CN102352401A - 一种酶法水解制备杠柳苷元的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及了一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，其特征在于包含以下步骤：1）取香加皮药材粉碎，加入3-8倍量80-90%甲醇溶液超声提取，提取液回收甲醇，加适量水共沸，趁热离心，得离心液；2）上述离心液调节pH4.5-5.5，加入生物酶保温酶解18-32小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品；3）上述粗品用高速逆流色谱仪制备，收集流分，干燥得杠柳苷元。本方法具有低污染、高收率的优点，适合工业化制备。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备杠柳苷元的方法，尤其是涉及一种酶法水解制备杠柳苷元的方法。
背景技术
香加皮（Cortex Periplocae ）是萝藦科（Asclepiadaceae）植物杠柳Periploca sepium Bunge的干燥根皮，具有祛风湿、强筋骨的功效，是临床常用中药，用于风寒湿痹，腰膝酸软，心悸气短，下肢浮肿。
杠柳苷元为(3beta,5beta)-3,5,14-trihydroxycard-20(22)-enolide，分子式C23H34O5，分子量390.5131，分子结构：
杠柳苷元为强心苷元，不仅具有强心作用，还具有抗炎、抗肿瘤等药理作用。顾为等发表的“杠柳苷元对肥大细胞脱颗粒及释放组胺影响的研究”和韩宇博等发表的“杠柳苷元的抗肿瘤作用研究”都对杠柳苷元做了实验验证。
杠柳苷元在中药香加皮中含量较低，制备难度较大，多是以杠柳毒苷为原料水解得来。
杠柳毒苷又叫萝蘑毒苷，五加皮苷G，分子式是C36H56O13，分子量为696.82，是一种具有甾核和不饱和五元内酯环结构的甲型强心苷，结构式含杠柳苷元-D-(加拿大麻糖)-D-(葡萄糖)，1g溶于大约20ml沸水，而在25℃时，大约为1:2500。易溶于乙醇，几乎不溶于乙醚、氯仿。
现有从香加皮中水解制备杠柳苷元方法，多是酸水解法制备。如专利（申请号200610013621.9）“一种杠柳苷元的制备方法”，该专利公开的方法是对含有杠柳毒苷的提取物进行酸水解和收集，得到中间体A，将中间体A进行柱层析，浓缩干燥后得到中间体B，将中间体B重结晶或高效液相制备得杠柳苷元。该法在酸水解产生大量的酸水，污染环境，柱层析过程样品损失较多，同时也产生大量硅胶和氧化铝废弃物，造成环境污染。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足和缺陷，提供一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，该方法能够提高产品收率，减少污染。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，其特征在于包含以下步骤：
1）取香加皮药材粉碎，加入3-8倍量80-90%甲醇溶液超声提取，提取液回收甲醇，加适量水共沸，趁热离心，得离心液；
2）上述离心液调节pH4.5-5.5，加入生物酶保温酶解18-32小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品；
3）上述粗品用高速逆流色谱仪制备，收集流分，干燥得杠柳苷元。
所述的调节pH的酸为柠檬酸或盐酸中的一种。
所述的生物酶可选蜗牛酶、纤维素酶和苦杏仁酶中的一种，用量为原料的1-5‰。
所述的保温酶解温度为47-55℃。
所述的高速逆流色谱制备条件为:溶剂系统选用氯仿/甲醇/水(4/3/3)体系，上相为固定相，转速700-1200r/min，流动相流速1-4ml/min。
在步骤1）中共沸时要充分搅拌，离心过滤可以加适量硅藻土提高效率。
步骤3）中粗品溶解可以氯仿溶解也可以流动相溶解。
本发明的优势在于：
1. 工艺采用超声提取，提取效率高，杂质溶出少。
2. 工艺采用生物酶解，酶解条件温和，不造成分子结构异化，同时废水容易处理。
3. 工艺采用高速逆流色谱分离，产品无损失，无废弃物产生。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1：
香加皮药材粉碎，取1000g，加入8L90%甲醇溶液超声提取60min，滤过液体再加3L90%甲醇超声提取30min，合并提取液回收甲醇，加500ml蒸馏水共沸1小时，加适量硅藻土趁热离心，收集离心液，柠檬酸调节pH4.5，加热至50℃，加入1g蜗牛酶保温酶解32小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品12g。取氯仿、甲醇、水按4：3：3比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速800r/min，注入流动相，平衡后，调整流速2ml/min，氯仿溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得杠柳苷元6.2g，含量96.6%。
实施例2：
香加皮药材粉碎，取1000g，加入5L80%甲醇溶液超声提取40min，提取3次，合并提取液回收甲醇，加600ml蒸馏水共沸1小时，加适量硅藻土趁热离心，收集离心液，盐酸调节pH5，加热至55℃，加入5g纤维素酶保温酶解18小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品10g。取氯仿、甲醇、水按4：3：3比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速900r/min，注入流动相，平衡后，调整流速3ml/min，流动相溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得杠柳苷元5.6g，含量98.2%。
实施例3：
香加皮药材粉碎，取1000g，加入6L85%甲醇溶液超声提取60min，提取2次，合并提取液回收甲醇，加500ml蒸馏水共沸1小时，加适量硅藻土趁热离心，收集离心液，柠檬酸调节pH5，加热至50℃，加入3g苦杏仁酶保温酶解26小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品12g。取氯仿、甲醇、水按4：3：3比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速1200r/min，注入流动相，平衡后，调整流速4ml/min，流动相溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得杠柳苷元6.9g，含量97.1%。
Claims (5)
1.一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，其特征在于包含以下步骤：
1）取香加皮药材粉碎，加入3-8倍量80-90%甲醇溶液超声提取，提取液回收甲醇，加适量水共沸，趁热离心，得离心液；
2）上述离心液调节pH4.5-5.5，加入生物酶保温酶解18-32小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品；
3）上述粗品用高速逆流色谱仪制备，收集流分，干燥得杠柳苷元。
2.如权利要求1所述一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，其特征在于步骤2）所述的调节pH的酸为柠檬酸或盐酸中的一种。
3.如权利要求1所述一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，其特征在于步骤2）所述的生物酶可选蜗牛酶、纤维素酶和苦杏仁酶中的一种，用量为原料的1-5‰。
4.如权利要求1所述一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，其特征在于步骤2）所述的保温酶解温度为47-55℃。
5.如权利要求1所述一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，其特征在于步骤3）所述的高速逆流色谱制备条件为:溶剂系统选用氯仿/甲醇/水(4/3/3)体系，上相为固定相，转速700-1200r/min，流动相流速1-4ml/min。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102898494A (zh) * | 2012-10-12 | 2013-01-30 | 灵武市森保科技开发有限公司 | 杠柳毒苷的制备方法 |
| CN106868087A (zh) * | 2017-03-28 | 2017-06-20 | 浙江树人学院 | 一种杠柳苷元的生物转化制备方法 |
| CN109971801A (zh) * | 2018-11-28 | 2019-07-05 | 山东省分析测试中心 | 高速逆流色谱仪在糖苷类成分生物转化中的应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3732210A (en) * | 1970-01-28 | 1973-05-08 | Hoechst Ag | Process for the manufacture of pregnane-20-one-3beta,5beta,14beta,21-tetrol |
| CN1560265A (zh) * | 2004-02-26 | 2005-01-05 | 广州中医药大学 | 一种制备抗病毒与抗肿瘤天然药物牛蒡子苷元的方法 |
| CN1850847A (zh) * | 2006-05-10 | 2006-10-25 | 天津中医药大学 | 一种杠柳苷元的制备方法 |
| CN102094052A (zh) * | 2010-12-12 | 2011-06-15 | 大连理工大学 | 一种糖苷酶催化与盐析萃取偶联制备天然药物的方法 |
-
2011
- 2011-07-26 CN CN2011102106312A patent/CN102352401A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3732210A (en) * | 1970-01-28 | 1973-05-08 | Hoechst Ag | Process for the manufacture of pregnane-20-one-3beta,5beta,14beta,21-tetrol |
| CN1560265A (zh) * | 2004-02-26 | 2005-01-05 | 广州中医药大学 | 一种制备抗病毒与抗肿瘤天然药物牛蒡子苷元的方法 |
| CN1850847A (zh) * | 2006-05-10 | 2006-10-25 | 天津中医药大学 | 一种杠柳苷元的制备方法 |
| CN102094052A (zh) * | 2010-12-12 | 2011-06-15 | 大连理工大学 | 一种糖苷酶催化与盐析萃取偶联制备天然药物的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 《药物分析杂志》 20061231 李丹毅 RP-HPLC法同时测定香加皮中杠柳毒苷和4一甲氧基水杨醛的含量 第1568页右栏第1段 1-5 第26卷, 第11期 * |
| 李丹毅: "RP—HPLC法同时测定香加皮中杠柳毒苷和4一甲氧基水杨醛的含量", 《药物分析杂志》, vol. 26, no. 11, 31 December 2006 (2006-12-31), pages 1568 - 1 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102898494A (zh) * | 2012-10-12 | 2013-01-30 | 灵武市森保科技开发有限公司 | 杠柳毒苷的制备方法 |
| CN106868087A (zh) * | 2017-03-28 | 2017-06-20 | 浙江树人学院 | 一种杠柳苷元的生物转化制备方法 |
| CN109971801A (zh) * | 2018-11-28 | 2019-07-05 | 山东省分析测试中心 | 高速逆流色谱仪在糖苷类成分生物转化中的应用 |
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