CN115768516A - 通过施用il-4r抑制剂治疗嗜酸细胞性食管炎的方法 - Google Patents

通过施用il-4r抑制剂治疗嗜酸细胞性食管炎的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115768516A
CN115768516A CN202180036330.4A CN202180036330A CN115768516A CN 115768516 A CN115768516 A CN 115768516A CN 202180036330 A CN202180036330 A CN 202180036330A CN 115768516 A CN115768516 A CN 115768516A
Authority
CN
China
Prior art keywords
inhibitor
treatment
subject
seq
eoe
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180036330.4A
Other languages
English (en)
Inventor
J·D·汉密尔顿
J·马罗尼
L·曼内特
M·鲁迪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanofi Biotechnology SAS
Regeneron Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Sanofi Biotechnology SAS
Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Biotechnology SAS, Regeneron Pharmaceuticals Inc filed Critical Sanofi Biotechnology SAS
Publication of CN115768516A publication Critical patent/CN115768516A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Abstract

本公开通过给受试者施用一个或多个剂量的白介素‑4受体(IL‑4R)抑制剂，如抗IL‑4R抗体或其抗原结合片段，提供用于治疗、预防或改善青少年或成人受试者的嗜酸细胞性食管炎的一个或多个症状的方法。

Description

通过施用IL-4R抑制剂治疗嗜酸细胞性食管炎的方法
相关申请的交叉参考
本申请于2021年5月21日作为PCT国际专利申请提交，并要求以下申请的优先权：2020年5月22日提交的美国临时专利申请No.63/029085；2020年8月17日提交的美国临时专利申请No.63/066705；2020年8月27日提交的美国临时专利申请No.63/071264；2020年10月6日提交的美国临时专利申请No.63/088147；2020年12月3日提交的美国临时专利申请No.63/121088；和2021年2月2日提交的美国临时专利申请No.63/144939；2021年4月21日提交的欧洲专利申请No.21315068.3；其中各自的完整内容通过引用并入本文。
发明领域
本公开涉及白介素-4(IL-4)受体抑制剂用于治疗或预防有需要的受试者中的嗜酸细胞性食管炎(eosinophilic esophagitis)的用途。
背景
嗜酸细胞性食管炎(EoE)是一种慢性、炎性、过敏/免疫介导的食管疾病，其特征在于局部嗜酸性炎症(eosinophilic inflammation)，导致食管功能障碍的症状。虽然被认为是一种罕见疾病，但目前全球流行率估计为22.7/100,000(Arias等，Aliment PharmacyTher 2016，43:3-15)，并且似乎在增加(Dellon，Gastroenterology Clinics of NorthAmerica 2014，43:201-218)。尽管嗜酸细胞性食管炎在所有年龄段均有报道，然而，大多数病例发生在儿童和50岁以下的成人中(参见Dellon等，Clinical Gastroenterology andHepatology 2014，
12:589-596)。尽管临床症状没有性别相关的差异，但EoE的性别差异被持续报道，受影响的男性是女性的3到4倍，(参见，例如，Kapel等，Gastroenterology 2008，140:82-90)。
成人和10岁以上儿童中的EoE的主要临床表现为吞咽困难和食物嵌塞(Lucendo等，United European Gastroenterol J，2017年，5:335-358)。这些症状导致生活质量(QOL)显著受损(参见，DeBrosse等，Journal of Allergy and Clinical Immunology 2011年，128:132-138；Falk，Gastrointestinal Endoscopy Clinics of North America 2014年，43:231-242；和Straumann，Gastrointestinal Endoscopy Clinics of North America2008，18:99-118)。内镜检查发现与食管炎症有关，并且包括固定或暂时的同心环、纵向皱纹、白色斑块、减少的粘膜血管、脆弱或皱褶状粘膜以及狭窄。
越来越多的证据表明，2型细胞因子介导的免疫反应在EoE的发展中起着重要作用。认为这是通过引起慢性嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T细胞和淋巴细胞诱发的炎症通过已知调控食管中嗜酸性细胞积聚的细胞因子而产生，这些细胞因子如白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13和嗜酸细胞活化趋化因子-1(eotaxin-1)、-2，和-3(例如，参见Abonia和Rothenberg，Annual Review of Medicine 2012，63:421-434；Blanchard等，Journal ofClinical Investigation，2006，116:536-547；Blanchar等，Gastrointestinal EndoscopyClinics of North America，2008，18:133-43；和Mishra，Immunology and AllergyClinics of North America，2009，29:29-40)。与食管组织中观察到的2型介导炎症相一致，EoE患者有较高的共病过敏性疾病发生率，这些疾病也与增强的IL-4和IL-13信号有关，尤其是食物过敏、特应性皮炎(AD)、哮喘，和过敏性鼻炎(参见，例如，Assa'ad，Gastrointestinal Endoscopy Clinics of North America，2008，18:119-132；和Weinbrand Goichberg等，Immunologic Research，2013，56:249-260)。
目前的治疗方法包括慢性饮食排除、吞咽局部制剂皮质类固醇(欧盟[EU]以外未批准用于治疗EoE)和食管扩张。用于长期和/或疼痛性食物嵌塞的急诊内镜检查与严重食管损伤的风险相关，并且不会改变疾病的潜在发病机制或进展。虽然在临床试验中，吞咽的局部皮质类固醇被报道可诱导部分临床反应和组织学缓解，但他们并非统一有效，并且可能与真菌感染以及停药后疾病复发有关。因此，仍然需要安全有效的治疗EoE的方法。
概述
在一个方面中，提供了治疗、预防或改善≥12岁受试者的至少一种嗜酸细胞性食管炎(EoE)症状的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用一个或多个剂量的白介素-4受体(IL-4R)抑制剂，其中在治疗开始前，受试者具有≥10的吞咽困难症状问卷(Dysphagia Symptom Questionnaire)(DSQ)评分，其中IL-4R抑制剂是结合IL-4Rα的抗体或其抗原结合片段，并且其包含包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)1、包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链互补决定区(LCDR)1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。
在一些实施方案中，受试者是成人。在一些实施方案中，受试者是≥12岁且<18岁的青少年。
在一些实施方案中，在治疗开始前，受试者具有通过内镜活检在食管近端区域、食管中段区域和食管远端区域中的至少两个区域测量的≥15eos/hpf的上皮内嗜酸细胞性浸润峰值细胞计数。在一些实施方案中，受试者具有持续至少4周，平均每周至少两次吞咽困难发作的病史。在一些实施方案中，受试者对吞咽的局部皮质类固醇和/或质子泵抑制剂(PPI)的治疗无反应或反应不足。
在一些实施方案中，受试者患有伴随的特应性疾病。在一些实施方案中，伴随的特应性疾病是食物过敏、特应性皮炎、哮喘、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎或过敏性结膜炎。在一些实施方案中，受试者患有嗜酸细胞性胃肠炎。在一些实施方案中，受试者具有选自哮喘、特应性皮炎、手部和食物湿疹、过敏性鼻炎、口腔过敏综合征和食物过敏(例如，花生过敏)的当前或先前的共病。
在一些实施方案中，受试者患有伴随的2型炎症疾病。在一些实施方案中，受试者患有哮喘、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎、变应性真菌性鼻窦炎、慢性窦炎、变应性支气管肺曲霉菌病(ABPA)、统一气道疾病、嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA，以前称为Churg-Strauss综合征)、胃食管反流病(GERD)、特应性结膜炎、血管炎、囊性纤维化(CF)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)、阿司匹林超敏反应、非甾体抗炎药(NSAID)超敏反应(例如NSAID加重呼吸道疾病或NSAID-ERD)、常年性过敏性鼻炎(PAR)、特应性皮炎(AD)、慢性嗜酸性肺炎(CEP)，或运动诱发的支气管痉挛。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)和含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂包含含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂是杜匹鲁单抗(dupilumab)或其生物等效物。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂以约50mg至约600mg的剂量施用。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂以约300mg的剂量施用。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂一周施用一次或每两周施用一次。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂联合第二治疗剂或疗法来施用。在一些实施方案中，第二治疗剂或疗法是IL-1β抑制剂、IL-5抑制剂、IL-9抑制剂、IL-13抑制剂、IL-17抑制剂、IL-25抑制剂、TNFα抑制剂、嗜酸细胞活化趋化因子-3抑制剂、IgE抑制剂、前列腺素D2抑制剂、免疫抑制剂、局部皮质类固醇、口服皮质类固醇、全身皮质类固醇、吸入皮质类固醇、糖皮质类固醇、PPI、减充血剂、抗组胺剂、非甾体抗炎药(NSAID)、食管扩张、过敏原去除(allergen removal)或饮食管理。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂联合PPI来施用。在一些实施方案中，PPI以选自以下的高剂量方案施用：40mg QD或20mg BID剂量的奥美拉唑(omeprazole)、40mg QD或20mg BID剂量的埃索美拉唑(esomeprazole)、60mg QD或30mg BID剂量的兰索拉唑(lansoprazole)、60mg QD剂量的右兰索拉唑(dexlansoprazole)，40mg QD或20mg BID剂量的雷贝拉唑(rabeprazole)，和80mg QD或40mg BID剂量的泮托拉唑(pantoprazole)。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗减少了使用PPI治疗的需要。
在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗使一种或多种EoE相关的和/或2型炎症相关的基因的表达正常化(例如，使图3中所示的一种或多种2型炎症相关的基因的表达正常化和/或使图6中所示的一种或多种EoE相关的基因的表达正常化)。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗减少了受试者的吞咽困难(例如，改善受试者吞咽食物的能力)。在一些实施方案中，在治疗24周后，相对于基线，使用IL-4R抑制剂的治疗使受试者的DSQ评分降低至少30％；和/或在治疗24周后，相对于基线，使受试者的DSQ评分降低至少10分。在一些实施方案中，相对于受试者的基线值，使用IL-4R抑制剂的治疗在约4周内、约6周内或约8周内减轻吞咽困难的症状。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗减少受试者的食管上皮内嗜酸性粒细胞。在一些实施方案中，在治疗24周后，相对于基线，受试者的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数降低至少50％；和/或在治疗24周后，受试者食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数降至≤6eos/hpf。在一些实施方案中，在治疗24周后，使用IL-4R抑制剂的治疗将受试者食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数降至≤1eos/hpf。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗改善食管的一个或多个内窥镜特征，例如，食管近端和/或远端的水肿、环、渗出物、皱褶和/或狭窄的存在或严重程度。在一些实施方案中，在治疗24周后，相对于基线，使用IL-4R抑制剂的治疗将受试者的EoE-EREFS评分降低至少25％。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗降低了选自TARC、嗜酸细胞活化趋化因子-3和IgE(例如，总IgE)的生物标志物的表达。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗使与疾病严重性的临床测量相关的基因的表达正常化(例如，CTSC、CCL26、CCR3、ANO1和/或SPINK8)。
在另一个方面中，提供了改善吞咽食物的能力的方法。在一些实施方案中，该方法包括：
向患有嗜酸细胞性食管炎的受试者施用一个或多个剂量的白介素-4受体(IL-4R)抑制剂，其中IL-4R抑制剂是抗体或其抗原结合片段，其结合IL-4Rα并且包含含有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)1、含有SEQ ID NO:4的HCDR2、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3、含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链互补决定区(LCDR)1、含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。
在一些实施方案中，受试者是成人。在一些实施方案中，受试者是≥12岁且<18岁的青少年。
在一些实施方案中，在治疗开始前，受试者具有≥10的吞咽困难症状问卷(DSQ)评分。在一些实施方案中，在治疗开始前，受试者具有通过内镜活检在食管近端区域、食管中段区域和食管远端区域中的至少两个区域测量的上皮内嗜酸细胞性浸润峰值细胞计数≥15个eos/hpf。在一些实施方案中，受试者具有持续至少4周，平均每周至少两次吞咽困难发作的病史。在一些实施方案中，受试者对吞咽局部皮质类固醇和/或质子泵抑制剂(PPI)的治疗无反应或反应不足。
在一些实施方案中，受试者患有伴随的特应性疾病。在一些实施方案中，伴随的特应性疾病是食物过敏、特应性皮炎、哮喘、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎或过敏性结膜炎。在一些实施方案中，受试者患有嗜酸细胞性胃肠炎。
在一些实施方案中，受试者患有伴随的2型炎症疾病。在一些实施方案中，受试者患有哮喘、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎、变应性真菌性鼻窦炎、慢性窦炎、变应性支气管肺曲霉菌病(ABPA)、统一气道疾病、嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA，以前称为Churg-Strauss综合征)、胃食管反流病(GERD)、特应性结膜炎、血管炎、囊性纤维化(CF)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)、阿司匹林超敏反应、非甾体抗炎药(NSAID)超敏反应(例如NSAID加重呼吸道疾病或NSAID-ERD)、常年性过敏性鼻炎(PAR)、特应性皮炎(AD)、慢性嗜酸性肺炎(CEP)，或运动诱发的支气管痉挛中的一种或多种。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)和含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂包含含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂是杜匹鲁单抗或其生物等效物。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂以约50mg至约600mg的剂量施用。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂以约300mg的剂量施用。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂一周施用一次或每两周施用一次。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂联合第二治疗剂或疗法来施用。在一些实施方案中，第二治疗剂或疗法是IL-1β抑制剂、IL-5抑制剂、IL-9抑制剂、IL-13抑制剂、IL-17抑制剂、IL-25抑制剂、TNFα抑制剂、嗜酸细胞活化趋化因子-3抑制剂、IgE抑制剂、前列腺素D2抑制剂、免疫抑制剂、局部皮质类固醇、口服皮质类固醇、全身皮质类固醇、吸入皮质类固醇、糖皮质类固醇、PPI、减充血剂、抗组胺剂、非甾体抗炎药(NSAID)、食管扩张、过敏原去除或饮食管理。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂联合PPI来施用。在一些实施方案中，PPI以选自以下的高剂量方案施用：40mg QD或20mg BID剂量的奥美拉唑(omeprazole)、40mg QD或20mg BID剂量的埃索美拉唑(esomeprazole)、60mg QD或30mg BID剂量的兰索拉唑(lansoprazole)、60mg QD剂量的右兰索拉唑(dexlansoprazole)，40mg QD或20mg BID剂量的雷贝拉唑(rabeprazole)，和80mg QD或40mg BID剂量的泮托拉唑(pantoprazole)。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗减少了使用PPI治疗的需要。
在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗：
在治疗24周后，相对于基线，将受试者的DSQ评分降低至少30％；
在治疗24周后，相对于基线，将受试者的DSQ评分降低了至少10分；和/或
改善了受试者的吞咽困难评分的患者总体印象的变化(PGIC)。
在一些实施方案中，在治疗24周后，使用IL-4R抑制剂的治疗导致受试者中的吞咽困难结果的患者总体印象的变化(PGIC)评分为“好得多了”或“中等程度的好转”。
在一些实施方案中，将IL-4R抑制剂包含在选自玻璃小瓶(glass vial)、注射器、笔式递送装置和自动注射器的容器中。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂包含在玻璃小瓶内。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂包含在注射器中。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂包含在自动注射器中。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂包含在笔式递送装置中。在一些实施方案中，笔式递送装置是预灌装的。
通过阅读随后的详述，其它实施方案将是明显的。
附图简述
图1.如通过24周治疗期间DSQ总评分变化测量的，用杜匹鲁单抗治疗显著且快速地降低了EoE患者的吞咽困难严重程度。DSQ评分范围为0到84，分数越低表明吞咽困难的发生频率越低或严重程度越低。安慰剂＝菱形(图中的上线)；杜匹鲁单抗300mg QW＝圆形(图中的下线)。LS，最小二乘法；SE，标准误差。*P<0.05，**P<0.01；***P<0.001。
图2A和2B.如通过EREFS评分测量的，在第24周，用杜匹鲁单抗治疗降低了EoE的内镜特征。EREFS评分范围为0至18，评分越高表明严重程度/存在程度越高。图2A：与基线相比，EREFS总分的绝对变化。图2B：食管近端和远端区域的EREFS的主要特征从基线到第24周的变化。**P<0.01；***P<0.001。P值是名义上的。EREFS，嗜酸细胞性食管炎内镜参考评分；LS，最小二乘法；SD，标准偏差；SE，标准误差。a安慰剂组的5名患者接受了救援治疗；救援治疗后的数据被设置为缺失，并将其第24周的数据插补。数据缺失的其他原因包括早期中止A部分的研究，在患者服用第一剂C部分研究药物后第24周进行内窥镜检查，或由于COVID-19大流行限制而推迟了第24周的访视。
图3.用杜匹鲁单抗治疗使实施例1中的成人和青少年EoE患者食管活检中的2型炎症特征(T2INFGS)正常化。行表示2型炎症标志的基因：IL13RA1、FCER1A、CCL17、ARG1、IL4R、STAT6、CCR4、TSLP、DPP4、SIGLEC8、GATA1、PTGDR2、CCR3、CLC、HRH1、CCL24、ALOX15、CCL26、IL1RL1、HDC、TPSAB1、CMA1、IL25、IL4、GATA3、IL13、IL5、POSTN、CCL13、CCL18、IL33、CCL11、MUC5B、MUC5AC、PTGDS、和FCER2。每列是一名患者的平均基因表达(每个时间点每个患者最多3个样本)。针对筛查和治疗第24周时的安慰剂治疗的患者、筛查和治疗第24周时的杜匹鲁单抗治疗的患者、健康对照和EoE对照，显示了基因表达特征。
图4.用杜匹鲁单抗治疗使实施例1中的成人和青少年EoE患者食管活检中的96-基因EoE诊断组(EDPGS)正常化。行表示EoE诊断组的基因(Wen等，Gastroenterology 2013；145(6):1289-1299)。每列是一名患者的平均基因表达(每个时间点每个患者最多3个样本)。针对筛查和治疗第24周时的安慰剂治疗的患者、筛查和治疗第24周时的杜匹鲁单抗治疗的患者、健康对照和EoE对照，显示了基因表达特征。
图5.杜匹鲁单抗300mg QW vs安慰剂对1,302个基因的作用，在第12周具有调节的表达(“the DpxOme-EoE”TM)及其在每个单独样本中的富集评分(NES_EoE)。针对基线和治疗第12周时的安慰剂治疗的患者(n＝19)、基线和治疗第12周时的杜匹鲁单抗治疗的患者(n＝22)、健康对照和EoE对照，显示了基因表达特征。行表示DpxOme-EoETM的基因。
图6.用杜匹鲁单抗300mg QW vs安慰剂治疗后12周时具有最大表达变化的头30个基因。
图7A-7C.杜匹鲁单抗300mg QW vs安慰剂对EoE患者中的2型炎症血清TARC(图7A)、血浆嗜酸细胞活化趋化因子-3(图7B)和血清总IgE(图7C)的生物标志物从基线到第4、12和24周的中值变化的作用。杜匹鲁单抗和安慰剂之间的***P值<0.0001。使用基于秩的ANCOVA模型分析了杜匹鲁单抗和安慰剂与基线相比的变化差异，基线测量作为协变量，并且分层因素和治疗作为固定因素。对使用首次救援治疗后的值进行审查，然后使用最后观察结转(LOCF)法将每次访视时的缺失数据插补。
发明详述
在描述本发明之前，应当理解本发明不限于所描述的具体方法和实验条件，因为这样的方法和条件可以变化。还应当理解，本文使用的术语仅是为了描述具体实施方案的目的，并非旨在限制，因为本发明的范围仅受限于所附权利要求书。
除非另有定义，否则本文中使用的所用技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。
如本文所用，术语“约”，用于提及具体列举的数值时，是指该值可以从列举的值变化不超过1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101以及其间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”等表示缓解症状，暂时或永久消除症状的诱因，或预防或减缓所述疾病或病症的症状的出现。
本文中使用的“嗜酸细胞性食管炎”或“EoE”是指以食管内异常嗜酸性炎症和食管功能障碍为特征的炎症疾病。EoE的主要症状包括但不限于胸痛、腹痛、吞咽困难、烧心、拒食、呕吐和食物嵌塞。EoE的临床病理特征是食管壁出现脊状或气管样环以及食管粘膜嗜酸细胞浸润。EoE目前通过食管内窥镜检查和活检，然后对食管粘膜衬里进行显微镜和生化分析来诊断。EoE可分为特应性或非特应性(参见Mulder等，Histopathology 2012，61:810-822)。本公开包括治疗特应性和非特应性形式EoE的方法。
如本文所用，术语“有需要的受试者”是指表现出一个或多个嗜酸细胞性食管炎症状或指征的人类或非人类哺乳动物，和/或已被诊断为嗜酸细胞性食管炎的人类或非人类哺乳动物。在某些实施方案中，该术语包括显示一个或多个EoE相关的生物标志物(本文别处描述)水平升高的受试者和/或具有与EoE相关的基因表达谱(“EoE疾病转录组”)的受试者。例如，在一些实施方案中，根据本发明的方法治疗的受试者是IgE、血清TARC和/或嗜酸细胞活化趋化因子-3水平升高的受试者，是具有与发布的EoE基因表达特征一致的基因表达谱的受试者(Dellon等，Clin Transl Gastroenterol 2017，8(2)：e74)，或具有公开的EoE基因表达特征的一个或多个基因的表达水平改变的受试者。如本文所用，术语“受试者”和“患者”可以互换使用。
术语“有需要的受试者”还可以包括，例如，在治疗前，表现出(或已经表现出)一个或多个EoE指征的受试者，如，例如，食管中促炎症介质(诸如肥大细胞)的过表达、食管嗜酸细胞性浸润、食管壁增厚、吞咽困难、食物嵌塞、胸部和腹部疼痛和/或EoE相关的生物标志物水平升高。该术语还包括外周嗜酸性粒细胞计数升高(例如≥100、≥150、≥200或≥300细胞/μL)或血清IgE升高(>150kU/L)的受试者。
术语“嗜酸细胞性浸润”是指受试者的器官或组织(包括血液、食管、胃、十二指肠和回肠)中存在嗜酸性粒细胞。在本公开的上下文中，术语“嗜酸细胞性浸润”指的是在胃肠道区域(包括但不限于食管和胃)的粘膜衬里中存在嗜酸性粒细胞。例如，在患有EoE的受试者的食管组织活检中分析嗜酸细胞性浸润。根据一些实施方案，“嗜酸细胞性浸润”是指在食管或食管近端、中段和远端区域中的两个或更多个中，每高倍视野≥15个嗜酸性粒细胞。术语“高倍视野”是指显微镜的标准总放大倍数为400X，用于观察组织中的嗜酸性粒细胞，例如，受试者食管中的嗜酸性粒细胞。因此，在一些实施方案中，“有需要的受试者”是指表现在食管中，例如，在食管的近端、中段和远端区域中的两个或更多个中，每高倍视野(“hpf”)≥15个嗜酸性粒细胞(“eos”)。在某些实施方案中，“嗜酸细胞性浸润”包括白细胞(例如淋巴细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞)对组织的浸润。可通过细胞表面标志物(如嗜酸性粒细胞特异性标志物(如CD11cLow/Neg、SiglecF+、F4/80+、EMR1+、Siglec 8+和MBP2+)、巨噬细胞特异性标志物(例如CD11b+、F4/80+、CD14+、EMR1+和CD68+)、嗜中性粒细胞特异标志物(例如CD11b+、Ly6G+、Ly6C+、CD11b+和CD66b+)，和T细胞特异性标记物(例如CD3+、CD4+和CD8+)来检测白细胞对例如食管组织的浸润。
治疗方法
在一个方面中，提供了治疗、预防或改善受试者嗜酸细胞性食管炎(EoE)的一种或多种症状的方法。在一些实施方案中，受试者≥12岁。在一些实施方案中，受试者是成人。在一些实施方案中，受试者是≥12岁且<18岁青少年。在一些实施方案中，受试者是治疗开始前体重>40kg的青少年。
在一些实施方案中，待治疗的受试者具有频繁和/或严重的吞咽困难病史。例如，在一些实施方案中，在治疗开始前，受试者具有≥10的吞咽困难症状问卷(DSQ)评分，例如，≥15、≥20、≥25、≥30或≥35的DSQ评分。在一些实施方案中，在治疗开始前，受试者每周平均经历至少2、3、4、5或更多次吞咽困难发作。在一些实施方案中，受试者每周经历多次吞咽困难发作(例如，平均2次或更多次吞咽困难)，持续至少4周、至少8周、至少12周、至少16周或至少20周，或持续至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月或更长时间。在一些实施方案中，在治疗开始前，受试者经历了多次(例如，2次或更多次)吞咽困难发作，其需要液体、咳嗽或作呕、呕吐或医疗护理以获得缓解。
在一些实施方案中，待治疗的受试者具有EoE的一种或多种生物标志物的改变水平，或具有EoE-相关基因的基因特征谱，其表示EoE患者的公开的基因特征谱或与患者的公开的EoE基因特征谱相一致。本领域描述了诊断EoE的EoE相关的生物标志物和基因表达组，例如，Sherrill等，Genes Immun 2014，15(6)：361-369；Dellon等，Clin TranslGastroenterol，8(2)：e74；和美国专利公开No.2017/0067111。在一些实施方案中，受试者具有升高水平的嗜酸细胞活化趋化因子-3、血清TARC、总IgE、过敏原特异性IgE和/或过敏原特异性IgG4。在一些实施方案中，待治疗的受试者具有升高水平的一个或多个EoE相关基因，如TNFAIP6、LRRC31、SLC26A4-AS1、ALOX15、CCL26、TGM6、NRXN1、PMCH、SLC26A4、CXCL1、CCR3、TREML2、POSTN、LURAP1L、或CXCL6。在一些实施方案中，待治疗的受试者具有降低水平的一个或多个EoE相关基因，如CRTAC1、BC107108、SFTA2、C2orf16、KRTAP3-2、PLNIPRP3、CIDEA、FLG、SLC8A1-AS1、SPINK5、SPINK7、SPINK8、DPCR1、MUC22、CRISP2、DSG1、GYS2、或CRISP3。
在一些实施方案中，待治疗的受试者患有或已经患有至少一种共病(comorbidity)。在一些实施方案中，共病是哮喘、特应性皮炎、手和食物湿疹、过敏性鼻炎、口腔过敏综合征或食物过敏(如花生过敏)。
在一些实施方案中，待治疗的受试者患有伴随的特应性疾病。在一些实施方案中，伴随的特应性疾病是食物过敏、特应性皮炎、哮喘、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎或过敏性结膜炎。
在一些实施方案中，待治疗的受试者患有或已经患有伴随的2型炎症病症。2型炎症病症的非限制性实例包括哮喘、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎、变应性真菌性鼻窦炎、慢性窦炎、变应性支气管肺曲霉菌病(ABPA)、统一气道疾病、嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA，以前称为Churg-Strauss综合征)、胃食管反流病(GERD)、特应性结膜炎、特应性皮炎、血管炎、囊性纤维化(CF)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)、阿司匹林超敏反应、非甾体抗炎药(NSAID)超敏反应(例如NSAID加重呼吸道疾病或NSAID-ERD)、常年性过敏性鼻炎(PAR)、慢性嗜酸性肺炎(CEP)，或运动诱发的支气管痉挛。
在一些实施方案中，待治疗的受试者是对过敏原易感的受试者，例如，具有食物过敏的受试者。例如，在一些实施方案中，受试者可能表现出以下特征之一：(a)暴露于一种或多种过敏原时，容易发生过敏反应或响应；(b)先前表现出对一种或多种过敏原的过敏反应或响应；(c)有已知的过敏史；和/或(d)表现出过敏响应或过敏反应的体征或症状。如本文所用，短语“过敏响应”、“过敏反应、”“过敏症状”等包括选自以下的一种或多种体征或症状：荨麻疹(urticaria)(例如，荨麻疹(hives))、血管性水肿、鼻炎、哮喘、呕吐、打喷嚏、流鼻涕、鼻窦炎、水眼、喘息、支气管痉挛、呼气流量峰值减少(PEF)、胃肠道窘迫、脸红、嘴唇肿胀、舌头肿胀、血压降低、过敏反应和器官功能障碍/衰竭。“过敏响应”、“过敏反应、“过敏症状”等也包括免疫响应和反应，如，例如，增加的IgE产生、增加的过敏原特异性免疫球蛋白产生和/或嗜酸性粒细胞增多。在某些实施方案中，受试者对与EoE相关的过敏原过敏，或使受试者易感和/或易患EoE。在一些实施方案中，过敏原包含在食物内或衍生自食物，例如，乳制品(例如，牛奶)、鸡蛋、小麦、大豆、玉米、黑麦、鱼、贝类、花生、坚果。在一些实施方案中，过敏原包含在非食物内或衍生自非食物，例如，灰尘(例如，含有尘螨)、花粉、昆虫毒液(例如，蜜蜂、黄蜂、蚊子等的毒液)、霉菌、动物皮屑(dander)、乳胶、药品(medication)、药物(drug)、豚草、禾本科(grass)或桦树。
在一些实施方案中，待治疗的受试者表现出与慢性食管炎病症相关的病理学和症状，包括胃食管反流病(GERD)，或已被诊断为慢性食管炎病症。在一些实施方案中，待治疗的受试者表现出与嗜酸细胞性胃肠炎相关或已诊断为嗜酸细胞性胃肠炎的病理学和症状。
在一些实施方案中，待治疗的受试者是对一种或多种当前EoE护理治疗标准(例如，食物排除饮食(food-elimination diets)、吞咽的局部皮质类固醇、糖皮质类固醇、PPI治疗(如高剂量PPI方案)或食管扩张)无反应、反应不充分或耐受的受试者。在一些实施方案中，受试者在开始用IL-4R抑制剂治疗时正在进行高剂量PPI方案。在一些实施方案中，受试者具有一个或多个食管扩张。
抗IL-4Rα抗体及其抗原结合片段
根据本公开的某些示例性实施方案，IL-4R抑制剂是抗IL-4Rα抗体或其抗原结合片段。如本文所用，术语“抗体”包括包含四条多肽链(通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链)的免疫球蛋白分子，及其多聚体(例如IgM)。在典型的抗体中，每条重链包含重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域CHI、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，穿插有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本公开的不同实施方案中，抗IL-4R抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列相同，或可以是天然或人工修饰的。可以基于两个或更多个CDR的并排分析来限定氨基酸共有序列。
本文所用的术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括特异性结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、可酶促获得的、合成的或基因工程化的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段可以使用任何合适的标准技术(如蛋白水解消化或涉及操纵和表达编码抗体可变结构域和任选地表达恒定结构域的DNA的重组基因工程技术)衍生自例如完整抗体分子。此类DNA是已知的和/或可容易地从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体-抗体文库)获得，或可以合成。可以通过化学或通过使用分子生物学技术对DNA进行测序和操作，例如将一个或多个可变和/或恒定结构域排列成合适的构型，或引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或缺失氨基酸等。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元(例如，分离的互补决定区(CDR)，如CDR3肽)或受约束的FR3-CDR3-FR4肽。其他工程化分子，如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体、纳米抗体(例如，单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域也包括在本文所用的术语“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段通常将包含至少一个可变结构域。可变结构域可以具有任何大小或氨基酸组成，并且通常将包含至少一个CDR，其与一个或多个框架序列相邻或在框内。在具有与VL结构域缔合的VH结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以相对于彼此以任何合适的排列定位。例如，可变区可以是二聚体并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可含有单体VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以在本公开的抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括:(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL L。在可变结构域和恒定结构域的任何构型中，包括上文列出的任何示例性构型，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接，或可以通过完全或部分铰链或接头区连接。铰链区可以由至少2个(例如5、10、15、20、40、60或更多个)氨基酸组成，其导致单个多肽分子中相邻可变和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本公开的抗体的抗原结合片段可以包含上文列出的任何可变和恒定结构域构型的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)，其彼此和/或与一个或多个单体VH或VL结构域非共价缔合(例如，通过二硫键)。
如本文所用的，术语“抗体”还包括多特异性(例如双特异性)抗体。多特异性抗体或抗体的抗原结合片段通常将包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性地结合单独的抗原或相同抗原上的不同表位。可以使用本领域可用的常规技术改进任何多特异性抗体形式，以用于本公开的抗体或抗体的抗原结合片段的情况中。例如，本公开包括包括使用双特异性抗体的方法，其中免疫球蛋白的一个臂是IL-4Rα或其片段特异性的，并且免疫球蛋白的另一个臂是第二治疗靶标特异性的或与治疗剂部分进行缀合。可以在本公开的内容中使用的示例性双特异性形式包括但不限于例如基于scFv的双特异性形式或双抗体双特异性形式、IgG-scFv融合体、双重可变结构域(DVD)-Ig、四杂交瘤((Quadroma)、杵臼结构、共同轻链(例如，具有杵臼结构的共同轻链等)、CrossMab、CrossFab、(SEED)体、亮氨酸拉链、Duobody、IgG1/IgG2、双重作用Fab(DAF)-IgG和mAb2双特异性形式(对于前述形式的综述，参见例如Klein等，2012，mAbs 4：6，1-11和其中引用的参考文献)。还可以使用肽/核酸缀合来构建双特异性抗体，例如，其中使用具有正交化学反应性的非天然氨基酸来产生位点特异性抗体-寡核苷酸缀合物，其随后自组装成具有限定组成、化合价和几何形状的多聚复合物。(参见例如Kazane等，J.Am.Chem.Soc.[Epub:2012年12月4日])。
在一些实施方案中，本公开的方法中使用的抗体是人抗体。如本文所用的，术语“人抗体”旨在包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。尽管如此，本公开的人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中，特别是在CDR3中。然而，如本文所用的，术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。
用于本公开的方法中的抗体可以是重组人抗体。如本文所用的，术语“重组人抗体”旨在包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)、从重组的组合人抗体文库分离的抗体(下文进一步描述)、从人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如，小鼠)分离的抗体(参见例如Taylor等(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，将此类重组人抗体进行体外诱变(或者，使用人Ig序列转基因的动物时，进行体内体细胞诱变)，且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列：其虽然衍生自人种系VH和VL序列并且与人种系VH和VL序列相关，但可能不天然存在于体内的人抗体种系库中。
“分离的抗体”是指已经从其天然环境的至少一种组分中鉴定和分离和/或收集的抗体。例如，已经从生物体的至少一种组分或从抗体天然存在或天然产生的组织或细胞中分离或去除的抗体是“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是已经经历至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。
根据某些实施方案，本公开的方法中使用的抗体特异性地结合IL-4Rα。如本文所用的，术语“特异性地结合”意指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。用于确定抗体是否特异性结合抗原的方法是本领域熟知的，并且包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。例如，如本公开上下文中所用的，“特异性地结合”IL-4Rα的抗体包括以小于约1000nM、小于约500nM、小于约300nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约90nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约1nM、小于约0.5nM、小于约0.25nM、小于约0.1nM或小于约0.05nM的KD(如在表面等离子体共振测定中测量的)与IL-4Rα或其部分结合的抗体。然而，特异性地结合人IL-4Rα的分离的抗体具有与其他抗原(如来自其他(非人)物种的IL-4Rα分子)的交叉反应性。
在某些示例性实施方案中，IL-4R拮抗剂是抗IL-4Rα抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)和/或互补决定区(CDR)，其包含美国专利号7,608,693中所述的抗IL-4R抗体的任何氨基酸序列。在某些示例性实施方案中，可以用于本公开方法的内容中的抗IL-4Rα抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR)和含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的轻链互补决定区(LCDR)。在一些实施方案中，抗IL-4Rα抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和三个LCDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中HCDR1包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ IDNO:5的氨基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，并且LCDR3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗IL-4R抗体或其抗原结合片段分别包含SEQ ID NO:3、4、5、6、7和8的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且还包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少85％序列同一性(例如，至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的HCVR以及与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少85％序列同一性(例如，至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的LCVR。在一些实施方案中，抗IL-4R抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:1的HCVR和含有SEQ ID NO:2的LCVR。
在一些实施方案中，抗IL-4R抗体包含含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，抗IL-4R抗体包含含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链。
包含含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链的示例性抗体是称为杜匹鲁单抗的全人抗IL-4R抗体。根据某些示例性实施方案，本公开的方法包括杜匹鲁单抗的用途。如本文所用，“杜匹鲁单抗”还包括杜匹鲁单抗的生物等效物。如本文关于杜匹鲁单抗所用的术语“生物等效物”是指作为药物等效物或药物替代物的抗IL-4R抗体或IL-4R结合蛋白或其片段，在相似实验条件下以相同摩尔剂量(不论单剂量亦或多剂量)施用时，其吸收速率和/或程度未显示与杜匹鲁单抗的吸收速率和/或程度显著的差异。在一些实施方案中，该术语是指结合IL-4R的抗原结合蛋白，其与杜匹鲁单抗在安全性、纯度和/或效力方面没有临床上有意义的差异。
可以在本公开的方法内容中使用的其他抗IL-4Rα抗体包括，例如，本领域称为和已知为AMG317(Corren等，2010，Am J Respir Crit Care Med.，181(8)：788-796)或MEDI9314的抗体，或美国专利号7,186,809、美国专利号7,605,237、美国专利号7,638,606、美国专利号8,092,804、美国专利号8,679,487、美国专利号8,877,189、美国专利号10,774,141或国际专利公开号WO2020/096381(其各自的内容通过引用并入本文)中所述的任何抗IL-4Rα抗体。
在一些实施方案中，用于本公开的方法中的抗IL-4Rα抗体或其抗原结合片段包含所附序列表中列出的一个或多个CDR、HCVR和/或LCVR序列。
在一些实施方案中，抗IL-4Rα抗体包含：(i)HCVR，其包含SEQ ID NO:32(SCB-VH-59)、SEQ ID NO:33(SCB-VH-60)、SEQ ID NO:34(SCB-VH-61)、SEQ ID NO:35(SCB-VH-62)、SEQ ID NO:36(SCB-VH-63)、SEQ ID NO:37(SCB-VH-64)、SEQ ID NO:38(SCB-VH-65)、SEQID NO:39(SCB-VH-66)、SEQ ID NO:40(SCB-VH-67)、SEQ ID NO:41(SCB-VH-68)、SEQ IDNO:42(SCB-VH-69)、SEQ ID NO:43(SCB-VH-70)、SEQ ID NO:44(SCB-VH-71)、SEQ ID NO:45(SCB-VH-72)、SEQ ID NO:46(SCB-VH-73)、SEQ ID NO:47(SCB-VH-74)、SEQ ID NO:48(SCB-VH-75)、SEQ ID NO:49(SCB-VH-76)、SEQ ID NO:50(SCB-VH-77)、SEQ ID NO:51(SCB-VH-78)、SEQ ID NO:52(SCB-VH-79)、SEQ ID NO:53(SCB-VH-80)、SEQ ID NO:54(SCB-VH-81)、SEQ ID NO:55(SCB-VH-82)、SEQ ID NO:56(SCB-VH-83)、SEQ ID NO:57(SCB-VH-84)、SEQID NO:58(SCB-VH-85)、SEQ ID NO:59(SCB-VH-86)、SEQ ID NO:60(SCB-VH-87)、SEQ IDNO:61(SCB-VH-88)、SEQ ID NO:62(SCB-VH-89)、SEQ ID NO:63(SCB-VH-90)、SEQ ID NO:64(SCB-VH-91)、SEQ ID NO:65(SCB-VH-92)、或SEQ ID NO:66(SCB-VH-93)的氨基酸序列；和(ii)LCVR，其包含SEQ ID NO:12(SCB-VL-39)、SEQ ID NO:13(SCB-VL-40)、SEQ ID NO:14(SCB-VL-41)、SEQ ID NO:15(SCB-VL-42)、SEQ ID NO:16(SCB-VL-43)、SEQ ID NO:17(SCB-VL-44)、SEQ ID NO:18(SCB-VL-45)、SEQ ID NO:19(SCB-VL-46)、SEQ ID NO:20(SCB-VL-47)、SEQ ID NO:21(SCB-VL-48)、SEQ ID NO:22(SCB-VL-49)、SEQ ID NO:23(SCB-VL-50)、SEQ ID NO:24(SCB-VL-51)、SEQ ID NO:25(SCB-VL-52)、SEQ ID NO:26(SCB-VL-53)、SEQID NO:27(SCB-VL-54)、SEQ ID NO:28(SCB-VL-55)、SEQ ID NO:29(SCB-VL-56)、SEQ IDNO:30(SCB-VL-57)、or SEQ ID NO:31(SCB-VL-58)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗IL-4Rα抗体包含含有SEQ ID NO:64(SCB-VH-91)的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:17(SCB-VL-44)、SEQ ID NO:27(SCB-VL-54)或SEQ ID NO:28(SCB-VL-55)的氨基酸序列的LCVR。
在一些实施方案中，抗IL-4Rα抗体包含选自下组的氨基酸序列对：SEQ ID NO::67/68(MEDI-1-VH/MEDI-1-VL)；SEQ ID NO::69/70(MEDI-2-VH/MEDI-2-VL)；SEQ ID NO::71/72(MEDI-3-VH/MEDI-3-VL)；SEQ ID NO::73/74(MEDI-4-VH/MEDI-4-VL)；SEQ ID NO::75/76(MEDI-5-VH/MEDI-5-VL)；SEQ ID NO::77/78(MEDI-6-VH/MEDI-6/VL)；SEQ ID NO::79/80(MEDI-7-VH/MEDI-7-VL)；SEQ ID NO::81/82(MEDI-8-VH/MEDI-8-VL)；SEQ ID NO::83/84(MEDI-9-VH/MEDI-9-VL)；SEQ ID NO::85/86(MEDI-10-VH/MEDI-10-VL)；SEQ IDNO::87/88(MEDI-11-VH/MEDI-11/VL)；SEQ ID NO::89/90(MEDI-12-VH/MEDI-12-VL)；SEQID NO::91/92(MEDI-13-VH/MEDI-13-VL)；SEQ ID NO::93/94(MEDI-14-VH/MEDI-14-VL)；SEQ ID NO::95/96(MEDI-15-VH/MEDI-15-VL)；SEQ ID NO::97/98(MEDI-16-VH/MEDI-16/VL)；SEQ ID NO::99/100(MEDI-17-VH/MEDI-17-VL)；SEQ ID NO::101/102(MEDI-18-VH/MEDI-18-VL)；SEQ ID NO::103/104(MEDI-19-VH/MEDI-19-VL)；SEQ ID NO::105/106(MEDI-20-VH/MEDI-20-VL)；SEQ ID NO::107/108(MEDI-21-VH/MEDI-21-VL)；SEQ ID NO::109/110(MEDI-22-VH/MEDI-22-VL)；SEQ ID NO::111/112(MEDI-23-VH/MEDI-23-VL)；SEQID NO::113/114(MEDI-24-VH/MEDI-24-VL)；SEQ ID NO::115/116(MEDI-25-VH/MEDI-25-VL)；SEQ ID NO::117/118(MEDI-26-VH/MEDI-26-VL)；SEQ ID NO::119/120(MEDI-27-VH/MEDI-27-VL)；SEQ ID NO::121/122(MEDI-28-VH/MEDI-28-VL)；SEQ ID NO::123/124(MEDI-29-VH/MEDI-29-VL)；SEQ ID NO::125/126(MEDI-30-VH/MEDI-30-VL)；SEQ ID NO::127/128(MEDI-31-VH/MEDI-31-VL)；SEQ ID NO::129/130(MEDI-32-VH/MEDI-32-VL)；SEQID NO::131/132(MEDI-33-VH/MEDI-33-VL)；SEQ ID NO::133/134(MEDI-34-VH/MEDI-34-VL)；SEQ ID NO::135/136(MEDI-35-VH/MEDI-35-VL)；SEQ ID NO::137/138(MEDI-36-VH/MEDI-36-VL)；SEQ ID NO::139/140(MEDI-37-VH/MEDI-37-VL)；SEQ ID NO::141/142(MEDI-38-VH/MEDI-38-VL)；SEQ ID NO::143/144(MEDI-39-VH/MEDI-39-VL)；SEQ ID NO::145/146(MEDI-40-VH/MEDI-40-VL)；SEQ ID NO::147/148(MEDI-41-VH/MEDI-41-VL)；SEQID NO::149/150(MEDI-42-VH/MEDI-42-VL)；and SEQ ID NO::151/152(MEDI-37GL-VH/MEDI-37GL-VL)。
在一些实施方案中，抗IL-4Rα抗体包含(i)HCVR，其包含SEQ ID NO:153(AJOU-1-VH)、SEQ ID NO:154(AJOU-2-VH)、SEQ ID NO:155(AJOU-3-VH)、SEQ ID NO:156(AJOU-4-VH)、SEQ ID NO:157(AJOU-5-VH)、SEQ ID NO:158(AJOU-6-VH)、SEQ ID NO:159(AJOU-7-VH)、SEQ ID NO:160(AJOU-8-VH)、SEQ ID NO:161(AJOU-9-VH)、SEQ ID NO:162(AJOU-10-VH)、SEQ ID NO:163(AJOU-69-VH)、SEQ ID NO:164(AJOU-70-VH)、SEQ ID NO:165(AJOU-71-VH)、SEQ ID NO:166(AJOU-72-VH)、或SEQ ID NO:167(AJOU-83-VH)的氨基酸序列；和(ii)LCVR，其包含SEQ ID NO:168(AJOU-33-VL)、SEQ ID NO:169(AJOU-34-VL)、SEQ ID NO:170(AJOU-35-VL)、SEQ ID NO:171(AJOU-36-VL)、SEQ ID NO:172(AJOU-37-VL)、SEQ IDNO:173(AJOU-38-VL)、SEQ ID NO:174(AJOU-39-VL)、SEQ ID NO:175(AJOU-40-VL)、SEQ IDNO:176(AJOU-41-VL)、SEQ ID NO:177(AJOU-42-VL)、SEQ ID NO:178(AJOU-77-VL)、SEQ IDNO:179(AJOU-78-VL)、SEQ ID NO:180(AJOU-79-VL)、SEQ ID NO:181(AJOU-80-VL)、SEQ IDNO:182(AJOU-86-VL)、SEQ ID NO:183(AJOU-87-VL)、SEQ ID NO:184(AJOU-88-VL)、SEQ IDNO:185(AJOU-89-VL)、SEQ ID NO:186(AJOU-90-VL)、或SEQ ID NO:187(AJOU-91-VL)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗IL-4Rα抗体包含(i)HCVR，其包含SEQ ID NO:188(REGN-VH-3)、SEQ ID NO:189(REGN-VH-19)、SEQ ID NO:190(REGN-VH-35)、SEQ ID NO:191(REGN-VH-51)、SEQ ID NO:192(REGN-VH-67)、SEQ ID NO:193(REGN-VH-83)、SEQ ID NO:194(REGN-VH-99)、SEQ ID NO:195(REGN-VH-115)、SEQ ID NO:196(REGN-VH-147)、或SEQ ID NO:197(REGN-VH-163)的氨基酸序列；和(ii)LCVR，其包含SEQ ID NO:198(REGN-VL-11)、SEQ IDNO:199(REGN-VL-27)、SEQ ID NO:200(REGN-VL-43)、SEQ ID NO:201(REGN-VL-59)、SEQ IDNO:202(REGN-VL-75)、SEQ ID NO:203(REGN-VL-91)、SEQ ID NO:204(REGN-VL-107)、SEQID NO:205(REGN-VL-123)、SEQ ID NO:206(REGN-VL-155)、或SEQ ID NO:207(REGN-VL-171)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的方法中使用的抗IL-4Rα抗体可以具有pH依赖性结合特征。例如，与中性pH相比，如本文所公开使用的抗IL-4Rα抗体在酸性pH可以呈现出与IL-4Rα的结合降低。或者，与中性pH相比，如本文公开使用的抗IL-4Rα抗体在酸性pH可以呈现出与其抗原的结合增强。表述“酸性pH”包括小于约6.2，例如约6.0、5.95、5.9、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更小的pH值。如本文所用的，表述“中性pH”是指约7.0至约7.4的pH。表述“中性pH”包括约7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的pH值。
在某些情况下，“与中性pH相比，在酸性pH与IL-4Rα的结合降低”以抗体在酸性pH结合IL-4Rα的KD值与抗体在中性pH结合IL-4Rα的KD值的比率进行表示(或反之亦然)。例如，如果抗体或其抗原结合片段呈现出约3.0或更大的酸性/中性KD比率，则针对本公开的目的，抗体或其抗原结合片段可以被认为呈现出“与中性pH相比，在酸性pH与IL-4Rα的结合降低”。在某些示例性实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段的酸性/中性KD比率可以是约3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、100.0或更大。
可以获得具有pH依赖性结合特征的抗体，例如，通过筛选与中性pH相比，在酸性pH与特定抗原的结合降低(或增强)的抗体群。另外，抗原结合结构域在氨基酸水平的修饰可以产生具有pH依赖性特征的抗体。例如，通过用组氨酸残基取代抗原结合结构域(例如，CDR内)的一个或多个氨基酸，可以获得相对于中性pH，在酸性pH具有降低的抗原结合的抗体。
人抗体的制备
在转基因小鼠中产生人抗体的方法是本领域已知的。在本公开的内容中可以使用任何此类已知的方法来制备特异性结合人IL-4R的人抗体。
使用VELOCIMMUNETM技术(参见，例如，US 6,596,541，RegeneronPharmaceuticals)或任何其它已知的用于产生单克隆抗体的方法，最初分离对IL-4R具有高亲和力的嵌合抗体，其具有人可变区和小鼠恒定区。
Figure BDA0003950009950000131
技术涉及产生转基因小鼠，其具有包含可操作地连接内源性小鼠恒定区基因座的人重链和轻链可变区的基因组，使得小鼠响应于抗原刺激而产生包含人可变区和小鼠恒定区的抗体。分离编码抗体重链和轻链可变区的DNA，并将其可操作地连接编码人重链和轻链恒定区的DNA。然后在能够表达完全人抗体的细胞中表达DNA。
通常，用目的抗原攻击
Figure BDA0003950009950000132
小鼠，并从表达抗体的小鼠收集淋巴细胞(如B细胞)。可以将淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生杂交瘤细胞系，并且筛选和选择此类杂交瘤细胞系以鉴定产生目的抗原特异性的抗体的杂交瘤细胞系。可以分离编码重链和轻链可变区的DNA并将其连接期望的重链和轻链的同种型恒定区。这样的抗体蛋白可以在细胞(如CHO细胞)中产生。或者，可以直接从抗原特异性淋巴细胞分离编码抗原特异性嵌合抗体或轻链和重链可变结构域的DNA。
最初，分离具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体。使用本领域技术人员已知的标准程序表征和选择抗体的所需特征，包括亲和力、选择性、表位等。用期望的人恒定区替换小鼠恒定区以产生本公开的完全人抗体，例如野生型或修饰的IgGl或IgG4。虽然所选择的恒定区可以根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和靶特异性特征存在于可变区中。
通常，通过与固定在固相上或溶液相中的抗原结合来测量时，如上所述，可用于本公开方法中的抗体具有高亲和力。用期望的人恒定区替换小鼠恒定区以产生本公开的完全人抗体。虽然所选择的恒定区可以根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和靶特异性特征存在于可变区中。
在一个实施方案中，特异性结合IL-4R并可用于本文公开的方法中的人抗体或其抗原结合片段包含在具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)内含有的三个重链CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，和在具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)内含有的三个轻链CDR(LCVR1、LCVR2、LCVR3)。用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列内的CDR的方法和技术是本领域熟知的，并且可以用于鉴定本文公开的指定HCVR和/或LCVR氨基酸序列内的CDR。可用于鉴定CDR边界的示例性惯例包括例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般而言，Kabat定义基于序列变异性，Chothia定义基于结构环区域的位置，而AbM定义是Kabat和Chothia方法之间的折衷。参见例如Kabat，“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991)；Al-Lazikani等，J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；和Martin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86：9268-9272(1989)。公共数据库也可用于鉴定抗体内的CDR序列。
药物组合物
在一个方面中，本公开提供了包括将IL-4R抑制剂施用于受试者的方法，其中IL-4R抑制剂(例如抗IL-4R抗体)包含在含有一种或多种药学上可接受的运载体、载体和/或赋形剂的药物组合物中。各种药学上可接受的载体和赋形剂是本领域公知的。参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA。在一些实施方案中，载体适用于静脉内、肌内、口服、腹膜内、鞘内、经皮、局部或皮下施用。
在一些实施方案中，药物组合物包含可注射制剂，如用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射、滴注输注等的剂型。这些可注射制剂可以通过已知方法制备。例如，可注射制剂可以例如通过将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备。作为注射用水性介质，存在例如生理盐水、含有葡萄糖和其他助剂的等渗溶液等，其可以与适当的增溶剂如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等组合使用。作为油性介质，使用例如芝麻油、大豆油等，其可以结合增溶剂使用，如苯甲酸苄酯、苯甲醇等。如此制备的注射剂可以装入合适的安瓿中。
根据本公开的方法施用于受试者的抗体剂量可以根据受试者的年龄和大小、症状、病症、给药途径等而变化。剂量通常根据体重或体表面积计算。根据病症的严重性，可以调整治疗的频率和持续时间。施用包含抗IL-4R抗体的药物组合物的有效剂量和时间表可以凭经验确定；例如，可以通过定期评估来监测患者进展，并相应地调整剂量。此外，可以使用本领域熟知的方法进行剂量的种间缩放(例如，Mordenti等，1991，Pharmaceut.Res.8:1351)。可以在本公开的上下文中使用的抗IL4R抗体的具体示例性剂量和涉及其的施用方案在本文其他地方公开。
各种递送系统是已知的并且可以用于施用药物组合物，例如包封在脂质体、微粒、微胶囊、能够表达突变病毒的重组细胞、受体介导的内吞作用(参见例如Wu等，1987，J.Biol.Chem.262:4429-4432)。施用方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。组合物可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或推注注射，通过上皮或粘膜皮肤衬里(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并且可以与其他生物活性剂一起施用。在一些实施方案中，静脉内施用如本文公开的药物组合物。在一些实施方案中，皮下施用如本文公开的药物组合物。
在一些实施方案中，本公开的药物组合物包含在容器内。因此，在另一个方面中，提供了包含本文公开的药物组合物的容器。例如，在一些实施方案中，药物组合物包含在选自玻璃小瓶、注射器、笔式递送装置和自动注射器的容器内。
在一些实施方案中，本公开的药物组合物用标准针头和注射器例如通过皮下或静脉内递送。在一些实施方案中，注射器是预填充注射器。在一些实施方案中，笔式递送装置或自动注射器用于递送本公开的药物组合物(例如，用于皮下递送)。笔式递送装置可以是可重复使用的或一次性的。通常，可重复使用的笔式递送装置利用含有药物组合物的可更换药筒。一旦药筒内的药物组合物已经施用并且药筒是空的，就可以容易地丢弃空药筒并用含有药物组合物的新药筒替换。然后可以重复使用笔式递送装置。在一次性笔式递送装置中，没有可更换的药筒。相反，一次性笔式递送装置预填充有保持在装置内的贮存器中的药物组合物。一旦贮存器中的药物组合物被清空，就丢弃整个装置。
合适的笔式和自动注射器递送装置的实例包括但不限于AUTOPENTM(OwenMumford，Inc.，Woodstock，UK)、DISETRONICTM笔(Disetronic MEDIcal Systems，Bergdorf，Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25TM笔、HUMALOGTM笔、HUMALIN 70/30TM笔(Eli Lilly andCo.，Indianapolis，IN)、NOVOPENTMI、II和III(Novo Nordisk，哥本哈根，丹麦)、NOVOPENJUNIORTM(Novo Nordisk，哥本哈根，丹麦)、BDTM笔(Becton Dickinson，Franklin Lakes，NJ)、OPTIPENTM、OPTIPEN PROTM、OPTIPEN STARLETTM和OPTICLIKTM(Sanofi-Aventis，法兰克福，德国)。应用于皮下递送本公开的药物组合物的一次性笔式递送装置的实例包括但不限于SOLOSTARTM笔(Sanofi-aventis)、FLEXPENTM(Novo Nordisk)和KWIKPENTM(Eli Lilly)、SURECLICKTM自动注射器(Amgen，Thousand Oaks，CA)、PENLETTM(Haselmeier，斯图加特，德国)、EPIPEN(Dey，L.P.)和HUMIRATM笔(Abbott Labs，Abbott Park IL)。
在一些实施方案中，使用控释系统递送药物组合物。在一个实施方案中，可以使用泵(参见Langer，同上；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201)。在另一个实施方案中，可以使用聚合材料；参见，Medical Applications of Controlled Release，Langer和Wise(编辑)，1974，CRC Pres.，Boca Raton，Florida。在另一个实施方案中，控释系统可以放置在组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的部分(参见例如Goodson，1984，见Medical Applications of Controlled Release，上文，vol.2，pp.115-138)。在Langer，1990，Science 249：1527-1533的综述中讨论了其它控释系统。
在一些实施方案中，如本文所述使用的药物组合物被制备成适合于符合活性成分剂量的单位剂量的剂型。单位剂量的此类剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊、注射剂(安瓿)、栓剂等。
可用于本公开内容中的包含抗IL-4R抗体的示例性药物组合物公开于例如美国专利号8,945,559中。
剂量和给药方案
通常，根据本文公开的方法施用于受试者的IL-4R抑制剂(例如，如本文公开的抗IL-4R抗体)的量是治疗有效量。如本文使用的，短语“治疗有效量”是指导致以下一种或多种的IL-4R抑制剂的量：(a)嗜酸细胞性食管炎症状的严重性和持续时间的减少；(b)食管中嗜酸性粒细胞数量的减少；(c)食管膨胀性增加；(d)吞咽困难发作或吞咽困难强度减少；(e)一种或多种EoE相关的生物标志物或基因表达特征的正常化；和/或(f)对使用另一种药剂的伴随治疗或救援治疗的使用或需求减少(例如，减少或消除全身性和/或吞咽的局部皮质类固醇、PPI等的使用)。
在抗IL-4R抗体的情况下，治疗有效量可以是约0.05mg至约600mg、约50mg至约600mg,或约50mg至约300mg,e.g.、约0.05mg、约0.1mg、约1.0mg、约1.5mg、约2.0mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg,或约600mg的抗IL-4R抗体。在某些实施方案中，将75mg、100mg、150mg、200mg或300mg的抗IL-4R抗体施用于受试者。
各个剂量中所含IL-4R抑制剂(例如抗IL-4R抗体)的量可以以每千克患者体重的活性剂(例如，抗体)毫克数(即mg/kg)表示。例如，IL-4R抑制剂可以以约0.0001至约10mg/kg患者体重的剂量，例如以约1mg/kg至约10mg/kg，或约1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg施用于患者。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂或包含IL-4R抑制剂的药物组合物以约每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次、每十二周一次或更低频率的给药频率施用于受试者，只要实现治疗应答即可。在某些涉及使用包含抗IL-4R抗体的药物组合物的实施方案中，可以使用每周一次给药约50mg至约600mg的量，例如，约75mg、150mg、200mg或300mg。
在一些实施方案中，在确定的时间过程中将多剂量的IL-4R抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，本公开的方法包括将多剂量的IL-4R抑制剂依次施用于受试者。如本文所用的，“依次施用”意指在不同时间点，例如在以预定间隔(例如小时、天、周或月)隔开的不同天，将各剂量的IL-4R抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，本公开的方法包括向患者依次施用单一初始剂量的IL-4R抑制剂，然后施用一个或多个第二剂量的IL-4R抑制剂，并且任选地然后施用一个或多个第三剂量的IL-4R抑制剂。
术语“初始剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”是指IL-4R抑制剂施用的时间顺序。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时施用的剂量(也称为“负荷剂量”)；“第二剂量”是在初始剂量之后施用的剂量；并且“第三剂量”是在第二剂量之后施用的剂量。初始、第二和第三剂量可以全部含有相同量的IL-4R抑制剂，但通常在施用频率方面可以彼此不同。然而，在某些实施方案中，初始、第二和/或第三剂量中所含IL-4R抑制剂的量在治疗过程中彼此不同(例如适当上调或下调)。在某些实施方案中，一个或多个(例如，1、2、3、4或5个)剂量可在治疗方案开始时作为“负荷剂量”施用，随后是以较低频率施用的后续剂量(例如“维持剂量”)。例如，IL-4R抑制剂可以以约200mg、400mg或约600m的负荷剂量施用于受试者，然后施用一个或多个约75mg至约300mg的维持剂量。在一个实施方案中，初始剂量和一个或多个第二剂量各自包括50mg至600mg的IL-4R抑制剂，例如，100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、400mg、500mg或600mg的IL-4R抑制剂。在一些实施方案中，初始剂量和一个或多个第二剂量各自含有相同量的IL-4R抑制剂。在其它实施方案中，初始剂量包含第一量的IL-4R抑制剂剂，且一个或多个第二剂量各自包含第二量的IL-4R抑制剂。例如，IL-4R抑制剂的第一量可以是IL-4R抑制剂的第二量的1.5×、2×、2.5×、3×、3.5×、4×或5×或更多。在一些实施方案中，在没有负荷剂量的情况下，受试者施用IL-4R抑制剂(例如，约50mg至约600mg，例如，约50mg、约75mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg或约mg的一个或多个剂量)。
在一些实施方案中，每个第二和/或第三剂量紧接在前剂量后1-14(例如，1、1 1/2、2、2 1/2、3、3 1/2、4、4 1/2、5、5 1/2、6、6 1/2、7、7 1/2、8、8 1/2、9、9 1/2、10、10 1/2、11、11 1/2、12、12 1/2、13、13 1/2、14、14 1/2或更长)周施用。如本文所用的，短语“紧接在前剂量”意指在多次施用的顺序中，在施用顺序中的下一个剂量之前对患者施用的IL-4R抑制剂的剂量，没有中间剂量。
本公开的方法可包括对患者施用任何数量的第二和/或第三剂量的IL-4R抑制剂。例如，在某些实施方案中，仅向患者施用单个第二剂量。在其他实施方案中，向患者施用两个或更多个(例如2、3、4、5、6、7、8或更多个)第二剂量。同样，在某些实施方案中，仅向患者施用单次第三剂量。在其他实施方案中，向患者施用两个或更多个(例如2、3、4、5、6、7、8或更多个)第三剂量。
在涉及多个第二剂量的一些实施方案中，每个第二剂量以与其它第二剂量相同的频率施用。例如，每个第二剂量可以紧接在前剂量后1至2周施用于患者。类似地，在涉及多个第三剂量的一些实施方案中，每个第三剂量以与其他第三剂量相同的频率施用。例如，每个第三剂量可以紧接在前剂量后2至4周施用于患者。或者，向患者施用第二和/或第三剂量的频率可以在治疗方案的过程中变化。施用频率也可以在治疗过程中由医师根据临床检查后个体患者的需要进行调整。
在一些实施方案中，对于≥12岁的患有嗜酸细胞性食管炎的受试者，IL-4R抑制剂(例如，如本文公开的抗IL-4R抗体)的治疗有效量包括初始(负荷)剂量，接着一个或多个第二(维持)剂量，其中IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)的初始剂量包括600mg，且IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)的每个第二剂量包括300mg，每周给药(QW)。
在一些实施方案中，对于≥12岁的患有嗜酸细胞性食管炎的受试者，IL-4R抑制剂(例如，如本文公开的抗IL-4R抗体)的治疗有效量包括初始(负荷)剂量，接着一个或多个第二(维持)剂量，其中IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)的初始剂量包括600mg，且IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)的每个第二剂量包括300mg，每两周给药(Q2W)。
在一些实施方案中，对于≥12岁的患有嗜酸细胞性食管炎的受试者，IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)的治疗有效量包括每周(QW)给药的包括300mg的IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)的剂量。
在一些实施方案中，对于≥12岁的患有嗜酸细胞性食管炎的受试者，IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)的治疗有效量包括每两周(Q2W)给药的包括300mg的IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)的剂量。
EoE-相关参数
在一些实施方案中，本文公开的治疗方法导致用于评估受试者中EoE的存在或严重性的一个或多个终点或EoE相关参数的改善。EoE相关参数的实例包括但不限于：(a)吞咽困难的频率和/或强度的变化(例如，减少)，例如，如通过吞咽困难症状问卷(DSQ)、Straumann Dysphagia Instrument(SDI)、吞咽困难的患者总体印象的变化(PGIC)或患者总体印象的严重性(PGIS)测量的；(b)食管上皮内嗜酸性粒细胞计数的变化(例如减少)；(c)一个或多个食管特征的变化，例如，水肿、环、渗出物、皱褶和/或狭窄的不存在、存在或严重性，例如，如使用EoE-EREFS测量的；(d)食管扩张性的变化(例如，增加)，例如，如使用腔内功能管腔成像探针(EndoFLIP)测量的；(e)食管组织学特征的严重性和/或程度的变化，例如，如使用嗜酸细胞性食管炎组织学评分系统(EoE-HSS)测量的；(f)一种或多种EoE相关的生物标志物水平或EoE基因表达特征的改变(例如正常化)；或(g)EoE的其他症状的频率和/或严重性的变化，例如，如使用嗜酸细胞性食管炎影响问卷(EoE-IQ)、EoE症状问卷、嗜酸细胞性食管炎活动指数(EEsAI)、成人嗜酸性生活质量(EoE-QQL-A)或欧洲生活质量5维量表(EQ-5D)测量的。用于评估这些EoE相关参数的方法在下面的实施例部分中描述，并在WO2019/028367中公开，通过引用并入本文。
为了确定EoE相关参数是否已“改善”，在基线和给药IL-4R抑制剂后的一个或多个时间点对该参数进行量化。例如，可以在用本公开的药物组合物初始治疗后，在第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天、第14天、第15天、第22天、第25天、第29天、第36天、第43天、第50天、第57天、第64天、第71天、第85天；或第1周、第2周、第3周、第4周、第5周、第6周、第7周、第8周、第9周、第10周、第11周、第12周、第13周、第14周、第15周、第16周、第17周、第18周、第19周、第20周、第21周、第22周、第23周、第24周或更长时间结束时，测量EoE相关参数。治疗开始后特定时间点的参数值与基线时的参数值之间的差异用于确定EoE相关参数是否有所改善。
在一些实施方案中，根据本文公开的方法用IL-4R抑制剂(例如抗IL-4R抗体)治疗受试者导致吞咽困难症状的改善。在一些实施方案中，治疗导致受试者吞咽困难的频率和/或强度的变化(例如，减少)。在一些实施方案中，治疗导致每周吞咽困难发作的频率减少，例如，相对于基线(例如，治疗开始前受试者每周吞咽困难发作的平均频率)，减少至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。在一些实施方案中，治疗导致DSQ评分的改善。DSQ是一种经验证的PRO，其已用于临床研究来测量吞咽困难的频率和强度(Hudgens等，J Patient。Rep Outcomes 2017，1(1):3,doi:10.1186/s41687-017-0006-5)。DSQ使用每日回忆期，且包括关于EoE吞咽困难的存在和严重性的3个问题。通常，在DSQ中，患者至少回答了问题1和2，并被要求吃过固体食物(问题1回答“是”：“自从今早醒来后，你吃过固体食物吗？”)以便继续调查问卷。如果患者对问题1回答“否”，则DSQ上的其余项目不得分。对问题2回答“否”的患者(“自从今早醒来后，食物是缓慢下沉还是卡在喉咙里了？”)给予0分，并且不要继续回答问题3(日记记录为当天完成)。对问题1和问题2回答“是”的人接着回答问题3，该问题按5分制评分，根据患者缓解症状的行动推断吞咽困难的严重性，范围从不采取行动到就医。因此，DSQ评分算法是根据对问题2和3的回答构建的，以确保最终得分是由吞咽困难的频率和严重性得出的。为了计算DSQ得分，每14天的时间段至少需要8个日记条目，以根据14天的累积评分得出标准化的总分。在一些实施方案中，DSQ是修改的DSQ，其中对于对问题1(“自从今早醒来后，你吃过固体食物吗？”)回答“否”的患者，进行后续问题探讨患者是否因吞咽固体食物的问题而避免进食固体食物。DSQ评分理论上的范围从0至84，较低的评分表示吞咽困难的频率较低或不太严重。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致DSQ评分相对于基线(例如，治疗开始前的受试者的DSQ评分)降低。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致DSQ评分相对于基线降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多分。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致DSQ评分相对于基线降低至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。在一些实施方案中，在使用IL-4R抑制剂后第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85或之后，或在用IL-4R抑制剂治疗24周后，测量DSQ评分的变化。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗开始的约4周、5周、6周、7周、8周、9周或10周内，使用IL-4R抑制剂的治疗减轻了受试者吞咽困难的症状(例如，如通过绝对DSQ评分的变化或相对于受试者基线值的DSQ评分的百分比降低测量的)。
可以使用吞咽困难的患者总体印象的变化(PGIC)来评估吞咽困难症状的变化。PGIC是一个单项问卷，其要求患者在7分等级(非常好；中度好；稍好；无变化；稍差；中度差；或非常差)提供吞咽食物困难改变的总体自我评估。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致PGIC评分相对于基线(例如，治疗开始前受试者的PGIC评分)的降低。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致PGIC评分相对于基线降低至少1、2、3或更多分。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致PGIC评级为“非常好”或“中度好”。在一些实施方案中，在用IL-4R抑制剂治疗开始约4周、5周、6周、7周、8周、9周或10周内，用IL-4R抑制剂治疗减轻了受试者吞咽困难的症状(例如，如通过PGIC评分相对于受试者基线值改善所测量的)。
在一些实施方案中，治疗导致SDI评分的改善。SDI是未经验证的患者报告的结果(PRO)，其已用于临床研究来确定吞咽困难的频率和强度(Straumann 2010)。SDI有1周的召回期。吞咽困难事件的频率按5分等级进行分级：0＝无，1＝每周一次，2＝每周若干次，3＝每天一次，和4＝每天若干次，且吞咽困难事件的强度按6分等级进行分级：0＝吞咽不受限制，1＝轻微抵抗感，2＝轻度干呕伴延迟通过；3＝需要干预(例如，饮水、呼吸)的短期阻塞，4＝只有通过呕吐才能清除的长期阻塞，5＝需要内镜干预的长期完全阻塞。总SDI评分范围为0至9。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致SDI评分相对于基线降低1、2、3、4、5、6或更多个分(例如，治疗开始前受试者的SDI评分)。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致SDI评分相对于基线降低至少3分。在一些实施方案中，与基线相比，使用IL-4R抑制剂的治疗导致SDI评分降低至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或在施用IL-4R抑制剂24周后，测量SDI评分的变化。
在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数的改善(例如，减少)。“食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数”是指一个高倍视野(hpf)内所含嗜酸性粒细胞的数量。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数相对于基线(例如，治疗开始前受试者的峰值计数)的降低。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数相对于基线至少为10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数减少至小于10eos/hpf或小于6eos/hpf。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数降低至≤6eos/hpf，≤5eos/hpf，≤4eos/hpf，≤3eos/hpf，≤2eos/hpf，或≤1eos/hpf。在一些实施方案中，在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂治疗24周后，测量食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数的变化。
在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致EoE的一个或多个内镜特征的改善。在一些实施方案中，在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致EoE-EREFS评分的改善。EoE-EREFS(水肿、环、渗出物、褶皱、狭窄)是经验证的用于疾病的炎症和重塑特征的评分系统，其用于测量通过内镜确定的EoE食管粘膜炎症和重塑特征(Hirano 2014)。该工具包括17项与食管特征的存在和严重程度相关的项目。具体的食管特征包括：环(食管周围的同心环-无、轻度、中度、重度、不适用)；狭窄(食管狭窄-是、否、不适用)；狭窄直径(如适用)；渗出物(指白色斑块-无、轻度、严重)、皱褶(沿食管向下的垂直线-无、存在)；水肿(粘膜血管标记缺失-无，存在)；皱纸(crêpepaper)食管(无，存在)；包括所有通过内镜确定的EoE发现(即固定环、狭窄、白色渗出物、皱褶、水肿和皱纸粘膜)的总体外观。此外，使用洛杉矶侵蚀分类系统(无侵蚀或LA分类A、B、C、D)记录与胃食管反流病相关的粘膜变化。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致EoE-EREFS评分相对于基线(例如，治疗开始前受试者的EoE-EREFS评分)降低至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。在一些实施方案中，在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂的治疗24周后，测量EoE-EREFS评分的变化。
在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致EoE的一个或多个组织学特征的改善。在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致EoE-HSS评分的改善。EoE-HSS是一种经过验证的工具，其生成单独的严重性(等级)和程度(阶段)疾病评分。该评分用于测量食管3个不同区域(近端、中段和远端)的EoE的8个组织学特征(参数)(Collins等，2017年)。这8个参数包括：嗜酸性粒细胞密度、基底区增生、嗜酸性粒细胞脓肿、嗜酸性细胞表面分层、扩张的细胞间间隙、表面上皮改变、角化不良细胞和固有层纤维化。分级和阶段的每个参数都使用0-3的等级(0表示炎症最少、正常)。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致EoE-HSS评分相对于基线(例如，治疗开始前受试者的EoE-HS评分)降低至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致EoE-HSS综合评分、分级评分和/或阶段评分的降低。在一些实施方案中，在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂的治疗24周后，测量EoE-HSS评分的变化。
在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致食管扩张性的改善。在一些实施方案中，使用腔内功能管腔成像探针(EndoFLIP，Medtronic，USA)评估食管扩张性，以测量食管管腔的直径和压力。EndoFLIP设备是一种基于导管的程序，其在食管容积扩张期间测量沿食管的多个部位的横截面积，同时记录腔内压力。通过对食管横截面积与压力关系的分析，可以确定食管顺应性以及扩张性平台(DP)。与健康对照组相比，EoE患者的DP显示明显降低(Kwiatek 2011)。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致食管扩张性相对于基线(例如，治疗开始前受试者的食管扩张性或DP)增加至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多(例如，通过DP测量)。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致DP增加至少0.5mm、1mm、1.5mm或更多。在一些实施方案中，在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂的治疗24周后，测量食管扩张性的变化。
在一些实施方案中，根据本文公开的方法用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致健康相关的生活质量的改善。在一些实施方案中，治疗导致EoE-IQ评分的改善。EoE-IQ以1至5的级别评估EoE的影响；评分越高表示健康相关的QoL受损越高。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致EoE-IQ评分相对于基线降低至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。在一些实施方案中，在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂的治疗24周后，测量EoE-IQ评分的变化。在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂治疗在用IL-4R抑制剂治疗开始的约4周、5周、6周、7周、8周、9周或10周内改善了受试者的健康相关的生活质量(例如，如通过绝对EoE-IQ评分的变化或EoE-IQ评分相对于受试者的基线值的降低百分比测量的)。
在一些实施方案中，根据本文公开的方法用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致除吞咽困难以外的症状的改善。在一些实施方案中，治疗导致EoE-SQ频率评分的改善。EoE-SQ频率评估除吞咽困难以外的症状，评分范围为5至25；评分越高表示症状负担越重。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致EoE-SQ频率评分相对于基线降低至少1、2、3、4、5、6或更多个分。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致EoE-SQ频率评分相对于基线降低至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。在一些实施方案中，在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂的治疗24周后，测量EoE-SQ频率评分的变化。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗开始约4周、5周、6周、7周、8周、9周或10周内，使用IL-4R抑制剂的治疗改善了受试者除吞咽困难以外的症状(例如，通过绝对EoE-SQ频率评分的变化或EoE-SQ频率评分相对于受试者基线值的百分比降低测量的)。
在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如抗IL-4R抗体)治疗受试者导致一种或多种EoE相关的生物标志物、EoE基因特征、2型炎症基因特征和/或针对一组EoE相关基因计算的标准化的富集分数(NES)的正常化。在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂治疗受试者抑制EoE基因特征、2型炎症基因特征和/或针对一组EoE相关的或2型炎性基因计算的NES。如本文所用，术语“EoE相关的生物标志物”是指生物应答、细胞类型、参数、蛋白质、多肽、酶、酶活性、代谢物、核酸、碳水化合物，或其他生物分子，其在EoE患者中以水平或量不同于(例如大于或小于)非EoE患者中存在或可检测的标记物的水平或量存在或可探测。在一些实施方案中，EoE相关的生物标志物是与纤维化、组织重塑或上皮屏障功能相关的基因。示例性EoE相关的生物标志物包括但不限于，例如，食管嗜酸性粒细胞、嗜酸细胞活化趋化因子-3(CCL26)、骨膜蛋白(POSTN)、血清IgE(总的和过敏原特异性)、血清IgG(总的和过敏原特异性)、花生酸盐15脂氧合酶(ALOX15)、IL-13、IL-5、血清胸腺和激活调控趋化因子(TARC；CCL17)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、血清嗜酸性阳离子蛋白(ECP)、胶原蛋白基因(例如，COL4A3、COL4A4、COL4A6、COL8A2、COL14A1和COL21A1)、钙蛋白酶14、桥粒蛋白-1(DSG1)、丝蛋白(FLG)、信号转导子和转录激活因子6(STAT6)、丝氨酸肽酶抑制剂Kazal-5型(SPINK5)、SPINK7、SPINK8、白介素4受体(IL-4R)、嗜酸性粒细胞相关基因(例如CLC和SIGLEC8)、anoctamin-1(ANO1)、组织蛋白酶C(CTSC)、C-C趋化因子受体3型(CCR3)和嗜酸性粒细胞衍生的神经毒素(EDN)。术语“EoE基因特征”是指EoE患者食管活检与健康对照相比的差异基因表达谱，也被称为“EoE疾病转录组”(Sherrill，2014)。在一些实施方案中，EoE基因特征是已公开的EoE疾病转录组的较小基因集，如EoE诊断组(EDP，临床上可作为EoGenuisTM获得，Inform Diagnostics，USA)。“2型炎症基因特征”是指与2型炎症相关的一组基因的转录组。示例性2型炎症相关基因包括但不限于CCL26、ALOX15、CCR3和IL1RL1。2型炎症基因特征的示例性基因列表如图3所示。标准化富集分数(NES)反映了一组转录物的活性水平在样本内整个转录物排名列表的极端(顶部或底部)被过度表达的程度，并通过计算该组转录物数量进行标准化(Subramanian，2005)(Barbie，2009)。
在一些实施方案中，使用来自受试者的组织样本(例如，来自近端、中段和/或远端区域的食管夹取活检样本)来确定EoE相关的生物标志物、EoE基因特征、2型炎症基因特征和/或NES。在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂治疗受试者导致一种或多种EoE相关的生物标志物、EoE基因标志物、2型炎症基因特征和/或NES相对于基线(例如，治疗开始前受试者的EoE相关的生物标志物、EoE基因特征或NES的表达水平)正常化，例如，如在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂的治疗24周后测量的。在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂治疗受试者相对于基线(例如，治疗开始前受试者的NES)抑制一种或多种EoE相关的生物标志物、EoE基因特征或2型炎症基因特征的NES，例如，如在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂的治疗24周后测量的。
在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致2型炎症基因特征的正常化，或2型炎症基因特征的基因子集的正常化。在一些实施方案中，基因特征是图3中所示的基因特征，例如，包括基因IL13RA1、FCER1A、CCL17、ARG1、IL4R、STAT6、CCR4、TSLP、DPP4、SIGLEC8、GATA1、PTGDR2、CCR3、CLC、HRH1、CCL24、ALOX15、CCL26、IL1RL1、HDC、TPSAB1、CMA1、IL25、IL4、GATA3、IL13、IL5、POSTN、CCL13、CCL18、IL33、CCL11、MUC5B、MUC5AC、PTGDS、和FCER2。在一些实施方案中，使用IL-4R抑制剂的治疗导致至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的2型炎症基因特征，例如图3所示的2型炎性基因特征的基因正常化。在一些实施方案中，相对于基线(例如，治疗开始前的受试者的基因特征(例如，基因表达水平))测量基因特征或基因特征的基因子集的正常化，例如，如在施用IL-4R抑制剂后的第8、15、22、25、29、36、43、50、57、64、71、85天或更晚，或使用IL-4R抑制剂的治疗24周后测量的。
在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者导致图6中所示的基因特征的正常化，或来自图6的基因特征的基因子集的正常化，例如，包括基因TNFAIP6、LRRC31、SLC26A4-AS1、ALOX15、CCL26、TGM6、NRXN1、PMCH、SLC26A4、CXCL1、CCR3、TREML2、POSTN、LURAP1L、CXCL6、CRTAC1、BC107108、SFTA2、C2orf16、KRTAP3-2、PLNIPRP3、CIDEA、SLC8A1-AS1、SPINK8、DPCR1、MUC22、CRISP2、DSG1、GYS2、和CRISP3。在一些实施方案中，用IL-4R抑制剂(例如，抗IL-4R抗体)治疗受试者使TARC(例如，血清TARC)、嗜酸细胞活化趋化因子-3(例如，血浆嗜酸细胞活化趋化因子-3)和/或IgE(例如，血清总IgE)的表达降低、遏制或正常化。
联合治疗
在一些实施方案中，本公开内容的方法包括联合IL-4R抑制剂给受试者施用一种或多种另外的治疗剂。如本文所用，表述“联合(in combination with)”意指另外的治疗剂在包含IL-4R拮抗剂的药物组合物之前、之后或同时施用。术语“联合”还包括IL-4R拮抗剂和第二治疗剂或疗法的相继或伴随给药。在一些实施方案中，第二治疗剂或治疗是IL-1β抑制剂、IL-5或IL-5R抑制剂(例如，抗IL-5或抗IL-5R抗体，如贝那利珠单抗、美普利珠单抗(mepolizumab)或瑞替珠单抗(reslizumab))、IL-9抑制剂、IL-13抑制剂(例如抗IL-13抗体，如曲洛单抗(tralokinumab)、RPC4046或QAX576)、IL-17抑制剂、IL-25抑制剂、TNFα抑制剂(例如抗TNFα抗体，如英夫利昔单抗或阿达木单抗)、嗜酸细胞活化趋化因子-3抑制剂、IgE抑制剂(例如，抗IgE抗体，如奥马利珠单抗)，TSLP抑制剂(例如：抗TSLP抗体，如替佐普单抗(tezepelumab)))、CRTH2抑制剂、Siglec-8抑制剂、前列腺素D2抑制剂、整合素抑制剂(例如整合素α4β7抑制剂，如维多珠抗体)，嗜酸细胞活化趋化因子抑制剂、免疫抑制剂、局部皮质类固醇、口服皮质类固醇、全身皮质类固醇、吸入皮质类固醇、糖皮质类固醇、PPI、减充血剂、抗组胺剂、非甾体抗炎药(NSAID)、食管扩张、过敏原去除或饮食管理。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂与饮食管理联合使用。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂与皮质类固醇(例如，吞咽的局部皮质类固醇)联合使用。
在一些实施方案中，IL-4R抑制剂与PPI联合使用，例如奥美拉唑、埃索美拉唑、兰索拉唑、右兰索拉唑、雷贝拉唑或泮托拉唑。在一些实施方案中，IL-4R抑制剂与高剂量PPI方案组合使用。例如，在一些实施方案中，IL-4R抑制剂与以下药物联合使用：奥美拉唑40mgQD或20mg BID、埃索美拉唑40mg QD或20mg BID、兰索拉唑60mg QD和30mg BID，右兰索拉唑60mg QDD、雷贝拉唑40mg QD或20mg BID，或泮托拉唑80mg QD或者40mg BID。
在一些实施方案中，施用IL-4R抑制剂减少了对同时治疗(例如PPI、皮质类固醇或糖皮质类固醇)的依赖性或需要。在一些实施方案中，与使用IL-4R抑制剂的治疗前受试者使用的量相比，与第二治疗(例如PPI、皮质类固醇或糖皮质类固醇)联合施用IL-4R抑制剂可使患者使用的第二治疗(例如PPI、皮质类固醇或糖皮质类固醇)的量减少至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。
实施例
提出以下实施例是为了给本领域普通技术人员提供如何制备和使用本公开的方法和组合物的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人认为是他们的发明的范围。已经努力确保关于所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应当考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数是以重量计的份数，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，以及压力是大气压或接近大气压。
实施例1：研究杜匹鲁单抗治疗成人和青少年嗜酸细胞性食管炎患者的疗效和安全性的临床试验
研究设计和目的
这个实施例描述了一项三部分的3期随机临床试验，以研究杜匹鲁单抗在成人和青少年嗜酸细胞性食管炎(EoE)患者中的疗效和安全性(NCT03633617)。临床试验的A部分和B部分为24周治疗、随机、双盲、安慰剂对照研究阶段，而C部分为28周的延长积极治疗阶段，将纳入来自A部分和B部分的患者。杜匹鲁单抗是一种完全人抗IL-4R抗体，其包含含有SEQ ID NO:9氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:10氨基酸序列的轻链；包含SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对；以及包含SEQ ID NO:3-8的重链和轻链CDR序列。
对于A部分，本研究的主要目的是通过组织学和临床测量评估，确定治疗24周后杜匹鲁单抗与安慰剂相比对成人和青少年EoE患者的治疗效果，并告知/确认B部分的最终样本量确定。对于B部分，主要目的是通过组织学和临床测量评估，证明在治疗24周后，与安慰剂相比，杜匹鲁单抗治疗对成人和青少年EoE患者的有效效。对于C部分，主要目的是通过组织学和临床测量评估治疗长达52周后，成人和青少年EoE患者中杜匹鲁单抗治疗的安全性和有效性。该研究的次要目标包括：评估杜匹鲁单抗治疗在成人和青少年EoE患者中的安全性、耐受性和免疫原性；使用描述性分析，探讨成人和青少年EoE患者中的杜匹鲁单抗浓度与响应之间的关系；并评估杜匹鲁单抗对EoE和2型炎症相关的转录组特征的影响。
A部分由如下所示的筛选期、随机化和治疗期组成：
·筛选期(长达12周)：在获得知情同意后，将在第1次访视时对患者进行研究资格的初步评估。研究参与者需要对EoE进行确认诊断，该诊断可以通过先前的历史活检或筛选期内进行的活检来确定。所有符合临床和实验室合格标准的患者将在第2次访视时接受内镜检查和活检，以建立基线参考测量。对于没有历史活检的患者，第2次访视的活检将作为EoE诊断的确认和基线参考测量。
·随机化：在基线访视(第3次访视)时，连续符合资格标准的患者将进入24周安慰剂对照的双盲治疗期，并按1:1的比例随机分成每周一次(QW)300mg杜匹鲁单抗或皮下注射安慰剂(SC)。
·安慰剂对照的双盲治疗期(24周)：将在双盲治疗期最后一剂研究药物一周后的第24周评估共同主要终点，以告知/确认B部分的最终样本量确定。双盲治疗访视结束时(第24周)，A部分中符合条件的患者可进入为期28周的延长积极治疗期(C部分)。未参与C部分的患者将进入为期12周的随访期。参加A部分的患者将没有资格参加B部分。
·随访期(12周)：所有患者将在完成C部分后再随访12周，如果不符合C部分的要求，则在A部分或B部分后立即随访。
对于B部分，计划在A部分最后一名患者入组后立即开始入组。B部分的筛选程序与以上针对A部分描述的相同。对于随机化，在基线访视(访视3)，连续符合资格标准的患者将进入为期24周的双盲治疗期，并将以1:1:1的比例随机分配给杜匹鲁单抗300mg QW、杜匹鲁单抗300mg每两周一次(Q2W)或SC给药的安慰剂。安慰剂对照的双盲治疗期(24周)的程序与A部分的那些相同。双盲治疗访视结束时(第24周)，B部分符合条件的患者可进入为期28周的延长积极治疗期(C部分)。未参与C部分的患者将进入为期12周的随访期。
对于C部分，28周的延长积极治疗期，在双盲治疗访视结束时(第24周)，A部分和B部分符合条件的患者可进入28周延长积极治疗期，其中所有患者将接受杜匹鲁单抗的积极治疗，但只有B部分患者对C部分的治疗方案不知情。在双盲治疗期间随机接受安慰剂治疗的A部分患者将在C部分期间接受杜匹鲁单抗300mg QW。在双盲治疗期间随机接受杜匹鲁单抗300mg QW的A部分患者将在部分C期间继续接受杜匹鲁单抗300毫克QW。在双盲治疗期间随机接受安慰剂治疗的B部分患者将按照1:1的比例再随机接受杜匹鲁单抗300mg QW或杜匹鲁单抗300mg Q2W。随机接受杜匹鲁单抗300mg Q2W的患者也将接受Q2W给药的匹配安慰剂，交替接受杜匹鲁单抗剂量，因此注射频率将与另一组相匹配，以达到方案盲法(regimen-blinding)的目的。在双盲治疗期间，所有其他患者将继续使用随机分配的相同的杜匹鲁单抗剂量方案。所有患者在完成C部分后将进行额外12周的随访，或如果不符合C部分的要求，则在A部分或B部分后立即进行随访。
本研究是根据赫尔辛基宣言、国际协调良好临床实践指南会议的规定和适用的监管要求进行的。该方案由所有现场的机构审查委员会/道德委员会审查和批准。所有成人患者均获得书面知情同意书。对于青少年患者，从患者处获得书面知情同意或同意，且从患者的父母或法定监护人处获得书面同意。
患者群体
本研究纳入研究开始时患有EoE的≥18岁的成年男性和女性以及≥12至<18岁的青少年男性和女性。
纳入标准：患者必须符合以下标准才符合纳入研究的资格：(1)男性或女性，≥12岁；(2)筛查前通过内镜活检的EoE书面诊断，如通过至少一个食管区域的上皮内嗜酸细胞性浸润(峰值细胞计数≥15eos/hpf)证明的，并在用高剂量PPI方案治疗至少8周后进行。如果患者停止PPI治疗，则必须在停止治疗后2周内进行活检。如果没有符合这些标准的既往(历史)内镜活检(或没有既往活检)，符合其他临床和实验室合格标准的患者将在基线内镜/活检前接受高剂量PPI方案治疗至少8周。注：如果患者在筛选访视时已经使用了可接受的高剂量PPI方案，则可在记录了8周治疗后的筛选期间的任何时间安排基线内镜检查。(3)在3个(近端、中段或远端)活检食管区域的至少2个中基线内镜活检显示上皮内嗜酸细胞性浸润的中心读数(峰值细胞计数≥15eos/hpf)；(4)筛查前4周内平均每周至少2次吞咽困难(固体摄入)的病史(根据患者报告)；(5)基线前2周内至少4次吞咽困难，通过eDiary记录，其中至少2次需要液体、咳嗽或作呕、呕吐或就医来缓解；(6)在基线访视(访视3)前的2周内，至少完成了14天DSQ eDiary数据录入中的11天；(7)基线DSQ评分≥10；(8)能够理解并完成研究相关问卷；(9)愿意并能够遵守临床访视和研究相关程序；(10)提供研究患者或法定可接受的代表签署的知情同意。对于青少年，父母或法定监护人必须提供签署的知情同意(患者还必须提供单独的知情同意来参加研究)。
排除标准：以下是研究A部分和B部分的排除标准：(1)体重≤40千克；(2)既往参与过杜匹鲁单抗临床试验，或过去或目前用杜匹鲁单抗治疗；(3)在筛选前6周内开始或改变食物排除饮食方案或重新引入先前排除的食物组。在整个研究过程中，食物排除饮食的患者必须保持相同的饮食。(4)食管嗜酸性粒细胞增多症的其他原因或以下情况：高嗜酸性粒细胞综合征和嗜酸性肉芽肿性多血管炎(Churg-Strauss综合征)。注：嗜酸性粒细胞胃肠炎患者符合资格，前提是他们符合其他资格标准。(5)活动性幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)感染；(6)贲门失弛缓症、克罗恩病、溃疡性结肠炎、乳糜泻病史和既往食管手术史；(7)无法通过标准、诊断性、9至10mm上部内窥镜检查的任何食管狭窄或筛查时需要扩张的任何严重食管狭窄；(8)研究者认为，出血性疾病或食管静脉曲张的病史会使患者因内镜手术而出现严重并发症的风险过高；(9)基线前8周内用吞咽的局部皮质类固醇治疗；(10)基线内镜检查前8周内开始、停用或改变以下药物的剂量方案：质子泵抑制剂(基线内镜检查前需要PPI试验的患者除外)、白三烯抑制剂或鼻用和/或吸入的皮质类固醇。基线内镜检查前至少8周服用稳定剂量的这些药物的患者可纳入研究，但在研究期间不得改变剂量。(11)SC免疫治疗(SCIT)剂量方案的开始、中止或改变。在第1次访视前至少1年服用稳定剂量这些药物的患者可纳入研究，但在研究期间不得改变剂量。(12)舌下免疫治疗(SLIT)；(13)在访视1前6个月内用口服免疫疗法(OIT)治疗；(14)筛选前3个月内的以下治疗，或研究者认为在研究期间可能需要此类治疗的任何情况：全身免疫抑制剂/免疫调节药物，包括但不限于全身皮质类固醇、奥马利珠单抗、环孢素、霉酚酸酯、干扰素γ[IFN-γ]、Janus激酶抑制剂、硫唑嘌呤和甲氨蝶呤(注：允许使用一次皮质类固醇作为每次内镜检查过程中使用的麻醉制剂的一部分)；(15)在第1次访视前2个月内或5个半衰期(half-lives)内(如已知)(以较长者为准)接受研究药物治疗；(16)研究期间计划或预期使用任何禁用药物和程序；(17)研究期间计划或预期的主要外科手术；(18)基线访视前4周内用活(减毒)疫苗治疗；(19)活动性寄生虫感染或疑似寄生虫感染，除非临床和(如有必要)实验室评估在随机化前已排除活动性感染；(20)基线访视前2周内需要用全身抗生素、抗病毒药物或抗真菌药物治疗的慢性或急性感染；(21)已知或疑似免疫缺陷病症，包括尽管感染缓解但仍有侵袭性机会性感染(如结核[TB]、非结核分枝杆菌感染、组织胞浆菌病、李斯特菌病、球虫病、肺囊虫病、曲霉病)，或其他频率异常的复发性感染，或研究者判断的表明免疫受损状态的长期感染史；(22)已知的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染史；(23)筛查时确定的乙型肝炎病毒感染诊断或筛查时乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性。接种疫苗后获得乙型肝炎病毒感染免疫力的患者(HBsAg阴性、乙型肝炎表面抗体[HBsAb]阳性和乙型肝炎核心抗体[HBcAb]阴性的患者)有资格参加该研究。只有在检测不到乙型肝炎病毒DNA水平的情况下，HBcAb阳性的患者才有资格参加研究。(24)在筛查时确定丙型肝炎病毒(HCV)感染的诊断。丙型肝炎抗体阳性的患者只有在HCV RNA阴性的情况下才有资格参加研究；(25)目前在进行对肝病的治疗，包括但不限于急性或慢性肝炎、肝硬化或肝衰竭，或有肝病证据，如通过持续性(经≥间隔2周的反复试验证实)升高的转氨酶((丙氨酸氨基转移酶[ALT]和/或天冬氨酸氨基转移酶[CAST])超过筛选期间正常[ULN]上限的3倍)所表明的；(26)筛选时出现任何以下异常实验室值：血小板<100×103/μL，中性粒细胞<1.5×103/μL，或估计肾小球滤过率(eGFR)<30mL/min/1.73m2；(27)研究者判断会对患者参与研究产生不利影响的严重合并疾病。实例包括但不限于预期寿命短、失控的糖尿病、心血管疾病(例如NYHA III级或IV级心力衰竭)、严重肾脏疾病(例如严重肾病综合征)、肝胆疾病(例如Child-Pugh B级或C级)、神经疾病(例如脱髓鞘疾病)、活动性重大自身免疫疾病(例如，狼疮、炎性肠病、类风湿性关节炎等)，其他严重的内分泌、胃肠、代谢、肺或淋巴疾病。(28)筛查前5年内的恶性病史，完全治疗的宫颈原位癌和完全治疗的非转移性皮肤鳞癌或基底细胞癌除外；(29)筛查前6个月内有酗酒或吸毒史；(30)研究者认为的任何其他医学或心理状况，包括筛查时的相关实验室异常，其表明存在一种新的和/或不充分了解的疾病，可能因参与本临床试验而给研究患者带来不合理的风险，可能使患者的参与不可靠，或可能干扰研究评估；(31)患者或其直系亲属是研究团队成员；(32)怀孕或哺乳期妇女，或计划在研究期间怀孕或哺乳的妇女；(33)有生育潜力的妇女，其在初次给药/第一次治疗开始前、研究期间以及最后一次给药后至少12周内不愿意实施高效避孕。绝经后妇女必须闭经至少12个月，才能不被认为有生育潜力。有记录的子宫切除术或输卵管结扎术的妇女不需要进行妊娠检测和避孕。(34)已知对杜匹鲁单抗或药物产品的赋形剂全身过敏。
研究治疗
用每个2.0mL一次性预充式玻璃注射器(带卡扣帽)递送300mg研究药物(2.0mL的150mg/mL溶液)，为本研究提供了浓度为150mg/mL的杜匹鲁单抗药物。在不添加蛋白质(即活性物质，抗IL-4Rα单克隆抗体)的情况下，在相同配方中制备安慰剂匹配的杜匹鲁单抗。
在双盲安慰剂对照的A部分和B部分以及C部分中，所有患者将每周接受一次(QW)皮下(SC)注射。在A部分，所有患者均接受300mg杜匹鲁单抗或安慰剂QW。在B部分，患者将接受300mg杜匹鲁单抗QW、300mg杜匹鲁单抗Q2W或安慰剂QW。对于杜匹鲁单抗300mg SC Q2W组，为了保持盲，将在杜匹鲁单抗剂量之间进行安慰剂SC注射，因此注射频率将与其他2组(杜匹鲁单抗QW和安慰剂)相匹配。在延长的积极治疗C部分中，患者将按照其治疗分配的频率(QW或Q2W与匹配的安慰剂交替使用杜匹鲁单抗剂量，因此两组的注射频率将相同，用于盲法方案目的)接受杜匹鲁单抗注射。研究药物的皮下注射部位应在腹部(避开肚脐和腰部区域)、大腿上部和上臂的不同象限之间交替进行，以便连续两次不注射同一部位。
背景治疗：在筛选前或在A部分或B部分筛选期间开始接受高剂量PPI治疗试验的患者必须在52周治疗期内保持以下所列剂量方案。高剂量PPI方案限定如下：
·奥美拉唑40mg每日一次(QD)或20mg每日两次(BID)
·埃索美拉唑40mg QD或20mg BID
·兰索拉唑60mg QD或30mg BID
·右兰索拉唑60mg QD
·雷贝拉唑40mg QD或20mg BID
·泮托拉唑80mg QD或40mg BID
初次筛查访视时目前使用PPI的患者在52周治疗期内也必须保持相同或类似的批准剂量方案。在研究期间，患者可能会更换为不同的经批准的PPI药物。禁止对所有其他患者进行PPI治疗。
救援治疗：如果医学上有必要(例如，对于治疗不可耐受的EoE症状)，允许对研究患者使用救援药物(全身和/或吞咽的局部皮质类固醇)或紧急食管扩张术。在开始救援治疗前，将进行内镜检查和活检。因开始救援治疗而接受内镜检查和活检的患者将不会接受预定的治疗访视结束时的内镜检查/活检。在研究的双盲期内接受救援治疗的患者将不符合延长积极治疗期的资格，除非在开始救援治疗前进行内镜检查和活检。然而，如果无法进行内镜检查和活检，救援治疗不应延误，并且这些患者将有资格接受C部分治疗。C部分治疗将根据事件时间表开始，且仅在门诊访视时开始。接受救援治疗的患者可继续接受研究药物。在双盲治疗期间和随访期间，他们将保持盲态，并将被要求返回诊所进行所有剩余的研究访视，并根据规定的事件时间表参与这些访视的所有评估。为了进行有效性分析，研究期间接受救援治疗的患者将被视为治疗失败。
评估的结果
研究A部分和B部分的共同主要终点是：在第24周达到≤6eos/hpf的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数的患者比例；DSQ评分从基线到第24周的绝对变化。
研究A部分和B部分的主要次要终点是：EoE-EREFS从基线到第24周的绝对变化；食食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数(eos/hpf)从基线到第24周的百分比变化；EoE组织学评分系统(EoEHSS)的EoE等级评分从基线到第24周的绝对变化；以及EoEHSS的EoE阶段评分从基线到第24周的绝对变化。
其他次要终点是：在第24周达到<15eos/hpf的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数的患者比例；在第24周达到≤1eos/hpf的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数的患者比例；DSQ从基线到第24周的百分比变化；EoE诊断组(EDP)转录组特征从基线到第24周的相对变化的标准化富集评分(NES)；2型炎症转录组特征从基线到第24周的相对变化的NES；非吞咽困难的EoE症状的严重性和/或频率从基线到第24周的绝对变化；在24周安慰剂对照治疗期间接受救援药物或程序的患者比例；以及在第24周通过功能管腔成像测量的食管扩张性平台与基线的绝对变化(如果采集的话)。
下面描述了用于评估有效性的程序，并且也描述在WO 2019/028367中，其通过引用并入本文。
EoE-EREFS：EoE食管特征将基于EoE-EREFS进行分析，其是一种经验证的疾病炎症和重塑特征评分系统，同时使用总体评分和每个单独的评分(Hirano，2013)。食管近端和远端区域分别评分；每个区域的评分范围从0到9，总评分范围从0至18。主要食管特征包括：水肿(无、存在)；环(无，轻度，中度，重度)；渗出物(无、轻度、重度)；皱褶(无，轻度，重度)；和狭窄(无、存在)。除了这些主要特征外，进行内镜检查的医生还可以获取以下次要特征的数据：皱纸食管(通过诊断性内镜时粘膜脆弱或撕裂)：无、存在；窄口径食管(管状食管大部分管腔直径减小)：无，存在；以及狭窄直径。使用洛杉矶糜烂分类系统(无糜烂或A级、B级、C级或D级)记录与胃食管反流病相关的粘膜变化。
活检：在第二次筛查访视(访视2，第21±7天)、第24周和第52周访视以及双盲治疗期间开始救援药物或程序前，通过内镜检查获得活检。在每个时间点从3个食管区域(3个近端、3个中部和3个远端)采集总共9个粘膜夹活检。每个区域的两个样本用于(研究纳入标准和终点评估所需的)组织学和(可能包括但不限于免疫组织化学[IHC]、RNA范围(原位杂交)和RNA测序的)其他组织分析。每个区域的第三个样品被处理用于RNA分析。此外，在第2次访视时，对所有<18岁的患者采集胃和/或十二指肠活检标本，以排除食管嗜酸性粒细胞增多的其他病因。只有在出现异常内镜检查结果(而非典型的EoE检查结果)或临床怀疑有其他病因的情况下，才能在成人中获得靶向的胃和/或十二指肠活检。胃活检样本应包括2个来自窦的样本和2个来自体的样本。十二指肠活检样本应包括2个球样本和2个来自十二指肠另一部分的样本。对活检样本进行每hpf的峰值eos评估，并分配EoE分级评分和阶段评分。EoE分级和分期评分评估八个特征：嗜酸性粒细胞密度、基底区增生、嗜酸性粒细胞脓肿、嗜酸性粒细胞表面分层、细胞间间隙扩张、表面上皮改变、上皮细胞角化不良和固有层纤维化(无/存在)。
EndoFLIP：EndoFLIP装置是一种基于导管的程序，其测量沿着食管的多个部位的横截面积，同时记录食管体积扩张期间的腔内压力。对食管横截面积与压力关系的分析可以确定食管顺应性以及扩张性平台。与健康对照相比，成人EoE患者的扩张性平台显著降低(Kwiatek，2011)。此外，食管扩张性与食物嵌塞和食管扩张需求的结果相关(Nicodeme，2013)。
吞咽困难症状问卷(DSQ)：DSQ是经验证的PRO，其已用于临床研究来测量吞咽困难的频率和强度(Hudgens等，J Patient Rep Outcomes 2017，1(1):3，doi:10.1186/s41687-017-0006-5)。对于对问题1(“自从今早醒来后，你吃过固体食物吗？”)回答“否”的患者，对DSQ进行了修改，提出了一个后续问题，以调查患者是否因吞咽固体食物的问题而避免进食固体食物。从筛查到研究结束或ET访视，患者每天使用eDiary完成该修改后的DSQ。DSQ使用每日回忆期，且包括3个关于EoE吞咽困难的存在和严重性的问题。所有患者都回答问题1和问题2，并被要求吃过固体食物(问题1“是”：“自从今早醒来后，你吃过固体食物吗？”)，以便进行问卷调查。如果患者对问题1回答“否”，则DSQ上的其余项不得分。对问题2(“自从今早醒来后，食物是缓慢下沉还是卡在喉咙里了？”)回答“否”的患者评分为零，并且不要继续回答问题3(日记记录为当天完成)。对问题1和2回答“是”的人继续回答问题3，该问题以5分级别评分，根据患者缓解症状的行动来推断吞咽困难的严重性，从不采取行动到就医。因此，DSQ评分算法是根据对问题2和3的回答构建的，以确保最终评分是由吞咽困难的频率和严重性来决定。为了计算DSQ评分，每14天至少需要8个日记条目，以根据14天的累积评分得出标准化总分。DSQ评分理论上可以从0分到84分，较低的分数表示吞咽困难不太频繁或不太严重。
EoE影响问卷(EoE-IQ)：EoE-IQ是赞助者开发的EoE患者健康相关QOL的疾病特异性测量。EoE-IQ测量EoE对患者情绪、社交、工作和学校以及睡眠方面的影响，范围为1至5；评分越高表示症状负担越重。在(基于5分的回答选项，其从“根本不”到“极端”)EoE-IQ中测量的概念可以包括：“在过去的7天里，你有没有：被EoE症状困扰；担心吞咽困难；担心窒息；尴尬；担心在公共场所吞咽困难，难以参加涉及食物的社交活动；EoE对家庭关系的影响；EoE对朋友关系的影响，难以跟上工作或学校的事情工具；缺少工作或学校；睡眠中断。”EoE-IQ由患者在研究期间的特定时间使用电子问卷完成。
EoE症状问卷(EoE-SQ)：EoE症状问卷是测量除吞咽困难和吞咽疼痛以外的症状的频率和严重性的问卷，量度为5至25；评分越高表示症状负担越重。它由赞助商开发。在EoE-SQ频率中测量的概念(基于5分回答选项，从“从不”到“一天不止一次”)可以包括：“在过去的7天里，你经历过多少次：胸痛；胃痛；胸口灼热感(烧心)；食物或液体回流到喉咙；呕吐。”EoE症状问卷由患者在研究期间的特定时间使用电子问卷完成。
吞咽困难的患者总体印象的变化(PGIC)：PGIC是一项单项问卷，要求患者提供吞咽困难变化的总体自我评估，评分量度为7分(非常好；中度好；稍好；无变化；稍差；中度差；或非常差)。PGIC由患者在研究期间的特定时间使用电子问卷完成。
总鼻症状评分(TNSS)：总鼻症状得分(TNSS)，以0-9分测量，是对鼻塞、瘙痒/打喷嚏和鼻漏的综合症状评估(每个以0-3分分级，3分为严重)。TNSS仅施用于有过敏性鼻炎病史且能流利地使用问卷所用语言的患者(根据参与国的翻译情况)。TNSS由患者在研究期间的特定时间使用电子问卷完成。
12+岁标准化鼻结膜炎生活质量问卷(RQLQ(S)+12)：12+岁的标准化鼻结膜炎生活质量问卷[RQLQ(S)+12]是一份自填问卷，用于测量12岁及以上的常年或季节性过敏性鼻炎患者的健康相关QOL。RQLQ(S)共有28项，分为7个领域：活动限制、睡眠问题、鼻部症状、眼部症状、非鼻部/眼部症状、实际问题和情绪功能。RQLQ(S)+12的回答基于7分Likert量表，回答范围从0(不困扰)到6(极度困扰)。总体RQLQ(S)+12得分是所有28个回答的平均值，而单个领域评分是那些领域中项目的平均值。评分越高表明健康相关的QOL受损越多(评分越低越好)。总分变化0.5分或以上被认为具有临床意义。RQLQ(S)+12由患者在研究期间的特定时间使用电子问卷完成。
Juniper哮喘控制问卷(ACQ)：5个问题版本的Juniper ACQ(ACQ-5)是评估哮喘控制的经验证的问卷。ACQ-5评分是5项评分的平均值，范围从0(完全受控)到6(严重不受控)。评分小于1.0反映哮喘得到充分控制，而评分为1.0或更高反映哮喘控制不足。评分越高表示哮喘控制越差。建议的0.50变化是一个合理的阈值，用于定义有意义的单个级别变化。ACQ-5仅施用于有哮喘病史且能流利地使用问卷所用语言的患者(基于参与国家的有效翻译的可用性)。ACQ-5由患者在研究期间的特定时间使用电子问卷完成。
患者导向的湿疹测量(POEM)：POEM是一个7项、经验证的问卷，用于临床实践和临床试验中来评估患有AD的儿童和成人的疾病症状(Charman，2004)。该格式是根据过去一周期间的发生频率，使用5分制对7个项目(干燥、瘙痒、剥落、开裂、失眠、出血和哭泣)的反应。每个问题的可能评分为：0(无天数)、1(1-2天)、2(3-4天)、3(5-6天)和4(每天)，综合评分系统为0-28；评分越高表示AD越严重。已确定以下POEM分带评分：0至2＝没有或几乎没有；3至7＝轻度湿疹；8至16＝中度湿疹；17至24＝严重湿疹；25至28＝非常严重的湿疹。POEM仅施用于有AD病史且能流利地使用问卷所用语言的患者(基于参与国家的有效翻译的可用性)。POEM由患者在研究期间的特定时间使用电子问卷完成。
欧洲生活质量五维量表(EQ-5D)：欧洲生活质量五维量表(EQ-5D)是用于评估健康状况的标准化问卷(Rabin，2014)。它由描述性系统和EQ视觉模拟量表(EQ VAS)组成。EQ-5D-3L(3级)描述系统包括以下5个维度：行动能力、自我护理、日常活动、疼痛/不适和焦虑/抑郁。对于每个维度，患者从三个级别中选择一个：没有问题、一些问题和极端问题。EQ VAS在垂直视觉模拟量表上记录患者的自我评估健康，其中终点标记为“最佳可想象健康状态”和“最差可想象健康状态”。EQ-5D-3L由患者在研究期间的特定时间使用电子问卷完成。
药效和探索性生物标志物程序
在这个研究中，将进行研究评估，以探索EoE、杜匹鲁单抗如何改变EoE的潜在疾病过程、2型炎症以及杜匹鲁单抗安全性和有效性的预测因子。在指定的时间点收集嗜酸细胞活化趋化因子-3(肝素化血浆)样品；血清TARC、总IgE、过敏原特异性IgE和IgG4。认为所研究的生物标志物与EoE的病理生理学、对治疗的响应(即2型炎症的评估)以及响应的基线预测因子和杜匹鲁单抗作用机制有关。
EoE诊断组和2型炎症转录组学
与健康对照相比，EoE患者食管活检的差异基因表达谱是EoE疾病转录组(Sherrill等，Genes Immun 2014，15(6):361-369)。该疾病基因表达特征已被进一步细化为更小的基因集，被用作EoE诊断组(EDP)(Dellon等，Clin Transl Gastroenterol 2017，8(2):e74)。标准化富集分数(NES)反映了一组转录物的活性水平在样本内整个转录物排名列表的极端(顶部或底部)被过度表达的程度，并通过计算该组转录物数量进行标准化(Subramanian，2005；Barbie，2009)。通过计算转录组中所有基因在基线和第24周之间的表达水平差异(TPM，每百万分的转录物)，确定一组预选转录物在分布上的位置，计算每个个体患者的富集分数(表达水平差异处于分布极值的程度)，来计算每个样品的每个转录组特征的NES分数。为了进行统计比较，一旦计算了每个个体的NES，就使用Wilcoxon符号秩检验来确定安慰剂组和杜匹鲁单抗组之间是否存在显著差异。
临床试验的A部分的结果
基线特征
以下表1和表2总结了入组研究A部分的患者的基线人口统计数据和疾病特征。
表1：基线人口统计数据
安慰剂 300mg QW 总体
N(FAS) 39 42 81
年龄(岁)，平均(SD) 28.8(12.53) 33.9(15.53) 31.5(14.31)
≥12至<18岁，n(％) 9(23.1) 11(26.2) 20(24.7)
≥18岁，n(％) 30(76.9) 31(73.8) 61(75.3)
性别(男性)，n(％) 21(53.8) 28(66.7) 49(60.5)
种族，n(％)
白人 37(94.9) 41(97.6) 78(96.3)
黑人或非裔美国人 1(2.6) 1(2.4) 2(2.5)
其他 1(2.6) 0 1(1.2)
体重(kg)，平均(SD) 74.5(15.45) 80.9(24.81) 77.8(20.95)
BMI(kg/m2)，平均(SD) 25.8(5.79) 26.3(6.79) 26.1(6.30)
表2：基线疾病特征
Figure BDA0003950009950000301
Figure BDA0003950009950000311
如表1和表2所示，各治疗组的基线人口统计数据和疾病特征是相当的。人群的平均DSQ约为34，表明基线症状的严重程度(substantial degree)。如表2所示，高比例的受试者具有既往的吞咽局部类固醇使用史和既往的食管扩张史。基线峰值嗜酸性粒细胞计数升高。如表3所示，大多数受试者还至少有一种并发过敏性疾病(EoE除外)。
表3：并发特应性/过敏性疾病
Figure BDA0003950009950000312
有效性
使用杜匹鲁单抗治疗导致共同主要终点的统计学显著改善(在第24周达到≤6eos/hpf的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数的患者比例，以及DSQ评分从基线到第24周的绝对变化)，如下表7所示。大多数接受剂量为300mg QW的杜匹鲁单抗的患者(59.5％)在第24周达到≤6eos/hpf的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数，而安慰剂为5.1％，与组织学疾病缓解一致。接受杜匹鲁单抗的患者的绝对DSQ评分平均降低21.92，而安慰剂组的绝对DSQ降低9.60。图1显示了DSQ总评分随时间从基线的绝对变化。杜匹鲁单抗显著且快速地降低了EoE患者的吞咽困难严重性。与安慰剂治疗的患者相比，杜匹鲁单抗治疗的患者的DSQ评分有更大的改善，从第4周起达到统计学意义。
如表7所示，用杜匹鲁单抗治疗导致关键次要终点和其他次要终点在统计学上有显著改善。接受杜匹鲁单抗的患者的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数(eos/hpf)较基线展示出-71.24％的变化，而安慰剂组展示出-2.98％的变化。大多数接受杜匹鲁单抗的患者(64.3％)达到<15eos/hpf的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数，而接受安慰剂的患者仅为7.7％。相当比例的接受杜匹鲁单抗的患者达到≤1eos/hpf的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数(21％，而安慰剂组的0例患者)。在第24周时，杜匹鲁单抗还显著改善了EoE组织学评分；接受杜匹鲁单抗的患者在EOEHSS中的平均等级评分和平均阶段评分还呈现出与基线相比的绝对变化的减少(平均等级评分：杜匹鲁单抗为-0.761vs.安慰剂为-0.001；平均阶段评分：杜匹鲁单抗为-0.753vs.安慰剂为-0.012)。
杜匹鲁单抗在第24周时降低了EoE的内镜特征，如通过EoE-EREFS测量的，其测量了内镜发现的严重性；评分越高表示严重性越高。在筛选和第24周，通过内镜对食管近端和远端的EREFS进行了评估。评估的特征为水肿(评分范围0-1)、环(0-3)、渗出物(0-2)、褶皱(0-2)和狭窄(0-1)，评分越高表示严重性越高。总评分表示两个区域的所有特征之和(0-18)。在第24周，分析了总评分、炎症子评分(水肿、渗出物和褶皱的总和)、重塑子得分(环和狭窄的总和)和单独评分与基线的变化。
在基线，杜匹鲁单抗组与安慰剂组患者的平均[SD]总EREFS相似(6.5[3.20]vs6.0[2.38])(表4)。在第24周，杜匹鲁单抗组与安慰剂组的患者在总EREFS和炎症子评分有显著更大的变化(改善)(两者的P<0.0001)，并且有改善重塑子评分的趋势。在第24周，观察到近端和远端水肿在统计学地名义上有显著的或数值上的改善(杜匹鲁单抗与安慰剂的最小二乘平均差分别为-0.3和-0.1)、环(-0.2和-0.2)，渗出物(-0.4和-0.5)和褶皱(-0.5和-0.6)，但狭窄没有改善(0和0)(图2B)。
表4.总EREFS和炎症和重塑子评分从基线到第24周的变化
Figure BDA0003950009950000321
Figure BDA0003950009950000331
CI，置信区间；EoE-EREFS，嗜酸细胞性食管炎内镜参考评分；LS，最小二乘；SD，标准偏差；SE，标准误差。
a安慰剂组的5名患者接受了救援治疗；将救援治疗后的数据设置为缺失，并对他们第24周的数据进行插补。数据缺失的其他原因包括早期中止A部分的研究，在患者服用第一剂C部分研究药物后第24周进行内镜检查，或由于COVID-19大流行限制而推迟了第24周的访视。
b具有P值的置信区间基于LS平均变化的治疗差异(杜匹鲁单抗vs安慰剂)，使用协方差模型分析，基线测量作为协变量，治疗、年龄组(>＝12至<18vs>＝18)和随机分层的PPI使用作为固定因素。
表4和表7以及图2A显示，用杜匹鲁单抗治疗的患者的EoE-EREFS总评分与基线相比展现了-3.2的绝对变化，而安慰剂为-0.3。图2B还显示了与安慰剂相比，用杜匹鲁单抗治疗的患者中，EREFS组分评分相对基线降低。
在试验期间，患者每天使用电子日记完成DSQ。DSQ评分(范围0-84)基于患者对“食物缓慢下降或被卡住”问题的回应，以及为“让食物下降或缓解”而采取的行动。吞咽困难相关疼痛评分(范围0-56)基于“吞咽时疼痛”的后续问题。评分越高表示严重性越高。使用Cochran-Mantel-Haenszel检验分析了在第24周时DSQ达到≥30％和≥50％降低的患者比例(通常评估的PRO应答者分析阈值)。通过协方差模型分析评估了从基线到第24周吞咽困难相关疼痛评分的最小二乘(LS)平均变化。76.2％的杜匹鲁单抗治疗的患者与41.0％的安慰剂治疗的患者实现了DSQ评分≥30％的降低(P<0.01)，且71.4％的杜匹鲁单抗治疗的患者与30.8％的安慰剂治疗的患者实现了≥50％的降低(P<0.001)(表5)。从第2周开始，与安慰剂相比，杜匹鲁单抗的吞咽困难相关疼痛评分明显降低(LS平均差：-2.3；95％CI-4.4至-0.1；P<0.05)，并持续下降至第24周(LS平均差：-5.7；95％CI-8.7至-2.7；P＜0.001)。与基线相比，用杜匹鲁单抗治疗的患者的DSQ具有-69.17％的变化，而安慰剂治疗的患者的DSQ具有-31.68％的变化。
表5. 3-部分EoE 3期研究的部分A中参与的患者中杜匹鲁单抗vs安慰剂的DSQ应 答者分析和吞咽困难相关疼痛评分
Figure BDA0003950009950000332
Figure BDA0003950009950000341
CI，置信区间；DSQ，吞咽困难症状问卷；LS，最小二乘；qw，每周；SD，标准偏差；SE，标准误差。
an＝观察/插补的患者的数量。安慰剂组中的五名患者接受了救援治疗；救援治疗后的数据设为缺失并且通过多重插补插补他们第24周的数据。
嗜酸细胞性食管炎组织学评分系统(EoE-HSS)评估EoE食管活检中与临床症状相关的组织学特征的严重性(等级)和程度(阶段)。活检取自近端、中段和远端食管区域，中心病理学家对8个特征(基底区增生[BZH]、嗜酸性粒细胞炎症[EI]、嗜酸粒细胞脓肿[EA]、嗜酸粒细胞表面分层[ESL]、细胞间间隙扩张[DIS]、表面上皮改变[SEA]、角化不良上皮细胞[DEC]和固有层纤维化[LPF])的严重性和异常程度进行评分(0正常-3最大变化)。平均EoE-HSS等级或阶段评分是从分配分数之和除以每个食管区域的最大可能分数计算得出的；将每个区域的3个评分相加，得出总评分。分析从基线到第24周的总的绝对变化以及等级和阶段的单独评分。
杜匹鲁单抗组与安慰剂组的基线特征相似，包括平均EoE-HSS等级(1.26vs 1.32)和阶段(1.30vs 1.38)总评分。在第24周，杜匹鲁单抗与安慰剂相比，平均EoE-HSS总等级和阶段评分有改善(两者P<0.001)；在大多数组织学特征(包括BZH、EI、EA、ESL、DIS、SEA等级和BZH，EI，EA，ESL、SEA阶段评分)中观察到显著改善，所有P<0.05(表6)。在DEC和LPF等级和阶段评分方面，杜匹鲁单抗与安慰剂相比有显著改善。活检中LPF经常缺失，导致样本量减少。这些数据证明了杜匹鲁单抗对食管上皮非嗜酸性粒细胞成分(包括BZH和DIS)的有益作用。
表6.EoE-HES等级和阶段总的和单独的特征评分从基线到第24周的变化
Figure BDA0003950009950000351
Figure BDA0003950009950000361
Figure BDA0003950009950000371
Figure BDA0003950009950000381
CI，置信区间；EoE-HSS，嗜酸细胞性食管炎组织学评分系统；LS，最小二乘；SD，标准偏差；SE，标准误差。
a每个活检的EoE-HSS的平均等级或平均阶段评分是每个评估特征的分配分数除以该区域的最大可能分数的总和(即，24，除非未评估特征，在这种情况下，最大可能评分减少3)。
b安慰剂组的5名患者接受了救援治疗；将救援治疗后的数据设置为缺失，并对第24周的数据进行插补。数据缺失的其他原因包括早期中止A部分的研究，在患者服用第一剂C部分研究药物后第24周进行内镜检查，或由于COVID-19大流行限制而推迟了第24周的访视。
c具有p值的置信区间基于LS平均变化的治疗差异(杜匹鲁单抗vs安慰剂)，使用协方差模型分析，基线测量作为协变量，治疗、年龄组[>＝12至<18vs>＝18]和随机(是vs.否)分层的PPI使用作为固定因素。
共有5名安慰剂患者接受了救援治疗：吞服的局部类固醇(3)、全身类固醇(1)或扩张(1)。没有接受杜匹鲁单抗治疗的患者采用救援治疗。
Figure BDA0003950009950000391
安全性
以下表8中显示了试验的安全性数据。在试验中没有观察到新的或不可预期的副作用，并且没有观察到相关SAE。杜匹鲁单抗是充分耐受的，并且大部分AE是轻微强度的。
表8：安全性评估
Figure BDA0003950009950000401
SAE：
具有异常疼痛的61岁女性；结肠息肉切除术前3天；与研究药物无关
47岁女性子宫内膜息肉恶化导致次全腹式子宫切除术
基因表达谱
使用本研究中患者食管活检获得的组织与治疗前基线的组织谱进行比较，通过RNA测序来评估杜匹鲁单抗治疗对差异基因表达谱的影响。众所周知，疾病中基因表达失调(EoE疾病转录组)不仅包括与嗜酸性粒细胞和2型炎症相关的那些基因，还包括与上皮增殖、屏障功能、重塑和纤维化相关的那些基因。利用来自转录组特征的评分提供了一种机制来量化疾病和靶炎症途径的总体失调。此外，转录组给出了疾病的定量分子表型，其不仅包括与炎症相关的参数，还包括可能无法通过其他方法便利地进行测量的与上皮屏障、重塑和纤维化相关的参数。
在A部分中，用杜匹鲁单抗(而非安慰剂)的治疗抑制了2型炎症和EoE诊断组(EDP)标准化富集评分(NES)。参见，图3和图4。如图3中所示2型炎症转录组是与2型炎症相关的基因的Regeneron校验(Regeneron-curated)基因列表。EDP是公开的EoE患者与对照组的食管夹取活检中差异表达的基因的96基因组(Wen等，Gastroenterology 2013；145(6):1289-1299)。如以下表9所示，杜匹鲁单抗将食管活检中的EoE疾病特征降低了-2.66(与安慰剂组的-0.160相比)，使其表型更类似于正常食管组织，并将2型炎症特征从基线降低了-1.97(与安慰剂的-0.32相比)。
表9：2型和EoE诊断组基因表达特征
Figure BDA0003950009950000411
*中值差异
#平均差异
其他终点
通过11项EoE影响问卷(EoE IQ)评估HRQoL，测量EoE的情绪、社交、生产力(productivity)和睡眠相关影响(评分范围：1-5)。通过5项EoE症状问卷(EoE-SQ频率)评估症状负担，测量除吞咽困难/吞咽疼痛以外的EoE症状的频率，包括胸痛、胃痛、烧心、反胃和呕吐(评分范围：5-25)。EoE-IQ/EoE-SQ频率评分越高，表明对HRQoL/症状负担的影响越大。评估患者总体印象的变化(PGIC)中报告吞咽困难改善的患者比例。PGIC要求患者对他们自开始接受研究治疗以来吞咽困难的总体变化进行7分评分，从“非常好”到“非常差”。
结果
基线时，分别地，杜匹鲁单抗/安慰剂组的平均EoE-IQ为2.0/2.4和平均EoE-SQ频率为10.1/11.5。在第24周，杜匹鲁单抗与安慰剂的基线差异的LS平均变化为EoE-IQ的-0.4(95％CI：-0.6，-0.1；名义P＝0.008)和EoE-SQ-频率的-1.7(-2.9，-0.5；名义P＝0.005)。在第24周，与PGIC基线相比，40.5％vs 7.7％(名义P＜0.001)的杜匹鲁单抗vs安慰剂患者报告吞咽困难“非常好”；26.2％vs 10.3％(名义P＝0.074)报告“中度好转”。
生物标志物分析
分析了在24周的治疗期内，杜匹鲁单抗对2型炎症的循环生物标志物的影响。在第4周、第12周和第24周评估生物标志物、血清胸腺和激活调控的趋化因子(TARC)、血浆嗜酸细胞活化趋化因子-3和血清总免疫球蛋白E(IgE)的中值和中值变化。
治疗组间的TARC、嗜酸细胞活化趋化因子-3和总IgE的基线水平相似(TARC中杜匹鲁单抗与安慰剂的中值[Q1-Q3]：322.0pg/mL[232.0-430.0]与293.0pg/mL[226.0-418.0]；嗜酸细胞活化趋化因子-3：217.5pg/mL[139.0-330.0]对217.0pg/mL[163.0-448.0]；总IgE：110.0kU/L[51.1-463.0]与100.0kU/L[46.7-294.0])。在杜匹鲁单抗治疗的患者与安慰剂治疗的患者中，TARC和嗜酸细胞活化趋化因子-3从基线快速下降，效果持续24周以上，而总IgE下降更为缓慢(图7A-7C)。在第24周，TARC中，杜匹鲁单抗与安慰剂的中值(Q1-Q3)为196.5pg/mL(134.0-277.0)vs 319.0pg/mL)(191.0-381.0)，嗜酸细胞活化趋化因子-3为110.0pg/mL(82.3-133.0)vs 203.0pg/mL(164.0-358.0)，总IgE为59.8kU/L(21.7-161.0)vs106.0kU/L(42.7-228.0)(对于杜匹鲁单抗vs安慰剂，从基线的中值变化均为P<0.0001)。第4周、第12周和第24周，杜匹鲁单抗vs安慰剂从基线变化的中值分别如下：TARC，-109.0pg/mL vs-1.5pg/mL，-109.0pg/mL vs-9.0pg/mL，-115.5pg/mL vs-35.0pg/mL；嗜酸细胞活化趋化因子-3，-109.1pg/mL vs-4.0pg/mL，-118.4pg/mL vs-14.5pg/mL，-88.6pg/mL vs-9.0pg/mL；总IgE，-13.6kU/L vs-0.7kU/L，-32.1kU/L vs-1.8kU/L，-45.7kU/L vs-8.6kU/L(所有P<0.0001)。
综上所述，在24周的治疗期内，杜匹鲁单抗治疗导致EoE青少年和成人的血清TARC和血浆嗜酸细胞活化趋化因子-3快速且持续的抑制，以及血清总IgE逐渐抑制。与EoE和其他2型炎症疾病的先前发现一致，这些结果证明了2型炎症的IL-4/IL-13依赖性调节。
结论
该3期临床试验的A部分数据表明，每周施用杜匹鲁单抗可有效改善吞咽困难以及治疗EoE的组织学和内镜测量。该试验满足了其两个共同的主要终点(DSQ的绝对变化和第24周食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数达到≤6eos/hpf的患者比例)以及所有关键次要终点。值得注意的是，这是第一次使用生物制剂的3期试验报告了患者吞咽食物能力的改善，正如经验证的DSQ报告的那样。与安慰剂治疗的患者中的5％相比，用杜匹鲁单抗治疗的60％的患者的食管嗜酸性粒细胞计数降至正常范围。如EREFS测量的，与安慰剂相比，杜匹鲁单抗还减少了异常内镜发现。此外，转录谱分析显示了杜匹鲁单抗使EoE相关基因(包括与嗜酸性粒细胞和2型炎症、上皮增殖、屏障功能、重塑和纤维化相关的基因)的表达正常化，这表明疾病的分子逆转超过了嗜酸性炎症的减少。
实施例2：杜匹鲁单抗治疗的嗜酸细胞性食管炎患者的转录组分析
这个实施例描述了2期临床试验(NCT02379052)中参与的成人患者(18-65岁)的转录组分析结果。参与2期试验的24名安慰剂患者中的19名(79％)和23名杜匹鲁单抗患者中的22名(96％)获得了转录组结果；6名患者未获得活检标本，他们被排除在分析之外。
方法
患者完成了35天的筛选期，随后1:1随机分组，以接受每周一次(QW)皮下注射300mg杜匹鲁单抗(第1天的负荷剂量为600mg)或匹配的安慰剂，为期12周，并进行了16周的随访。在筛选和第12周内镜检查过程中从近端、中段和远端食管收集用于RNA分析的夹取活检组织，并在RNALater中冷冻。RNA提取后，使用KAPA链mRNA序列试剂盒(mRNA-Seq Kit)(KAPA Biosystems，Roche Sequenting and Life Sciences，MA，USA)制备链特异性RNA序列文库。扩增后，通过多路单-读长(single-read)运行(80bp，40M读长)在Illumina
Figure BDA0003950009950000431
2000(Illumino Inc.，CA，USA)上进行测序。使用Array Studio软件(OmicSoft，NC，USA)将读长映射到人类基因组(National Center for Biotechnology Information GRCh37)。使用DESeq2包鉴定差异表达的基因。
使用考虑了阳性和阴性基因集的基因集富集分析工具(www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/33599-gsea2)，使用EoE中前50个上调最多和前50个下调最多的基因来生成标准化富集评分(NES)。首先将基因表达谱转化为z-评分，并使用每个样本中的排序z-评分计算单个样本NES，以表示样本的总体疾病特征分数，表示为EoE-NES。
使用具有来自分子特征数据库(MSigDB，c5.bp.v7.0)的GO生物过程基因集的基因集富集分析(GSEA)进行无偏全局转录组分析。对大小>100的基因集进行预筛选，以确保生物过程特异性，如果EoE与健康以及杜匹鲁单抗治疗后与基线比较的FDR<0.05，则选择顶级GO项。
使用DESeq2版本1.26.0进行差异表达分析。在两个分组(安慰剂和杜匹鲁单抗300mg QW)中，将第12周与基线进行比较。如果达到以下阈值：从基线的相对log变化≥2，q值≤0.05(反映了多次测试的调整)，则认为治疗(杜匹鲁单抗或安慰剂)会显著调节基因。计算以下之间的Pearson相关性：(i)EoE中(疾病vs健康)已公开的基因变化，以及(ii)杜匹鲁单抗治疗后(治疗后vs治疗前)的基因变化。
结果
将第12周与基线进行比较(相对基线≥2，q≤0.05的相对log变化)时，未发现安慰剂组内存在差异表达的基因。在第12周，用杜匹鲁单抗300mg QW治疗vs基线调节了(从基线的相对对数变化≥2，q≤0.05)1,302个基因的表达，DpxOme-EoETM，其中513个下调和789个上调(图5)。由于在取样的所有三个食管区域的治疗后结果高度相似，因此所有样本均呈现平均值。EoE中前50个上调最多的和前50个下调最多的基因用于生成标准化富集评分(EoE-NES)。在这些基因中，杜匹鲁单抗治疗显示EoE-NES显著降低(Wilcoxon秩和检验，P<5.0×10-8)，安慰剂组无明显变化。显示由杜匹鲁单抗引起的表达变化最高的30个基因包括与2型炎症、组织重塑/纤维化、屏障功能和增殖/分化相关的基因(图6)。被杜匹鲁单抗下调的EoE转录组中的上调基因包括ALOX15、CCL26、POSTN、NRXN1和CCR3；疾病中下调的基因和被杜匹鲁单抗上调的基因包括SPINK8和DSG1。
与公开的EoE转录组vs健康转录组进行比较时，用杜匹鲁单抗(第12周vs基线)治疗在第12周使转录组正常化。在公开的EoE基因转录组(vs健康)与DpxOme-EoETM之间观察到强烈的负相关(第12周vs.基线)(皮尔逊相关系数：ρ＝-0.872，P<1×10-6)。对于不符合显著性阈值的基因，存在正常化趋势，而杜匹鲁单抗也显著调节了许多未包括在公开的EoE转录组中的基因。此外，EoE和杜匹鲁单抗特征之间不重叠的许多基因在一个或另一个数据集中无法测量。在EoE中改变并通过杜匹鲁单抗治疗改变的主要基因包括以下基因本体(GO)组：免疫功能/炎症(如白介素-12的产生、B细胞介导的免疫、对1型干扰素的反应)、嗜酸性粒细胞迁移重塑(如，胞外基质分解)、肥大细胞激活、上皮分化(例如角化和角质化)。
在第12周，杜匹鲁单抗调节了2型炎症基因、嗜酸性粒细胞相关的基因以及与肥大细胞激活相关的基因。这些受调节的基因包括CCL26、MUC5B、CLC、IL1RL1、HDC、IL13、FCER1G、GATA2和KIT。在第12周，杜匹鲁单抗治疗减少了嗜酸性粒细胞组织浸润，对取样的所有三个区域的影响相似。嗜酸性粒细胞相关基因表达中观察到的变化与杜匹鲁单抗治疗后食管活检中观察到的酸性粒细胞密度的降低一致。
在第12周，杜匹鲁单抗治疗还调节了与纤维化、基质重塑、TGFβ和整合素信号相关的基因，如胶原蛋白家族基因和屏障相关的基因，包括DSG1、SPINK5、SPINK7和SPINK8。在1型炎症基因、公开的抗IL-13基因以及未被抗IL-13抗体QAX576调节的基因中观察到其他的表达变化。
为了评估基因表达谱与EoE-HSS等级评分、嗜酸性粒细胞计数、粘膜炎症和重塑特征(EoE-EREFS)之间的关系，使用单个基因结果以及NES进行相关性分析。DpxOme-EoETMNES评分与组织学严重性密切相关(ρ＝0.832，P<0.001)，表明分子特征与临床测量有生物学关联。此外，几个单独基因的表达也高度相关。与总EoE-HSS最高度相关的单个基因是CTSC(组织蛋白酶C；ρ＝0.826，P<0.001)，其是一种参与激活其他促炎蛋白酶的蛋白酶。还发现该基因与嗜酸性粒细胞计数(ρ＝0.783，P<0.001)以及其他基因(包括CCL26、CCR3、ANO1和SPINK8)高度相关。观察到与EoE-EREFS从ρ＝0.585至0.623的其他相关性。
本发明范围不受本文描述的具体实施方案的限制。实际上，根据前述说明书和附图，除了本文描述的那些之外，本发明的各种修饰对于本领域技术人员而言将变得明显。这样的修饰旨在落入所附权利要求书的范围之内。本文引用的所有专利和非专利文献的公开内容特意以其整体按引用并入。
序列表
SEQID NO 序列 描述
1 EVQLVESGGGLEQPGGSLRLSCAGSGFTFRDYAMTWVRQAPGKGLEWVSSISGSGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRLSITIRPRYYGLDVWGQGTTVTVS Dupilumab HCVR 氨基酸序列
2 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSIGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGFYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIK Dupilumab LCVR 氨基酸序列
3 GFTFRDYA Dupilumab HCDR1 氨基酸序列
4 ISGSGGNT Dupilumab HCDR2 氨基酸序列
5 AKDRLSITIRPRYYGLDV Dupilumab HCDR3 氨基酸序列
6 QSLLYSIGYNY Dupilumab LCDR1 氨基酸序列
7 LGS Dupilumab LCDR2 氨基酸序列
8 MQALQTPYT Dupilumab LCDR3 氨基酸序列
9 EVQLVESGGGLEQPGGSLRLSCAGSGFTFRDYAMTWVRQAPGKGLEWVSSISGSGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRLSITIRPRYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Dupilumab 重链氨基酸序列
10 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSIGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGFYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Dupilumab轻链氨基酸序列
11 MKVLQEPTCVSDYMSISTCEWKMNGPTNCSTELRLLYQLVFLLSEAHTCIPENNGGAGCVCHLLMDDVVSADNYTLDLWAGQQLLWKGSFKPSEHVKPRAPGNLTVHTNVSDTLLLTWSNPYPPDNYLYNHLTYAVNIWSENDPADFRIYNVTYLEPSLRIAASTLKSGISYRARVRAWAQCYNTTWSEWSPSTKWHNSYREPFEQH 人 IL-4Rα
12 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-39
13 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-40
14 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-41
15 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-42
16 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-43
17 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-44
18 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-45
19 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-46
20 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-47
21 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-48
22 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-49
23 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-50
24 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-51
25 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-52
26 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-53
27 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-54
28 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-55
29 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-56
30 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-57
31 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-58
32 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-59
33 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-60
34 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-61
35 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-62
36 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-63
37 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-64
38 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-65
39 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-66
40 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-67
41 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-68
42 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-69
43 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-70
44 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-71
45 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-72
46 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-73
47 EVQLVQSGGGLVHPGRSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-74
48 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLTCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-75
49 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMHWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-76
50 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGEGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-77
51 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDEAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-78
52 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAGDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-79
53 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFDDYAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-80
54 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-81
55 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-82
56 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-83
57 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-84
58 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-85
59 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-86
60 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-87
61 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-88
62 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-89
63 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-90
64 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-91
65 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-92
66 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-93
67 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLDYWGKGTLVTVSS MEDI-1-VH
68 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSLSANYVFGTGTKLTVL MEDI-1-VL
69 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-2-VH
70 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSQPPNPLFGTGTKLTVL MEDI-2-VL
71 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKLLKNPWGKGTLVTVSS MEDI-3-VH
72 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWFGTPASNYVFGTGTKLTVL MEDI-3-VL
73 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-4-VH
74 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSSPPQPIFGTGTKLTVL MEDI-4-VL
75 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYDWGKGTLVTVSS MEDI-5-VH
76 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSSPPQPIFGTGTKLTVL MEDI-5-VL
77 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-6-VH
78 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTYHPIFGTGTKLTVL MEDI-6-VL
79 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQYWGKGTLVTVSS MEDI-7-VH
80 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSSPPQPIFGTGTKLTVL MEDI-7-VL
81 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQYWGKGTLVTVSS MEDI-8-VH
82 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTYHPIFGTGTKLTVL MEDI-8-VL
83 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-9-VH
84 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTMYPLFGTGTKLTVL MEDI-9-VL
85 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYDWGKGTLVTVSS MEDI-10-VH
86 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVLTPIFGTGTKLTVL MEDI-10-VL
87 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWFYDWGKGTLVTVSS MEDI-11-VH
88 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPSMIPLFGTGTKLTVL MEDI-11-VL
89 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWFYDWGKGTLVTVSS MEDI-12-VH
90 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTMYPLFGTGTKLTVL MEDI-12-VL
91 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYDWGKGTLVTVSS MEDI-13-VH
92 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTLQPLFGTGTKLTVL MEDI-13-VL
93 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-14-VH
94 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPPTKPLFGTGTKLTVL MEDI-14-VL
95 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-15-VH
96 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTHRHPLFGTGTKLTVL MEDI-15-VL
97 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-16-VH
98 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTYHPIFGTGTKLTVL MEDI-16-VL
99 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQHWGKGTLVTVSS MEDI-17-VH
100 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVDRPIFGTGTKLTVL MEDI-17-VL
101 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQHWGKGTLVTVSS MEDI-18-VH
102 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTPMPVFGTGTKLTVL MEDI-18-VL
103 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQHWGKGTLVTVSS MEDI-19-VH
104 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTYHPIFGTGTKLTVL MEDI-19-VL
105 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-20-VH
106 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-20-VL
107 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSASYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-21-VH
108 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEAVYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-21-VL
109 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-22-VH
110 QPVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-22-VL
111 QVQLVQSGAEVRKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-23-VH
112 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPPGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-23-VL
113 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPRGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-24-VH
114 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-24-VL
115 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPRGGSASYAQKFQGRVSMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-25-VH
116 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTTATLAITGLQTGDEADYYCGTWVTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-25-VL
117 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-26-VH
118 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-26-VL
119 QVQLVQSGAEVRKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRPEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTQVTVSS MEDI-27-VH
120 QSVLTQPPLVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQRLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-27-VL
121 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGNGTLVTVSS MEDI-28-VH
122 LPVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSSIGNSYVSWYQQLPGAAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGFRSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-28-VL
123 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTRVTVSS MEDI-29-VH
124 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-29-VL
125 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-30-VH
126 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQRLPGAAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-30-VL
127 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-31-VH
128 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSSIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWATSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-31-VL
129 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-32-VH
130 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTAWEWPFGTGTKLTVL MEDI-32-VL
131 QVQLVQSGAEEKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-33-VH
132 QSALTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-33-VL
133 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVSMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-34-VH
134 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-34-VL
135 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-35-VH
136 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-35-VL
137 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSASYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-36-VH
138 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDSSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-36-VL
139 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPRGGSTSYAQKFQGRVAMTRDTSTSTVYMELSSLRPEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-37-VH
140 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGGSSIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-37-VL
141 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSASYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-38-VH
142 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-38-VL
143 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPRGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-39-VH
144 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTAWEWPFGTGTKLTVL MEDI-39-VL
145 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-40-VH
146 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDSSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-40-VL
147 QVQLVQSGAEVRKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRPEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSG MEDI-41-VH
148 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSTNIGNSYVSWYQRLPGTAPKLLIYDNNKRPPGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-41-VL
149 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWVGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSGDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-42-VH
150 QAVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQRLPGAAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTGWEWPFGTGTKLTVL MEDI-42-VL
151 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPRGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-37GL-VH
152 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGGSSIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-37GL-VL
153 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISSGGGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKLRRYFDYWGQGTLVTVSS AJOU-1-VH
154 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISSGGSSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLHLQMNSLRAEDTAVYYCARGPQRSATAVFDYWGQGTLVTVSS AJOU-2-VH
155 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSWISPNSGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRPLSAAWSHSSYYNAMDVWGQGTLVTVSS AJOU-3-VH
156 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSLISHSGSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-4-VH
157 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSGISHGSGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-5-VH
158 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSGISHGNGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKTGRHFDYWGQGTLVTVSS AJOU-6-VH
159 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISPSGSSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSYRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-7-VH
160 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISPSGGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAKRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-8-VH
161 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISPGSGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKFRRHFDYWGQGTLVTVSS AJOU-9-VH
162 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISSGGGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-10-VH
163 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITSSGRSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-69-VH
164 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITSSGANIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-70-VH
165 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITSSGGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-71-VH
166 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITAGGGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-72-VH
167 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRHAMAWVRQAPGKGLEWVSAITSSGRSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-83-VH
168 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNYVNWYQQLPGTAPKLLIYDNSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDASLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-33-VL
169 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNNVSWYQQLPGTAPKLLIYANSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGSWDDSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-34-VL
170 QSVLTQPPSAPGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNSVNWYQQLPGTAPKLLIYDDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCDAWDSSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-35-VL
171 QSVLTQPPSASGTPGQRVTLSCTGSSSNIGSNYVSWYQQLPGTAPKLLIYADSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDDSLSGYVFGGGTKLTVL AJOU-36-VL
172 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSSSSSNIGSNYVSWYQQLPGTAPKLLIYSDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGSWDYSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-37-VL
173 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGNNTVSWYQQLPGTAPKLLIYDNSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCGSWDYSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-38-VL
174 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGNNDVNWYQQLPGTAPKLLIYYDSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDASLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-39-VL
175 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNAVNWYQQLPGTAPKLLIYYDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDDSLNGYVFGGGTKLTVL AJOU-40-VL
176 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVTWYQQLPGTAPKLLIYDDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGSWDYSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-41-VL
177 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVL AJOU-42-VL
178 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVL AJOU-77-VL
179 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLRGYVLGGGTKLTVL AJOU-78-VL
180 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGYWDYSLSGYVLGGGTKLTVL AJOU-79-VL
181 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVL AJOU-80-VL
182 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSANSRTDGFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-86-VL
183 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSAQFGSRDNFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-87-VL
184 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSTKQMHNYQFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-88-VL
185 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSLLRGENLQFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-89-VL
186 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSPLFPDSGSFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-90-VL
187 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSAALDLSPSFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-91-VL
188 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGISWVRQAPGQGLEWMGWISVYNGKTNYAQKLQGRVTMTTDTSTTTAYMEMRSLRSDDTAVYYCARGSGYDLDYWGQGTLVSVSS REGN-VH-3
189 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPGRTMVRGGIRYYYGMDVWGQGTTVTVSS REGN-VH-19
190 EVKLAESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSHWMNWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQLNSLIAEDTAVYYCARDRGVRPPRGAFDIWGQGTMVTVSS REGN-VH-35
191 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNSYGISWVRQAPGQGLEWMGWIRTYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDEARIVVAGTTPYYYGMDVWGQGTTVTVSS REGN-VH-51
192 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTISDHYMSWIRQAPGKGLEWISYISSSGSKIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARTRQLVGDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-67
193 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDNYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIRWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKEGGYSGYRPGPFFDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-83
194 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGISWVRQAPGQGLEWMGWISVYNGHTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGSGYDFDSWGQGTLVTVSS REGN-VH-99
195 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVRRFFDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-115
196 QVQLVQSGPEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGISWVRQAPGQGLEWMGWISVYNGNINYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMDLRSLRSDDTAVYYCARGSGYDFDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-147
197 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKDSAYTFNRYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYTGNTVYAQKLQGRVTMTTDNSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDKSIFGVVRGFDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-163
198 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNALGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTFSSLQPEDFATYYCLQDFNYPYTFGQGTKLEIK REGN-VL-11
199 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTISCRASQGVSSWLAWYQQKPGNAPKLLISAASSIQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPLTFGGGTKVEIK REGN-VL-27
200 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSFQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQANSFPLTFGGGTTVEIK REGN-VL-43
201 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISIWLAWYQQSPGKAPKLLINVASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFVTYYCQQANSFPITFGQGTRLATK REGN-VL-59
202 DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCWASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIFAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIR REGN-VL-75
203 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNYNLAWYQHKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGGGTKVEIK REGN-VL-91
204 AIQMTQSSSSLSASVGDRVTITCRASQAIRNALGWYQQKPGKAPKVLIYAASSLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYDYPYTFGQGTKLEIK REGN-VL-107
205 DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCWASQGIISYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCHQLKSYPITFGQGTRLEIK REGN-VL-123
206 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNALGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSASGTDFTLTISSLQPEDFAAYYCLQDYNYPYTFGQGTKLEIK REGN-VL-155
207 EIVMTQSPVTLSLSPGERATLPCRASQSVSSSLAWYQQKAGQSPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISNLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGGGTKVEIK REGN-VL-171

Claims (49)

1.一种治疗、预防或改善≥12岁受试者的至少一种嗜酸细胞性食管炎(EoE)症状的方法，所述方法包含向所述受试者施用一个或多个剂量的白介素-4受体(IL-4R)抑制剂，其中在治疗开始前，所述受试者具有≥10的吞咽困难症状问卷(DSQ)评分，并且其中所述IL-4R抑制剂是结合IL-4Rα的抗体或其抗原结合片段，并且包含：包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)1、包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链互补决定区(LCDR)1、包含SEQID NO:7的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。
2.权利要求1的方法，其中所述受试者是成人。
3.权利要求1的方法，其中所述受试者是≥12岁且<18岁的青少年。
4.权利要求1至3任一项的方法，其中在治疗开始前，所述受试者具有通过内镜活检在食管近端区域、食管中段区域和食管远端区域中的至少两个区域测量的≥15eos/hpf的上皮内嗜酸细胞性浸润峰值细胞计数。
5.权利要求1至4任一项的方法，其中所述受试者患有伴随的特应性疾病。
6.权利要求5的方法，其中所述伴随的特应性疾病是食物过敏、特应性皮炎、哮喘、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎或过敏性结膜炎。
7.权利要求1至6任一项的方法，其中所述受试者患有嗜酸细胞性胃肠炎。
8.权利要求1至7任一项的方法，其中所述受试者具有持续至少4周，平均每周至少两次吞咽困难发作的病史。
9.权利要求1至8任一项的方法，其中所述受试者对使用吞咽的局部皮质类固醇和/或质子泵抑制剂(PPI)的治疗无反应或反应不足。
10.权利要求1至9任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂包含：包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)。
11.权利要求1至10任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂包含：包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链。
12.权利要求1至11任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂是杜匹鲁单抗或其生物等效物。
13.权利要求1至12任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂以约50mg至约600mg的剂量给药。
14.权利要求13的方法，其中所述IL-4R抑制剂以约300mg的剂量给药。
15.权利要求13或14的方法，其中所述IL-4R抑制剂一周给药一次或每两周给药一次。
16.权利要求1至15任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂与第二治疗剂或疗法联合给药。
17.权利要求16的方法，其中所述第二治疗剂或疗法是IL-1β抑制剂、IL-5抑制剂、IL-9抑制剂、IL-13抑制剂、IL-17抑制剂、IL-25抑制剂、TNFα抑制剂、嗜酸细胞活化趋化因子-3抑制剂、IgE抑制剂、前列腺素D2抑制剂、免疫抑制剂、局部皮质类固醇、口服皮质类固醇、全身皮质类固醇、吸入皮质类固醇、糖皮质类固醇、PPI、减充血剂、抗组胺剂、非甾体抗炎药(NSAID)、食管扩张、过敏原去除或饮食管理。
18.权利要求17的方法，其中所述IL-4R抑制剂与PPI联合给药。
19.权利要求18的方法，其中所述PPI以选自以下的高剂量方案施用：40mg QD或20mgBID剂量的奥美拉唑、40mg QD或20mg BID剂量的埃索美拉唑、60mg QD或30mg BID剂量的兰索拉唑、60mg QD剂量的右兰索拉唑，40mg QD或20mg BID剂量的雷贝拉唑，和80mg QD或40mg BID剂量的泮托拉唑。
20.权利要求1至19任一项的方法，其中使用所述IL-4R抑制剂的治疗使一种或多种EoE相关的和/或2型炎症相关基因的表达正常化。
21.权利要求1至20任一项的方法，其中使用所述IL-4R抑制剂的治疗减轻所述受试者的吞咽困难。
22.权利要求21的方法，其中使用所述IL-4R抑制剂的治疗：
在治疗24周后，相对于基线，使所述受试者的DSQ评分降低至少30％；和/或
在治疗24周后，相对于基线，使所述受试者的DSQ评分降低至少10分。
23.权利要求1至20任一项的方法，其中使用所述IL-4R抑制剂的治疗减少了所述受试者的食管上皮内嗜酸性粒细胞。
24.权利要求23的方法，其中使用所述IL-4R抑制剂的治疗：
在治疗24周后，相对于基线，所述受试者的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数减少至少50％；和/或
在治疗24周后，所述受试者的食管上皮内嗜酸性粒细胞峰值计数减少至≤6eos/hpf。
25.权利要求1至24任一项的方法，其中在治疗24周后，相对于基线，使用所述IL-4R抑制剂的治疗将所述受试者的EoE-EREFS评分减少至少25％。
26.权利要求1至25任一项的方法，其中使用所述IL-4R抑制剂的治疗改善所述受试者吞咽食物的能力。
27.权利要求1至26任一项的方法，其中使用所述IL-4R抑制剂的治疗：
减少选自TARC、嗜酸细胞活化趋化因子-3和IgE的生物标志物的表达；
使图3中所示的一种或多种2型炎症相关基因的表达正常化；和/或
使图6中所示的一种或多种EoE相关基因的表达正常化。
28.一种改善受试者吞咽食物的能力的方法，所述方法包含：
向患有嗜酸细胞性食管炎(EoE)的所述受试者施用一个或多个剂量的白介素-4受体(IL-4R)抑制剂，其中所述IL-4R抑制剂是抗体或其抗原结合片段，其结合IL-4Rα并且包含：包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)1、包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链互补决定区(LCDR)1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。
29.权利要求28的方法，其中所述受试者≥12岁。
30.权利要求29的方法，其中所述受试者是成人。
31.权利要求29的方法，其中所述受试者是≥12岁且<18岁的青少年。
32.权利要求28至31任一项的方法，其中在治疗开始前，所述受试者具有≥10的吞咽困难症状问卷(DSQ)评分。
33.权利要求28至32任一项的方法，其中所述受试者患有伴随的特应性疾病。
34.权利要求33的方法，其中所述伴随的特应性疾病是食物过敏、特应性皮炎、哮喘、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎或过敏性结膜炎。
35.权利要求28至34任一项的方法，其中所述受试者患有嗜酸细胞性胃肠炎。
36.权利要求28至35任一项的方法，其中所述受试者具有持续至少4周，平均每周至少两次吞咽困难发作的病史。
37.权利要求28至36任一项的方法，其中所述受试者对使用吞咽的局部皮质类固醇和/或质子泵抑制剂(PPI)的治疗无反应或反应不足。
38.权利要求28至37任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂包含：包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)。
39.权利要求28至38任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂包含：包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链。
40.权利要求28至39任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂是杜匹鲁单抗或其生物等效物。
41.权利要求28至40任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂以约50mg至约600mg的剂量给药。
42.权利要求41的方法，其中所述IL-4R抑制剂以约300mg的剂量给药。
43.权利要求41或42的方法，其中所述IL-4R抑制剂一周给药一次或每两周给药一次。
44.权利要求28至43任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂与第二治疗剂或疗法联合给药。
45.权利要求44的方法，其中所述第二治疗剂或疗法是IL-1β抑制剂、IL-5抑制剂、IL-9抑制剂、IL-13抑制剂、IL-17抑制剂、IL-25抑制剂、TNFα抑制剂、嗜酸细胞活化趋化因子-3抑制剂、IgE抑制剂、前列腺素D2抑制剂、免疫抑制剂、局部皮质类固醇、口服皮质类固醇、全身皮质类固醇、吸入皮质类固醇、糖皮质类固醇、PPI、减充血剂、抗组胺剂、非甾体抗炎药(NSAID)、食管扩张、过敏原去除或饮食管理。
46.权利要求45的方法，其中所述IL-4R抑制剂与PPI联合给药。
47.权利要求46的方法，其中所述PPI以选自以下的高剂量方案施用：40mg QD或20mgBID剂量的奥美拉唑、40mg QD或20mg BID剂量的埃索美拉唑、60mg QD或30mg BID剂量的兰索拉唑、60mg QD剂量的右兰索拉唑，40mg QD或20mg BID剂量的雷贝拉唑，和80mg QD或40mg BID剂量的泮托拉唑。
48.权利要求28至47任一项的方法，其中使用所述IL-4R抑制剂的治疗：
在治疗24周后，相对于基线，使所述受试者的DSQ评分降低至少30％；
在治疗24周后，相对于基线，使所述受试者的DSQ评分降低至少10分；和/或
改善所述受试者的吞咽困难评分的患者总体印象的变化(PGIC)。
49.权利要求1至48任一项的方法，其中所述IL-4R抑制剂包含在选自玻璃小瓶、注射器、笔式递送装置和自动注射器的容器中。
CN202180036330.4A 2020-05-22 2021-05-21 通过施用il-4r抑制剂治疗嗜酸细胞性食管炎的方法 Pending CN115768516A (zh)

Applications Claiming Priority (15)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063029085P 2020-05-22 2020-05-22
US63/029,085 2020-05-22
US202063066705P 2020-08-17 2020-08-17
US63/066,705 2020-08-17
US202063071264P 2020-08-27 2020-08-27
US63/071,264 2020-08-27
US202063088147P 2020-10-06 2020-10-06
US63/088,147 2020-10-06
US202063121088P 2020-12-03 2020-12-03
US63/121,088 2020-12-03
US202163144939P 2021-02-02 2021-02-02
US63/144,939 2021-02-02
EP21315068.3 2021-04-21
EP21315068 2021-04-21
PCT/US2021/033693 WO2021237110A1 (en) 2020-05-22 2021-05-21 Methods for treating eosinophilic esophagitis by administering an il-4r inhibitor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115768516A true CN115768516A (zh) 2023-03-07

Family

ID=76444669

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180036330.4A Pending CN115768516A (zh) 2020-05-22 2021-05-21 通过施用il-4r抑制剂治疗嗜酸细胞性食管炎的方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20210363264A1 (zh)
EP (1) EP4153300A1 (zh)
JP (1) JP2023527775A (zh)
KR (1) KR20230015965A (zh)
CN (1) CN115768516A (zh)
AU (1) AU2021277398A1 (zh)
BR (1) BR112022022235A2 (zh)
CA (1) CA3174431A1 (zh)
IL (1) IL298257A (zh)
MX (1) MX2022014440A (zh)
WO (1) WO2021237110A1 (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI697334B (zh) 2013-06-04 2020-07-01 美商再生元醫藥公司 藉由投與ｉｌ-４ｒ抑制劑以治療過敏及增強過敏原-特異之免疫療法的方法
TWI682781B (zh) 2013-07-11 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 藉由投與ｉｌ－４ｒ抑制劑治療嗜酸性食道炎的方法
CA2939506C (en) 2014-02-28 2022-08-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating skin infection by administering an il-4r antagonist
KR20220151021A (ko) 2016-09-01 2022-11-11 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Il-4r 길항제를 투여함에 의해 알레르기를 예방하거나 치료하기 위한 방법
JP2021523188A (ja) 2018-05-13 2021-09-02 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． Ｉｌ−４ｒ阻害剤を投与することによって重度のアトピー性皮膚炎を処置するための方法
CN114173819A (zh) 2019-08-05 2022-03-11 瑞泽恩制药公司 通过施用il-4r拮抗剂治疗过敏和增强过敏原特异性免疫疗法的方法
WO2024011251A1 (en) 2022-07-08 2024-01-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating eosinophilic esophagitis in pediatric by administering an il-4r antagonist

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2001272925A1 (en) 2000-05-26 2001-12-11 Immunex Corporation Use of interleukin-4 antagonists and compositions thereof
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
MXPA06004853A (es) 2003-11-07 2006-07-06 Immunex Corp Anticuerpos que se aglutinan al receptor 4 de interleucina.
US8030003B2 (en) 2004-12-07 2011-10-04 Children's Hospital Medical Center Diagnosis of eosinophilic esophagitis based on presence of an elevated level of eotaxin-3
LT2769992T (lt) 2006-10-02 2021-04-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Didelio afiniškumo žmogaus antikūnai, atpažįstantys žmogaus il-4 receptorių
US7608693B2 (en) 2006-10-02 2009-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-4 receptor
US8092804B2 (en) 2007-12-21 2012-01-10 Medimmune Limited Binding members for interleukin-4 receptor alpha (IL-4Rα)-173
EP3354280B1 (en) 2010-10-06 2020-07-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stabilized formulations containing anti-interleukin-4 receptor (il-4r) antibodies
DK2644698T3 (en) * 2010-11-17 2018-01-22 Chugai Pharmaceutical Co Ltd MULTI-SPECIFIC ANTIGEN-BINDING MOLECULE WITH ALTERNATIVE FUNCTION TO BLOOD COAGULATION FACTOR FUNCTION VIII
US8790651B2 (en) * 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
TWI682781B (zh) * 2013-07-11 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 藉由投與ｉｌ－４ｒ抑制劑治療嗜酸性食道炎的方法
EP3448391A4 (en) * 2016-04-27 2019-12-18 AbbVie Inc. METHODS OF TREATING DISEASES IN WHICH IL-13 ACTIVITY IS HARMFUL WITH ANTI-IL-13 ANTIBODIES
CN107474134B (zh) 2016-06-08 2021-07-27 苏州康乃德生物医药有限公司 用于结合白细胞介素4受体的抗体
TWI728172B (zh) * 2016-08-18 2021-05-21 美商愛戴爾製藥股份有限公司 治療嗜伊紅性食道炎之方法
US11053309B2 (en) * 2017-08-04 2021-07-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating active eosinophilic esophagitis
JP2021514513A (ja) * 2018-02-21 2021-06-10 アデア ファーマシューティカルズ，ユーエス，エル．ピー． 好酸球性食道炎を管理する方法
CN112261954A (zh) * 2018-06-14 2021-01-22 味之素株式会社 具有针对抗体的亲和性物质和生物正交性官能团的化合物或其盐
KR102330596B1 (ko) 2018-11-09 2021-11-26 아주대학교산학협력단 인간 il-4 수용체 알파에 대한 고친화도 인간 항체 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
JP2023527775A (ja) 2023-06-30
WO2021237110A1 (en) 2021-11-25
EP4153300A1 (en) 2023-03-29
IL298257A (en) 2023-01-01
CA3174431A1 (en) 2021-11-25
BR112022022235A2 (pt) 2023-03-28
MX2022014440A (es) 2023-02-27
KR20230015965A (ko) 2023-01-31
AU2021277398A1 (en) 2023-02-02
US20210363264A1 (en) 2021-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210363237A1 (en) Methods for treating active eosinophilic esophagitis
JP6837105B2 (ja) Ｉｌ−４ｒ阻害剤の投与による好酸球性食道炎を治療する方法
CN109789196B (zh) 用于通过施用il-4r拮抗剂来预防或治疗变态反应的方法
CN115768516A (zh) 通过施用il-4r抑制剂治疗嗜酸细胞性食管炎的方法
TWI814575B (zh) 藉由投與il-4r拮抗劑治療異位性皮膚炎的方法
JP7434456B2 (ja) 抗ｉｌ－１３抗体を使用する、ｉｌ－１３活性が有害である疾患の治療方法
CN115427450A (zh) 通过施用il-4r拮抗剂治疗特应性皮炎的方法
JP2024016237A (ja) 活動性好酸球性食道炎を治療する方法
RU2776651C2 (ru) Способы лечения активного эозинофильного эзофагита
US20240034798A1 (en) Methods for treating eosinophilic esophagitis by administering an il-4r antagonist
TW202041536A (zh) 藉由投與il-4r拮抗劑治療異位性皮膚炎的方法
EA045955B1 (ru) Способы лечения заболеваний, при которых активность il-13 оказывает негативное влияние, с применением антител против il-13

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination