CN115844944A - 血人参提取物在制备氨基糖苷类抗生素抗铜绿假单胞菌增敏剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了医药技术领域中一种血人参提取物在制备氨基糖苷类抗生素抗铜绿假单胞菌增敏剂中的应用，具体是将血人参与有机溶剂混合后提取得到血人参提取物，氨基糖苷类抗生素按照不同临床菌株的1/4MIC和1/8MIC分别联合血人参提取物1024μg/mL和512μg/mL四种配伍，结果说明血人参提取物可以增加多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种血人参提取物在制备氨基糖苷类抗生素抗铜绿假单胞菌增敏剂中的应用。
背景技术
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)是目前临床上最常见的引起严重院内获得性感染的条件致病菌之一。在机体抵抗力下降或免疫功能受损或是侵入性操作时(如留置尿管、呼吸机辅助通气)易引起各种感染，如泌尿系感染、呼吸道感染、脑膜炎、烧伤感染等，其中以下呼吸道感染最为常见，包括支气管扩张合并感染、慢性阻塞性肺疾病合并感染、呼吸机相关性肺炎等，且主要分布于重症监护病房。
抗生素的广泛使用以及滥用导致多重耐药铜绿假单胞菌(Multidrug-resistantPseudomonas aeruginosa,MDRPA)的出现，给人们的安全带来巨大的威胁。目前，氨基糖苷类抗生素的作用为与细菌核糖体结合，干扰细菌蛋白质合成过程，为一类静止期杀菌剂，是目前治疗需氧革兰阴性杆菌严重感染的重要药物。然而，随着氨基糖苷类抗生素的不断使用，对氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌的不断出现，使临床上对氨基糖苷类抗生素耐药的感染无从选择。因此，在全球对新抗菌药物的开发陷入低谷期的时刻，“间接抗菌策略”，即找到具有提高现有抗菌药物作用的药物(抗菌增敏剂)，延缓耐药菌的传播迫在眉睫。
苗药血人参民族名称为窝布套学(贵州黔南)，又称雪人参、铁刷子、红苦刺等，是豆科木蓝属(Indigofera)植物茸毛木蓝(Indigofera stachyoides Lindl.)的根。主要分布于贵州、广西等地，尤其在贵州苗族地区(安龙、普安、晴隆、等地)，药用历史悠久，在《中华草本》、《贵州民间药物》和《贵州民族常用天然药物》等医药著作中均有记载。有解表、化痰、利湿、补血活血之功效。主治肺痈、感冒发热、咳嗽，瘀血腹痛，风湿痹痛，崩漏，妇女腹痛，疔疮痈疽，淋浊。在现有技术道中，并未有血人参协同氨基糖苷类抗生素抗菌增效的报道。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，研究血人参提取物联合氨基糖苷类抗生素，通过逆转铜绿假单胞菌的耐药性，提高氨基糖苷类抗生素
对多重耐药铜绿假单胞菌的敏感性。
本发明的目的之一是提供一种血人参提取物在制备氨基糖苷类抗生素抗铜绿假单胞菌增敏剂中的应用。
进一步的，所述铜绿假单胞菌为多重耐药铜绿假单胞菌。
进一步的，所述铜绿假单胞菌为氨基糖苷类耐药的铜绿假单胞菌。
进一步的，所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素、妥布霉素或阿米卡星中的一种。
进一步的，将血人参与适当比例的有机溶剂混合，提取数次，合并提取液，回收溶剂后得血人参提取物。
所述血人参为豆科(Leguminosae)木蓝属(Indigofera)植物茸毛木蓝(Indigofera stachyoides Lindl.)干燥的根。
进一步的，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。
进一步的，所述提取方法包括加热回流提取、闪式提取、超声提取或渗漉提取。
本发明还有一个目的是提供一种治疗耐药菌感染的联合用药物，它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的血人参提取物和氨基糖苷类抗生素，以及药学上可接受的载体；所述血人参提取物为将血人参与适当比例的有机溶剂混合，提取数次，合并提取液，回收溶剂后得到。
进一步的，所述血人参提取物的量≥512μg/mL或者≥1024μg/mL；所述氨基糖苷类抗生素的量≤不同耐药菌株的1/4MIC。更优选血人参提取物的量≥1024μg/mL。
进一步的，所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素、妥布霉素或阿米卡星中的一种。
氨基糖苷类抗生素的用药浓度更低，抗菌敏感性更强。
本发明的工作原理及有益效果：氨基糖苷类抗生素对细菌的作用主要是抑制细菌蛋白质的合成，作用点在细胞30S核糖体亚单位的16SrRNA解码区的A部位。还可影响细菌蛋白质合成的全过程，妨碍初始复合物的合成，诱导细菌合成错误蛋白以及阻止已合成蛋白的释放，从而导致细菌死亡。本申请利用血人参提取物联合不同氨基糖苷类抗生素对多种细菌进行筛选实验，在进行大量筛选实验后发现血人参提取物可显著增强庆大霉素、妥布霉素或阿米卡星对铜绿假单胞菌的抗菌作用，且氨基糖苷类抗生素的量可以达到不同耐药菌株的1/4MIC甚至是1/8MIC。
附图说明
图1～图4为血人参分别联合庆大霉素对不同铜绿假单胞菌菌株MIC的影响示意图；
图5～图8为血人参分别联合妥布霉素对不同铜绿假单胞菌菌株MIC的影响示意图；
图9～图12为血人参分别联合阿米卡星对不同铜绿假单胞菌菌株MIC的影响示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
在本实施方案中首先参考2020年美国临床和实验室标准协会(Clinical andLaboratory Standards Institute，CLSI)药物敏感标准判断，选择质控菌株：铜绿假单胞菌ATCC27853，临床分离菌株来源于贵州遵义地区。
实施例1：血人参提取物对铜绿假单胞菌质控菌株ATCC27853与临床分离株最低抑菌浓度(MIC)的测定。
使用小型打粉机将血人参药材打碎，过筛，用75％乙醇浸泡过夜(w/w＝1:10)，超声波提取3次，每次30min，抽滤，合并滤液并浓缩得血人参粗提物。
采用微孔二倍稀释法，调整细菌浓度为1×106CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内，加入各药物至含有细菌培养孔内，根据溶解度依次倍比稀释，置37℃培养箱孵育18～24h，读取阳性和阴性对照孔，阴性对照孔清亮，阳性对照孔混浊。血人参提取物对细菌的MIC为抑制细菌肉眼可见生长的最低药物浓度。此次实验结果表明血人参提取物单独使用不能完全抑制细菌生长，结果示于表1。
表1血人参提取物对铜绿假单胞菌质控菌株与16株临床分离菌株的MIC
实施例2：氨基糖苷类抗生素庆大霉素对铜绿假单胞菌质控菌株ATCC27853与临床分离菌株的最低抑菌浓度测定。
采用微孔二倍稀释法，调整细菌浓度为1×106CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内，加入各药物至含有细菌培养孔内，根据溶解度依次倍比稀释，置37℃培养箱孵育18～24h，读取阳性和阴性对照孔，阴性对照孔清亮，阳性对照孔混浊。药物对细菌的MIC为抑制细菌肉眼可见生长的最低药物浓度。此次实验观察了氨基糖苷类抗生素庆大霉素对铜绿假单胞菌质控菌株ATCC27853和16株临床分离菌株的抑菌效力。根据实验室标准协会(Clinicaland Laboratory Standards Institute，CLSI)药物敏感标准，当MIC值≤4μg/mL时，即判断铜绿假单胞菌对庆大霉素敏感；当MIC值≥16μg/mL时，即判断铜绿假单胞菌对庆大霉素耐药。根据表2结果可知，只有铜绿假单胞菌标准株对庆大霉素敏感；其16株铜绿假单胞菌临床株对庆大霉素全部耐药(耐药菌比例达到100％)。
表2庆大霉素对铜绿假单胞菌质控菌株和16株临床分离菌株的MIC
实施例3：氨基糖苷类抗生素妥布霉素对铜绿假单胞菌质控菌株ATCC27853与临床分离菌株的最低抑菌浓度测定。
采用微孔二倍稀释法，调整细菌浓度为1×106CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内，加入各药物至含有细菌培养孔内，根据溶解度依次倍比稀释，置37℃培养箱孵育18～24h，读取阳性和阴性对照孔，阴性对照孔清亮，阳性对照孔混浊。药物对细菌的MIC为抑制细菌肉眼可见生长的最低药物浓度。此次实验观察了妥布霉素对铜绿假单胞菌质控菌株ATCC27853和16株临床分离菌株的抑菌效力。根据实验室标准协会(Clinical andLaboratory Standards Institute，CLSI)药物敏感标准，当MIC值≤4μg/mL时，即判断铜绿假单胞菌对妥布霉素敏感；当MIC值≥16μg/mL时，即判断铜绿假单胞菌对妥布霉素耐药。根据表3结果可知，只有铜绿假单胞菌标准株对氨基糖苷类抗生素妥布霉素敏感；铜绿假单胞菌临床株14号在敏感与耐药的临界值之间，其它15株临床分离株都对氨基糖苷类抗生素妥布霉素耐药(耐药菌比例达到94％)。
表3妥布霉素对铜绿假单胞菌质控菌株和16株临床分离菌株的MIC
实施例4：氨基糖苷类抗生素阿米卡星对铜绿假单胞菌质控菌株ATCC27853与临床分离菌株的最低抑菌浓度测定。
采用微孔二倍稀释法，调整细菌浓度为1×106CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内，加入各药物至含有细菌培养孔内，根据溶解度依次倍比稀释，置37℃培养箱孵育18～24h，读取阳性和阴性对照孔，阴性对照孔清亮，阳性对照孔混浊。药物对细菌的MIC为抑制细菌肉眼可见生长的最低药物浓度。此次实验观察了氨基糖苷类抗生素阿米卡星对铜绿假单胞菌质控菌株ATCC27853和16株临床分离菌株的抑菌效力。根据实验室标准协会(Clinicaland Laboratory Standards Institute，CLSI)药物敏感标准，当MIC值≤16μg/mL时，即判断铜绿假单胞菌对阿米卡星敏感；当MIC值≥64μg/mL时，即判断铜绿假单胞菌对阿米卡星耐药。根据表4结果可知，只有铜绿假单胞菌标准株对氨基糖苷类抗生素阿米卡星敏感；铜绿假单胞菌临床株15、16号在敏感与耐药的临界值之间，其它14株临床分离株都对氨基糖苷类抗生素阿米卡星耐药(耐药菌比例达到90％)。
表4阿米卡星对铜绿假单胞菌质控菌株和16株临床分离菌株的MIC
实施例5：血人参提取物与氨基糖苷类抗生素庆大霉素、妥布霉素以及阿米卡星联合应用时对铜绿假单胞菌耐药临床菌株MIC影响。
采用棋盘式微孔稀释法，调整细菌浓度为1×106CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内，将不同浓度血人参提取物(1024μg/mL、512μg/mL)分别与1/4MIC、1/8MIC庆大霉素、妥布霉素以及阿米卡星分别配伍，观察配伍后的药物对铜绿假单胞菌临床分离菌株MIC的影响。
此次实验结果表明血人参提取物单独使用虽然不能完全抑制细菌生长，但在1024μg/mL血人参提取物与氨基糖苷类抗生素庆大霉素、妥布霉素以及阿米卡星联合应用时，可使庆大霉素、妥布霉素或者阿米卡星的MIC降低8倍，说明血人参提取物可以增加铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素庆大霉素、妥布霉素以及阿米卡星的敏感性。结果见表5、6、7。
表5血人参分别联合庆大霉素对铜绿假单胞菌MIC的影响
表6血人参分别联合妥布霉素对铜绿假单胞菌MIC的影响
表7血人参分别联合阿米卡星对铜绿假单胞菌MIC的影响
注：√代表有效，×代表无效。
如图1～12所示，澄清代表有效，本实验中配合设计分别为氨基糖苷类抗生素庆大霉素、妥布霉素以及阿米卡星对不同临床菌株的1/4MIC和1/8MIC分别联合血人参提取物1024μg/mL和512μg/mL四种配伍，其中氨基糖苷类抗生素庆大霉素、妥布霉素以及阿米卡星对不同临床菌株的1/4MIC和1/8MIC分别联合血人参提取物1024μg/mL和512μg/mL四种配伍均有效，以上实验说明血人参提取物可以显著增加氨基糖苷类抗生素庆大霉素、妥布霉素以及阿米卡星对铜绿假单胞菌临床菌株的敏感性。
Claims (10)
1.一种血人参提取物在制备氨基糖苷类抗生素抗铜绿假单胞菌增敏剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述铜绿假单胞菌为多重耐药铜绿假单胞菌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述铜绿假单胞菌为氨基糖苷类耐药的铜绿假单胞菌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素、妥布霉素或阿米卡星中的一种。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：将血人参与适当比例的有机溶剂混合，提取数次，合并提取液，回收溶剂后得血人参提取物。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述提取方法包括加热回流提取、闪式提取、超声提取或渗漉提取。
8.一种治疗耐药菌感染的联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的血人参提取物和氨基糖苷类抗生素，以及药学上可接受的载体；所述血人参提取物为将血人参与适当比例的有机溶剂混合，提取数次，合并提取液，回收溶剂后得到。
9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于：所述血人参提取物的量≥512μg/mL；所述氨基糖苷类抗生素的量≤不同耐药菌株的1/4MIC。
10.根据权利要求8所述的药物，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素、妥布霉素或阿米卡星中的一种。
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