CN115792243A - 一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用 - Google Patents

一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115792243A
CN115792243A CN202211487820.9A CN202211487820A CN115792243A CN 115792243 A CN115792243 A CN 115792243A CN 202211487820 A CN202211487820 A CN 202211487820A CN 115792243 A CN115792243 A CN 115792243A
Authority
CN
China
Prior art keywords
deer
glue
ion
solution
sample
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211487820.9A
Other languages
English (en)
Inventor
徐成业
张璐璐
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Tongrentang Liaoning Technology Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Beijing Tongrentang Liaoning Technology Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Tongrentang Liaoning Technology Pharmaceutical Co ltd filed Critical Beijing Tongrentang Liaoning Technology Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN202211487820.9A priority Critical patent/CN115792243A/zh
Publication of CN115792243A publication Critical patent/CN115792243A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W30/00—Technologies for solid waste management
    • Y02W30/50—Reuse, recycling or recovery technologies
    • Y02W30/62—Plastics recycling; Rubber recycling

Landscapes

  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明属于鹿胶制品鉴别技术领域，具体涉及一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用，方法包括如下步骤：检测样品粉碎溶解，加蛋白酶酶解，过滤取滤液；将滤液注入到液相色谱‑质谱仪，电喷雾离子源、正离子模式下，进行多级反应监测，以m/z 994.5→966.5和m/z 994.5→683.4作为鹿胶的检测离子对。本方法具有较好的专属性和灵敏度，可用于鹿胶及制品的质量控制，这对于保证鹿胶及制品的质量和临床疗效具有重要的意义。

Description

一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用
技术领域
本发明属于鹿胶制品鉴别技术领域，具体涉及一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用。
背景技术
胶类中药材是常用传统药材，包括阿胶、龟甲胶、鹿角胶等。此类药材既可单独使用，也可作为原料用于中成药的生产。随着胶类中药需求量的日益增大以及资源萎缩，致使胶类药材掺伪造假问题严重，不法分子常常以价格低廉的胶类冒充价格较高的正品胶类投料，同时，这些劣质胶类有可能流通到中成药企业，被用于中成药生产投料。这些行为将严重损害消费者的利益，扰乱医药市场。在此背景下，程显隆等对胶类药材的专属性鉴别进行了系列的研究，建立了特征肽检测技术，用于胶类药材的质量控制。因此，自2015版《中国药典》开始收载阿胶、龟甲胶、鹿角胶3种胶类的特征多肽鉴别方法。国家食品药品监督管理总局也先后批准了阿胶中牛皮源成分的检测；龟甲胶中驴皮源、牛皮源成分的检测；鹿角胶中驴皮源、牛皮源成分的检测。上述标准的建立对于打击胶类药材造假的违法行为，有效地控制胶类药材质量具有积极的意义。
事实上，由于阿胶的经济价值较高。目前，对于阿胶饮片及制品的特征肽研究较为深入。严华等就采用了分子生物学方法对阿胶混伪品进行了鉴别。相较于分子生物学的方法，应用质谱检测技术发现特征肽的方法灵敏度高、重复性好且操作简单。因此，UPLC-Q-TOF-MS技术被广泛应用于阿胶的专属性肽段研究，并取得了较好的效果。此外，在特征性肽段研究的基础上，采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QqQ-MS)对特征性肽段进行检识也成为鉴别胶类药材真伪优劣的有效手段，并在阿胶及其制品的真伪鉴别方面到了广泛应用。
鹿胶是由鹿科动物梅花鹿(Cervus nipport T.)或马鹿(Cervus elaphus L.)的皮为原料经过蒸煮、浓缩、干燥而得，具有补血益气、补肾壮阳等功效。目前，市场上以鹿胶为原料的系列产品已经上市，但其相应的鉴定、评价标准还不完善。这对于保证鹿胶的质量和临床疗效具有较大的影响。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用，能够对鹿胶制品进行有效鉴别。
本发明是这样实现的，提供一种利用专属离子对检测鹿胶的方法，包括如下步骤：
1)检测样品粉碎溶解，加蛋白酶酶解，过滤取滤液；
2)将滤液注入到液相色谱-质谱仪，电喷雾离子源、正离子模式下，进行多级反应监测，以m/z 994.5→966.5和m/z 994.5→683.4作为鹿胶的检测离子对。
优选的，所述步骤1)包括如下步骤：
101)将检测样品粉碎后，先加1％的碳酸氢铵溶液，超声处理一定时间，再加入1％的碳酸氢铵溶液稀释，摇匀过滤；
102)取步骤101)制备的滤液，加入胰蛋白酶溶液，摇匀，37℃恒温酶解一定时间，过滤，取滤液。
进一步优选，步骤101)中，取0.5g粉碎后的样品，置50mL量瓶中，加1％碳酸氢铵溶液40mL，超声处理30min，超声条件为功率250W、频率40kHz，然后继续加1％碳酸氢铵溶液稀释至50mL，摇匀，过0.22μm滤膜；
步骤102)中，取滤液1mL，加入胰蛋白酶溶液0.l mL，摇匀，37℃恒温酶解12小时，过滤，胰蛋白酶溶液的制备方法为：取质谱级胰蛋白酶，加1％碳酸氢铵溶液制成每l mL胰蛋白酶溶液中含l mg胰蛋白酶的溶液，临用前新制。
进一步优选，所述步骤2)中：
色谱条件为：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18、2.1mm×100mm、1.7μm，柱温：30℃；流动相：以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以0.1％甲酸乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.35mL/min，进样量10μL；
质谱条件为：电喷雾离子源，正离子模式；毛细管电离电压2.5kV，锥孔电压45V，离子源温度150℃，脱溶剂气温度400℃，锥孔气流量50L/h，脱溶剂气流量800L/h；脱溶剂气为氮气，裂解气为氦气；数据采集模式为多级反应监测，裂解能量均为45V，数据采集和分析采用Waters MassLynx v4.1软件。
进一步优选，梯度洗脱程序为：梯度洗脱程序为：
Figure BDA0003963362550000031
本发明还提供了利用上述专属离子对检测鹿胶的方法在鹿胶鉴别中的应用。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本方法具有较好的专属性和灵敏度，可用于鹿胶药材及制品的质量控制，这对于保证鹿胶及制品的质量和临床疗效具有重要的意义。
附图说明
图1为五种不同胶类蛋白质典型的基峰图(从上至下依次为鹿胶、鹿角胶、阿胶、龟甲胶和黄明胶)；
图2为五种不同胶类蛋白质PCA得分图(LPJ表示鹿胶；LJJ表示鹿角胶；EJ表示阿胶；GJJ表示龟甲胶；HMJ表示黄明胶)；
图3为五种不同胶类蛋白质OPLS-DA得分图(LPJ表示鹿胶；LJJ表示鹿角胶；EJ表示阿胶；GJJ表示龟甲胶；HMJ表示黄明胶)；
图4为permutation置换检验结果图；
图5为OPLS-DA下s-plot图；
图6为特征性离子在五种样品中的分布情况(从上至下依次为鹿胶、鹿角胶、阿胶、龟甲胶和黄明胶)；
图7为鹿胶特征离子m/z994.5的二级质谱图(50V)；
图8为鹿胶特征离子对图谱(上面为m/z 994.5→966.5离子对，下面为m/z994.5→683.4离子对)。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1、鹿胶中专属性离子对的筛选
1.仪器及试药：
(1)仪器：Waters ACQUITY UPLC I-class超高效液相色谱仪；Waters XEVO G2-XSQTOF-MS四级杆串联飞行时间质谱仪；MassLynx v4.1软件；Progenesis QI软件；EZinfo3.0软件；SIMCA-P 14.0软件；AE240型分析天平；FA1004B电子天平。KQ-250DB型数控超声波清洗器；X/WT数显调节仪电热恒温水浴锅。
(2)试药：亮氨酸脑啡肽购自Waters公司；甲酸，乙腈均为色谱纯，购自德国Merck公司；纯净水为Milli-Q纯水；胰蛋白酶为质谱级，购自大连美仑生物技术有限公司；甲醇为色谱纯，购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司，碳酸氢铵为分析纯。
(3)待测样品：鹿胶(8批次样品，由北京同仁堂(辽宁)科技药业有限公司提供)、鹿角胶(市售8批次)、阿胶(市售6批次)、龟甲胶(市售8批次)、黄明胶(市售3批次)。
2.方法：
(1)供试品的制备：各胶经粉碎机粉碎，取粉末约0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加1％碳酸氢铵溶液40mL，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，加1％碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜。取滤液1mL，加入胰蛋白酶溶液(取质谱级胰蛋白酶，加1％碳酸氢铵溶液制成每lmL中含lmg的溶液，临用前新制)0.lmL，摇匀，37℃恒温酶解12小时，滤过，取续滤液，即得。
(2)色谱条件：ACQUITY UPLC BEH C18(2.1mm×100mm，1.7μm)色谱柱，柱温：30℃；流动相：以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以0.1％甲酸乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，流速：0.35mL/min；进样量：5μL。梯度洗脱的程序为：
Figure BDA0003963362550000051
Figure BDA0003963362550000061
(3)质谱条件：电喷雾离子源(electrospray ion source，ESI)，正离子模式；毛细管电离电压2.0kV，锥孔电压：40V，补偿：80，离子源温度：100℃，脱溶剂气温度：400℃，锥孔气流量：100L/h，脱溶剂气流量：800L/h；脱溶剂气：氮气(N2)，裂解气：氦气(He)；采用MSE方式采集数据，即设定高低2个能量通道交替采集目标化合物的离子和碎片离子。低能量通道的碰撞能量为6V，高能量通道的碰撞能量为20-30V的梯度能量。质谱采集模式：continuum，采集范围：100～1500Da，采集频率为：0.1s。数据采集时采用亮氨酸脑啡肽作为lockspray进行即时质量校正，以保证采集质量数的准确性与重复性，亮氨酸脑啡肽的浓度为1ng/ml，注射泵流速为10μL/min lockspray，采集频率为20s/次；数据采集和分析采用WatersMassLynx v4.1软件进行。
(4)样品测试：
采用上述色谱及质谱条件测定5种不同胶类蛋白质酶解肽的图谱，各种胶类成分典型的基峰图见图1。
(5)原始数据处理：将UPLC-Q-TOF-MS采集得到的原始数据导入Progenesis QI软件进行峰提取、峰对齐、标准化等操作。同时，补齐缺失值，剔除QC样本中RSD％＜30％的变量，并对数据组进行归一化处理。最终，得到样本与保留时间-质荷比-峰强度对应的数据矩阵。
(6)多元统计分析：
将数据矩阵导入Ezinfo 3.0及SIMCA-P 14.0软件进行主成分分析(PCA)，确定鹿胶与不同动物来源及组织部位的胶类是否具有差异(能否各自聚类)；进一步采用正交偏最小二乘判别法分析(OPLS-DA)，确定鹿胶与不同动物来源及组织部位的胶类之间分类贡献度较大的数据点作为目标肽段(选择VIP>1并且P<0.05的数据)
(7)特征离子的验证：
将筛选得到的特征离子分别在鹿胶与不同动物来源及组织部位的胶类样品中进行测定，确定可行的特征性离子。
3.结果
3.1原始数据处理
采用多元数学统计方法对LC/MS数据进行分析的第一步是将三维LC/MS数据转换成二维矩阵。该操作由Progenesis QI软件进行，包括峰提取(peak picking)、峰对齐(Alignment)、标准化(normalization)等步骤。同时，还可补齐缺失值，剔除QC样本中RSD％＜30％的变量，并完成数据组的归一化处理。最终，得到样本与保留时间-质荷比-峰强度对应的数据矩阵。
3.2PCA分析
PCA作为一种非监督模式下的模型分析方法，能够根据数据的相似性来对样本的总体进行分析，从而更真实地反映组间的差异以及组内的变异。由得分图可知，各组胶类可得到明显的区分，PCA得分图见图2。
3.3正交偏最小二乘法辨别分析(OPLS-DA)
PCA能够显现出各组间的差异，却无法确定组间的差异。OPLS-DA作为一种有监督模式下的模型分析方法，更侧重于进行分组并发现组间差异。因此，本研究采用OPLS-DA进一步分析鹿胶组和其它胶类组间的差异，从而确定鹿胶中的专属性离子(得分图详见图3)。
同时，为了确保模型不存在过拟合的情况，还对OPLS-DA分析进行了permutation置换检验，结果表明模型合格(详见图4)。
根据鹿胶组和其它胶类组的OPLS-DA分析绘制S-plot图，s-plot图中的点代表离子对，离原点越远的离子对被认为在分组贡献越大，越可能是标记物。此外，VIP值作为反映变量重要性的参数，其值大于1的变量被认为对模型的分类有贡献。同时，为了剔除假阳性的结果，利用t检验对各变量进行组内检验，选取P＜0.05的数据作为潜在的差异性标志物，确定鹿胶中的特征性离子。
综合筛选出离子的结果，并逐一在鹿胶与不同动物来源及组织部位的胶类样品中进行测定，结果确定9.65-549.7745，9.98-660.3025等7个离子可作为鹿胶中的特征性离子，详细结果见表1。
表1筛选得到的鹿胶中特征离子的结果
序号 Rt m/z 电荷数| 来源
1 9.65 549.7745 2 鹿胶
2 9.98 660.3025 2 鹿胶
3 18.97 524.5909 2 鹿胶
4 20.78 994.4981 2 鹿胶
5 22.70 1037.5389 2 鹿胶
6 26.78 818.9282 2 鹿胶
7 26.79 819.4300 2 鹿胶
3.4.特征性离子的验证：
将筛选得到的特征离子分别在鹿胶与不同动物来源及组织部位的胶类样品中进行测定。结果，鹿胶样品在保留时间20.78min检出的特征离子(m/z 994.4981)在鹿角胶、阿胶、龟甲胶及黄明胶等其它胶类药材中均未出检，表明该离子在检测时具有更强的专属性，详见图6。
3.5.特征性离子对的选择：
将筛选得到的特征离子m/z 994.4981进行二级质谱分析，根据二级质谱图确定m/z 994.5→966.5和m/z994.5→683.4可作为鹿胶专属性离子对，详见图7。
实施例2、利用专属离子对检测鹿胶
1.仪器及试药
(1)仪器：Waters ACQUITY UPLC H-class超高效液相色谱仪；Waters XEVO TQD三重四级杆质谱仪；MassLynx v4.1软件；AE240型分析天平；FA1004B电子天平。KQ-250DB型数控超声波清洗器；X/WT数显调节仪电热恒温水浴锅。
(2)试药：甲酸，乙腈均为色谱纯，购自德国Merck公司；纯净水为Milli-Q纯水；胰蛋白酶为质谱级，购自大连美仑生物技术有限公司；甲醇为色谱纯，购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司，碳酸氢铵为分析纯。
(3)待测样品：鹿胶(8批次样品，由北京同仁堂(辽宁)科技药业有限公司提供)、鹿角胶(市售8批次)、阿胶(市售6批次)、龟甲胶(市售8批次)、黄明胶(市售3批次)。
2.方法：
(1)供试品的制备：不同动物来源的胶经粉碎机粉碎，各取粉末约0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加1％碳酸氢铵溶液40mL，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，加1％碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜。取滤液1mL，加入胰蛋白酶溶液(取质谱级胰蛋白酶，加1％碳酸氢铵溶液制成每lmL中含lmg的溶液，临用前新制)0.lmL，摇匀，37℃恒温酶解12小时，滤过，取续滤液，即得。
(2)色谱条件：ACQUITY UPLC BEH C18(2.1mm×100mm，1.7μm)色谱柱，柱温：30℃；流动相：以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以0.1％甲酸乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，流速：0.35mL/min；进样量：10μL。梯度洗脱的程序为：
Figure BDA0003963362550000101
(3)质谱条件：电喷雾离子源(electrospray ion source，ESI)，正离子模式；毛细管电离电压2.5kV，锥孔电压：45V，离子源温度：150℃，脱溶剂气温度：400℃，锥孔气流量：50L/h，脱溶剂气流量：800L/h；脱溶剂气：氮气(N2)，裂解气：氦气(He)；数据采集模式为多级反应监测(MRM)，采集离子对为m/z 994.5→966.5和m/z 994.5→683.4，裂解能量均为45V，数据采集和分析采用Waters MassLynx v4.1软件。
(4)专属性试验：本研究以m/z 994.5→966.5和m/z 994.5→683.4作为选择离子，分别对1-8号鹿胶，9-16号鹿角胶，17-22号阿胶，23-30号龟甲胶及31-33号黄明胶进行试验，用以评价方法的专属性情况。
(5)精密度试验
取鹿胶样品，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，在上述色谱及质谱条件下连续进行测定6次，从而评价仪器的精密度情况。
(6)重复性试验
取鹿胶样品，按供试品溶液制备方法平行制备6份供试品溶液，在上述色谱及质谱条件下进行测定，用于评价方法的重复性情况。
(7)稳定性试验
取新阿胶样品，按供试品溶液制备方法平行制备供试品溶液，分别在0、6、12、24、48、72h进行测定，用以衡量样品的稳定性情况。
3.结果
(1)专属性试验
除鹿胶外，其他样品均未检出m/z 994.5→966.5和m/z 994.5→683.4的特征离子对，表明上述各种胶类对测定无干扰，方法专属性良好，典型鹿胶特征离子对图谱见图8。
(2)精密度检查
精密度试验显示，离子对m/z 994.5→966.5和m/z 994.5→683.4峰面积的RSD分别为3.40％和2.20％，表明该方法精密度良好，详细结果见表2。
表2精密度试验结果
NO. 1 2 3 4 5 6 RSD％
994.5→966.5 276 279 268 257 283 275 3.40
994.5→683.4 290 282 297 285 295 283 2.20
(3)重复性试验
重复性试验显示，离子对994.5→966.5及m/z 994.5→683.4峰面积的RSD分别为2.76％和2.26％，表明该方法重复性良好，详细结果见表3。
表3重复性试验结果
NO. 1 2 3 4 5 6 RSD％
994.5→966.5 452 440 425 429 448 454 2.76
994.5→683.4 345 359 354 360 365 346 2.26
(4)稳定性试验
稳定性试验显示，离子对994.5→966.5及m/z 994.5→683.4在48小时内峰面积的RSD分别为4.39％和4.92％，说明鹿胶样品溶液在48h内稳定，结果见表4。
表4稳定性试验结果
NO. 0h 6h 12h 24h 48h 72h RSD％
994.5→966.5 375 348 345 339 337 - 4.39
994.5→683.4 471 456 438 429 416 - 4.92

Claims (6)

1.一种利用专属离子对检测鹿胶的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)检测样品粉碎溶解，加蛋白酶酶解，过滤取滤液；
2)将滤液注入到液相色谱-质谱仪，电喷雾离子源、正离子模式下，进行多级反应监测，以m/z 994.5→966.5和m/z 994.5→683.4作为鹿胶的检测离子对。
2.根据权利要求1所述的利用专属离子对检测鹿胶的方法，其特征在于，所述步骤1)包括如下步骤：
101)将检测样品粉碎后，先加1％的碳酸氢铵溶液，超声处理一定时间，再加入1％的碳酸氢铵溶液稀释，摇匀过滤；
102)取步骤101)制备的滤液，加入胰蛋白酶溶液，摇匀，37℃恒温酶解一定时间，过滤，取滤液。
3.根据权利要求2所述的利用专属离子对检测鹿胶的方法，其特征在于，步骤101)中，取0.5g粉碎后的样品，置50mL量瓶中，加1％碳酸氢铵溶液40mL，超声处理30min，超声条件为功率250W、频率40kHz，然后继续加1％碳酸氢铵溶液稀释至50mL，摇匀，过0.22μm滤膜；
步骤102)中，取滤液1mL，加入胰蛋白酶溶液0.lmL，摇匀，37℃恒温酶解12小时，过滤，胰蛋白酶溶液的制备方法为：取质谱级胰蛋白酶，加1％碳酸氢铵溶液制成每lmL胰蛋白酶溶液中含lmg胰蛋白酶的溶液，临用前新制。
4.根据权利要求1所述的利用专属离子对检测鹿胶的方法，其特征在于，所述步骤2)中：
色谱条件为：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18、2.1mm×100mm、1.7μm，柱温：30℃；流动相：以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以0.1％甲酸乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.35mL/min，进样量10μL；
质谱条件为：电喷雾离子源，正离子模式；毛细管电离电压2.5kV，锥孔电压45V，离子源温度150℃，脱溶剂气温度400℃，锥孔气流量50L/h，脱溶剂气流量800L/h；脱溶剂气为氮气，裂解气为氦气；数据采集模式为多级反应监测，裂解能量均为45V，数据采集和分析采用Waters MassLynx v4.1软件。
5.根据权利要求4所述的利用专属离子对检测鹿胶的方法，其特征在于，梯度洗脱程序为：
Figure FDA0003963362540000021
6.根据权利要求1-5任一所述的利用专属离子对检测鹿胶的方法在鹿胶鉴别中的应用。
CN202211487820.9A 2022-11-25 2022-11-25 一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用 Pending CN115792243A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211487820.9A CN115792243A (zh) 2022-11-25 2022-11-25 一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211487820.9A CN115792243A (zh) 2022-11-25 2022-11-25 一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115792243A true CN115792243A (zh) 2023-03-14

Family

ID=85441363

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211487820.9A Pending CN115792243A (zh) 2022-11-25 2022-11-25 一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115792243A (zh)

Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016157250A1 (ja) * 2015-03-30 2016-10-06 国立大学法人神戸大学 動物種鑑別方法及び装置
WO2017059647A1 (zh) * 2015-10-09 2017-04-13 东阿阿胶股份有限公司 一种动物皮张的鉴定方法
CN109187835A (zh) * 2018-09-17 2019-01-11 南京中医药大学 一种含蛋白质类中药的专属性肽段的鉴别方法
CN109187783A (zh) * 2018-09-03 2019-01-11 贵州广济堂药业有限公司 鹿胶特征肽及鉴定待测样品中是否包含鹿胶的方法
JP2019088213A (ja) * 2017-11-13 2019-06-13 一般財団法人日本皮革研究所 コラーゲン由来材料の動物種を判定する方法
CN111239302A (zh) * 2020-03-04 2020-06-05 南京中医药大学 一种利用蛋白质内切酶切割胶原蛋白获得专属性肽段的方法和应用
CN112098577A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种胶类药材的检测方法
CN112098578A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
CN112098579A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种鹿源特征肽段及其检测方法
WO2021003926A1 (zh) * 2019-07-10 2021-01-14 南京中医药大学 一种阿胶及其制品的驴源性特征肽及其阿胶及其制品的鉴别方法
AU2020103172A4 (en) * 2020-09-23 2021-01-14 Shandong Institute For Food And Drug Control Method to identify donkey derived components in donkey-hide gelatin and the preparations
CN112898384A (zh) * 2021-01-23 2021-06-04 南京中医药大学 一种鹿角特征肽段及其检测方法
CN112898400A (zh) * 2021-01-23 2021-06-04 南京中医药大学 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
CN113173972A (zh) * 2021-04-20 2021-07-27 江阴天江药业有限公司 用于鉴别鹿角或鹿皮配方颗粒的特征肽段及其检测方法
CN113173971A (zh) * 2021-04-20 2021-07-27 江阴天江药业有限公司 用于鉴别含有鹿角或鹿皮的配方颗粒的特征肽段及其检测方法

Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016157250A1 (ja) * 2015-03-30 2016-10-06 国立大学法人神戸大学 動物種鑑別方法及び装置
WO2017059647A1 (zh) * 2015-10-09 2017-04-13 东阿阿胶股份有限公司 一种动物皮张的鉴定方法
JP2019088213A (ja) * 2017-11-13 2019-06-13 一般財団法人日本皮革研究所 コラーゲン由来材料の動物種を判定する方法
CN109187783A (zh) * 2018-09-03 2019-01-11 贵州广济堂药业有限公司 鹿胶特征肽及鉴定待测样品中是否包含鹿胶的方法
CN113004374A (zh) * 2018-09-03 2021-06-22 贵州广济堂药业有限公司 鹿胶特征肽及鉴定待测样品中是否包含鹿胶的方法
CN109187835A (zh) * 2018-09-17 2019-01-11 南京中医药大学 一种含蛋白质类中药的专属性肽段的鉴别方法
WO2021003926A1 (zh) * 2019-07-10 2021-01-14 南京中医药大学 一种阿胶及其制品的驴源性特征肽及其阿胶及其制品的鉴别方法
CN111239302A (zh) * 2020-03-04 2020-06-05 南京中医药大学 一种利用蛋白质内切酶切割胶原蛋白获得专属性肽段的方法和应用
CN112098579A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种鹿源特征肽段及其检测方法
CN112098578A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
CN112098577A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种胶类药材的检测方法
WO2022048049A1 (zh) * 2020-09-01 2022-03-10 南京中医药大学 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
AU2020103172A4 (en) * 2020-09-23 2021-01-14 Shandong Institute For Food And Drug Control Method to identify donkey derived components in donkey-hide gelatin and the preparations
CN112898384A (zh) * 2021-01-23 2021-06-04 南京中医药大学 一种鹿角特征肽段及其检测方法
CN112898400A (zh) * 2021-01-23 2021-06-04 南京中医药大学 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
CN113173972A (zh) * 2021-04-20 2021-07-27 江阴天江药业有限公司 用于鉴别鹿角或鹿皮配方颗粒的特征肽段及其检测方法
CN113173971A (zh) * 2021-04-20 2021-07-27 江阴天江药业有限公司 用于鉴别含有鹿角或鹿皮的配方颗粒的特征肽段及其检测方法

Non-Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIA CHEN等: "Detection of Gelatin Adulteration in Traditional Chinese Medicine: Analysis of Deer-Horn Glue by Rapid-Resolution Liquid Chromatography-Triple Quadrupole Mass Spectrometry", JOURNAL OF ANALYTICAL METHODS IN CHEMISTRY, vol. 2015, 4 October 2015 (2015-10-04), pages 259757 *
RUI LIU等: "A strategy for identifying species-specific peptide biomarkers in deer-hide gelatin using untargeted and targeted mass spectrometry approaches", ANALYTICA CHIMICA ACTA, vol. 1092, 26 September 2019 (2019-09-26), pages 32 - 41, XP085900989, DOI: 10.1016/j.aca.2019.09.064 *
SHUYING HAN等: "Discovery of peptide biomarkers by label-free peptidomics for discrimination of horn gelatin and hide gelatin from Cervus nippon Temminck", FOOD CHEMISTRY, vol. 363, 10 June 2021 (2021-06-10), pages 130347, XP086722727, DOI: 10.1016/j.foodchem.2021.130347 *
SHUYING HAN等: "Response boosting-based approach for absolute quantification of gelatin peptides using LC-MS/MS", FOOD CHEMISTRY, vol. 390, 28 April 2022 (2022-04-28), pages 133111 *
刘睿等: "基于"多肽组-修饰组"比较分析鹿皮与鹿皮胶物质基础", 药学学报, vol. 55, no. 08, 3 April 2020 (2020-04-03), pages 1882 - 1888 *
张玉婷等: "超高效液相色谱-质谱法对妇康宝口服液中阿胶皮源成分的鉴别", 天津药学, vol. 34, no. 5, 28 October 2022 (2022-10-28), pages 14 - 17 *
张行: "基于蛋白质组学的梅花鹿鹿皮胶真伪鉴别及其组方工艺、免疫调节活性的研究", CNKI优秀硕士学位论文全文库, 1 June 2021 (2021-06-01) *
杨海军等: "基于超声辅助酶解与串联质谱联用的鹿角特征肽检测", 中国现代应用药学, vol. 39, no. 9, 15 October 2022 (2022-10-15), pages 2543 - 2548 *
杭宝建等: "超高效液相色谱-串联质谱法测定阿胶中马、牛、羊、猪、骆驼、鹿皮源成分", 色谱, vol. 36, no. 4, 8 April 2018 (2018-04-08), pages 409 - 410 *
蒋梦彤等: "基于Label-free定量多肽组学的鹿角胶与鹿皮胶糖基化肽研究", 中国中药杂志, vol. 46, no. 14, 6 May 2021 (2021-05-06), pages 3487 - 3493 *
蔡朔等: "基于特征肽发现与应用的胶类中药质量控制", 中草药, vol. 53, no. 21, 8 November 2022 (2022-11-08), pages 6888 - 6899 *
裴玉琼等: "基于特征肽检测的多来源胶类中药同时鉴别", 分析试验室, vol. 41, no. 12, 30 September 2022 (2022-09-30), pages 1562 - 1568 *
赵艳霞等: "基于特征肽测定阿胶食品中的5种杂皮源成分", 现代食品科技, vol. 38, no. 4, 24 March 2022 (2022-03-24), pages 234 - 240 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103760269B (zh) 一种兽药残留的检测方法
Zhou et al. Rapid and sensitive analysis of 27 underivatized free amino acids, dipeptides, and tripeptides in fruits of Siraitia grosvenorii swingle using HILIC-UHPLC-QTRAP®/MS 2 combined with chemometrics methods
CN115015460B (zh) 一种运用广泛靶向代谢组学技术鉴定冬虫夏草产地的方法
CN109633012B (zh) 一种浙麦冬的鉴别方法
CN108152399B (zh) 一种柏子仁药材uplc特征图谱的构建及其检测方法
CN111398482A (zh) 鸡内金的检测方法
CN109632995B (zh) 一种酸枣仁黄酮类成分uplc指纹图谱的建立方法及应用
Shi et al. Rapid screening of illegally added drugs in functional food using a miniature ion trap mass spectrometer
CN110715994A (zh) 用UHPLC-Q-Orbitrap MS分析酸枣仁和理枣仁差异性化学成分的方法
CN114113381A (zh) 一种舒氏海龙特征多肽及其应用和鉴别舒适海龙的方法
CN103063766B (zh) 一种脑栓通制剂hplc指纹图谱的构建方法及其应用
CN107688056B (zh) 一种鉴定穿山甲种属的液质联用检测方法
CN114354772B (zh) 用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法和应用
CN112362798B (zh) 一种化妆品中大麻二酚的检测方法
CN114113376A (zh) 僵蚕特征多肽以及僵蚕、僵蚕水提物制品和其他僵蚕制品的鉴别方法
CN115792243A (zh) 一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用
CN108333287B (zh) 一种羚羊角粉的定量检测方法
CN113759011B (zh) 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法
CN114216980A (zh) 一种银柴胡hplc-elsd指纹图谱建立方法
CN111413423B (zh) 地骨皮uplc特征图谱的构建方法及地骨皮的检测方法
CN109374785B (zh) 淡竹叶药材uplc特征图谱的构建方法和检测方法
Zhao et al. Simultaneous analysis of twelve bile acids by UPLC-MS and exploration of the processing mechanism of bile arisaema by fermentation
CN114487180A (zh) 天王补心制剂中理枣仁的掺伪检测方法
CN109596763B (zh) 一种杜仲与盐杜仲的特征图谱的构建方法及鉴别方法
CN107764912B (zh) 一种健骨注射液hplc指纹图谱的构建方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination