CN115851528B - 一株稻黄单胞杆菌致病变种la20、引物组合及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一株稻黄单胞杆菌致病变种LA20、引物组合及其应用，属于微生物技术领域。稻黄单胞杆菌致病变种LA20于2022年10月9日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.25881。本发明提供的稻黄单胞杆菌致病变种LA20能同时克服我国广泛应用的抗病基因Xa4、xa5、xa13和Xa7的抗性(以往的稻黄单胞菌株不具备同时克服上述四个基因的能力)，使绝大多数水稻品种抗性丧失，引起水稻白叶枯病再次爆发流行。该流行株是必不可少的重要菌种资源，在白叶枯病再次爆发成灾机理研究以及作为新的鉴别菌株鉴定评价水稻种质资源抗病性等方面具有巨大应用价值。

Description

一株稻黄单胞杆菌致病变种LA20、引物组合及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一株稻黄单胞杆菌致病变种LA20、引物组合及其应用。

背景技术

由稻黄单胞杆菌致病变种(Xanthomonas oryzaepv.oryzae)引起的白叶枯病是世界上最重要的水稻细菌性病害之一，一般造成减产10％-30％，重则减产50％甚至绝收。在我国，除了新疆、西藏等地未见报道，白叶枯病在全国其余各水稻产区均有发生和流行，成为危害我国水稻生产的三大流行性病害之一。自20世纪70年代以来，利用抗病基因培育抗病品种防治白叶枯病是最为有效和成功的，据全国农技中心统计2018年全国白叶枯病的发生面积仅约为21万公顷，偶有局部零星发生。白叶枯病抗性基因类型检测分析显示我国北方稻区培育的抗白叶枯病品种主要利用的是Xa4、xa5、Xa7、xa13、Xa21和Xa23六个抗病基因；长江中下游稻区培育的抗病品种主要利用的则是xa5、Xa7、xa13、Xa21和Xa23五个抗病基因；华南稻区培育的抗病品种主要利用的仅有xa5、Xa7和Xa23三个抗病基因。

病原菌和寄主是军备竞赛的关系，寄主产生抗性时，病原菌也会不断进化来克服寄主抗病基因的抗性。虽然上述水稻Xa4、xa5、Xa7、xa13、Xa21和Xa23基因抗性较好、抗谱较宽，对我国大多数白叶枯病原菌小种具有抗性，在抗病育种中被广泛应用，但随着病原菌小种的不断进化，它们的抗病持久性也很难保持。最近两年长江中下游地区，白叶枯病“卷土重来”大面积发生流行，原有的白叶枯病抗性品种抗性丧失，这时分离鉴定病原菌新流行株，测试致病性，确定其分类地位和小种类型对于爆发成灾机理的研究、相应的水稻抗病基因克隆，抗病种质资源鉴定和评价，抗病品种培育显得尤为重要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一株稻黄单胞杆菌致病变种LA20、引物组合及其应用，本发明提供的稻黄单胞杆菌致病变种LA20能同时克服抗病基因Xa4、xa5、xa13和Xa7的抗性，使绝大多数水稻品种抗性丧失，引起白叶枯病再次爆发流行。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一株稻黄单胞杆菌致病变种(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)LA20，于2022年10月9日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.25881。

本发明还提供了一种鉴定上述技术方案所述稻黄单胞杆菌致病变种LA20的引物组合，包括Xoo163引物对和Xoo1429引物对；

所述Xoo163引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述Xoo1429引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

优选的，所述引物组合鉴定稻黄单胞杆菌致病变种LA20的PCR反应的体系每20μL包括：2×KOD FX缓冲液10μL，10μM正反引物各0.5μL，KOD FX DNA聚合酶0.5μL，含模板ddH₂O溶液8.5μL。

优选的，所述PCR反应的条件包括：95℃预变性5min；98℃变性10s，55℃退火20s，68℃延伸30s，35个循环；最后，68℃延伸7min，4℃保存。

本发明还提供了上述技术方案所述的稻黄单胞杆菌致病变种LA20在鉴定和/或评价水稻种质资源白叶枯病抗性中的应用。

优选的，通过抗病基因鉴定和/或评价水稻种质资源白叶枯病抗性。

优选的，所述抗病基因包括Xa4、xa5、xa13和Xa7基因。

本发明的有益效果为：

本发明提供的稻黄单胞杆菌致病变种LA20能同时克服我国广泛应用的抗病基因Xa4、xa5、xa13和Xa7的抗性(以往的稻黄单胞菌株不具备同时克服上述四个基因的能力)，使绝大多数水稻品种抗性丧失，引起白叶枯病再次爆发流行。该流行株是必不可少的重要菌种资源，在白叶枯再次爆发成灾机理研究以及作为新的鉴别菌株鉴定评价水稻种质资源抗病性等方面具有巨大应用价值。

生物保藏说明

稻黄单胞杆菌致病变种(Xanthomonas oryzaepv.oryzae)LA20，于2022年10月9日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.25881，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。

附图说明

图1为稻黄单胞杆菌致病变种新流行株LA20在PSA培养基上的菌落形态；

图2为菌落PCR扩增稻黄单胞杆菌致病变种新流行株LA20的16SrRNA、特有hypotheticalprotein以及16S rRNA和电子转移黄蛋白基因嵌合序列(16S rRNA/ETF)；M：DNA2000bp marker；1-8：LA20在PSA培养基上生长的单菌落；

图3为稻黄单胞杆菌致病变种新流行株LA20对Xa4、xa5、Xa7、xa13、Xa21和Xa23的致病性。

具体实施方式

本发明提供了一株稻黄单胞杆菌致病变种(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)LA20，于2022年10月9日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.25881。

本发明还提供了一种鉴定上述技术方案所述稻黄单胞杆菌致病变种LA20的引物组合，包括Xoo163引物对和Xoo1429引物对。

在本发明中，所述Xoo163引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，具体如下：

SEQ ID NO.1：CAATGCACACGTGGAAAGGG；

SEQ ID No.2：CTTGCAAGGGATAGAAGCGT。

在本发明中，所述Xoo1429引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，具体如下：

SEQ ID NO.3：GCCTCGGAGCTATATGCCGT；

SEQ ID No.4：TAAGTCTGTTGTGAAAGCCC。

在本发明中，所述引物组合鉴定稻黄单胞杆菌致病变种LA20的PCR反应的体系每20μL优选包括：2×KOD FX缓冲液10μL，10μM正反引物各0.5μL，KOD FX DNA聚合酶0.5μL，含模板ddH₂O溶液8.5μL。本发明对模板的获取方法没有特殊限定，本领域技术人员按照常规操作即可。

在本发明中，所述PCR反应条件优选包括：95℃预变性5min；98℃变性10s，55℃退火20s，68℃延伸30s，35个循环；最后，68℃延伸7min，4℃保存。

本发明还提供了上述技术方案所述的稻黄单胞杆菌致病变种LA20在鉴定和/或评价水稻种质资源白叶枯病抗性中的应用。

优选的，所述水稻种质资源为国际水稻研究所培育的以IR24为轮回亲本的籼稻近等单基因系：IR24(Xa18)、IRBB1(Xa1)、IRBB2(Xa2)、IRBB3(Xa3)、IRBB4(Xa4)、IRBB5(xa5)、IRBB7(Xa7)、IRBB8(Xa8)、IRBB10(Xa10)、IRBB11(Xa11)、IRBB13(xa13)、IRBB14(Xa14)和IRBB21(Xa21)以及由中国农科院培育的CBB23(Xa23)，括号内为品种包含的单一白叶枯抗病基因。

本发明优选通过抗病基因鉴定和/或评价水稻种质资源白叶枯病抗性。在本发明中，所述抗病基因优选包括Xa4、xa5、xa13和Xa7基因。

实施例中用到的培养基：

PSA固体培养基：蛋白胨10g，L-谷氨酸1g，蔗糖10g，琼脂20g，蒸馏水定容至1L。121℃，高压灭菌20min。

M210液体培养基：酵母提取物4g，酵水解干酪素8g，蔗糖5g，MgSO₄·7H₂O 0.3g，蒸馏水定容至1L。121℃，高压灭菌20min。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

菌株LA20的分离鉴定及纯化和保藏

1.菌株LA20的分离

2021年安徽省六安市种植的水稻品种“荃优1606”大面积爆发白叶枯病，采集具有白叶枯病典型症状的发病叶片，在叶片病健交界处剪取2-3cm，放入75％的酒精中1min、1％的次氯酸钠溶液中3-5min，然后用无菌水冲洗三遍；再加入1mL无菌水，镊子挤压剪碎的叶片，吸取挤压液100μL按照10¹-10⁸的梯度等比稀释，最后将各个梯度的等比稀释液100μL分别涂布在PSA培养基平板上，28℃培养4-5天，观察记录单菌落特征。

2.菌株LA20的鉴定

(1)形态学鉴定

菌株LA20在PSA培养基上长出的单菌落呈黄色，圆形凸起且边缘光滑(图1)。细胞杆状，大小0.5-1.0×1.0-2.7μm，单个排列，鞭毛单根极生，无芽孢和荚膜。参照《伯杰细菌鉴定手册》中文第八版(R.E.布坎南等,北京:科学出版社,1984)，LA20符合黄单胞杆菌的生长特性，初步确认该菌株隶属于黄单胞杆菌属细菌(Xanthomonas spp.)。

(2)分子鉴定

以菌株LA20在平板上形成的单菌落为模板，采用菌落PCR反应快速、特异地扩增16S rRNA基因(1539bp)、稻黄单胞致病变种特有hypothetical protein基因(163bp)以及16S rRNA和ETF基因嵌合专化序列(1429bp)，通过获得的扩增片段的序列同源性来鉴定菌株LA20的种属。

PCR反应的模板：LA20在PSA固体培养基培养4-5天，挑取单菌落溶于8.5μL ddH₂O；或者LA20在PSA液体培养基28℃，200rpm培养48h，取1μL菌液溶于7.5μL ddH₂O。

PCR反应的引物：见表1，通用引物16SrRNAF/R序列参见文献Mondal,K.K.,et al.,Plant Diseae,2011,95:1582，特异引物Xoo163F/R和Xoo1429F/R序列为本发明设计，设计思路为：在NCBI上下载水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae、细菌性条斑病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzicola、细菌性穗枯病菌Burkholderia glumae、细菌性叶鞘褐腐病菌Pseudomonasfuscovaginae、细菌性基腐病菌Dickeyazeae的基因组序列信息进行BLAST分析，选择只存在白叶枯病菌Xanthomonas oryzaepv.oryzae内的基因特有序列设计引物。

表1稻黄单胞杆菌致病变种分离株鉴定所用引物序列

PCR反应的体系(20μL)：2×KOD FX缓冲液10μL，10μM正反引物各0.5μL，KOD FXDNA聚合酶0.5μL，含模板ddH₂O溶液8.5μL。

PCR反应条件：95℃预变性5min；98℃变性10s，55℃退火20s，68℃延伸30s，35个循环；最后，68℃延伸7min，4℃保存。

PCR产物的检测：扩增产物用浓度为1.5％的琼脂糖凝胶电泳并用凝胶成像仪观察，目标片段分别约为1539bp、163bp和1429bp(图2)。

PCR产物的序列比对：扩增的PCR产物直接送擎科生物科技有限公司Sanger测序，测序获得的三段基因序列分别如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示。将获得的三段序列在NCBI数据库(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)中进行BLAST分析，结果显示菌株LA20的SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和SEQ ID No.9与稻黄单胞致病变种典型株系PXO99A的16S rRNA基因、特有hypotheticalprotein基因以及16S rRNA和ETF基因嵌合专化序列同源性高度一致，均为100％。

结合形态学和分子生物学的鉴定结果，可知菌株LA20为稻黄单胞杆菌致病变种，其分类命名为Xanthomonas oryzaepv.oryzae。

SEQ ID No.7：

AGAGTTTGATCCTGGCTCAGAGTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAACGGCAGCACAGTAAGAGCTTGCTCTTATGGGTGGCGAGTGGCGGACGGGTGAGGAATACATCGGAATCTACTCTTTCGTGGGGGATAACGTAGGGAAACTTACGCTAATACCGCATACGACCTACGGGTGAAAGCGGAGGACCTTCGGGCTTCGCGCGATTGAATGAGCCGATGTCGGATTAGCTAGTTGGCGGGGTAAAGGCCCACCAAGGCGACGATCCGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGGGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCCCTTTTGTTGGGAAAGAAAAGCAGTCGGTTAATACCCGATTGTTCTGACGGTACCCAAAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTACTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGTAGGTGGTGGTTTAAGTCTGTTGTGAAAGCCCTGGGCTCAACCTGGGAATTGCAGTGGATACTGGGTCACTAGAGTGTGGTAGAGGGTAGCGGAATTCCCGGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATCGGGAGGAACATCAGTGGCGAAGGCGGCTACCTGGACCAACACTGACACTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGCGAACTGGATGTTGGGTGCAATTTGGCACGCAGTATCGAAGCTAACGCGTTAAGTTCGCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATCCACGGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACCGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCCAGCACGTAATGGTGGGAACTCTAAGGAGACCGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGACCAGGGCTACACACGTACTACAATGGTAGGGACAGAGGGCTGCAAACCCGCGAGGGCAAGCCAATCCCAGAAACCCTATCTCAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTTGTTGCACCAGAAGCAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGCTTGCCACGGTGTGGCCGATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTT。

SEQ ID No.8：

CAATGCACACGTGGAAAGGGACCTCAAAAAAATCCAGTCCGGCACCGCTCTGTCACCGCTGCTGCTAGTGCGCCAGGAAGGCCAGCGCACCGTAGTTGCCGACGGCTACCACCGTTTGTGCGCCGTCTATCGCTTAGACGAGGACGCTTCTATCCCTTGCAAG。

SEQ ID No.9：

GCCTCGGAGCTATATGCCGTGCTGTGTGGAGTACAAAGCCACCAACGCGAACATACGACTCAATTATTTAGGGACTCGAAGTCCCCGCCTTAGCCTCAACGACACGTTTAGATAGATATCTCAAACGCTCGCTACGTCACAAGTTATAAAAGAACATGTCTCAGCCTCAACGCTGATCCATATAAATTCTTAAGTGTGCACTACATTCAGAGTGGTGGGTCTGGGTAGACTCGAACTACCGACCTCACCCTTATCAGGGGTGCGCTCTAACCACCTGAGCTACAGACCCGAAGTCTTTTCACTCAATATGGTGGAGCCTGTCGGGATCGAACCGACGACCCCCTGCTTGCAAAGCAGGTGCTCTCCCAGCTGAGCTAAGGCCCCAAAAGGGACTTCGCATACCGACCTGTGCCGGTATGAATCTCTGAATGCAGGTAATTTGTGAGGACGCCCGACAGGACGATGACGTCATGCTCAAAAGGAGGTGATCCAGCCGCACCTTCCGATACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAGTCATCGGCCACACCGTGGCAAGCGCCCTCCCGAAGGTTAAGCTACCTGCTTCTGGTGCAACAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATGCTGATCTGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTGAGATAGGGTTTCTGGGATTGGCTTGCCCTCGCGGGTTTGCAGCCCTCTGTCCCTACCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCTGGTCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCGGTCTCCTTAGAGTTCCCACCATTACGTGCTGGCAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCACGGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCCGTGGATGTCAAGACCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGCGAACTTAACGCGTTAGCTTCGATACTGCGTGCCAAATTGCACCCAACATCCAGTTCGCATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCCTCAGTGTCAGTGTTGGTCCAGGTAGCCGCCTTCGCCACTGATGTTCCTCCCGATCTCTACGCATTTCACTGCTACACCGGGAATTCCGCTACCCTCTACCACACTCTAGTGACCCAGTATCCACTGCAATTCCCAGGTTGAGCCCAGGGCTTTCACAACAGACTTA。

3.菌株LA20的纯化和保藏

LA20鉴定为稻黄单胞杆菌致病变种后，在PSA培养基上挑取单菌落到M210液体培养基中，于28℃下200rpm培养48h，菌液与50％的灭菌甘油以体积比1:1混合后放入-80℃冰箱保存备用。并对其进行了保藏，保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏日期为：2022年10月9日，保藏编号：CGMCC No.25881。

实施例2

菌株LA20的致病性测定和水稻品种抗病性评价

1.接种水稻材料的选择和种植

接种的水稻材料选用国际水稻研究所培育的以IR24为轮回亲本的籼稻近等单基因系：IR24(Xa18)、IRBB1(Xa1)、IRBB2(Xa2)、IRBB3(Xa3)、IRBB4(Xa4)、IRBB5(Xa5)、IRBB7(Xa7)、IRBB8(Xa8)、IRBB10(Xa10)、IRBB11(Xa11)、IRBB13(Xa13)、IRBB14(Xa14)和IRBB21(Xa21)以及由中国农科院培育的CBB23(Xa23)，这些水稻材料遗传背景清楚，LA20的致病性可以和抗病基因一一对应。每份接种材料种植4行，每行6株，行间距为20cm，株距为16cm，3次重复；水稻材料播种时间与大田生产播种时间相同或适当调整，以使植株接种期和发病期能够与适宜水稻白叶枯病发生流行的气候条件(日均气温约30℃，相对湿度大于75％)相遇，确保致病性测定结果的准确性。

2.接种体的制备

取-80℃冻存的菌株LA20在PSA培养基平板上划线培养4-5天，挑取单菌落到约2-3mL M210液体培养基中，于28℃下200rpm培养48h，再以1:100的比例转接到新的M210液体培养基中扩大培养至OD₆₀₀值约为0.5，作为接种体以备用。

3.接种

水稻孕穗期，于下午16:00-18:00时进行剪叶接种，剪刀蘸取配置的OD₆₀₀值约为0.5的LA20菌液，剪除剑叶顶端2-3cm，每份水稻材料接种6株，每株接种3-5片剑叶，重复3次。

4.病情调查

接种21天后，观察接种材料的发病情况，测量病斑长度，每株测量发病最严重的剑叶的病斑长度，每份接种材料测量6株，重复三次，统计平均病斑长度占接种叶片总长的比率。

5.致病性测定和水稻品种抗病性评价

根据我国白叶枯病病情分级和抗性类型划分标准(方中达等,中国水稻白叶枯病菌致病型的研究,植物病理学报,1990,20:81-87)：病斑长度小于接种叶长的四分之一为抗病(R)，大于或等于接种叶长的四分之一为感病(S)，对LA20的致病性进行测定和评价，结果见表2。

表2稻黄单胞杆菌致病变种新流行株LA20在水稻鉴别品种中的致病性

如表2所示：LA20侵染21天后，IR24(Xa18)、IRBB1(Xa1)、IRBB2(Xa2)、IRBB3(Xa3)、IRBB4(Xa4)、IRBB5(xa5)、IRBB7(Xa7)、IRBB8(Xa8)、IRBB10(Xa10)、IRBB11(Xa11)、IRBB13(xa13)和IRBB14(Xa14)十二个鉴别品种的平均病斑长度达到12.7-27.0cm，是接种叶长的0.34-0.73，大于四分之一，对LA20表现为感病，LA20对其具有致病性；仅仅IRBB21和CBB23的病斑长度为7.9cm和3.5cm，分别占接种叶长的0.21和0.14，小于四分之一，对LA20表现为抗病(图3)。这结果意味着菌株LA20能完全克服Xa18、Xa1、Xa2、Xa3、Xa4、xa5、Xa7、Xa8、Xa10、Xa11、xa13和Xa14十二个基因的抗性，但还不能完全克服Xa21和Xa23基因的抗性，Xa21和Xa23对LA20还具有一定抗性。

参照杨万风等(2006)报道的采用IRBB5、IRBB13、IRBB3、IRBB14、IRBB2和IR24作为鉴别品种的水稻白叶枯病菌致病性分型标准R1-R9型(中国水稻白叶枯病菌毒性变异研究,植物病理学报,2006,36:244-288)，LA20归为R9型，IRBB5等六个鉴别品种对其均表现为感病；但同已报道的强致病性R9型不一样的是，LA20还可以完全克服水稻品种中广泛应用的广谱且抗性持久的Xa7抗病基因的抗性(表2)，这表明LA20是病原菌为克服水稻抗性进化出的比现存的R9型强致病株致病性更强的新流行株。

对于水稻白叶枯病的抗病育种，我国水稻品种中广泛应用的是Xa4、xa5、Xa7、xa13、Xa21和Xa23六个抗病基因，上述结果显示去年从安徽分离的LA20新流行株已完全能克服Xa4、xa5、Xa7和xa13的抗性(图3)，导致含有这四个基因的抗病品种抗性丧失，这可能是水稻白叶枯病“沉寂”后，近两年却在长江中下游地区再度爆发流行的原因。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一株稻黄单胞杆菌致病变种(Xanthomonas oryzaepv.oryzae)LA20，于2022年10月9日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.25881。

2.权利要求1所述的稻黄单胞杆菌致病变种LA20在鉴定和/或评价水稻种质资源白叶枯病抗性中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过抗病基因鉴定和/或评价水稻种质资源白叶枯病抗性。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗病基因包括Xa4、xa5、xa13和Xa7基因。