CN115885921B - 一种龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法，涉及水产养殖技术领域。所述龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法，包括将所述龟鳖目动物受精卵的内容物打入透明容器中进行无壳孵化的步骤；所述透明容器中装入灭菌水；所述灭菌水与所述内容物通过透明材料隔开。本发明提供的无壳孵化方法，方便24小时记录龟鳖目动物胚胎发育的过程，相较于将龟鳖目动物受精卵剖开取出发育的胚胎观察的传统方法，本发明可以在不伤害胚胎的情况下，连续全方位观察龟的胚胎发育全过程，本发明对龟鳖目动物组织胚胎学发展具有促进作用，同时可以为挽救珍惜龟鳖目动物破损的受精蛋提供一定的技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖技术领域，特别是涉及一种龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法。
背景技术
传统的孵化手段，例如蛭石孵化或者无介质孵化都大大提高了黄喉拟水龟等龟鳖目动物受精卵的孵化率。对于龟鳖目动物的胎胚发育进程的研究也逐步开展。如何使龟鳖目动物胚胎发育可视化，便捷观察对于龟鳖目动物组织胚胎学的发展具有重要意义。
目前，关于龟鳖目动物胚胎发育的观察方法，多半是直接将处于发育的受精卵剖开取出发育的胚胎观察。但是，以上技术方案中的方法存在以下缺点：取出发育的胚胎观察后，胚胎即停止发育然后死亡，不能观察同一个胚胎发育的全过程。因此，设计一种龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法，相较于将龟鳖目动物受精卵剖开取出发育的胚胎观察的传统方法可以不伤害胚胎的情况下连续观察龟的胚胎发育全过程，解决这一问题可为龟鳖目动物组织胚胎学发展具有促进作用，提供理论和技术支持，同时可以为挽救珍惜龟鳖类破损的受精蛋提供一定的技术支持。
发明内容
本发明的目的是提供一种龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法，以解决上述现有技术存在的问题，本发明的方法可以在不伤害胚胎的情况下连续观察龟的胚胎发育全过程。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法，包括将所述龟鳖目动物受精卵的内容物置于透明容器中进行无壳孵化的步骤；所述透明容器中装入灭菌水；所述灭菌水与所述内容物通过透明材料隔开。
进一步地，所述龟鳖目动物为黄喉拟水龟、巴西红耳龟或乌龟。
进一步地，所述透明容器为透明塑料杯。
进一步地，所述灭菌水与所述透明容器的容积的比例为1：2。
进一步地，所述透明材料为聚乙烯材质透明保鲜膜。
进一步地，所述无壳孵化的温度为25-32℃。
进一步地，所述无壳孵化的湿度为80％。
本发明公开了以下技术效果：
本发明公开了一种龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法技术，方便24小时记录龟鳖目动物胚胎发育的过程，相较于将龟鳖目动物受精卵剖开取出发育的胚胎观察的传统方法，本发明可以在不伤害胚胎的情况下，连续全方位观察龟的胚胎发育全过程，本发明对龟鳖目动物组织胚胎学发展具有促进作用，同时可以为挽救珍惜龟鳖类破损的受精蛋提供一定的技术支持。本发明提供的方法无需添加额外物质，所用人工容器和操作方法具有简易、方便和高效等特点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为蛋黄下沉示例图；箭头所指为下沉部位；
图2为将透明保鲜膜套入装好灭菌水的一次性塑料杯中，拉伸成形为凹状、无褶皱的结构；
图3为将黄喉拟水龟受精卵内容物打入凹状结构中；
图4为用透明保鲜膜将塑料杯口水平封住的示意图；
图5为黄喉拟水龟受精卵内容物发育18天的观察图；
图6为黄喉拟水龟受精卵内容物发育27天的观察图；
图7为黄喉拟水龟受精卵内容物发育33天的观察图；
图8为黄喉拟水龟受精卵内容物发育47天的观察图；
图9为黄喉拟水龟受精卵内容物发育53天的观察图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1
1.将180mL容量的一次性塑料杯、直径6.5cm的一次性橡皮筋、30×30cm聚乙烯材质的透明保鲜膜(PE，具有透氧隔菌功能)、酒精棉球和15cm扁圆型镊子，提前进行紫外线照射30分钟消毒。
2.选取黄喉拟水龟当天产的经过光照观察蛋黄下沉(如图1所示)的受精卵30枚进行无壳孵化。塑料杯中装入二分之一(最低为三分之一)体积的灭菌水(方便稳定保温)，将透明保鲜膜套入装好灭菌水的一次性塑料杯中，拉伸成形为凹状、无褶皱的结构，深度2-3cm，悬空，用橡皮筋固定(图2)。随后，在超净台中用镊子小心剥开受精卵，将内容物打入凹状结构中。包裹内容物的保鲜膜被杯口托起形成与真实蛋壳相同的立体结构和弧度(图3)。然后用透明保鲜膜将塑料杯口水平封住，无褶皱，并再次用橡皮筋固定，固定处涂抹酒精消毒(图4)。最后将塑料杯置于恒温孵化箱(珠江牌)中，设置32℃(温度最低可降为25℃)，湿度80％，进行孵化。
从无壳孵化开始至幼龟收好腹部卵黄脐带脱落，共历时53天(孵化过程如图5-9所示)，孵化成功率为90％，龟初始平均体重为4.48g，状态良好，饲养三天后吃食正常，与正常自然孵化出壳的幼龟无异。
实施例2
同实施例1，区别仅在于，将黄喉拟水龟的受精卵替换为巴西红耳龟受精卵。
从无壳孵化开始至幼龟收好腹部卵黄脐带脱落，共历时55天，孵化成功率为90％，龟初始平均体重为4.62g，状态良好，饲养三天后吃食正常，与正常自然孵化出壳的幼龟无异。
实施例3
同实施例1，区别仅在于，将黄喉拟水龟的受精卵替换为乌龟受精卵。
从无壳孵化开始至幼龟收好腹部卵黄脐带脱落，共历时56天，孵化成功率为90％，龟初始平均体重为4.01g，状态良好，饲养三天后吃食正常，与正常自然孵化出壳的幼龟无异。
对比例1
同实施例1，区别仅在于，塑料杯中未装入灭菌水。
从无壳孵化开始至幼龟收好腹部卵黄脐带脱落，共历时54天，孵化成功率为80％，龟初始平均体重为4.22g，状态良好，饲养三天后吃食正常，与正常自然孵化出壳的幼龟无异。
对比例2
同实施例1，区别仅在于，受精卵选用产出后第二天的受精卵。
从无壳孵化开始至幼龟收好腹部卵黄脐带脱落，共历时54天，孵化成功率为50％，龟初始平均体重为4.00g，状态良好，饲养三天后吃食正常，与正常自然孵化出壳的幼龟无异。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (1)
1.一种龟鳖目动物受精卵无壳孵化方法，其特征在于，包括将所述龟鳖目动物受精卵的内容物置于透明容器中进行无壳孵化的步骤；所述透明容器中装入灭菌水；所述灭菌水与所述内容物通过透明材料隔开；
将所述龟鳖目动物受精卵的内容物置于所述透明容器中进行无壳孵化的步骤，具体包括：将所述透明材料套入装好灭菌水的所述透明容器中，拉伸成形为凹状、无褶皱的结构，深度2-3cm，悬空，用橡皮筋固定；
在超净台中用镊子小心剥开所述龟鳖目动物受精卵取出所述内容物，并打入所述凹状、无褶皱的结构中，包裹所述内容物的透明材料形成与真实蛋壳相同的立体结构和弧度，然后用所述透明材料将所述透明容器的容器口水平封住，无褶皱，并再次用橡皮筋固定，固定处涂抹酒精消毒，之后无壳孵化至幼龟收好腹部卵黄脐带脱落；
所述灭菌水与所述透明容器的容积的比例为1：2；
所述龟鳖目动物受精卵为龟鳖目动物产出后第一天的受精卵；
所述龟鳖目动物为黄喉拟水龟、巴西红耳龟或乌龟；
所述透明容器为透明塑料杯；
所述透明材料为聚乙烯材质透明保鲜膜；
所述无壳孵化的温度为25-32℃；
所述无壳孵化的湿度为80%。
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