CN115769860B - 一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，它属于饲料领域。方法：一、植物乳杆菌的碱度胁迫培养，得到耐碱植物乳杆菌；二、耐碱植物乳杆菌进行富硒发酵培养，所得发酵产物经分离、纯化后，得到耐碱且富纳米硒植物乳杆菌；三、扩大培养的菌液喷洒到鱼类配合饲料中，即完成。本发明开发了耐碱且富硒功能性饵料，提高了水生生物盐碱耐受能力，拓展渔业养殖空间；促进高盐碱水鱼类生长，抗逆性增强，提高水产养殖经济效益。能够促进鱼类肠道微生物种群的健康平衡，提高生长性能，增强了鱼类对盐碱的耐受力；食用耐碱且富纳米硒植物乳杆菌可以增强其在盐碱水中的生长性能。本发明中富含生物纳米硒的功能饵料适用于盐碱水中鱼类养殖。
Description
技术领域
本发明属于饲料领域；具体涉及一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法。
背景技术
东北地区的碳酸盐型盐碱水具有低盐、高碱、高pH值、离子组成复杂等特点，多数淡水鱼类无法在这样的水环境中生存或生长。碳酸盐碱度应激被认为是盐碱水中鱼类的主要应激源之一，鱼类在碱度作用下会激发炎症与免疫反应。
硒具有抗氧化及抗炎特性，然而无机硒有毒性且不易被机体吸收，目前，耐受高浓度硒盐的细菌很多，将硒盐转化为低毒的单质纳米硒，但是存在纳米硒含量不高，不耐受盐碱水环境，制成饲料后，高盐碱水渔业利用低，鱼体生长慢，抗逆性差。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的上述问题，而提出的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法。
一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，它按以下步骤实现：
一、碱度胁迫：设置4个碱度梯度，分别为15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L和30mmol/L，对应的PH值分别为7.5、8.0、8.5和9.0，盐度均为0.5～1，采用MRS培养基，进行植物乳杆菌的胁迫培养，得到耐碱植物乳杆菌；
二、取上述耐碱植物乳杆菌接种于MRS培养基并添加50～2000ug/ml的Na2SeO3，进行富硒发酵培养，所得发酵产物经分离、纯化后，得到耐碱且富纳米硒植物乳杆菌；
三、上述耐碱且富纳米硒植物乳杆菌进行扩大培养，得到活菌数为2～3×106CFU/ml的菌液，然后将菌液喷洒到鱼类配合饲料中，即完成适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备。
进一步的，步骤一中所述植物乳杆菌的接种量均为150～200ul。
进一步的，步骤一中所述胁迫培养：培养温度为35～38℃，时间分别为16～24h。
进一步的，步骤二中所述耐碱植物乳杆菌接种的接种量均为150～200ul。
进一步的，步骤二中所述富硒发酵培养：于35℃～37℃下有氧发酵24～36h
进一步的，步骤二中所述耐碱且富纳米硒植物乳杆菌的纳米硒含量为1300～1500ug。
进一步的，步骤三中所述扩大培养：采用MRS培养基，培养温度为35～38℃，时间为16～24h。
进一步的，步骤三中所述菌液与鱼类配合饲料的体积质量比为1ml:(80～100)g。
本发明中适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料，开发了耐碱且富硒功能性饵料，提高了水生生物盐碱耐受能力，拓展渔业养殖空间；促进高盐碱水鱼类生长，抗逆性增强，提高水产养殖经济效益。
本发明中耐碱且富纳米硒植物乳杆菌，耐盐碱能力高，其生物合成纳米硒活性高，自身低毒、安全高效环保，并且具有强抗氧化及抗炎性能，除了能够促进鱼类肠道微生物种群的健康平衡，还可以提高生长性能，运用两种手段同时增强鱼类对盐碱的耐受力；本发明中以鲤鱼为研究对象并且已证实食用耐碱且富纳米硒植物乳杆菌可以增强其在盐碱水中的生长性能，而且发现提前食用耐碱且富纳米硒植物乳杆菌，比同时耐碱且富纳米硒植物乳杆菌和盐碱水、先用盐碱水再服用耐碱且富纳米硒植物乳杆菌效果好。
本发明中富含生物纳米硒的功能饵料适用于盐碱水中鱼类养殖。
附图说明
图1为实施例中耐碱且富纳米硒植物乳杆菌的电镜图；
图2为实施例中鲤鱼碱胁迫成活率折线图，其中●表示对照组，■表示耐碱且富纳米硒植物乳杆菌组。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，它按以下步骤实现：
一、碱度胁迫：设置4个碱度梯度，分别为15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L和30mmol/L，对应的PH值分别为7.5、8.0、8.5和9.0，盐度均为0.5～1，采用MRS培养基，进行植物乳杆菌的胁迫培养，得到耐碱植物乳杆菌；
二、取上述耐碱植物乳杆菌接种于MRS培养基并添加50～2000ug/ml的Na2SeO3，进行富硒发酵培养，所得发酵产物经分离、纯化后，得到耐碱且富纳米硒植物乳杆菌；
三、上述耐碱且富纳米硒植物乳杆菌进行扩大培养，得到活菌数为2～3×106CFU/ml的菌液，然后将菌液喷洒到鱼类配合饲料中，即完成适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备。
本实施方式中所述植物乳杆菌、MRS培养基及鱼类配合饲料均为市售商品。
本实施方式步骤二中分离和纯化采用现有技术手段。
本实施方式中制备的适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料，日投喂量为鱼体重的2～4％，并根据天气、水温、鱼体大小、摄食强度等合理进行调整。
本实施方式中制备所得饲料要放到4℃冰箱保存，利于保持菌的活性。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤一中所述植物乳杆菌的接种量均为150～200ul。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤一中所述胁迫培养：培养温度为35～38℃，时间分别为16～24h。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤二中所述耐碱植物乳杆菌接种的接种量均为150～200ul。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤二中所述富硒发酵培养：于35℃～37℃下有氧发酵24～36h。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤二中所述耐碱且富纳米硒植物乳杆菌的纳米硒含量为1300～1500ug。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
本实施方式中通过原子分光光度计测量耐碱且富纳米硒植物乳杆菌中纳米硒的含量。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤二中添加1500ug/ml的Na2SeO3。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤三中所述扩大培养：采用MRS培养基，培养温度为35～38℃，时间为16～24h。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤三中得到活菌数为2.31×105CFU/g的菌液。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤三中所述菌液与鱼类配合饲料的体积质量比为1ml:(80～100)g。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
通过以下实施例验证本发明的有益效果：
实施例：
一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，它按以下步骤实现：
一、碱度胁迫：设置4个碱度梯度，分别为15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L和30mmol/L，对应的PH值分别为7.5、8.0、8.5和9.0，盐度均为0.6，采用MRS培养基，进行植物乳杆菌的胁迫培养，得到耐碱植物乳杆菌；
二、取上述耐碱植物乳杆菌接种于MRS培养基并添加200ug/ml的Na2SeO3，进行富硒发酵培养，所得发酵产物经分离、纯化后，得到耐碱且富纳米硒植物乳杆菌；
三、上述耐碱且富纳米硒植物乳杆菌进行扩大培养，得到活菌数为2.31×106CFU/ml的菌液，然后将菌液喷洒到鱼类配合饲料中，即完成适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备。
本实施例步骤一中所述植物乳杆菌的接种量均为200ul。
本实施例步骤一中所述胁迫培养：培养温度为35℃，时间分别为24h。
本实施例步骤二中所述耐碱植物乳杆菌接种的接种量均为200ul。
本实施例步骤二中所述富硒发酵培养：于37℃下有氧发酵24h
本实施例步骤二中所述耐碱且富纳米硒植物乳杆菌的纳米硒含量为1450ug。
本实施例步骤三中所述扩大培养：采用MRS培养基，培养温度为37℃，时间为36h。
本实施例步骤三中所述菌液与鱼类配合饲料的体积质量比为1ml:100g。
本实施例中所述植物乳杆菌、MRS培养基及鱼类配合饲料均为市售商品。
本实施例步骤二中所得耐碱且富纳米硒植物乳杆菌，如图1所示，可见菌体形态好，表面富含纳米硒，能够制备富含生物纳米硒的饲料。
本试验过程中，平均水温为22～23℃，溶解氧8mg/L以上；总氨氮和亚硝酸态氮分别保持在0.2mg/L以下和0.02mg/L以下。在整个养殖过程中鱼体无任何病害发生。
功能饵料的日投喂量为鱼体重的3％，并根据天气、水温、鱼体大小、摄食强度等合理进行调整。
实验选取360条鱼，将其均匀分到12个养殖缸里，将养殖缸进行分组，对照组、高碱度组、耐碱且富纳米硒植物乳杆菌组、耐碱且富纳米硒植物乳杆菌加碱组，每组3个平行试验。本实验在2022年9月开始11月结束，在实验过程中饲料现配现用，未饲喂的饲料要放在4℃冰箱储存。具体的实验生长情况及对碱的耐受存活率见下表1和图2。
表1各处理组鲤鱼的生长情况
注：每个值代表平均值±S.E.(n＝3)，同一行不同上标字母的值有显著差异(P<0.05)。
实验结果：
耐碱且富纳米硒植物乳杆菌组生长性能较对照组增加15％。将饲喂耐碱且富纳米硒植物乳杆菌30天的鲤放入到26.5mmol/L(致死浓度)的碱水中与对照组相比成活率提高10％。
Claims (10)
1.一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于它按以下步骤实现：
一、碱度胁迫：设置4个碱度梯度，分别为15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L和30mmol/L，对应的PH值分别为7.5、8.0、8.5和9.0，盐度均为0.5~1，采用MRS培养基，进行植物乳杆菌的胁迫培养，得到耐碱植物乳杆菌；
二、取上述耐碱植物乳杆菌接种于MRS培养基并添加50~2000ug/ml 的Na2SeO3，进行富硒发酵培养，所得发酵产物经分离、纯化后，得到耐碱且富纳米硒植物乳杆菌；
三、上述耐碱且富纳米硒植物乳杆菌进行扩大培养，得到活菌数为2~3×106CFU/ml的菌液，然后将菌液喷洒到鱼类配合饲料中，即完成适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备。
2.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤一中所述植物乳杆菌的接种量均为150~200ul。
3.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤一中所述胁迫培养：培养温度为35~38℃，时间分别为16~24h。
4.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤二中所述耐碱植物乳杆菌接种的接种量均为150~200ul。
5.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤二中所述富硒发酵培养：于35℃~37℃下有氧发酵24~36h。
6.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤二中所述耐碱且富纳米硒植物乳杆菌的纳米硒含量为1300~1500ug。
7.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤二中添加1500ug/ml 的Na2SeO3。
8.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤三中所述扩大培养：采用MRS培养基，培养温度为35~38℃，时间为16~24h。
9.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤三中得到活菌数为2.31×106CFU/ml的菌液。
10.根据权利要求1所述的一种适用于盐碱水且富含生物纳米硒的功能饵料的制备方法，其特征在于步骤三中所述菌液与鱼类配合饲料的体积质量比为1ml:(80~100)g。
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| Publication number | Publication date |
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