CN115683798A - 一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒及提取测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速高效提取测定茶叶中茶色素(茶红素、茶黄素和茶褐素)的试剂盒及提取测定方法。试剂盒包括萃取液A，萃取液B和萃取液C以及三种不同类型的预制离心管Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ。茶色素提取测定方法包括如下步骤：(1)浸提茶样；(2)用萃取液A充分萃取；(3)离心机离心；(4)用不同类型预制离心管配置比色溶液；(5)用分光光度计测定。本发明能够有效控制环境以及人员对检测结果的影响，且操作简单，省时高效，有效保证茶叶中茶色素的快速高效、准确检测。
Description
技术领域
本发明属于食品检测技术领域，具体是一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒及提取测定方法。
背景技术
红茶在发酵过程中，以儿茶素为主的多酚类化合物在多种酶的作用下氧化为茶色素。茶色素具有抗氧化、降血脂等多重保健功效，也是红茶茶汤“浓、强、鲜”等特征的物质基础。其中茶红素、茶黄素和茶褐素是茶色素的主要成分,对茶汤品质起重要作用，测定其含量既可作为茶叶感官审评的一种有效补充，也是品质鉴定的一种有价值的理化指标。快速高效测定茶叶中茶色素的含量对茶树新品种选育，了解红茶品质形成规律及改进茶叶加工工艺技术具有重要指导意义。目前，溶剂提取法是提取茶色素最为常用的方法，该方法利用茶色素在提取溶剂中具有良好溶解性的特点，从而实现茶色素的提取分离。然而，传统的提取方法操作步骤繁琐、工作量大，茶色素测定过程中环境温度、试剂配制浓度及操作人员的熟练度等因素均会对结果产生一定程度的影响，导致不同人员、不同温湿度环境以及实验室之间存在一定差异，检测结果对环境及操作人员的要求较高，且提取效率低下，难以实现快速、高通量测定。
通过使用茶色素提取试剂盒能够有效控制环境以及人员对检测结果的影响，且检测效率高，可大批量进行测定。而目前，国内外还未有快速提取茶色素相关的试剂盒，因此，本发明能填补相关快速提取茶色素的空白，为茶叶质量检验和科研育种提供重要依据。
发明内容
本发明是为了解决现有茶色素提取过程中操作步骤繁琐、工作量大、效率低，且操作人员的熟练度等因素均会对结果产生一定程度的影响的问题，提供一种能够有效控制环境以及人员对检测结果的影响，快速高效准确测定茶叶中茶色素的试剂盒及提取测定方法。
为了实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒，所述试剂盒内的试剂包括萃取液A，萃取液B和萃取液C以及三种不同类型的预制离心管Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ，其中萃取液A为乙酸乙酯(AR)，萃取液B为95％的乙醇，萃取液C为正丁醇(AR)；离心管Ⅰ为10ml连盖圆底离心管，离心管Ⅱ为10ml预制0.05g NaHCO3的连盖圆底离心管，离心管Ⅲ为10ml预制0.4g H2C2O4的连盖圆底离心管。
所述的一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒的提取测定方法，包括如下步骤：
1)制备茶样：准确称取1g(精确至0.01g)干茶样置于100ml锥形瓶中，加入50ml沸水，在沸水浴中浸提5min，浸提完毕后取出摇匀，趁热过滤于三角瓶中，冷却后备用；
2)萃取：吸取上述待测液4ml于10ml离心管Ⅰ中，加4ml萃取液A，随即震荡摇匀后，置于摇床上以50Hz/s摇匀5min，使其充分萃取；
3)将上述离心管Ⅰ置于离心机中以5000r/min离心5min，随后用移液枪将分层后的上层液和下层液分别吸取到对应的离心管Ⅰ中，盖好盖子后备用；
4)吸取上述上层液400μL于10ml离心管Ⅰ中，加入4.6ml萃取液B，充分震荡涡旋后得到溶液a；
5)吸取步骤3)中的下层液400μL于离心管Ⅲ中，依次加入3ml萃取液B和1.6ml蒸馏水，充分震荡涡旋后得到溶液d；
6)在离心管Ⅱ中加入2ml蒸馏水迅速涡旋后，吸取步骤3)中的上层液于该离心管，强烈振荡涡旋30s后，置于离心机中以5000r/min离心5min，吸取该溶液中的上层液800μL于10ml离心管Ⅰ中，加入4.2ml萃取液B，充分震荡涡旋后得到溶液c；
7)吸取步骤1)中待测液4ml于离心管Ⅰ中，加4ml萃取液C，随即震荡摇匀后，置于摇床上以50Hz/s摇匀5min，使其充分萃取，将上述离心管置于离心机中以5000r/min离心5min，随后用移液枪吸取800μL水层(下层)溶液于离心管Ⅲ中，依次加入3ml萃取液B及1.6ml蒸馏水，充分震荡涡旋后得到溶液b；
8)用1cm比色皿，以萃取液B作空白参比，在380nm波长处分别测定各溶液的吸光值；
9)结果计算:
茶黄素(％)＝Ac×2.25/(m×w)×100％
茶红素(％)＝(2Aa+2Ad-Ac-2Ab)×7.06/(m×w)×100％
茶褐素(％)＝7.06×2Ab/(m×w)×100％
式中，m为试样质量(g)；W-试样干物质含量(％)；Aa-溶液a的吸光度；Ab一溶液b的吸光度；Ac-溶液c的吸光度；Ad-溶液d的吸光度。
本发明的一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒及提取测定方法，具有如下有益效果：相比传统的提取测定方法，可以高通量的检测茶样中的茶色素，且操作简单，易于快速掌握，效率更高、重复性更好，能够有效控制环境以及人员对检测结果的影响，有效保证茶叶茶色素检测的准确、高效进行。
具体实施方式
本发明的一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒，试剂盒内的试剂包括萃取液A，萃取液B和萃取液C以及三种不同类型的预制离心管Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ，其中萃取液A为乙酸乙酯(AR)，萃取液B为95％的乙醇，萃取液C为正丁醇(AR)；离心管Ⅰ为10ml连盖圆底离心管，离心管Ⅱ为10ml预制0.05g NaHCO3的连盖圆底离心管，离心管Ⅲ为10ml预制0.4g H2C2O4的连盖圆底离心管。
使用该试剂盒提取测定茶叶中茶色素的方法，包括如下步骤：
1)制备茶样：准确称取1g(精确至0.01g)干茶样置于100ml锥形瓶中，加入50ml沸水，在沸水浴中浸提5min，浸提完毕后取出摇匀，趁热过滤于三角瓶中，冷却后备用；
2)萃取：吸取上述待测液4ml于10ml离心管Ⅰ中，加4ml萃取液A，随即震荡摇匀后，置于摇床上以50Hz/s摇匀5min，使其充分萃取；
3)将上述离心管Ⅰ置于离心机中以5000r/min离心5min，随后用移液枪将分层后的上层液和下层液分别吸取到对应的离心管Ⅰ中，盖好盖子后备用；
4)吸取上述上层液400μL于10ml离心管Ⅰ中，加入4.6ml萃取液B，充分震荡涡旋后得到溶液a；
5)吸取步骤3)中的下层液400μL于离心管Ⅲ中，依次加入3ml萃取液B和1.6ml蒸馏水，充分震荡涡旋后得到溶液d；
6)在离心管Ⅱ中加入2ml蒸馏水迅速涡旋后，吸取步骤3)中的上层液于该离心管，强烈振荡涡旋30s后，置于离心机中以5000r/min离心5min，吸取该溶液中的上层液800μL于10ml离心管Ⅰ中，加入4.2ml萃取液B，充分震荡涡旋后得到溶液c；
7)吸取步骤1)中待测液4ml于离心管Ⅰ中，加4ml萃取液C，随即震荡摇匀后，置于摇床上以50Hz/s摇匀5min，使其充分萃取，将上述离心管置于离心机中以5000r/min离心5min，随后用移液枪吸取800μL水层(下层)溶液于离心管Ⅲ中，依次加入3ml萃取液B及1.6ml蒸馏水，充分震荡涡旋后得到溶液b；
8)用1cm比色皿，以萃取液B作空白参比，在380nm波长处分别测定各溶液的吸光值；
9)结果计算:
茶黄素(％)＝Ac×2.25/(m×w)×100％
茶红素(％)＝(2Aa+2Ad-Ac-2Ab)×7.06/(m×w)×100％
茶褐素(％)＝7.06×2Ab/(m×w)×100％
式中，m为试样质量(g)；W-试样干物质含量(％)；Aa-溶液a的吸光度；Ab一溶液b的吸光度；Ac-溶液c的吸光度；Ad-溶液d的吸光度
实验例1本发明试剂盒提取测定与传统方法测定茶黄素的重复性实验
对茶样1、2、3分别采用本发明的试剂盒以及传统方法提取测定茶黄素，重复3次，结果如表1所示：
表1本发明试剂盒提取测定与传统方法测定茶黄素的重复性实验结果表
结果显示，本发明试剂盒重复性测定茶样1、2和3中茶黄素含量的平均值分别是1.48±0.02、1.22±0.02和1.50±0.02，使用传统方法萃取测定的平均值分别是1.49±0.06、1.22±0.05和1.59±0.04，使用本发明试剂盒提取测定的变异系数分别为1.63、2.04和1.58，而使用传统方法萃取测定的变异系数分别为4.30、4.08和2.80。两种方法测定的平均值几乎无差异，但使用本发明试剂盒提取测定的变异系数明显更小，表明本发明的重复性更加稳定。
实验例2本发明试剂盒提取测定与传统方法测定茶红素的重复性实验
对茶样1、2、3分别采用本发明的试剂盒以及传统方法提取测定茶红素，重复3次，结果如表2所示：
表2本发明试剂盒提取测定与传统方法测定茶红素的重复性实验结果表
结果显示，本发明试剂盒重复性测定茶样1、2和3中茶红素含量的平均值分别是25.11±0.34、19.79±0.13和31.69±0.49，使用传统方法萃取测定的平均值分别是26.87±0.79、21.85±1.09和31.25±0.84；使用本发明试剂盒提取测定的变异系数分别为1.37、0.68和1.54，而使用传统方法萃取测定的变异系数分别为2.94、4.98和2.69。两种方法测定的平均值在茶样1与茶样2中有略有差异，茶样3无显著差异。两种方法测定的变异系数同样是使用本发明试剂盒提取测定的明显更小，表明本发明的重复性更加稳定。
实验例3本发明试剂盒提取测定与传统方法测定茶褐素的重复性实验
对茶样1、2、3分别采用本发明的试剂盒以及传统方法提取测定茶褐素，重复3次，结果如表3所示：
表3本发明试剂盒提取测定与传统方法测定茶褐素的重复性实验结果表
结果显示，本发明试剂盒重复性测定茶样1、2和3中茶褐素含量的平均值分别是64.82±0.08、54.84±0.56和73.16±0.61，使用传统方法萃取测定的平均值分别是63.92±0.23、54.66±1.35和71.82±1.84；使用本发明试剂盒提取测定的变异系数分别为0.13、1.02和0.84，而使用传统方法萃取测定的变异系数分别为0.36、2.46和2.56。两种方法测定的平均值几乎无差异，但使用本发明试剂盒提取测定的变异系数明显更小，表明本发明的重复性更加稳定。
通过对3种茶色素的测定，结果表明使用本发明试剂盒提取测定与传统法提取测定的结果比较吻合，但明显本发明效率更高，且重复性更好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒，其特征在于所述试剂盒内的试剂包括萃取液A，萃取液B和萃取液C以及三种不同类型的预制离心管Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ，其中萃取液A为乙酸乙酯(AR)，萃取液B为95％的乙醇，萃取液C为正丁醇(AR)；离心管Ⅰ为10ml连盖圆底离心管，离心管Ⅱ为10ml预制0.05g NaHCO3的连盖圆底离心管，离心管Ⅲ为10ml预制0.4gH2C2O4的连盖圆底离心管。
2.如权利要求1所述的一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒的提取测定方法，其特征在于包括如下步骤：
1)制备茶样：准确称取1g(精确至0.01g)干茶样置于100ml锥形瓶中，加入50ml沸水，在沸水浴中浸提5min，浸提完毕后取出摇匀，趁热过滤于三角瓶中，冷却后备用；
2)萃取：吸取上述待测液4ml于10ml离心管Ⅰ中，加4ml萃取液A，随即震荡摇匀后，置于摇床上以50Hz/s摇匀5min，使其充分萃取；
3)将上述离心管Ⅰ置于离心机中以5000r/min离心5min，随后用移液枪将分层后的上层液和下层液分别吸取到对应的离心管Ⅰ中，盖好盖子后备用；
4)吸取上述上层液400μL于10ml离心管Ⅰ中，加入4.6ml萃取液B，充分震荡涡旋后得到溶液a；
5)吸取步骤3)中的下层液400μL于离心管Ⅲ中，依次加入3ml萃取液B和1.6ml蒸馏水，充分震荡涡旋后得到溶液d；
6)在离心管Ⅱ中加入2ml蒸馏水迅速涡旋后，吸取步骤3)中的上层液于该离心管，强烈振荡涡旋30s后，置于离心机中以5000r/min离心5min，吸取该溶液中的上层液800μL于10ml离心管Ⅰ中，加入4.2ml萃取液B，充分震荡涡旋后得到溶液c；
7)吸取步骤1)中待测液4ml于离心管Ⅰ中，加4ml萃取液C，随即震荡摇匀后，置于摇床上以50Hz/s摇匀5min，使其充分萃取，将上述离心管置于离心机中以5000r/min离心5min，随后用移液枪吸取800μL水层(下层)溶液于离心管Ⅲ中，依次加入3ml萃取液B及1.6ml蒸馏水，充分震荡涡旋后得到溶液b；
8)用1cm比色皿，以萃取液B作空白参比，在380nm波长处分别测定各溶液的吸光值；
9)结果计算:
茶黄素(％)＝Ac×2.25/(m×w)×100％
茶红素(％)＝(2Aa+2Ad-Ac-2Ab)×7.06/(m×w)×100％
茶褐素(％)＝7.06×2Ab/(m×w)×100％
式中，m为试样质量(g)；W-试样干物质含量(％)；Aa-溶液a的吸光度；Ab一溶液b的吸光度；Ac-溶液c的吸光度；Ad-溶液d的吸光度。
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| CN202211444183.7A Pending CN115683798A (zh) | 2022-11-18 | 2022-11-18 | 一种快速高效提取测定茶叶中茶色素的试剂盒及提取测定方法 |
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104146112A (zh) * | 2014-07-25 | 2014-11-19 | 广西南翔环保有限公司 | 从六堡茶中提取茶褐素提取物的方法及应用 |
| CN104568534A (zh) * | 2013-10-28 | 2015-04-29 | 云南天士力帝泊洱生物茶集团有限公司 | 普洱熟茶滋味品质和香气品质的测定方法 |
| CN105532952A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-05-04 | 信阳师范学院 | 一种茶叶加工方法及茶叶 |
| CN114397260A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-26 | 梧州市食品药品检验所 | 六堡茶中茶褐素含量的测定方法 |
-
2022
- 2022-11-18 CN CN202211444183.7A patent/CN115683798A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 刘展良: "（《各类茶艺茶叶营销农学专业改革创新示范规划教材 茶叶品质化》", vol. 1, 31 January 2021, 中国商业出版社, pages: 144 - 148 * |
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