CN115770261A - 一种益生菌复合制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种益生菌复合制剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115770261A CN115770261A CN202111049810.2A CN202111049810A CN115770261A CN 115770261 A CN115770261 A CN 115770261A CN 202111049810 A CN202111049810 A CN 202111049810A CN 115770261 A CN115770261 A CN 115770261A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- probiotic
- cancer
- probiotic compound
- compound preparation
- inorganic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 173
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 173
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 119
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims abstract description 141
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 81
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 claims abstract description 77
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 claims abstract description 77
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 66
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 52
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 44
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 40
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims description 59
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 56
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 37
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 claims description 30
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims description 29
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims description 29
- 229960000892 attapulgite Drugs 0.000 claims description 29
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 claims description 29
- 229910052625 palygorskite Inorganic materials 0.000 claims description 29
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 21
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 18
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 18
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 18
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 claims description 18
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 14
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 13
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 13
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 12
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 12
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 12
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 12
- GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H sodium hexametaphosphate Chemical compound [Na]OP1(=O)OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])O1 GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 12
- 235000019982 sodium hexametaphosphate Nutrition 0.000 claims description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 claims description 9
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 9
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 7
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical group [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 claims description 7
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 7
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 claims description 6
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 claims description 6
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 6
- 229910021647 smectite Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 claims description 5
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 claims description 5
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 5
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 5
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000186018 Bifidobacterium adolescentis Species 0.000 claims description 5
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 241000193171 Clostridium butyricum Species 0.000 claims description 5
- 241001478240 Coccus Species 0.000 claims description 5
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 5
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 claims description 5
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 claims description 5
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 claims description 5
- 241000186672 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Species 0.000 claims description 5
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 claims description 5
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 claims description 5
- 229940004120 bifidobacterium infantis Drugs 0.000 claims description 5
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims description 5
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 claims description 5
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 claims description 5
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 claims description 4
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 claims description 4
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 4
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 4
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 4
- 206010023648 Lactase deficiency Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010538 Lactose Intolerance Diseases 0.000 claims description 4
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 claims description 4
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 4
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 4
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 4
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 claims description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 4
- 229910052909 inorganic silicate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010065 polycystic ovary syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000004113 Sepiolite Substances 0.000 claims description 3
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- WUKWITHWXAAZEY-UHFFFAOYSA-L calcium difluoride Chemical compound [F-].[F-].[Ca+2] WUKWITHWXAAZEY-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 229910001919 chlorite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052619 chlorite group Inorganic materials 0.000 claims description 3
- QBWCMBCROVPCKQ-UHFFFAOYSA-N chlorous acid Chemical compound OCl=O QBWCMBCROVPCKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000010436 fluorite Substances 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 3
- 229910052900 illite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- VGIBGUSAECPPNB-UHFFFAOYSA-L nonaaluminum;magnesium;tripotassium;1,3-dioxido-2,4,5-trioxa-1,3-disilabicyclo[1.1.1]pentane;iron(2+);oxygen(2-);fluoride;hydroxide Chemical compound [OH-].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[F-].[Mg+2].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2 VGIBGUSAECPPNB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 235000019353 potassium silicate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910052624 sepiolite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019355 sepiolite Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910052604 silicate mineral Inorganic materials 0.000 claims description 3
- NTHWMYGWWRZVTN-UHFFFAOYSA-N sodium silicate Chemical group [Na+].[Na+].[O-][Si]([O-])=O NTHWMYGWWRZVTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019832 sodium triphosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000454 talc Substances 0.000 claims description 3
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 claims description 3
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 claims description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 claims 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 claims 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 abstract description 28
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 11
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 229910052901 montmorillonite Inorganic materials 0.000 description 33
- GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N dialuminum;dioxosilane;oxygen(2-);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3].O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 17
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 15
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 15
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 210000001099 axilla Anatomy 0.000 description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000003194 forelimb Anatomy 0.000 description 7
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 7
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 5
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 3
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 3
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 3
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 3
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 3
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 3
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 2
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 208000012671 Gastrointestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 2
- 239000013132 MOF-5 Substances 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 2
- 229910000323 aluminium silicate Inorganic materials 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 2
- 229920003045 dextran sodium sulfate Polymers 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 208000035861 hematochezia Diseases 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 229910019487 (Mg, Al)2Si4O10 Inorganic materials 0.000 description 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 208000002454 Nasopharyngeal Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- CQBLUJRVOKGWCF-UHFFFAOYSA-N [O].[AlH3] Chemical compound [O].[AlH3] CQBLUJRVOKGWCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBNDGIHQAIXEAO-UHFFFAOYSA-N [O].[Si] Chemical compound [O].[Si] OBNDGIHQAIXEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 239000002734 clay mineral Substances 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 108010054561 gastric mucus glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 201000011216 nasopharynx carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000015816 nutrient absorption Nutrition 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000008855 peristalsis Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229940070486 senna leaf extract Drugs 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种益生菌复合制剂，是将益生菌复合菌落干粉与无机材料直接混合制备得到的，无机材料为经过分散处理的无机矿物材料；并提供了其制备方法和应用。本发明的的特点及优点是：本发明提供的益生菌复合制剂，可通过类似口服、灌胃等简单的方式发挥作用。无机矿物材料经过分散处理，能够有效提高其承载能力和定植能力，同时也能够通过无机矿物材料本身，改变宿主体内微环境，可达到改变肠道内微生物菌群组成和数量的目的，进而可通过肠道内微生物菌群组成和数量的改变，达到预防、缓解和治疗多种因肠道菌群失调所引起的病症的目的。
Description
技术领域
本发明涉及微生物制剂技术领域，具体涉及一种益生菌复合制剂及其制备方法和应用。
背景技术
肠道是免疫系统最大的组成部分，肠道内的微生物中，超过99％都是细菌，存活数量大约有100兆个，有500-1000个不同的种类，其中含有数万亿的共生细菌。这些数目庞大的细菌大致可以分为三个大类：有害菌、中性菌和有益菌(益生菌)。
有害菌，数量一旦失控大量生长，就会引发多种疾病，产生致癌物等有害物质，或者影响免疫系统的功能。
中性菌，即具有双重作用的细菌，如大肠杆菌、肠球菌等，在正常情况下对健康有益，一旦增殖失控，或从肠道转移到身体其他部位，就可能引发许多问题。
有益菌，也称之为益生菌，主要是各种双歧杆菌、乳酸杆菌等，是人体健康不可缺少的要素，可以合成各种维生素，参与食物的消化，促进肠道蠕动，抑制致病菌群的生长，分解有害、有毒物质等。益生菌能够通过定植在宿主体内内，改变宿主某一部位菌群的组成。也能通过调节宿主黏膜与系统免疫功能或通过调节肠道内菌群平衡，起到促进营养吸收、保持肠道健康的作用。
人体的健康与肠道内的益生菌群结构息息相关。肠道菌群在长期的进化过程中，通过个体的适应和自然选择，菌群中不同种类之间，菌群与宿主之间，菌群、宿主与环境之间，始终处于动态平衡状态中，形成一个互相依存，相互制约的系统，因此，人体在正常情况下，菌群结构相对稳定，对宿主表现为不致病。但当机体内外环境变化时，平衡被打破，则会加速癌症，肠炎，肥胖等疾病的发生发展。
双歧杆菌(Bifidobacterium)是一种革兰氏阳性、杆状、端部有时呈分叉状的厌氧益生菌，其广泛存在于人和动物的消化道、阴道和口腔内。双歧杆菌能够与人体免疫细胞互相作用，调节先天性及适应性免疫相关的特定信号通路，促进Th1型免疫反应。双歧杆菌具有增强肿瘤微环境中的树突细胞的功能及CD8+T细胞的招募。另一方面，由于恶性肿瘤患者会接受各类治疗，这些治疗手段对微生物群的组成也会产生巨大影响。因此，帮助恶性肿瘤患者重建、优化其肠道菌群结构是具有积极意义的。
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，杆的末端呈圆形，主要存在小肠中。嗜酸乳杆菌能分泌抗生物素类物质(嗜酸乳菌素(acidolin)、嗜酸杆菌素(acidophilin)、乳酸菌素(1aetocidon)，对肠道致病微生物产生拮抗作用。
蒙脱石(Montmorillonite)是一种由含水铝硅酸盐颗粒构成的层状矿物，分子式为(Al，Mg)2[Si4O10](OH)2·nH2O，结构为中央铝氧八面体，上下硅氧四面体的三层片状结构，在晶体层间含有可交换阳离子，离子交换容量高，吸水膨胀能力强。蒙脱石颗粒小，具有胶体分散性，在电子显微镜下可见片状晶体。蒙脱石能够覆盖消化道粘膜，固定和抑制消化道内病毒、病菌及其产生的毒素，并与粘液糖蛋白结合，修复、提高粘膜屏障的防御功能。
凹凸棒(Mg，Al)2Si4O10(OH)·4(H2O)，是一种具链层状结构的含水富镁铝硅酸盐粘土矿物。在每个2：1单位结构层中，四面体晶片角顶隔一定距离方向颠倒，形成层链状。在四面体条带间形成与链平行的通道，通道中充填结晶水。
目前常用到调节肠道菌群的方法主要有口服益生菌和粪菌移植，但二者均存在一定缺陷：1)益生菌的一大特性即为不能耐受胃酸和胆盐，故此口服益生菌因其不能通过胃酸屏障，难以定植肠道而导致了改变肠道菌群组成的难度极大；2)粪菌移植(FMT)作为新兴技术，虽然能够更好的改变肠道菌群组成，但这种方法存在病原体感染的潜在风险，其安全性尚有待考证。
发明内容
本发明的目的是提供了一种能够通过类似简单口服方式使用，促使益生菌在宿主肠道内稳定定植的益生菌复合制剂。
本发明的上述目的可采用下列技术方案来实现：
一种益生菌复合制剂，所述益生菌复合制剂是将益生菌复合菌落干粉与无机材料直接混合制备得到的，所述无机材料为经过分散处理的无机矿物材料。
益生菌做为微生物中的一种，其对人类的有益影响早已被证实，但前期研究发现，口服益生菌具有较大缺陷，主要原因在于口服用药需要通过胃酸和胆汁的消化处理，但大部分的益生菌均无法耐受胃酸和胆汁中的胆盐，故此经过胃酸胆汁消化过后的益生菌数量大幅减少，活性也相应降低，虽然胃酸后期会由十二指肠产生的分泌物中和，但某些情况下，胃酸分泌过多的宿主体甚至会导致少部分胃酸流入至肠道中，不仅会严重影响到随消化液进入肠道的益生菌的定植，严重者甚至会影响到肠道中已有益生菌群落的数量和分布，同时胃酸会酸蚀肠道形成溃疡，造成肠道菌群环境失衡，有害菌大量繁殖并通过溃疡进入血液，从而引发了后续的一系列严重疾病；而本发明所提供的益生菌复合制剂则能够有效解决上述的多种问题。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述益生菌复合菌落包括但不限于由芽孢杆菌菌株培养得到的菌落和/或由放线菌菌株培养得到的放线菌菌落。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述芽孢杆菌菌株包括但不限于乳杆菌、芽孢杆菌和球菌中的一种或几种。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述乳杆菌包括但不限于嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌和德氏乳杆菌中的一种或几种。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述芽孢杆菌包括但不限于地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、酪酸梭状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌中的一种或几种。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述球菌包括但不限于嗜热链球菌、粪肠球菌和屎肠球菌中的一种或几种。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述放线菌菌株为双歧杆菌。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述双歧杆菌包括但不限于青春型双歧杆菌、长型双歧杆菌和婴儿双歧杆菌中的一种或几种。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述双歧杆菌优选为长型双歧杆菌。
上述益生菌复合制剂中，益生菌可以是单一菌种，也可以是混合菌种。
益生菌优选为双歧杆菌和/或嗜酸乳杆菌。
复合益生菌冻干粉剂中，嗜酸乳杆菌冻干粉和双歧杆菌冻干粉按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述无机矿物材料的分散处理方式为：在无机矿物材料中加入分散剂。
分散剂选择在分子内同时具有亲油性和亲水性两种相反性质的制剂，其能够促使无机矿物材料中聚集在一起的颗粒/纤维束均匀分散于介质中，形成稳定的悬浮体形态，从而实现对益生菌干粉的亲和、包裹和保护。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述无机矿物材料为硅酸盐矿物材料。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述无机硅酸盐矿物材料包括但不限于具有微孔结构的阳离子交换树脂、萤石、双八面体蒙脱石(Dioctahedral Smectites)亚族、三八面体蒙脱石(Trioctahedral Smectites)亚族、硅藻土、高岭土、凹凸棒土、伊利石、绿泥石、海泡石、沸石和滑石中的一种或几种。
无机材料优选为凹凸棒土和/或蒙脱石。
无机材料混合物中，凹凸棒土和蒙脱石按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1。
本发明所选择的无机材料是具有阳离子交换能力和高表面积的材料，这些材料应具有一定的粒径，该粒径与其混合培养的益生菌菌体大小处于同一数量级，使其能够有效实现对益生菌的承载和保护。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述分散剂为无机分散剂或有机分散剂。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述无机分散剂为硅酸盐类分散剂或碱金属磷酸盐类分散剂。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述硅酸盐类分散剂为水玻璃；所述碱金属磷酸盐类分散剂为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠或焦磷酸钠。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述有机分散剂为低分子聚合物类分散剂。
进一步的，上述的一种益生菌复合制剂，所述低分子聚合物类分散剂为聚乙二醇。
分散剂选择为六偏磷酸钠、焦磷酸钠和/或聚乙二醇，优选为焦磷酸钠和聚乙二醇；分散剂中，焦磷酸钠和聚乙二醇按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1。
分散后的无机材料中，无机材料和分散剂按照质量配比计为(5-15)：(0.5-1.5)，优选为9：1。
益生菌复合制剂的极性可为散剂、胶囊剂、片剂等所有适应性剂型。
无机材料可以是天然矿物材料，也可以是经过加工的天然材料(如改性等)，还可以是人工制备的材料。
本发明的第二个发明点在于，提供了上述一种益生菌复合制剂的制备方法，是将益生菌复合菌落培养后冻干，再与消毒灭菌分散后的无机材料混合即可。
本发明提供的制备方法操作简单，益生菌复合菌落冻干后制粉直接与分散后的无机材料混合即可，在保证成品效果的前提下，大幅降低了工业化制造的成本及需求。
进一步的，上述一种益生菌复合制剂的制备方法，所述益生菌复合菌落中各菌株的培养时间为2-8h。
进一步的，上述一种益生菌复合制剂的制备方法，所述无机材料的分散处理方法为：将无机材料与水混合，磁力搅拌后超声处理，再加入分散剂后水浴加热，最后洗涤、烘干、粉碎、过筛即可。
进一步的，上述一种益生菌复合制剂的制备方法，所述益生菌复合菌落冻干剂与分散后无机材料的混合方法为：将益生菌复合菌落冻干剂以107-1014cfu/g分散后无机材料的配比加入至分散后无机材料中进行混合；优选为1010cfu/g。
本发明公开益生菌复合制剂的制备方法如下所述：
步骤1：将多种益生菌菌株分别于相应培养条件下培养2-8h，洗涤，涂片镜检，提取16s rDNA测序确定菌种纯度，确定无杂菌污染后，添加冻干保护剂冻干并混合，得到益生菌复合菌落冻干粉剂；
步骤2：称取适量无机材料并以消毒剂(乙醇)浸泡消毒；再以紫外线照射、辐照等方式进行灭菌处理，最后加入分散剂进行分散，得到分散后的无机材料；
分散过程为：称量一定量的无机材料，溶入200ml去离子水中，磁力搅拌5min、超声15min，然后加入10％质量分数的分散剂，60℃水浴加热搅拌2h，用去离子水洗涤3次，最后经过烘干、粉碎，过200目筛，贮存备用；
步骤3：将一种或多种益生菌菌株所制备得到的冻干粉剂以107-1014cfu/g分散后无机材料的配比剂量进行混合，得到所述益生菌复合制剂，并在此过程中依据所需剂型添加缓冲剂，赋性剂，助溶剂，矫味剂等辅料。
本发明的第三个发明点在于，提供了上述一种益生菌复合制剂在制备用于促进益生菌肠道定植药物中的应用。
本发明的第四个发明点在于，提供了上述一种益生菌复合制剂在制备疾病治疗药物中的应用。
本发明的第五个发明点在于，提供了上述一种益生菌复合制剂在制备恶性肿瘤治疗药物中的应用。
进一步的，上述的应用，所述恶性肿瘤治疗药物中，还包括有可联合使用的治疗用药。
进一步的，上述的应用，所述可联合使用的治疗用药分别为阿霉素或PD1。
进一步的，上述的应用，所述恶性肿瘤为恶性黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、肉瘤、胃癌、肝癌、肺癌、宫颈癌、胰腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌、皮肤癌、食道癌、前列腺癌、鼻咽癌或口腔癌。
本发明的第六个发明点在于，提供了上述制备方法在制备抑制恶性肿瘤生长药物中应用。
进一步的，上述的应用，所述恶性肿瘤为恶性黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、肉瘤、胃癌、肝癌、肺癌、宫颈癌、胰腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌、皮肤癌、食道癌、前列腺癌、鼻咽癌或口腔癌。
本发明的第七个发明点在于，提供了上述一种益生菌复合制剂在制备用于治疗腹泻、便秘、消化不良、高血压、乳糖酶缺乏、乳糖不耐受、阴道感染、肝硬化、腹腔炎症、肠源性内毒素血症、特应性皮炎、过敏、肠易激综合征、牙周炎、精神类疾病、溃疡性结肠炎、多囊卵巢综合症中任一项病症的药物中的应用。
本发明的第八个发明点在于，提供了上述一种用于治疗恶性肿瘤的药物，所述药物含有前述的益生菌复合制剂。
进一步的，上述的药物，该药物还包括用于治疗恶性肿瘤肿的化疗药和/或免疫治疗药物。
通过实验证明，采用本发明公开的益生菌复合制剂能够有效促进益生菌在宿主肠道内的定植，调节宿主肠道菌群组成。基于此技术原理可以推导预见，只要在宿主体内调节肠道微生物组成能够治疗或缓解这些疾病，那么本发明公开的制备方法必然能够用于这些疾病的治疗。这些疾病至少包括：腹泻、便秘、消化不良、高血压、乳糖酶缺乏、乳糖不耐受、阴道感染、肝硬化、腹腔炎症、肠源性内毒素血症、特应性皮炎、过敏、肠易激综合征、牙周炎、精神类疾病、溃疡性结肠炎、多囊卵巢综合症。
本发明的的特点及优点是：本发明提供的益生菌复合制剂，由益生菌复合菌落干粉与无机材料直接混合制备得到，此种制剂的制备方法免除了益生菌培养过程，只需将活性益生菌干粉与分散后起到承载作用的无机矿物材料直接混合即可，操作更加简便，也更适合工业化大规模生产。以此方法制备得到的益生菌复合制剂可通过类似口服、灌胃等简单的方式发挥作用。无机矿物材料经过分散处理，能够有效提高其承载能力(吸附能力)和定植能力，同时也能够通过无机矿物材料本身，改变宿主体内微环境(如酸碱性)，基于此调整，再将复合了多种益生菌菌落的干粉活性成分定植于宿主肠道内，即可达到改变肠道内微生物菌群组成和数量的目的，进而可通过肠道内微生物菌群组成和数量的改变，达到预防、缓解和治疗多种因肠道菌群失调所引起的病症的目的。
本发明还可将嗜酸乳杆菌、青春型双歧杆菌、长型双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌、嗜热链球菌、粪肠球菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、酪酸梭状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、屎肠球菌等益生菌培养后的冻干粉与分散处理后的蒙脱石、凹凸棒土等无机硅酸盐材料直接混合制备成益生菌复合制剂，利用无机硅酸盐材料作为介质，为以上益生菌在肠道内的定植提供更有利的生态位，从而发挥在与肠道菌群失调，益生菌减少等生理状况相关的疾病的治疗中的作用。特异性促进这些具有激活宿主免疫细胞活性的益生菌的生长繁殖，就能从根本上解决益生菌在肠道内定植难和外源性粪菌移植存在的潜在感染风险的问题，最终达到根据病人情况特异性改变肠道菌群组成的效果。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1显示为嗜酸乳杆菌+分散后蒙脱石的结合微观图。
图2显示为双歧杆菌+分散后蒙脱石的结合微观图。
图3显示为嗜酸乳杆菌+双歧杆菌+分散后蒙脱石的结合微观图。
图4显示为嗜酸乳杆菌+分散后凹凸棒土的结合微观图。
图5显示为双歧杆菌+分散后凹凸棒土的结合微观图。
图6显示为嗜酸乳杆菌+双歧杆菌+分散后凹凸棒土的结合微观图。
图7显示为嗜酸乳杆菌+双歧杆菌+分散后蒙脱石+分散后凹凸棒土的结合微观图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种益生菌复合制剂，是将益生菌复合菌落干粉与无机材料直接混合制备得到的，所述益生菌复合菌落包括但不限于由芽孢杆菌菌株培养得到的菌落和/或由放线菌菌株培养得到的放线菌菌落；所述无机材料为经过分散处理的无机矿物材料。
本发明所提供的复合制剂，其中的无机矿物材料经过分散处理，形成了悬浮体形态，亲和性能和包裹性能提高，能够有效促进益生菌的定植，同时，由于无机矿物材料本身为微粒型的碱性物质，其可依附于益生菌干粉表面，形成碱性保护层，大幅降低了胃酸或胆盐对益生菌的伤害作用，还可有效中和过多的胃酸，通过改变胃肠道的微环境促进益生菌定植，提高益生菌活性，有效丰富了胃肠道中的益生菌数量和种类，进而可有效调节胃肠道的菌群菌落平衡，不仅可以治疗胃肠道菌落失衡引起的部分疾病，还能够有效预防因胃肠道有害菌引起的多种疾病。
实施例2：
一种益生菌复合制剂，是将益生菌复合菌落干粉与无机材料直接混合制备得到的，所述益生菌复合菌落包括但不限于由芽孢杆菌菌株培养得到的菌落和/或由放线菌菌株培养得到的放线菌菌落；所述无机材料为经过分散处理的无机矿物材料；
其中的芽孢杆菌菌株包括但不限于乳杆菌、芽孢杆菌和球菌中的一种或几种；乳杆菌可选择为嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌和德氏乳杆菌中的一种或几种；芽孢杆菌可选择为地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、酪酸梭状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌中的一种或几种；球菌可选择为嗜热链球菌、粪肠球菌和屎肠球菌中的一种或几种；
其中的放线菌菌株为双歧杆菌；双歧杆菌可选择为青春型双歧杆菌、长型双歧杆菌和婴儿双歧杆菌中的一种或几种；
益生菌可以是单一菌种，也可以是混合菌种。
益生菌优选为双歧杆菌和/或嗜酸乳杆菌。
复合益生菌冻干粉剂中，嗜酸乳杆菌冻干粉和双歧杆菌冻干粉按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1；
无机矿物材料的分散处理方式为：在无机矿物材料中加入分散剂。
分散剂可选择为无机分散剂或有机分散剂；
其中无机分散剂为硅酸盐类分散剂或碱金属磷酸盐类分散剂；硅酸盐类分散剂为水玻璃；碱金属磷酸盐类分散剂为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠或焦磷酸钠；
有机分散剂为低分子聚合物类分散剂；可选择为聚乙二醇。
分散剂选择为六偏磷酸钠、焦磷酸钠和/或聚乙二醇，优选为焦磷酸钠和聚乙二醇；分散剂中，焦磷酸钠和聚乙二醇按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1。
益生菌复合制剂中的无机矿物材料为硅酸盐矿物材料；可选择为具有微孔结构的阳离子交换树脂、萤石、双八面体蒙脱石(Dioctahedral Smectites)亚族、三八面体蒙脱石(Trioctahedral Smectites)亚族、硅藻土、高岭土、凹凸棒土、伊利石、绿泥石、海泡石、沸石和滑石中的一种或几种。
无机材料优选为凹凸棒土和/或蒙脱石。
无机材料混合物中，凹凸棒土和蒙脱石按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1。
分散后的无机材料中，无机材料和分散剂按照质量配比计为(5-15)：(0.5-1.5)，优选为9：1。
益生菌复合制剂的极性可为散剂、胶囊剂、片剂等所有适应性剂型。
本发明还提供了种益生菌复合制剂的制备方法，是将益生菌复合菌落培养后冻干，再与消毒灭菌分散后的无机材料混合即可。
益生菌复合菌落中各菌株的培养时间为2-8h。
无机材料的分散处理方法为：将无机材料与水混合，磁力搅拌后超声处理，再加入分散剂后水浴加热，最后洗涤、烘干、粉碎、过筛即可。
益生菌复合菌落冻干剂与分散后无机材料的混合方法为：将益生菌复合菌落冻干剂以107-1014cfu/g分散后无机材料的配比加入至分散后无机材料中进行混合；优选为1010cfu/g。
本发明公开益生菌复合制剂的具体制备方法如下所述：
步骤1：将多种益生菌菌株分别于相应培养条件下培养2-8h，洗涤，涂片镜检，提取16s rDNA测序确定菌种纯度，确定无杂菌污染后，添加冻干保护剂冻干并混合，得到益生菌复合菌落冻干粉剂；
步骤2：称取适量无机材料并以消毒剂(乙醇)浸泡消毒；再以紫外线照射、辐照等方式进行灭菌处理，最后加入分散剂进行分散，得到分散后的无机材料；
分散过程为：称量10g的无机材料，溶入200ml去离子水中，磁力搅拌5min、超声15min，然后加入10％质量分数的分散剂，60℃水浴加热搅拌2h，用去离子水洗涤3次，最后经过烘干、粉碎，过200目筛，贮存备用。
步骤3：将一种或多种益生菌菌株所制备得到的冻干粉剂以107-1014cfu/g分散后无机材料的配比剂量进行混合，得到所述益生菌复合制剂，并在此过程中依据所需剂型添加缓冲剂，赋性剂，助溶剂，矫味剂等辅料。
本发明还提供了益生菌复合制剂在制备用于促进益生菌肠道定植药物中的应用、在制备疾病治疗药物中的应用、在制备恶性肿瘤治疗药物中的应用。
本发明还提供了上述制备方法在制备抑制恶性肿瘤生长药物中应用。
恶性肿瘤为恶性黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、肉瘤、胃癌、肝癌、肺癌、宫颈癌、胰腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌、皮肤癌、食道癌、前列腺癌、鼻咽癌或口腔癌。
本发明还提供了益生菌复合制剂在制备用于治疗腹泻、便秘、消化不良、高血压、乳糖酶缺乏、乳糖不耐受、阴道感染、肝硬化、腹腔炎症、肠源性内毒素血症、特应性皮炎、过敏、肠易激综合征、牙周炎、精神类疾病、溃疡性结肠炎、多囊卵巢综合症中任一项病症的药物中的应用。
本发明还提供了一种用于治疗恶性肿瘤的药物，所述药物含有前述的益生菌复合制剂。
该药物还包括用于治疗恶性肿瘤肿的化疗药和/或免疫治疗药物。
实施例3：
益生菌冻干粉+分散后无机材料体系功效实验的准备：
1)微生物的培养与准备：
为了进行有效的对比，共选择大肠杆菌(阴性对照)1'、双歧杆菌2'、嗜酸乳杆菌3'、保加利亚乳杆菌4'、德氏乳杆菌5'、地衣芽孢杆菌6'、蜡样芽孢杆菌7'、酪酸梭状芽孢杆菌8'、凝结芽孢杆菌9'、枯草芽孢杆菌10'、嗜热链球菌11'、粪肠球菌12'、屎肠球菌13'、青春型双歧杆菌14'、长型双歧杆菌15'、婴儿双歧杆菌16'；这些微生物均来自于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，表1显示为微生物的厌氧培育的培养基选择及培养条件，培养完成后，待后续实验使用，具体如下表所示：
上述益生菌的冻干过程为：培养后的菌群落于-40℃预冻3小时，再迅速移入-60℃冷冻干燥28小时，得益生菌冻干粉剂，粉剂含水量≤2％。
复合益生菌冻干粉剂中，嗜酸乳杆菌冻干粉和双歧杆菌冻干粉混合物中，按照质量配比计为(0-2)：(2-0)，优选为1：1。
2)分散后无机材料的准备：
若干种无机材料的准备：为了进行有效的对比，共准备了以下无机材料进行实验：包括蒙脱石(1″)，硅藻土(2″)、高岭土(3″)、凹凸棒土(4″)、介孔二氧化硅(5″)、金属骨架二氧化硅MOF-5(6″)、蒙脱石与硅藻土混合物(7″)、蒙脱石和凹凸棒土混合物(8″)、蒙脱石和金属骨架二氧化硅混合物(9″)，这些材料的准备过程分别为：
先对无机材料予以分散处理，具体过程为：称量10g的无机材料，溶入200ml去离子水中，磁力搅拌5min、超声15min，然后加入10％质量分数的分散剂，60℃水浴加热搅拌2h，用去离子水洗涤3次，最后经过烘干、粉碎，过200目筛，贮存备用。
其中，蒙脱石(1″)购于先声药业，硅藻土(2″)、高岭土(3″)、凹凸棒土(4″)购于阿里巴巴，介孔二氧化硅(5″)、金属骨架二氧化硅MOF-5(6″)购自美国西格玛公司。
无机材料混合物中，蒙脱石和硅藻土混合物(7″)按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1；蒙脱石与凹凸棒土混合物(8″)按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1；蒙脱石和金属骨架二氧化硅混合物(9″)按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1。
分散剂选择为六偏磷酸钠、焦磷酸钠和/或聚乙二醇，分别为六偏磷酸钠(a)、焦磷酸钠(b)、聚乙二醇(c)、六偏磷酸钠与焦磷酸钠混合物(d)、六偏磷酸钠与聚乙二醇混合物(e)、焦磷酸钠与聚乙二醇混合物(f)，优选为焦磷酸钠与聚乙二醇混合物(f)；分散剂中，六偏磷酸钠与焦磷酸钠混合物(d)、六偏磷酸钠与聚乙二醇混合物(e)、焦磷酸钠与聚乙二醇混合物(f)均按照质量配比计为(0-2)：(2-0)；优选为1：1。
六偏磷酸钠、焦磷酸钠和聚乙二醇均购自阿里巴巴，为食品级。
分散后的无机材料中，无机材料和分散剂按照质量配比计为(5-15)：(0.5-1.5)，可选择为5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、15：1、20：1、25：1，优选为9：1。
称取适量分散后的无机材料并以消毒剂(乙醇)浸泡；以紫外线照射、辐照等方式进行灭菌处理。
沉降率是指单位时间内沉降盘上颗粒重量与分散后的制剂中检测域内颗粒总重的比值，以百分比计，其中，百分比值越低，则表明沉降盘上的颗粒越少，也即分散效果越好。表2显示为通过沉降率对分散剂与无机材料进行选择，具体如下表所示：
上表2中，分散剂依次为(a)-(f)，无机材料依次为(1″)-(9″)，无机材料中，(7″)-(9″)的混合配比为1：1；分散剂中，(d)-(f)的混合配比为1：1；无机材料与分散剂的配比按照质量计为9：1；
从上表2中可以看出，无机材料和分散剂选择为8″+f时，其沉降率最低，约为0.1％，故此选择蒙脱石与凹凸棒土混合物(8″)为无机材料，焦磷酸钠与聚乙二醇混合物(f)为分散剂，以9：1的重量配比进行分散处理。
3)益生菌冻干粉+分散后无机材料：
益生菌冻干粉以107-1014CFU/g分散后无机材料的配比进行混合，并在此过程中依据所需剂型添加缓冲剂，赋性剂，助溶剂，矫味剂等辅料。
表3显示为各种材料体系的比例，具体如下表所示：
4)小鼠实验：
为了验证本发明的效果，准备了多种病症模型小鼠，实验其效果的对象包括：
纯磷酸盐缓冲液(PBS)、双歧杆菌冻干粉(下表中以A表示)、嗜酸乳杆菌冻干粉(下表中以B表示)、双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物(下表中以C表示)；
分散后硅酸盐材料：蒙脱石(下表中以1表示)、凹凸棒土(下表中以2表示)、蒙脱石+凹凸棒土1：1(下表中以3表示)、微生物冻干粉与分散后无机材料混合之后得到的制剂于下表中以A+(1-3)、B+(1-3)、C+(1-3)表示。
图1-图7分别为益生菌冻干粉+分散后无机材料的微观结合结构图，其中，益生菌冻干粉分别为嗜酸乳杆菌和/或双歧杆菌冻干粉，分散后无机材料分别为分散后蒙脱石和/或分散后凹凸棒土。
为表明本发明采用的益生菌冻干粉剂+分散后无机材料的技术方案效果要优于现有技术(发明人现有专利CN112972503、CN112972504)所记载的悬液，本发明还分别以CN112972503、CN112972504所公开的技术方案设置了悬液对比例(分别记载为对比1和对比2)，菌悬液和无机材料的配比分别选择上述公开文件中的最优实施例数据，分别记载为D和E；同时为了突出“冻干”和“分散”的技术效果，分别设置了“菌悬液+分散无机材料”和“冻干菌+未分散无机材料”的对比例，分别记载为F和G。
CN112972503对比1和CN112972504对比2中，生物培养液双歧杆菌为(A)、乳杆菌为(B)、蒙脱石+凹凸棒土为(8)，微生物培养液与无机材料悬液混合培养之后(为S)获得的混合液SA+8、SB+8；故此，
实施例4(黑色素瘤)中，D应当选择SA+8(62.1)、SB+8(60.4)中更优者，即D＝SA+8(62.1)；
实施例6(乳腺癌)中，D应当选择SA+8(58.3)、SB+8(55.1)中更优者，即D＝SA+8(58.3)；
实施例7(结肠癌)中，D应当选择SA+8(49.7)、SB+8(57.4)中更优者，即D＝SB+8(57.4)；
实施例8(骨肉瘤)中，D应当选择SA+8(51.6)、SB+8(59.3)中更优者，即D＝SB+8(59.3)；
实施例9(肝癌)中，D应当选择SA+8(57.3)、SB+8(56.1)中更优者，即D＝SA+8(57.3)；
实施例10(肺癌)中，D应当选择SA+8(57.8)、SB+8(56.2)中更优者，即D＝SA+8(57.8)；
实施例11(宫颈癌)中，D应当选择SA+8(54.8)、SB+8(53.5)中更优者，即D＝SA+8(54.8)。
另外，由于益生菌混合体系的作用是通过生物体消化道系统为基础产生作用的，因此无法采用细胞实验进行效果验证，必须采用生物活体实验。因此本发明采用了常见的小鼠实验对效果进行验证。具体地说，采用对照组和治疗组之间肿瘤瘤重的变化来评估对肿瘤抑制率；肿瘤抑制率＝(对照组肿瘤的瘤重-治疗组肿瘤的瘤重)÷对照组肿瘤的瘤重×100％，个别情况下，治疗组测试的对象是无效的，会出现负的肿瘤抑制率，为方便数据处理，约定出现负数的情况以及肿瘤抑制率低于3％的统一用0来表示。这些情况下表示该治疗组测试的对象无效果。
另外，每个实验对象设置10个重复(即每个体系均用10只小鼠)，用瘤重的平均值来作为计算的基础。
另外，为了验证各类对象与现行常见的化疗药以及免疫治疗制剂的联合使用效果，发明人还设置了两组实验，分别是将A+(1-3)、B+(1-3)、C+(1-3)与阿霉素(ADM)联用，以及将A+(1-3)、B+(1-3)、C+(1-3)与PD1联用。
其中，阿霉素的使用条件如下：18-20g小鼠，腹腔注射阿霉素，剂量为3mg/kg，植瘤后第四天开始，每两天注射一次。
PD1的使用条件如下：18-20g小鼠，尾静脉注射PD1抗体，剂量为10mg/kg，植瘤后第四天开始，每两天注射一次。
本发明公开的益生菌复合制剂以及采用此制剂调节肠道菌群的方法，主要在于利用益生菌冻干粉-无机矿物材料复合制剂对小鼠进行灌服，最终直接改变小鼠肠道的菌群组成。
实施例4：
黑色素瘤小鼠实验：
B16-F10细胞，来源于中国科学院上海生科院细胞资源中心；体重18-20克的SPF级的C57BL/6J小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
将上述实验对象通过灌胃给药的方式注入C57BL/6J小鼠胃内，每只小鼠按0.01g矿物材料的量计算给药量，每两天一次，共灌胃两周。在第十五天时，B16-F10肿瘤细胞通过红细胞计数板计数活细胞，然后把细胞调整为5×106/ml，接种于小鼠右前肢腋部皮下(0.1ml/鼠)，建立肿瘤模型。植瘤20天后，在末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤并称重，根据瘤重的变化来计算矿物材料及益生菌矿物材料复合制剂的肿瘤抑制率，评价肿瘤的治疗效果。结果如下表4所示：
由表4可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择更优者SA+8做为D、E；而本发明的C+3组的抑制率63.5％明显优于D、E组的62.1％，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
实施例5：
溃疡性结肠炎小鼠模型：
体重18-20克的SPF级的C57BL/6J小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
C57BL/6J小鼠饮用3％DSS水溶液(葡聚糖硫酸钠，可诱导肠炎)7天后，观察到小鼠明显体重减轻，腹泻，便血症状。将制备好的需实验的对象灌服液通过灌胃给药的方式注入C57BL/6J小鼠胃内，每只小鼠按0.05g矿物材料的量计算给药量，每天1次，共灌胃7天。7天后统计治疗效果，如果在最后一天小鼠不再腹泻便血，体重恢复，则视为治愈。结果如下表5所示：
由表5可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择更优者SB+8做为D、E；而本发明的C+3组的治愈率与D、E组的100％相当，也即是具备有非常优异的治疗效果，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
实施例6：
乳腺癌小鼠实验：
4T1细胞，来源于中国科学院上海生科院细胞资源中心；体重18-20克的SPF级的BALB/c小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
将上述实验对象通过灌胃给药的方式注入BALB/c小鼠胃内，每只小鼠按0.01g矿物材料的量计算给药量，每两天一次，共灌胃两周。在第十五天时，4T1肿瘤细胞通过红细胞计数板计数活细胞，然后把细胞调整为5×106/ml，接种于小鼠右前肢腋部皮下(0.1ml/鼠)，建立肿瘤模型。植瘤25天后，在末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤并称重，根据瘤重的变化来计算矿物材料及益生菌矿物材料复合制剂的肿瘤抑制率，评价肿瘤的治疗效果。结果如下表6所示：
由表6可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择更优者SA+8做为D、E；而本发明的C+3组的抑制率60.1％明显优于D、E组的58.3％，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
实施例7：
结肠癌小鼠实验：
MC38细胞，来源于中国科学院上海生科院细胞资源中心；体重18-20克的SPF级的C57BL/6J小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
将上述实验对象通过灌胃给药的方式注入C57BL/6J小鼠胃内，每只小鼠按0.01g矿物材料的量计算给药量，每两天一次，共灌胃两周。在第十五天时，MC38肿瘤细胞通过红细胞计数板计数活细胞，然后把细胞调整为5×106/ml，接种于小鼠右前肢腋部皮下(0.1ml/鼠)，建立肿瘤模型。植瘤25天后，在末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤并称重，根据瘤重的变化来计算矿物材料及益生菌矿物材料复合制剂的肿瘤抑制率，评价肿瘤的治疗效果。结果如下表7所示：
由表7可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择更优者SB+8做为D、E；而本发明的C+3组的抑制率58.6％明显优于D、E组的57.4％，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
实施例8：
骨肉瘤小鼠实验：
S180细胞，来源于中国科学院上海生科院细胞资源中心；体重18-20克的SPF级的C57BL/6J小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
将上述实验对象通过灌胃给药的方式注入C57BL/6J小鼠胃内，每只小鼠按0.01g矿物材料的量计算给药量，每两天一次，共灌胃两周。在第十五天时，S180肿瘤细胞通过红细胞计数板计数活细胞，然后把细胞调整为5×106/ml，接种于小鼠右前肢腋部皮下(0.1ml/鼠)，建立肿瘤模型。植瘤30天后，在末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤并称重，根据瘤重的变化来计算矿物材料及益生菌矿物材料复合制剂的肿瘤抑制率，评价肿瘤的治疗效果。结果如下表8所示：
由表8可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择更优者SB+8做为D、E；而本发明的C+3组的抑制率61.2％明显优于D、E组的59.3％，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
实施例9：
肝癌小鼠实验：
heps细胞，来源于中国科学院上海生科院细胞资源中心；体重18-20克的SPF级的C57BL/6J小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
将上述实验对象通过灌胃给药的方式注入C57BL/6J小鼠胃内，每只小鼠按0.01g矿物材料的量计算给药量，每两天一次，共灌胃两周。在第十五天时，heps肿瘤细胞通过红细胞计数板计数活细胞，然后把细胞调整为5×106/ml，接种于小鼠右前肢腋部皮下(0.1ml/鼠)，建立肿瘤模型。植瘤25天后，在末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤并称重，根据瘤重的变化来计算矿物材料及益生菌矿物材料复合制剂的肿瘤抑制率，评价肿瘤的治疗效果。结果如下表9所示：
由表9可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择更优者SA+8做为D、E；而本发明的C+3组的抑制率59.6％明显优于D、E组的57.3％，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
实施例10：
肺癌小鼠实验：
LLC细胞，来源于中国科学院上海生科院细胞资源中心；体重18-20克的SPF级的C57BL/6J小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
将上述实验对象通过灌胃给药的方式注入C57BL/6J小鼠胃内，每只小鼠按0.01g矿物材料的量计算给药量，每两天一次，共灌胃两周。在第十五天时，LLC肿瘤细胞通过红细胞计数板计数活细胞，然后把细胞调整为5×106/ml，接种于小鼠右前肢腋部皮下(0.1ml/鼠)，建立肿瘤模型。植瘤25天后，在末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤并称重，根据瘤重的变化来计算矿物材料及益生菌矿物材料复合制剂的肿瘤抑制率，评价肿瘤的治疗效果。结果如下表10所示：
由表10可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择更优者SA+8做为D、E；而本发明的C+3组的抑制率61.4％明显优于D、E组的57.8％，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
实施例11：
宫颈癌小鼠实验：
Hela细胞，来源于中国科学院上海生科院细胞资源中心；体重18-20克的SPF级的BALB/c Nude小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
将上述实验对象通过灌胃给药的方式注入BALB/c Nude小鼠胃内，每只小鼠按0.01g矿物材料的量计算给药量，每两天一次，共灌胃两周。在第十五天时，Hela肿瘤细胞通过红细胞计数板计数活细胞，然后把细胞调整为5×106/ml，接种于小鼠右前肢腋部皮下(0.1ml/鼠)，建立肿瘤模型。植瘤30天后，在末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤并称重，根据瘤重的变化来计算矿物材料及益生菌矿物材料复合制剂的肿瘤抑制率，评价肿瘤的治疗效果。结果如下表11所示：
由表11可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择更优者SA+8做为D、E；而本发明的C+3组的抑制率56.3％明显优于D、E组的54.8％，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
实施例12：
腹泻小鼠实验：
体重18-20克的SPF级的C57BL/6J小鼠，购买于扬州大学动物实验中心。
小鼠空腹4h后，每间隔12h给药(番泻叶浸出液)0.5ml，连续给药四天，观察到小鼠明显腹泻症状后停止给药。将制备好的需实验的对象灌服液通过灌胃给药的方式注入C57BL/6J小鼠胃内，每只小鼠按0.05g矿物材料的量计算给药量，每天2次，共灌胃2天。3天后统计治疗效果，如果在最后一天小鼠不再腹泻，则视为治愈。结果如下
表12所示：
由表12可以看出，对比1(CN112972503)和对比2(CN112972504)中，选择SA+8/SB+8做为D、E；而本发明的C+3组的治愈率与D、E组的100％相当，C+3即为[(C)双歧杆菌+嗜酸乳杆菌1：1的冻干粉混合物]+[(3)蒙脱石+凹凸棒土1：1]。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (32)
1.一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述益生菌复合制剂是将益生菌复合菌落干粉与无机材料直接混合制备得到的，所述无机材料为经过分散处理的无机矿物材料。
2.根据权利要求1所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述益生菌复合菌落包括但不限于由芽孢杆菌菌株培养得到的菌落和/或由放线菌菌株培养得到的放线菌菌落。
3.根据权利要求2所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述芽孢杆菌菌株包括但不限于乳杆菌、芽孢杆菌和球菌中的一种或几种。
4.根据权利要求3所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述乳杆菌包括但不限于嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌和德氏乳杆菌中的一种或几种。
5.根据权利要求3所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述芽孢杆菌包括但不限于地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、酪酸梭状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌中的一种或几种。
6.根据权利要求3所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述球菌包括但不限于嗜热链球菌、粪肠球菌和屎肠球菌中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述放线菌菌株为双歧杆菌。
8.根据权利要求7所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述双歧杆菌包括但不限于青春型双歧杆菌、长型双歧杆菌和婴儿双歧杆菌中的一种或几种。
9.根据权利要求8所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述双歧杆菌为长型双歧杆菌。
10.根据权利要求1所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述无机矿物材料的分散处理方式为：在无机矿物材料中加入分散剂。
11.根据权利要求10所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述无机矿物材料为硅酸盐矿物材料。
12.根据权利要求11所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述无机硅酸盐矿物材料包括但不限于具有微孔结构的阳离子交换树脂、萤石、双八面体蒙脱石(DioctahedralSmectites)亚族、三八面体蒙脱石(Trioctahedral Smectites)亚族、硅藻土、高岭土、凹凸棒土、伊利石、绿泥石、海泡石、沸石和滑石中的一种或几种。
13.根据权利要求10所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述分散剂为无机分散剂或有机分散剂。
14.根据权利要求13所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述无机分散剂为硅酸盐类分散剂或碱金属磷酸盐类分散剂。
15.根据权利要求14所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述硅酸盐类分散剂为水玻璃；所述碱金属磷酸盐类分散剂为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠或焦磷酸钠。
16.根据权利要求13所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述有机分散剂为低分子聚合物类分散剂。
17.根据权利要求16所述的一种益生菌复合制剂，其特征在于，所述低分子聚合物类分散剂为聚乙二醇。
18.一种益生菌复合制剂的制备方法，其特征在于，所述益生菌复合制剂是根据权利要求1-17任意一项所述的益生菌复合制剂，其制备方法是将益生菌复合菌落培养后冻干，再与消毒灭菌分散后的无机材料混合即可。
19.根据权利要求18所述的一种益生菌复合制剂的制备方法，其特征在于，所述益生菌复合菌落中各菌株的培养时间为2-8h。
20.根据权利要求18所述的一种益生菌复合制剂的制备方法，其特征在于，所述无机材料的分散处理方法为：将无机材料与水混合，磁力搅拌后超声处理，再加入分散剂后水浴加热，最后洗涤、烘干、粉碎、过筛即可。
21.根据权利要求19或20所述的一种益生菌复合制剂的制备方法，其特征在于，所述益生菌复合菌落冻干剂与分散后无机材料的混合方法为：将益生菌复合菌落冻干剂以107-1014cfu/g分散后无机材料的配比加入至分散后无机材料中进行混合。
22.根据权利要求1-17任意一项所述的一种益生菌复合制剂在制备用于促进益生菌肠道定植药物中的应用。
23.根据权利要求1-17任意一项所述的一种益生菌复合制剂在制备疾病治疗药物中的应用。
24.根据权利要求1-17任意一项所述的一种益生菌复合制剂在制备恶性肿瘤治疗药物中的应用。
25.根据权利要求24所述的应用，其特征在于，所述恶性肿瘤治疗药物中，还包括有可联合使用的治疗用药。
26.根据权利要求25所述的应用，其特征在于，所述可联合使用的治疗用药分别为阿霉素或PD1。
27.根据权利要求26所述的应用，其特征在于，所述恶性肿瘤为恶性黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、肉瘤、胃癌、肝癌、肺癌、宫颈癌、胰腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌、皮肤癌、食道癌、前列腺癌、鼻咽癌或口腔癌。
28.权利要求18-21中任意一项所述的制备方法在制备抑制恶性肿瘤生长药物中应用。
29.根据权利要求28所述的应用，其特征在于，所述恶性肿瘤为恶性黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、肉瘤、胃癌、肝癌、肺癌、宫颈癌、胰腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌、皮肤癌、食道癌、前列腺癌、鼻咽癌或口腔癌。
30.根据权利要求1-17任意一项所述的一种益生菌复合制剂在制备用于治疗腹泻、便秘、消化不良、高血压、乳糖酶缺乏、乳糖不耐受、阴道感染、肝硬化、腹腔炎症、肠源性内毒素血症、特应性皮炎、过敏、肠易激综合征、牙周炎、精神类疾病、溃疡性结肠炎、多囊卵巢综合症中任一项病症的药物中的应用。
31.一种用于治疗恶性肿瘤的药物，所述药物包括权利要求1-17中任意一项所述的益生菌复合制剂。
32.根据权利要求31所述的药物，其特征在于，该药物还包括用于治疗恶性肿瘤肿的化疗药和/或免疫治疗药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111049810.2A CN115770261A (zh) | 2021-09-08 | 2021-09-08 | 一种益生菌复合制剂及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111049810.2A CN115770261A (zh) | 2021-09-08 | 2021-09-08 | 一种益生菌复合制剂及其制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115770261A true CN115770261A (zh) | 2023-03-10 |
Family
ID=85388069
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111049810.2A Pending CN115770261A (zh) | 2021-09-08 | 2021-09-08 | 一种益生菌复合制剂及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115770261A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115024374A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-09-09 | 黄淮学院 | 一种含固定化益生菌糖果的制备方法及应用 |
-
2021
- 2021-09-08 CN CN202111049810.2A patent/CN115770261A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115024374A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-09-09 | 黄淮学院 | 一种含固定化益生菌糖果的制备方法及应用 |
| CN115024374B (zh) * | 2022-06-15 | 2023-11-24 | 黄淮学院 | 一种含固定化益生菌糖果的制备方法及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112972503B (zh) | 一种益生菌体系的制备方法及其应用 | |
| US5716615A (en) | Dietary and pharmaceutical compositions containing lyophilized lactic bacteria, their preparation and use | |
| JP3993168B2 (ja) | ラクトバシルス・ペントサス株を含む組成物およびそれらの使用 | |
| ES2245801T3 (es) | Preparacion farmaceutica que comprende lactobacillus casei rhamnosus. | |
| Yan et al. | Bifidobacterium longum subsp. longum YS108R fermented milk alleviates DSS induced colitis via anti-inflammation, mucosal barrier maintenance and gut microbiota modulation | |
| WO2017020784A1 (zh) | 一种脆弱拟杆菌及其应用 | |
| KR102403453B1 (ko) | 헬리코박터 파이로리 감염의 관리를 위한 조성물 | |
| US11376289B2 (en) | Composition and uses thereof | |
| CN112746034B (zh) | 一种协同抑制幽门螺旋杆菌的鼠李糖乳杆菌lr863和鼠李糖乳杆菌lr519及其应用 | |
| EP4007821A1 (en) | Bifidobacterium bifidum bacterial strain, the compositions thereof and related uses | |
| KR20110101930A (ko) | 브로콜리를 유산균으로 발효한 항염 및 항헬리코박터의 효과가 있는 기능성 발효물질 및 이의 제조방법 | |
| WO2020098988A1 (en) | Strains, composition and method of use | |
| CN113368221A (zh) | 一种组合物、制备方法及其在治疗细菌性疾病中的应用 | |
| CN112353822A (zh) | 一种乳酸乳球菌粒子与益生菌在制备抗幽门螺旋杆菌感染药物中的应用 | |
| CN109331045A (zh) | 一种含蜂花粉、活性炭的益生菌组合物及其制备方法 | |
| KR102705354B1 (ko) | 특이적인 치료학적 활성을 가진 항생제를, 동일한 치료학적 적응증과 비-전이성 항생제 내성을 가진 락토바실러스 및/또는 비피도박테리움의 동시 사용과 조합하는 병용 방법 | |
| CN115770261A (zh) | 一种益生菌复合制剂及其制备方法和应用 | |
| CN107118981A (zh) | 一种用于调理肠道微生物环境的益生菌制剂及其应用 | |
| JP4603116B2 (ja) | 乳酸菌含有組成物、医薬及び食品 | |
| CN116725979A (zh) | 一种胃肠道微环境响应型纳米涂层包覆益生菌的制备方法及其应用 | |
| JP4509250B2 (ja) | Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ除菌性医薬品 | |
| TWI552685B (zh) | 具有保護腸道益生菌、促進其增生及避免抗生素副作用之功效的大豆發酵益生質之組合物 | |
| TWI792249B (zh) | 使用乳酸菌菌株的發酵培養物來治療和/或預防幽門螺旋桿菌感染的相關疾病 | |
| CN114886930A (zh) | 一种具有辅助治疗肿瘤效果的益生菌复合物及其用途 | |
| KR20180056896A (ko) | 한국인 모유로부터 분리한 락토바실러스 가세리 제이12피4 와 스타필로코커스 에피더미디스 제이4피1로 제조한 인공영양아용 미생물제제 및 이를 사용한 장염 억제 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |