CN115844976A - 提升糖代谢能力的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种提升糖代谢能力的组合物及其应用。所述提升糖代谢能力的组合物，包括如下组分：白芸豆的提取物、绿茶的提取物，以及栀子的提取物。所述提升糖代谢能力的组合物，通过白芸豆的提取物、绿茶的提取物以及栀子的提取物的协同配伍，能够以不依赖胰岛素的方式激活骨骼肌细胞的葡萄糖转运蛋白向细胞膜上易位，从而激活骨骼肌细胞糖代谢通路，提升骨骼肌糖代谢能力，进一步改善肥胖和糖代谢障碍。同时，该提升糖代谢能力的组合物还可以增加胰岛素的敏感性，协同胰岛素增强骨骼肌的糖代谢能力。

Description

提升糖代谢能力的组合物及其应用

技术领域

本申请涉及药物、食品或保健品技术领域，特别是涉及一种提升糖代谢能力的组合物及其应用。

背景技术

随着经济的高速发展，居民的饮食结构也随之发生改变，人们根据喜好日常摄入更多的含糖饮料、精制碳水。大部分碳水化合物在口腔及肠腔中经消化酶水解为葡萄糖，分解后的葡萄糖通过肠黏膜上皮细胞进入小肠壁的毛细血管，并汇合于门静脉而进入肝脏，最后进入大循环，作为主要能源物质被运送到身体各个器官。而当碳水化合物摄入过剩时，会呈现高血糖状态，长期的高血糖会诱发肥胖、心血管疾病、糖尿病等疾病，严重危害人类健康。同时，研究表明肥胖、动脉粥样硬化以及糖尿病还会进一步导致糖代谢障碍，再度上调血糖水平，形成恶性循环。肥胖和糖尿病发病率呈逐年上升趋势，肥胖、糖尿病的发生又引发各种心脑血管疾病、慢性肾脏病和视网膜病变等，严重降低生活质量。因此，加速糖代谢，控制血糖升高，改善肥胖以及糖代谢障碍人群的健康是亟待解决的问题。

传统的用于平稳血糖、缓解糖代谢压力的方法或机理可以举例如：

(1)通过抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶以抑制外源性碳水向葡萄糖进行转换来控制血糖，但消化酶的抑制率根据个体差异很难把握，因此相应的产品若阻断率过高会造成低血糖，若阻断率过低仍然会造成糖代谢障碍人群血糖过高；

(2)通过注射胰岛素来激活糖代谢通路，但这作为临床治疗手段并不适用于糖尿病前期，或肥胖人群，长时间注射胰岛素更容易造成内源性胰岛素分泌障碍以及敏感性降低，导致胰岛素抵抗。

骨骼肌是人体最大的糖代谢器官，七成以上的糖代谢在骨骼肌中进行，因此促进骨骼肌对葡萄糖的摄取和利用是提升糖代谢的最有效的手段之一。骨骼肌糖代谢分为葡萄糖转运、糖原合成和糖原分解三个步骤进行，其中葡萄糖转运是骨骼肌利用葡萄糖的首要步骤。葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter 4，GLUT4)是骨骼肌中最重要的葡萄糖转运载体之一，承担转运机体50％～80％的葡萄糖。人体摄入糖分后刺激胰岛素分泌，胰岛素刺激细胞分泌GLUT4和易位到细胞膜上。在基础代谢状态下，定位细胞膜上的GLUT4仅有5％左右，血糖升高以及胰岛素分泌可使50％的GLUT4从细胞核周围易位到细胞膜表面，摄取利用葡萄糖稳定血糖水平。因此，促进GLUT4从细胞内易位到细胞膜是提升骨骼肌糖代谢能力的关键步骤。

有两种主要机制参与促进GLUT4的易位和活化，包括通过胰岛素受体底物(IRS)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)途径和p38促分裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)途径。因此胰岛素是调控骨骼肌细胞GLUT4易位的重要信号分子。在骨骼肌中胰岛素信号的传导主要由胰岛素受体底物-1(IRS-1)/PI3K/AKT途径介导。该途径的激活导致细胞内GLUT4易位至表面膜，从而增加葡萄糖摄取。另外，胰岛素可介导P38/MAPK信号通路增强GLUT4的内在活性，参与GLUT4的激活，导致胰岛素刺激葡萄糖摄取。通过调控胰岛素相关的两条通路，促进GLUT4向细胞膜易位，提高机体糖代谢能力是改善肥胖和代谢障碍的有效手段，但是有部分肥胖或糖尿病患者存在胰岛素水平低下或胰岛素受体不敏感等问题，仅依赖于胰岛素相关的通路可能对该类人群改善糖代谢的帮助有限。因此，寻找一种不依赖于胰岛素的促进糖代谢的方法是改善胰岛素水平低下或胰岛素受体不敏感人群糖代谢能力的解决方案之一。同时，目前以促进胰岛素分泌为目的方案对Ⅱ型糖尿病患者等胰岛素不敏感人群的糖代谢能力的提高也十分有限。

发明内容

基于此，本申请提供一种无需依赖于胰岛素，且能够有效提升机体的糖代谢能力的组合物及其应用。

本申请的第一方面，提供一种提升糖代谢能力的组合物，以重量份计，包括如下组分：

白芸豆的提取物30份～50份、绿茶的提取物30份～50份，以及栀子的提取物40份～80份；

所述重量份按照各组分的干重计。

在其中一个实施例中，所述的提升糖代谢能力的组合物，以重量份计，包括如下组分：

白芸豆的提取物35份～45份、绿茶的提取物35份～45份，以及栀子的提取物55份～65份；

所述重量份按照各组分的干重计。

在其中一个实施例中，所述组合物具有如下特征中的一项或多项：

(1)所述白芸豆的提取物为白芸豆的水提取物；

(2)所述绿茶的提取物为绿茶的水提取物和绿茶的醇提取物中的一种或两种；

(3)所述栀子的提取物为栀子的水提取物和栀子的醇提取物中的一种或两种。

在其中一个实施例中，所述白芸豆的提取物中蛋白质的质量百分比≥75％。

在其中一个实施例中，所述绿茶的提取物中茶多酚的质量百分比为20％～60％。

在其中一个实施例中，所述栀子的提取物中栀子苷的质量百分比为1％～10％。

本申请的第二方面，提供第一方面所述的提升糖代谢能力的组合物在制备具有提升糖代谢能力的药物、食品或保健品中的应用。

在其中一个实施例中，所述糖代谢为骨骼肌的糖代谢。

本申请的第三方面，提供第一方面所述的提升糖代谢能力的组合物在制备具有预防或治疗肥胖、糖代谢障碍、心血管疾病、糖尿病或辅助降血糖的药物、食品或保健品中的应用。

本申请的第四方面，提供一种药物、食品或保健品，包括第一方面所述的提升糖代谢能力的组合物，以及辅料。

上述提升糖代谢能力的组合物，通过白芸豆的提取物、绿茶的提取物以及栀子的提取物的协同配伍，能够以不依赖胰岛素的方式激活骨骼肌细胞的葡萄糖转运蛋白向细胞膜上易位，从而激活骨骼肌细胞糖代谢通路，提升骨骼肌糖代谢能力，进一步改善肥胖和糖代谢障碍。同时，该提升糖代谢能力的组合物还可以增加胰岛素的敏感性，协同胰岛素增强骨骼肌的糖代谢能力。

附图说明

图1为不同处理组细胞的葡萄糖摄取量统计图；

图2为不同处理组细胞膜蛋白中GLUT4、β-actin免疫印迹图以及相应的定量结果；

图3为不同处理组细胞中p-AKT、AKT免疫印迹图以及相应的定量结果。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本申请的提升糖代谢能力的组合物及其应用作进一步详细的说明。本申请可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本申请公开内容理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。

本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。

本文中，“一种或多种”指所列项目的任一种、任两种或任两种以上。

本申请中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”、“第四方面”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。

本申请中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。

本申请中，涉及到数值区间，如无特别说明，上述数值区间内视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。

本申请中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。

本申请中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。

本申请中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。

本申请中的室温一般指4℃～30℃，较佳地指20±5℃。

目前，尚未见不依赖于胰岛素的提升糖代谢能力的食源性天然产物组合物，也未见以激活骨骼肌GLUT4易位的从而提升糖代谢的食源性天然产物组合物。

传统的降低餐后血糖的药品或食品有以抑制α-淀粉、α-葡萄糖苷酶活性为主的产品，例如白芸豆提取物作为淀粉酶抑制剂在阻断碳水吸收的功能食品中被应用，但白芸豆提取物无法减少人体对葡萄糖、蔗糖等小分子糖类的吸收，且白芸豆的功效成分为α-淀粉酶抑制蛋白，在酸性的胃液环境中不稳定，因此，单独的白芸豆降低餐后血糖的效果不稳定。

本申请的一示例提供一种提升糖代谢能力的组合物，以重量份计，包括如下组分：白芸豆的提取物30份～50份、绿茶的提取物30份～50份，以及栀子的提取物40份～80份；所述重量份按照各组分的干重计。

上述提升糖代谢能力的组合物将白芸豆的提取物、绿茶的提取物和栀子的提取物进行复配形成组合物。首先，本组合物不仅可以一定程度抑制葡萄糖进入血液循环系统，更为重要的是，可以激活PI3K/AKT信号通路，从而促进骨骼肌细胞内的葡萄糖转运蛋白向细胞膜转移，使骨骼肌吸收更多葡萄糖，提升骨骼肌糖代谢能力；其次，本组合物不仅可以在胰岛素存在的情况下，增加胰岛素的敏感性，协同促进骨骼肌糖代谢，还可以在没有胰岛素存在的条件下，促进骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取利用；再次，本组合物的稳定性较单独白芸豆的蛋白质成分更好，因此控制血糖的能力也更稳定。

此外，本组合物能安全、有效、作用稳定、作用机制明确，同时，由于骨骼肌是人体最大的代谢葡萄糖的器官，本组合物以骨骼肌为靶器官，用骨骼肌消耗血液中的葡萄糖，能够进一步安全有效地提升骨骼肌糖代谢能力，平稳控制血糖浓度，有效改善人体的糖代谢水平，例如协助处于糖尿病前期人群维持好的糖代谢机能。

具体地，所述白芸豆的提取物的重量份包括但不限于：30份、33份、35份、37份、38份、39份、40份、41份、42份、43份、45份、47份、50份。

具体地，所述绿茶的提取物的重量份包括但不限于：30份、33份、35份、37份、38份、39份、40份、41份、42份、43份、45份、47份、50份。

具体地，所述栀子的提取物的重量份包括但不限于：40份、42份、45份、50份、55份、58份、60份、62份、65份、70份、75份、78份、80份。

在其中一个示例中，所述白芸豆的提取物为白芸豆的水提取物。

在其中一个示例中，所述白芸豆的提取物中蛋白质的质量百分比≥75％。进一步地，所述白芸豆的提取物中蛋白质的质量百分比为75％～99％。具体地，所述白芸豆的提取物中蛋白质的质量百分比包括但不限于：75％、78％、80％、80.6％、82％、85％、90％、95％、99％。不作限制地，所述白芸豆的提取物可以通过购买获得，也可以通过传统提取方法获得，例如包括如下步骤：粉碎白芸豆，加水提取，收集提取液进行干燥，制备所述白芸豆的提取物。更为具体地，白芸豆和水的重量比可为1:(9～16)，提取温度可为25℃～45℃，提取时间可为2～4小时。

在其中一个示例中，所述绿茶的提取物为绿茶的水提取物和绿茶的醇提取物中的一种或两种。进一步可选地，所述醇为乙醇。

在其中一个示例中，所述绿茶的提取物中茶多酚的质量百分比为20％～60％。具体地，所述绿茶的提取物中茶多酚的质量百分比包括但不限于：20％、25％、30％、35％、38％、40％、42％、45％、50％、55％、60％。不作限制地，所述绿茶的提取物可以通过购买获得，也可以通过传统提取方法获得，例如包括如下步骤：绿茶加水或醇提取，收集提取液进行浓缩和干燥，制备所述绿茶的提取物。更为具体地，绿茶和水的重量比可为(6～12):1，提取温度可为50℃～100℃，提取时间可为1～2小时，提取溶剂可为体积分数为0～100％的乙醇水溶液，进一步地，乙醇水溶液的体积分数为45～55％。

在其中一个示例中，所述栀子的提取物为栀子的水提取物和栀子的醇提取物中的一种或两种。进一步可选地，所述醇为乙醇。

在其中一个示例中，所述栀子的提取物中栀子苷的质量百分比为1％～10％。具体地，所述栀子的提取物中栀子苷的质量百分比包括但不限于：1％、2％、3％、3.5％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％。不作限制地，所述栀子的提取物可以通过购买获得，也可以通过传统提取方法获得，例如包括如下步骤：栀子加水或醇提取，收集提取液进行浓缩和干燥，制备所述栀子的提取物。更为具体地，栀子和水的重量比可为(4～10):1，提取温度可为60℃～100℃，提取时间可为2～3小时，提取溶剂可为体积分数为0～100％的乙醇水溶液，进一步地，乙醇水溶液的体积分数为45～55％。

在其中一个示例中，所述提升糖代谢能力的组合物，以重量份计，包括如下组分：

白芸豆的提取物35份～45份、绿茶的提取物35份～45份，以及栀子的提取物55份～65份；所述重量份按照各组分的干重计。

本申请的又一示例提供如上所述的提升糖代谢能力的组合物在制备具有提升糖代谢能力的药物、食品或保健品中的应用。进一步地，所述糖代谢为骨骼肌的糖代谢。

本申请的又一示例提供如上所述的提升糖代谢能力的组合物在制备具有预防或治疗肥胖、糖代谢障碍、心血管疾病、糖尿病或辅助降血糖的药物、食品或保健品中的应用。

本申请的又一示例提供一种药物、食品或保健品，包括如上所述的提升糖代谢能力的组合物，以及辅料。

以下为实施例，如无特别说明，实施例中采用的原料均为市售产品。

实施例和对比例中采用的白芸豆的提取物中蛋白质的质量百分比为80.6％。该白芸豆的提取物可以通过购买获得。不作限制地，该白芸豆的提取物的提取工艺为：白芸豆经粉碎，加水提取，收集提取液进行干燥，制得所述白芸豆的提取物。白芸豆和水的重量比为1:12，提取温度控制在35℃，保温3小时。

绿茶的提取物中茶多酚的质量百分比为40％。该绿茶的提取物可以通过购买获得。不作限制地，该绿茶的提取物的提取工艺为：绿茶加体积分数为50％的乙醇水溶液提取，收集提取液进行浓缩和干燥，制得所述绿茶的提取物。绿茶和乙醇水溶液的重量比为10:1，提取温度控制在80℃，提取1.5小时。

栀子的提取物中栀子苷的质量百分比为3.5％。该栀子的提取物可以通过购买获得。不作限制地，该栀子的提取物的提取工艺为：栀子加体积分数为50％的乙醇水溶液提取，收集提取液进行浓缩和干燥，制得所述栀子提取物。栀子和乙醇水溶液的重量比为8:1，提取温度控制在85℃，提取2.5小时。

实施例和对比例：

实施例和对比例提供提升骨骼肌糖代谢能力的组合物，其配伍如下表1所示：

表1

上述组合物的制备方法为将各组分按配伍重量份混合均匀即可。

测试例：

(1)组合物对骨骼肌细胞葡萄糖利用度的影响

1、C2C12细胞培养和分化

将C2C12小鼠成肌细胞接种于培养板，待细胞长满至80％～90％，用含2％马血清的高糖DMEM培养液诱导分化3～4天。

2、加样处理

待C2C12细胞分化出肌管后，用含25mM葡萄糖培养基模拟高糖情况下的细胞环境，将细胞进行分组加样处理：

空白组：加入1mL新鲜空白培养基，未加入任何样品；

胰岛素组：在收样前30分钟加入10μg/mL胰岛素，以培养基体积计；

实施例1+胰岛素组：加入200μg/mL实施例1组合物，收样前30分钟加入10μg/mL胰岛素，以培养基体积计；

实施例2组：加入200μg/mL实施例2组合物，以培养基体积计；

实施例3组：加入200μg/mL实施例3组合物，以培养基体积计；

对比例1组：加入200μg/mL对比例1组合物，以培养基体积计；

对比例2组：加入200μg/mL对比例2组合物，以培养基体积计；

对比例3组：加入200μg/mL对比例3组合物，以培养基体积计。

其中，胰岛素组处理时间为30分钟，其余组处理时间为2小时。

3、葡萄糖利用度检测

按上述分组加样处理完成后，吸取各组的培养基，1000rpm离心5分钟，取上清液，然后利用GOD-POD法试剂盒检测培养基上清液中的葡萄糖含量，葡萄糖摄取量＝空白培养基葡萄糖浓度-细胞接种孔葡萄糖含量均值，测试结果如图1和表2所示。

表2

由图1和表2可知，在相同的作用时间下，相比空白组，胰岛素、实施例1、实施例1+胰岛素、实施例2、实施例3处理孔中葡萄糖摄取量显著增多，存在显著性差异(P＜0.05)，对比例1、对比例2和对比例3虽一定程度增加了细胞对葡萄糖的摄取，但无显著性差异(P＞0.05)。其中尤其以实施例1+胰岛素组的葡萄糖摄取量最多，说明组合物可能增强了胰岛素的敏感性，促进骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取利用。另外，在不添加胰岛素的情况下，单独的组合物也可以一定程度增加骨骼肌细胞的葡萄糖摄取量，说明组合物可以一种不依赖于胰岛素的方式促进骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取利用。

(2)组合物对骨骼肌细胞的GLUT4蛋白分布的影响

1、C2C12细胞培养和分化，同(1)项。

2、加样处理，同(1)项。

3、膜蛋白的分离提取以及GLUT4蛋白水平检测

利用膜蛋白提取试剂盒(

C500049-0050)分离、提取经上述处理后的C2C12细胞中的膜蛋白。具体步骤如下：

1)收集不少于1×10⁷个细胞，预冷的双蒸水洗涤3次后加入1mL提取buffer，超声破碎30秒，4次，每次间隔1分钟；

2)冰上裂解10分钟，然后4℃、14000rpm离心10分钟，吸取上清，弃去沉淀；

3)上清置于37℃水浴10分钟，然后室温、14000rpm离心15分钟，样品分成上层和下层(含膜蛋白)；

4)取下层，加入500μL冰冷灭菌水，4℃放置5分钟，再置于37℃水浴10min，室温、14000rpm离心5分钟，得到的下层即为膜蛋白提取物，冷冻保存。

4、制备膜蛋白样品后，加入适当体积的1×Loading Buffer溶解膜蛋白，煮沸5分钟后，利用蛋白免疫印迹法检测GLUT4的表达情况。具体步骤如下：

1)电泳：制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶，将上述方法制得的蛋白样品加到凝胶的上样孔中，安装好电泳仪，插好电线和电源，90V的电压下恒压进行电泳，待目的条带跑到合适的位置时，停止电泳；

2)转膜：将凝胶取下，转移到转膜夹中，插到转膜装置中置于转膜槽中，倒入冷的1×电转缓冲液，插上冰砖，插好电线和电源，90V的电压下恒压转膜1小时；

3)封闭：转膜完成后将膜取出，置于5％的脱脂牛奶中，置于摇床上室温封闭1小时；

4)孵育一抗：将目的条带裁剪下来，一抗原液GLUT4(购自ABclone，GLUT4RabbitpAb，A7637)按1：1000比例稀释在含1％脱脂牛奶的TBST溶液中，β-actin(购自ABclone，β-Actin Mouse mAb，AC004)按1：10000比例稀释在含1％脱脂牛奶的TBST溶液中，将条带放在合适大小的抗体孵育槽中，加入相应抗体稀释液，置于4℃冰箱中的摇床中孵育过夜；次日回收一抗，用1×TBST在转速较快的摇床上洗膜，10分钟换一次液，一共洗3次；

5)孵育二抗：按1：10000的比例稀释二抗原液，将二抗稀释液加到膜上，置于慢速摇床上，室温孵育1小时，然后弃去二抗，用1×TBST在转速较快的摇床上洗膜，10分钟换一次液，一共洗4次；

6)显影：将ECL的A液和B液按照1：1的比例混匀，均匀滴加到膜上，然后将膜转移到显影夹中的干净玻璃纸上，立即到暗房中显影，获得结果条带；

7)用Image J图像处理软件统计GLUT4和β-actin灰度，计算GLUT4和β-actin的比值，测试结果如图2所示。

由图2可知，相比空白组，胰岛素、实施例1和实施例1+胰岛素组的GLUT4在膜蛋白中的表达量更高，说明单独的胰岛素、单独的组合物以及胰岛素和组合物的联用均可增加GLUT4在骨骼肌细胞膜上的表达。其中，胰岛素和组合物的联用的效果最好，说明组合物可能增强了胰岛素的敏感性，促进GLUT4从细胞内转位到细胞膜上。另外，在不添加胰岛素的情况下，单独的组合物也可以一定程度增加GLUT4在骨骼肌细胞膜上的表达量，说明组合物可以一种不依赖于胰岛素的方式促进GLUT4的膜转位，提升骨骼肌的糖代谢能力。

(3)组合物对骨骼肌细胞的Akt信号通路的影响

1、C2C12细胞培养和分化，同(1)项

2、加样处理，同(1)项

3、细胞蛋白样品制备

1)收集上述加样处理完毕的细胞，弃去培养基，预冷的PBS清洗一遍后弃去PBS，每孔加入90μL预冷的NP-40细胞裂解液，放置于冰上静置裂解10分钟；

2)用细胞刮将上述裂解后的细胞刮下，裂解液转移至离心管中，将离心管放在漩涡振荡仪上振荡5秒，然后插到冰上静置5分钟，重复该步骤3次，使细胞裂解完全，然后将离心管置于提前预冷至4℃的低温离心机中，12000g离心10分钟，吸取2μL上清液用于测量蛋白浓度；

3)BCA法测定蛋白浓度，根据蛋白浓度测定结果，计算蛋白裂解液的吸取量，用NP-40裂解液补齐各个样品的体积，加入相应量的5×上样缓冲液使之为1×工作浓度，漩涡振荡仪上振荡5秒混匀后，置于蛋白样品加热器煮样5分钟，常温离心机中10000g离心1分钟，将制备好的蛋白样品用于后续跑胶或者放置于-20℃冰箱中保存。

4、免疫印迹法检测蛋白表达

1)电泳：制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶，将上述方法制得的蛋白样品加到凝胶的上样孔中，安装好电泳仪，插好电线和电源，90V的电压下恒压进行电泳，待目的条带跑到合适的位置时，停止电泳；

2)转膜：将凝胶取下，转移到转膜夹中，插到转膜装置中置于转膜槽中，倒入冷的1×电转缓冲液，插上冰砖，插好电线和电源，90V的电压下恒压转膜1小时；

3)封闭：转膜完成后将膜取出，置于5％的脱脂牛奶中，置于摇床上室温封闭1小时；

4)孵育一抗：将目的条带裁剪下来，一抗原液p-AKT(购自CST，Phospho-Akt(Ser473)(D9E)

Rabbit mAb#4060)和AKT(购自CST，Akt(pan)(C67E7)Rabbit mAb#4691)均按1：1000比例稀释在含1％脱脂牛奶的TBST溶液中，将条带放在合适大小的抗体孵育槽中，加入相应抗体稀释液，置于4℃冰箱中的摇床中孵育过夜；次日回收一抗，用1×TBST在转速较快的摇床上洗膜，10分钟换一次液，一共洗3次；

5)孵育二抗：按1：10000的比例稀释兔二抗原液，将二抗稀释液加到膜上，置于慢速摇床上，室温孵育1小时，然后弃去二抗，用1×TBST在转速较快的摇床上洗膜，10分钟换一次液，一共洗4次；

6)显影：将ECL的A液和B液按照1：1的比例混匀，均匀滴加到膜上，然后将膜转移到显影夹中的干净玻璃纸上，立即到暗房中显影，获得结果条带；

7)用Image J图像处理软件统计p-AKT和AKT灰度，计算p-AKT和AKT的比值，测试结果如图3所示。

由图3可知，相比空白对照组，胰岛素、实施例1和实施例1+胰岛素组的p-AKT蛋白表达量更高，说明单独的胰岛素、单独的组合物以及胰岛素和组合物的联用均可增加AKT的磷酸化水平，促进AKT信号通路的激活。其中，胰岛素和组合物的联用的效果最好，说明组合物可能增强了胰岛素的敏感性，增加胰岛素对下游的PI3K/AKT信号通路的激活。另外，在不添加胰岛素的情况下，单独的组合物也可以一定程度增加p-AKT的表达量，进一步说明了组合物可以不依赖胰岛素提升骨骼肌细胞糖代谢的作用机制。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，便于具体和详细地理解本申请的技术方案，但并不能因此而理解为对申请专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本申请提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本申请所附权利要求的保护范围内。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种提升糖代谢能力的组合物，其特征在于，以重量份计，包括如下组分：

白芸豆的提取物30份～50份、绿茶的提取物30份～50份，以及栀子的提取物40份～80份；

所述重量份按照各组分的干重计。

2.根据权利要求1所述的提升糖代谢能力的组合物，其特征在于，以重量份计，包括如下组分：

白芸豆的提取物35份～45份、绿茶的提取物35份～45份，以及栀子的提取物55份～65份；

所述重量份按照各组分的干重计。

3.根据权利要求1或2所述的提升糖代谢能力的组合物，其特征在于，所述组合物具有如下特征中的一项或多项：

(1)所述白芸豆的提取物为白芸豆的水提取物；

(2)所述绿茶的提取物为绿茶的水提取物和绿茶的醇提取物中的一种或两种；

(3)所述栀子的提取物为栀子的水提取物和栀子的醇提取物中的一种或两种。

4.根据权利要求1或2所述的提升糖代谢能力的组合物，其特征在于，所述白芸豆的提取物中蛋白质的质量百分比≥75％。

5.根据权利要求1或2所述的提升糖代谢能力的组合物，其特征在于，所述绿茶的提取物中茶多酚的质量百分比为20％～60％。

6.根据权利要求1或2所述的提升糖代谢能力的组合物，其特征在于，所述栀子的提取物中栀子苷的质量百分比为1％～10％。

7.权利要求1～6任一项所述的提升糖代谢能力的组合物在制备具有提升糖代谢能力的药物、食品或保健品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述糖代谢为骨骼肌的糖代谢。

9.权利要求1～6任一项所述的提升糖代谢能力的组合物在制备具有预防或治疗肥胖、糖代谢障碍、心血管疾病、糖尿病或辅助降血糖的药物、食品或保健品中的应用。

10.一种药物、食品或保健品，其特征在于，包括权利要求1～6任一项所述的提升糖代谢能力的组合物，以及辅料。

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