CN115887551A - 一种天然来源的tarc/ccl17和mdc/ccl22抑制剂及其制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种天然来源的TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂及其制备与应用。本发明公开了一种天然来源的TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂，即茶枝柑果实提取物。茶枝柑果实提取物能够抑制与炎症性疾病的显著相关的TARC/CCL17和MDC/CCL22的表达，并且对特应性皮炎等炎症性疾病具有较为明显的疗效，能显著改善2,4‑二硝基氟苯诱导的特应性皮炎小鼠的皮损和病理性增厚，缓解肥大细胞浸润，减少小鼠瘙痒次数，降低血清中IgE的表达，具有治疗特应性皮炎的效果，疗效确切，效果显著，具有广阔的应用前景。

Description

一种天然来源的TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂及其制备与应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种天然来源的TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂及其制备与应用。

背景技术

趋化因子是一些能吸引免疫细胞移行至感染部位的小分子家族蛋白，根据其氨基端(N端)半胱氨酸的排列方式，可分为CXC、CC、XC和CX3C四个亚族。其中CC趋化因子家族的小分子蛋白下有两个重要的趋化因子：一个是CC趋化因子配体17(CCL17)，也被称为胸腺活化调节趋化因子(TARC)，另一个是CC趋化因子配体22(CCL22)，也被称为巨噬细胞来源趋化因子(MDC)。TARC/CCL17和MDC/CCL22这两个趋化因子对T细胞介导的炎症性疾病的启动和发展起到关键性的作用，在炎症性疾病(如特应性皮炎、支气管哮喘、牛皮癣和嗜酸性肺炎)中高表达。同时，TARC/CCL17和MDC/CCL22都可以在炎症刺激下诱导T细胞趋化，并通过与趋化因子受体CCR4作用，激活Th2细胞、嗜碱性细胞和NK细胞的趋化，影响淋巴细胞、树突状细胞的分化、增殖和定位，招募细胞聚集到炎症部位。因此，以TARC/CCL17和MDC/CCL22为靶点进行抗炎药物的开发，是目前研究的重点方向。然而，目前对这两种趋化因子抑制剂的研究和开发较少，这个领域仍有较大的研究和开发空间。

茶枝柑(Citrus reticulata‘Chachi’，简称CRC)是芸香科柑橘属柑橘的栽培品种，是广陈皮(新会陈皮)的基源植物。一般以茶枝柑成熟组织完全分化果实的果皮(柑皮)入药，其中存放陈化3年或三年以上者，名“广陈皮或新会陈皮”。而茶枝柑果实，尤其是茶枝柑果实组织未分化的干燥幼果(柑胎)，归入肝、胆、胃经，具有疏肝破气，消积化滞的功效，常用于食积气滞，脘腹胀痛。茶枝柑果实包括果皮和果肉两部分，并且以果肉为主，含量大约为80％，其主要化学成分包括黄酮类、挥发油类和氨基酸类等。目前已有的药理学研究表明，茶枝柑果实提取物及其主要化学成分具有抗炎、抗氧化、改善胃肠道功能、保护心血管等药理活性，其应用前景值得重视。然而，目前尚未有关于茶枝柑果实提取物可作为TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂的报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提出了一种天然来源的TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂-茶枝柑果实提取物，可用于治疗与TARC/CCL17和MDC/CCL22相关的炎症性疾病。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

本发明第一方面提供了茶枝柑果实提取物在制备TARC/CCL17和/或MDC/CCL22抑制剂中的应用。

本发明研究发现，茶枝柑果实提取物能抑制TNF-α/IFN-γ体外细胞炎症模型中TARC/CCL17和MDC/CCL22的表达，能作为TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂起到抗炎效果。

本发明第二方面提供了茶枝柑果实提取物在制备治疗特应性皮炎的药物中的应用。

本发明经研究发现，茶枝柑果实提取物能作为TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂，对2,4-二硝基氟苯诱导的特应性皮炎小鼠模型具有较为明显的疗效，能显著改善皮损和病理性增厚，减少小鼠瘙痒次数，降低血清中IgE的表达，具有治疗特应性皮炎的效果，疗效确切，效果显著，具有广阔的应用前景。

优选地，所述茶枝柑果实提取物是由脂溶性有机溶剂对茶枝柑果实进行萃取后得到。

更优选地，所述茶枝柑果实提取物的提取方法为：对茶枝柑果实药材(包括柑皮或柑胎)进行粉碎、过筛后，加入脂溶性有机溶剂进行超声提取，收集提取液，去除溶剂后经干燥即得。

进一步地，所述脂溶性有机溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、环己烷、正己烷、石油醚。

进一步地，所述超声提取的超声波频率为20-40kHz，提取温度为30-60℃，提取次数为1-3次，每次提取的时间为30-90min。

进一步地，所述茶枝柑果实药材过筛的粒度为20-60目。

进一步地，按体积量计，所述脂溶性有机溶剂的用量为茶枝柑果实药材用量的10-30倍。

本发明第三方面提供了一种用于治疗特应性皮炎的药物，所述药物以茶枝柑果实提取物为主要活性成分。

优选地，上述药物还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。即上述的药物以茶枝柑果实提取物作为主要活性成分，与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合制备成组合物，并制备成临床上可接受的剂型。所述剂型是指临床上常用的注射剂、片剂、胶囊剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其制备成肠衣片剂。

进一步地，所述赋形剂是指可用于药学领域的稀释剂、黏合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稳定剂以及其他一些药用基质。

进一步地，所述载体是药物领域中可接受的功能性药用辅料，包括表面活性剂、助悬剂、乳化剂以及一些新型药用高分子材料，如环糊精、壳聚糖、聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸聚乳酸共聚物(PLGA)、透明质酸等。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明公开了一种天然来源的TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂，即茶枝柑果实提取物。茶枝柑果实提取物能够抑制与炎症性疾病的显著相关的TARC/CCL17和MDC/CCL22的表达，并且对特应性皮炎等炎症性疾病具有较为明显的疗效，能显著改善2,4-二硝基氟苯诱导的特应性皮炎小鼠的皮损和病理性增厚，缓解肥大细胞浸润，减少小鼠瘙痒次数，降低血清中IgE的表达，具有治疗特应性皮炎的效果，疗效确切，效果显著，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为茶枝柑果实提取物对TNF-α/IFN-γ体外细胞炎症模型中TARC/CCL17和MDC/CCL22因子表达水平的影响结果；

图2为茶枝柑果实提取物对TNF-α/IFN-γ体外细胞炎症模型中TARC/CCL17和MDC/CCL22 mRNA水平的影响结果；

图3为茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠挠痒次数的影响结果；

图4为茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳肿胀程度的影响结果图；

图5为茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳朵重量的影响结果图；

图6为茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳朵厚度的影响结果图；

图7为茶枝柑果实提取物影响特应性皮炎小鼠耳组织的病理切片图；

图8为茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳组织肥大细胞的影响结果图；

图9为茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠血清中IgE表达的影响结果图。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。

实施例1茶枝柑果实提取物浸膏的制备

(1)取茶枝柑果实(柑皮或柑胎)粉碎、过20-60目筛，用乙酸乙酯溶液对茶枝柑果实超声提取1-3次，每次提取30-90min，乙酸乙酯用量为药材量的10-30倍(体积比)，超声波频率为20-40kHz，提取温度为30-60℃，提取后收集提取液；

(2)将提取液冷凝浓缩旋干，回收溶剂后经干燥、粉碎得到茶枝柑果实提取物浸膏。

实施例2茶枝柑果实提取物对TNF-α/IFN-γ体外细胞炎症模型中TARC/CCL17和MDC/CCL22因子表达水平的影响

1、实验设计

取处于对数生长期且状态良好的人永生化角质形成细胞(HaCaT)，以5×10⁴个/孔的铺板密度将其接种于12孔细胞培养板中，待细胞完全贴壁生长后，模型组给予含有10ng/mLTNF-α和10ng/mL IFN-γ的完全培养基造模，给药组分别给予含有10ng/mLTNF-α、10ng/mL IFN-γ以及实施例1中不同浓度的茶枝柑果实提取物(1.25、2.5、5μg/mL)的完全培养基，对照组则只给予同样体积的DMSO，培养24h后，收集细胞上清，采用ELISA试剂盒检测TARC/CCL17和MDC/CCL22因子的表达水平。

2、实验结果

如图1所示，在TNF-α和IFN-γ刺激下，TARC/CCL17和MDC/CCL22表达显著增加，表示炎症的产生，而茶枝柑果实提取物对TARC/CCL17和MDC/CCL22具有抑制作用，能显著下调其表达水平。

实施例3茶枝柑果实提取物对TNF-α/IFN-γ体外细胞炎症模型中TARC/CCL17和MDC/CCL22因子mRNA表达水平的影响

1、实验设计

取处于对数生长期且状态良好的HaCaT细胞，以3×10⁵个/孔的铺板密度将其接种于6孔细胞培养板中，待细胞完全贴壁生长后，模型组给予含有10ng/mL TNF-α和10ng/mLIFN-γ的完全培养基造模，给药组分别给予含有10ng/mL TNF-α、IFN-γ以及实施例1中不同浓度的茶枝柑果实提取物(1.25、2.5、5μg/mL)的完全培养基，对照组则只给予同样体积的DMSO，培养24h后，提取RNA并进行后续的实验。

(1)提取RNA

采用Trizol法提取RNA，大体过程为：弃去旧培养基，用预冷的PBS轻轻润洗2次，加入Trizol试剂提取细胞的总RNA，加入一定体积的氯仿，剧烈震荡使其充分乳化后，室温静置，在4℃下以一定条件进行离心，离心完毕后，小心吸取上层无色透明层溶液于新的无酶EP管中，加入异丙醇，吹打均匀后室温静置，在一定条件进行离心，离心完毕后弃去上清，管底留下白色沉淀，加入75％乙醇润洗，在一定条件进行离心，离心完毕将上清溶液小心吸弃，并将EP管倒置吸水纸中，静置，然后加入适量DEPC水快速涡旋瞬离，得到RNA样品，置于冰上保存，打开Nanodrop 2000超微分光光度计，在A260/280条件下测定RNA样品浓度。

(2)逆转录

根据所得到的RNA浓度(浓度范围为300～1000ng/mL)，利用试剂盒(翌圣生物科技股份有限公司，CAT:11123ES60)逆转录合成模板DNA。

(3)q-PCR

取一个96孔PCR专用板置于冰面上，每个孔加入相应的模板DNA、引物(具体序列如表1所示)、无菌水和染料(具体体系如表2所示)，以GADPH为内参基因。将混合完毕的PCR板置于实时荧光定量PCR仪中，设置扩增程序(如表3所示)进行上机测试。

表1引物序列表

表2扩增体系

表3扩增程序

2、实验结果

如图2所示，在TNF-α和IFN-γ刺激下，TARC/CCL17和MDC/CCL22的mRNA水平相对于正常组表达显著增加，而茶枝柑果实提取物对TARC/CCL17和MDC/CCL22具有明显的抑制作用，能显著下调其在mRNA水平上的表达。

实施例4茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠挠痒次数的影响

1、实验设计

基质溶液：以丙酮：橄榄油＝1:3的比例(体积比)配制成基质溶液；

模型诱导剂：分别精密称取0.5g或0.2g 2,4-二硝基氟苯(DNFB)粉末溶于基质溶液中，配置成为0.5％或0.2％ DNFB，用于建立动物模型的致敏剂及激发剂。

药物配制：将实施例1制备得到的茶枝柑果实提取物浸膏溶于0.5％羧甲基纤维素钠溶液中，配成不同浓度的茶枝柑果实提取物溶液。

2、造模方法与实验分组

取6-8周雌性BALB/c小鼠30只，分6组，分别为基质溶液组、模型组、阳性药组、茶枝柑果实提取物低、中、高剂量给药组，茶枝柑果实提取物低、中、高剂量给药量分别为0.036g/kg/d、0.36g/kg/d、1.78g/kg/d(按提取物计分别为2mg/kg、10mg/kg、100mg/kg，按生药量计分别为1g/kg、10g/kg、50g/kg)，阳性药组则给予醋酸地塞米松1mg/kg，基质溶液组和模型组给予相同体积的0.5％羧甲基纤维素钠溶液。

以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为半抗原诱导剂诱导特应性皮炎样小鼠，除基质溶液组外，各组第一周第1天开始以隔天给药、一周4次的给药频率进行处理，以每次吸取20μL0.5％DNFB涂抹于小鼠耳部的方式进行急性期致敏，第二周开始以一周2次的给药频率进行处理，以每次吸取20μL 0.2％DNFB涂抹于小鼠耳部的方式进行慢性期刺激，基质溶液组给予同样体积的基质溶液进行处理，多次刺激以构建特应性皮炎小鼠模型，在给药开始的第8天，小鼠耳部出现明显的红肿、皮屑等症状时视为造模成功，小鼠给药组在第8天开始连续20天进行口服灌胃给药。第28天时对给药组给予一次药物，基质溶液组及模型组给予一次0.5％羧甲基纤维素钠，1小时后以吸取20μL 0.2％DNFB涂抹于小鼠耳部进行造模刺激，30min后以小鼠后腿挠头、耳部以及背部等部位超过3s为一次，计算10分钟内各组小鼠的挠痒次数。

3、实验结果

如图3所示，相比于基质空白组，模型组小鼠瘙痒次数明显增加，说明该模型诱导成功，与模型组相比，阳性药组和给药组小鼠的瘙痒次数明显减少，说明茶枝柑果实提取物能明显缓解特应性皮炎小鼠的瘙痒症状，减少小鼠挠痒次数。

实施例5茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳肿胀程度的影响

1、实验设计

按“实施例4”的方法进行分组以及给药，实验结束当天采用具有数码拍摄功能的设备对小鼠刺激部位进行拍摄。

2、实验结果

如图4所示，基质溶液组小鼠耳部光滑平整，而模型组小鼠具有明显的红肿、肥厚甚至有部分渗出的皮损症状，说明该模型造模成功。与模型组相比，阳性药组和给药组能减轻特应性皮炎小鼠的耳部肿胀，并且低中高剂量给药组具有一定的浓度效应，特别是高剂量给药组，效果显著。

实施例6茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳朵重量影响

1、实验设计

按“实施例4”的方法进行分组以及给药，实验结束当天将小鼠处死，取下耳部组织，并进行称重。

2、实验结果

如图5所示，相比于基质溶液组，模型组小鼠耳朵重量明显增加，说明模型组小鼠耳部出现肿胀导致的重量增加，而与模型组相比，阳性药组和给药组均能降低模型小鼠耳部重量的增加量，说明茶枝柑果实提取物能降低特应性皮炎小鼠耳部重量的增加量。

实施例7茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳朵厚度影响

1、实验设计

按“实施例4”的方法进行分组以及给药，实验结束当天利用游标卡尺对小鼠刺激部位进行测量。

2、实验结果

如图6所示，相比于基质溶液组，模型组小鼠耳朵厚度明显增加，说明模型组小鼠耳部出现肿胀导致的厚度增加，而与模型组相比，阳性药组和给药组均能降低模型小鼠耳部厚度的增加量，说明茶枝柑果实提取物能降低特应性皮炎小鼠耳部厚度的增加量。

实施例8茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳组织病理切片影响

1、实验设计

按“实施例4”的方法进行分组以及给药，行为学指标检测完毕后，将小鼠耳部组织取下，组织切片经苏木素&伊红(H&E)染色后于光学显微镜下观察各组小鼠耳组织的结构及形态。

(1)取材：对新鲜组织用固定液固定24h以上，将组织从固定液取出后放置于通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内；

(2)脱水浸蜡：将脱水盒放进脱水机内依次用梯度酒精进行脱水，即75％酒精4h，85％酒精2h，90％酒精2h，95％酒精1h，无水乙醇I30 min，无水乙醇II30 min，醇苯5-10min，二甲苯I 5-10min，二甲苯II 5-10min，65℃融化石蜡I1h，65℃融化石蜡II 1h，65℃融化石蜡III 1h；

(3)包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20℃冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块；

(4)切片：将修整好的蜡块，放入-20℃冻台冷却，再将冷却的蜡块置于石蜡切片机切片，切片厚4μm。然后将切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，载玻片将组织捞起，60℃烘箱内烤片，水烤干蜡烤化后取出常温保存备用；

(5)石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min，二甲苯Ⅱ20min，无水乙醇Ⅰ5min，无水乙醇Ⅱ5min，75％酒精5min，水化；

(6)苏木素染色：将切片放入苏木素染液染3-5min，自来水洗涤，分化液分化，自来水洗涤，返蓝液返蓝，流水冲洗；

(7)伊红染色：切片依次入85％、95％的梯度酒精中各脱水5min，再放入伊红染液中染色5min；

(8)脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5min，无水乙醇II 5min，无水乙醇Ⅲ5min，二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min，透明中性树胶封片并晾干；

(9)显微镜镜检，图像采集分析。

2、实验结果

如图7所示，与基质溶液组小鼠相比，模型组小鼠表皮厚度明显增加，皮层细胞间隙紊乱，真皮层炎性细胞浸润明显增加，说明该模型诱导成功，而与模型组相比，阳性组小鼠的表皮厚度降低，给药组也具有一定的降低特应性小鼠表皮病理性增厚的疗效，皮层细胞间隙清晰可见，炎性细胞渗出减少，并且随着药物剂量的增加，疗效越显著，具有一定的浓度依赖性。

实施例9茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠耳组织肥大细胞浸润影响

1、实验设计

按“实施例4”的方法进行分组以及给药，行为学指标检测完毕后，将小鼠耳部组织取下，组织切片经甲苯胺蓝(TB)染色后于光学显微镜下观察各组小鼠耳组织的结构及形态。

(1)取材：新鲜组织用固定液固定24h以上，将组织从固定液取出后放置于通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内；

(2)脱水浸蜡：将脱水盒放进脱水机内依次梯度酒精进行脱水，即75％酒精4h，85％酒精2h，90％酒精2h，95％酒精1h，无水乙醇I 30min，无水乙醇II 30min，醇苯5-10min，二甲苯I 5-10min，二甲苯II 5-10min，65℃融化石蜡I1h，65℃融化石蜡II 1h，65℃融化石蜡III 1h；

(3)包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签，于-20℃冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块；

(4)切片：将修整好的蜡块，放入-20℃冻台冷却，再将冷却的蜡块置于石蜡切片机切片，切片厚4μm。然后将切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，载玻片将组织捞起，60℃烘箱内烤片，水烤干蜡烤化后取出常温保存备用；

(5)石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min，二甲苯Ⅱ20min，无水乙醇Ⅰ5min，无水乙醇Ⅱ5min，75％酒精5min，水化；

(6)甲苯胺蓝染色：切片入甲苯胺蓝染液染20-30min，自来水洗涤，分化液分化，自来水洗涤，返蓝液返蓝，流水冲洗；

(7)分色：切片依次入85％、95％的梯度酒精各脱水5min；

(8)脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5min，无水乙醇II 5min，无水乙醇Ⅲ5min，二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min，透明中性树胶封片并晾干；

(9)显微镜镜检，图像采集分析。

2、实验结果

如图8所示，与基质溶液组小鼠相比，模型组小鼠真皮层和皮下组织的肥大细胞浸润严重，肥大细胞的数目显著增多，茶枝柑果实提取物能明显缓解肥大细胞的浸润渗出，并且随着药物剂量的增加，疗效越显著，具有一定的浓度依赖性。

实施例10茶枝柑果实提取物对特应性皮炎小鼠血清中IgE表达影响

1、实验设计

按“实施例4”的方法进行分组以及给药，行为学指标检测完毕后，取血，室温静置2h，在3000rpm/min条件下离心20min，得到上清，保存于-80℃冰箱中以用于后续实验。

利用小鼠IgE ELISA试剂盒检测小鼠血清中IgE的表达。

2、实验结果

如图9所示，在模型药的刺激下，模型组小鼠血清中的IgE表达显著升高，说明特应性皮炎小鼠血清IgE释放增加，阳性药组与给药组均能在不同程度上降低特应性皮炎小鼠血清中的IgE表达。

综上可见，茶枝柑果实提取物能作为TARC/CCL17和MDC/CCL22抑制剂，对2,4-二硝基氟苯诱导的特应性皮炎小鼠模型具有较为明显的疗效，能显著改善皮损和病理性增厚，减少小鼠瘙痒次数，降低血清中IgE的表达，具有治疗特应性皮炎的效果，疗效确切，效果显著，具有广阔的应用前景

以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.茶枝柑果实提取物在制备TARC/CCL17和/或MDC/CCL22抑制剂中的应用。

2.茶枝柑果实提取物在制备治疗特应性皮炎的药物中的应用。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述茶枝柑果实提取物是由脂溶性有机溶剂对茶枝柑果实进行萃取后得到。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述茶枝柑果实提取物的提取方法为：对茶枝柑果实药材进行粉碎、过筛后，加入脂溶性有机溶剂进行超声提取，收集提取液，去除溶剂后经干燥即得。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述脂溶性有机溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、环己烷、正己烷。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述超声提取的超声波频率为20-40kHz，提取温度为30-60℃，提取次数为1-3次，每次提取的时间为30-90min。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述茶枝柑果实药材过筛的粒度为20-60目。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，按体积量计，所述脂溶性有机溶剂的用量为茶枝柑果实药材用量的10-30倍。

9.一种用于治疗特应性皮炎的药物，其特征在于，所述药物以茶枝柑果实提取物为主要活性成分。

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