理，且采用离子液体微乳液由制备例6制得，较对比4-8，实施例1的雷公藤甲素的提取率得到显著提高。
由实施例1和对比例9、10可知，实施例1步中骤S4的溶剂由环己烷和石油醚混合而得，较对比例9、10，实施例1的提取工艺有效提高雷公藤甲素的纯度。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (4)
1.从雷公藤中提取雷公藤甲素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将雷公藤粉末、复合酶加入水中，并调节pH至5-6，进行酶解，得雷公藤浆液；
S2、向步骤S1所得的雷公藤浆液中加入离子液体微乳液，进行超声处理后，离心收集提取液；
S3、先将步骤S2所得的提取液用100-200nm纳米膜进行过滤，收集滤液，再将滤液进行均质，最后经1000-2000分子量的超滤膜过滤并截留，得透析液；
S4、将步骤S3所得的透析液加入溶剂进行萃取，收集有机相，进行减压浓缩至干，得雷公藤甲素粗品；
S5、将步骤S4所得的雷公藤甲素粗品加入乙酸乙酯中，随后用硅胶柱层析纯化，所得收集液减压浓缩，冷冻干燥，得雷公藤甲素精品；
所述步骤S1中，雷公藤粉末、复合酶、水的质量比为1:0.02-0.05:3.5-4.5；
所述复合酶由质量比为3:2-5的纤维素酶与木聚糖酶复配而得；
所述离子液体微乳液，由以下方法制得：
按重量份，将40-60份离子液体、10-30份槐糖脂、4-6份正戊醇加入20-60份水中，进行均匀混合，得离子液体微乳液；
所述离子液体，包括以下重量份原料：26-30份1-甲基咪唑、35-40份环氧氯丙烷、40-50份甲苯、40-60份六氟磷酸钠、50-60份丙酮；
所述离子液体，由以下方法制得：
在氮气的保护下，先将1-甲基咪唑与甲苯混合均匀后，升温至60-80℃，加入环氧氯丙烷，反应5-7h后，用旋转蒸发仪去除甲苯，得中间体；再将中间体与六氟磷酸钠加入丙酮，以转速1600-2000r/min搅拌反应1-2h，抽滤，将滤液真空浓缩，得离子液体；
所述步骤S4中溶剂的体积为透析液的0.2-1倍；所述溶剂由体积比为1-5:3的环己烷和石油醚混合而得。
2.根据权利要求1所述的从雷公藤中提取雷公藤甲素的方法，其特征在于，所述步骤S2中的超声条件：功率为60-80W，时间为40-80min；离心条件：转速为9000-11000rpm，时间为5-10min。
3.根据权利要求1所述的从雷公藤中提取雷公藤甲素的方法，其特征在于，所述步骤S2中，离子液体微乳液的质量为雷公藤粉末的2-3倍。
4.根据权利要求1所述的从雷公藤中提取雷公藤甲素的方法，其特征在于，所述步骤S5中的硅胶层析采用梯度洗脱，梯度洗脱规律为乙酸乙酯与二氯甲烷的体积比从1:6-10到1:1-5。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211668768.7A CN115894602B (zh) | 2022-12-24 | 2022-12-24 | 从雷公藤中提取雷公藤甲素 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211668768.7A CN115894602B (zh) | 2022-12-24 | 2022-12-24 | 从雷公藤中提取雷公藤甲素 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115894602A CN115894602A (zh) | 2023-04-04 |
| CN115894602B true CN115894602B (zh) | 2024-05-14 |
Family
ID=86481912
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211668768.7A Active CN115894602B (zh) | 2022-12-24 | 2022-12-24 | 从雷公藤中提取雷公藤甲素 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115894602B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1506365A (zh) * | 2002-12-10 | 2004-06-23 | 浙江得恩德制药有限公司 | 雷公藤粗提取物的制备方法 |
| CN104710502A (zh) * | 2015-03-18 | 2015-06-17 | 浙江工商大学 | 一种利用离子液体高效提取雷公藤甲素和乙素的方法 |
| CN104788532A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-07-22 | 成都健腾生物技术有限公司 | 一种雷公藤甲素的提取制备方法 |
| CN104817565A (zh) * | 2015-03-17 | 2015-08-05 | 宁波市疾病预防控制中心 | 一种利用离子液体高效提取雷公藤生物碱的方法 |
| CN105348366A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-02-24 | 许志强 | 一种雷公藤甲素的提取方法 |
| CN107759658A (zh) * | 2017-09-07 | 2018-03-06 | 浙江工商大学 | 利用离子液体超声提取雷公藤内酯酮的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8048914B2 (en) * | 2004-02-09 | 2011-11-01 | Pharmagenesis, Inc. | Methods for isolation of triptolide compounds from Tripterygium wilfordii |
-
2022
- 2022-12-24 CN CN202211668768.7A patent/CN115894602B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1506365A (zh) * | 2002-12-10 | 2004-06-23 | 浙江得恩德制药有限公司 | 雷公藤粗提取物的制备方法 |
| CN104817565A (zh) * | 2015-03-17 | 2015-08-05 | 宁波市疾病预防控制中心 | 一种利用离子液体高效提取雷公藤生物碱的方法 |
| CN104710502A (zh) * | 2015-03-18 | 2015-06-17 | 浙江工商大学 | 一种利用离子液体高效提取雷公藤甲素和乙素的方法 |
| CN104788532A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-07-22 | 成都健腾生物技术有限公司 | 一种雷公藤甲素的提取制备方法 |
| CN105348366A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-02-24 | 许志强 | 一种雷公藤甲素的提取方法 |
| CN107759658A (zh) * | 2017-09-07 | 2018-03-06 | 浙江工商大学 | 利用离子液体超声提取雷公藤内酯酮的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 雷公藤内酯的提取、分析和药理作用研究进展;吴少辉 等;现代药物与临床;20110131;第26卷(第01期);第36-39页 * |
| 雷公藤甲素的提取工艺;程敬丽 等;农药;20050731;第44卷(第07期);第316-318页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115894602A (zh) | 2023-04-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109810201B (zh) | 一种蛹虫草中虫草多糖和虫草素的超声波复合酸性水提取方法 | |
| CN105193863B (zh) | 一种高纯度海藻多酚的制备方法 | |
| CN102491938B (zh) | 脱氧野尻霉素的一种纯化方法 | |
| CN101961371A (zh) | 从甜味绞股蓝中提取分离人参皂苷、黄酮、多糖的方法 | |
| CN110016067A (zh) | 一种超声波辅助双水相提取柚子皮中柚皮苷和多糖的工艺 | |
| CN101214279A (zh) | 一种从桑叶中提取黄酮、多糖的方法 | |
| CN102180940A (zh) | 一种化合物文冠果壳苷的制备方法 | |
| CN109096407A (zh) | 一种灵芝菌糠中总三萜和多糖的综合提取方法 | |
| CN115894602B (zh) | 从雷公藤中提取雷公藤甲素 | |
| CN109851646A (zh) | 一种地黄有效成分提取分离方法及提取的梓醇和多糖 | |
| CN106832022A (zh) | 一种提取岩藻聚糖硫酸酯的方法 | |
| CN106832037A (zh) | 一种快速高效的三七多糖提取方法 | |
| CN111777656B (zh) | 一种从新鲜黄芪中提取黄芪甲苷的方法 | |
| CN103340923B (zh) | 一种核桃鞣质的制备方法 | |
| CN104448027A (zh) | 从海带中提取岩藻聚糖硫酸酯和岩藻黄质的方法 | |
| CN102432619A (zh) | 一种制备芝麻素的方法 | |
| CN114539132B (zh) | 一种水热酸控醇提桑叶中dnj方法 | |
| CN102964407B (zh) | 一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法及其制成的落新妇苷 | |
| CN106923350B (zh) | 一种用玉米须制备水溶性膳食纤维的方法 | |
| CN112143769B (zh) | 一种使用葛根药渣制备葛根多肽提取物的方法以及由此制得的葛根多肽提取物 | |
| CN112812144A (zh) | 一种天麻素提取物的提取方法 | |
| CN102352401A (zh) | 一种酶法水解制备杠柳苷元的方法 | |
| CN112724116A (zh) | 一种从紫玉米轴中提取花青素的方法 | |
| CN111187317A (zh) | 一种糖苷化光甘草定的制备方法 | |
| CN106866836A (zh) | 一种从梨皮中提取果胶的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |