CN115678906B - 经优化的新冠病毒嵌合核酸疫苗及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了多核苷酸、其相关产品及其在制备新冠疫苗中的用途；其中，一种多核苷酸为编码新冠病毒Delta变异株与Beta变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽的、经序列优化的DNA分子或mRNA分子，另一种多核苷酸为编码新冠病毒Delta变异株与Omicron变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽的、经序列优化的DNA分子或mRNA分子；这些多核苷酸均可在体内高水平地表达相应的重组嵌合抗原肽，基于所述多核苷酸的嵌合核酸疫苗针对多种新冠病毒毒株均可提供较强的免疫保护效力，并且在与其他类型疫苗进行序贯免疫时可诱导针对新冠病毒各型毒株的(即，广谱的)、显著增高的免疫反应水平。

Description

经优化的新冠病毒嵌合核酸疫苗及其用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及经优化的新型冠状病毒嵌合核酸疫苗、其相关产品及其用途。

背景技术

新型冠状病毒肺炎(也称COVID-19)是由新型冠状病毒(也称新冠病毒， SARS-CoV-2)感染导致的一种急性呼吸道传染病。新冠病毒属于冠状病毒科β-冠状病毒属，具有囊膜，是单股正链RNA病毒。新冠病毒表面的刺突蛋白(又称S蛋白)负责病毒与宿主细胞膜受体的结合和膜融合，S蛋白上存在受体结合结构域(RBD)，其是一个重要的疫苗靶点，能激发中和抗体的产生，具有免疫聚焦的优势。

目前，新冠病毒变异株不断出现和流行，特别是，新冠病毒Omicron变异株还存在多种亚型(例如，BA.1，BA.2，BA.1.1， BA.3亚型)，具有超过Delta的传播速度；其中，BA.2亚型毒株的传播速度高于其他的Omicron亚型，现在已经占据了最大的比例。Omicron变异株的S蛋白上具有超过50个氨基酸突变，相比之前的Delta突变株的氨基酸突变大大增多。

由于这些新出现的新冠病毒变异株中S蛋白或RBD的序列存在很多突变，导致现有的基于新冠病毒原型株(Prototype)设计和开发的疫苗所激发的免疫反应在面对变异株(如Omicron变异株)时的效力大大下降，这种变异株突破疫苗、抗体保护的现象称为免疫逃逸。免疫逃逸的现象在Omicron的多种亚型上表现得尤为明显。为了解决新冠病毒变异株的免疫逃逸问题，需要开发新型疫苗以使其适应新出现的变异株(如Omicron 变异株及其各种亚型)，使其对当前的流行株具有较强保护效果；同时，由于目前存在多种变异株(特别是多种Omicron亚型)同时流行的现象，新型疫苗需要能够诱导广谱的免疫反应，以尽可能地同时防范多种新冠病毒毒株，这对于新冠疫情的防控可以起到至关重要的作用。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

为克服上述现有技术中存在的问题，本发明提供了两种多核苷酸，其相关产品及其在制备用于预防和/或治疗新冠病毒疫苗中的用途，基于所述多核苷酸或其相关产品的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，以及包括所述嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物的试剂盒；其中，一种多核苷酸为编码新冠病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域与Beta变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽的、经序列优化的DNA分子或mRNA分子，另一种多核苷酸为编码新冠病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域与Omicron变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽的、经序列优化的DNA分子或mRNA分子，这些多核苷酸均可在体内高水平地表达重组嵌合抗原肽，基于所述多核苷酸的嵌合核酸疫苗针对多种新冠病毒毒株均可提供较强的免疫保护效力，并且在与其他类型疫苗(如灭活疫苗)进行序贯免疫时可诱导针对新冠病毒各型毒株的(即，广谱的)、显著增高的免疫反应水平。

具体地，本发明提供了以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种多核苷酸，其编码如SEQ ID NO:1所示的新型冠状病毒Delta变异株与Beta变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽；

其特征在于：

所述多核苷酸为DNA分子，所述DNA分子包含或由如下序列之一组成：SEQ ID NO:2、3、4或5所示DNA序列；或者，

所述多核苷酸为mRNA分子，所述mRNA分子包含或由如下序列之一组成：SEQ IDNO:6、7、8或9所示mRNA序列。

第二方面，本发明提供了一种多核苷酸，其编码如SEQ ID NO:10所示的新型冠状病毒Delta变异株与Omicron变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽；

其特征在于：

所述多核苷酸为DNA分子，所述DNA分子包含或由如下序列之一组成：SEQ ID NO:11、12、13或14所示DNA序列；或者，

所述多核苷酸为mRNA分子，所述mRNA分子包含或由如下序列之一组成：SEQ IDNO:15、16、17或18所示mRNA序列。

第三方面，本发明提供了一种核酸构建体，其包含如上述第一或第二方面所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。

第四方面，本发明提供了一种表达载体，其包含如上述第三方面所述的核酸构建体。

第五方面，本发明提供了一种宿主细胞，其中转化或转染有如上述第一或第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体或如上述第四方面所述的表达载体。

第六方面，本发明提供了如上述第一或第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗新型冠状病毒的疫苗中的应用；

优选地，所述疫苗用于单独免疫或者与其他类型的新型冠状病毒疫苗进行序贯免疫；进一步优选地，所述其他类型的新型冠状病毒疫苗包括灭活疫苗。

第七方面，本发明提供了一种嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其包含如上述第一或第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的宿主细胞，以及生理学可接受的媒介物、佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。

在一个具体实施方案中，所述嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒DNA 疫苗，所述DNA疫苗包括：

(i)真核表达载体；和

(ii)构建入所述真核表达载体中的、编码如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列，其中，所述编码如SEQ ID NO:1所示的重组嵌合抗原肽的 DNA序列选自：SEQ ID NO:2、3、4或5所示DNA序列，所述编码如SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列选自：SEQ ID NO:11、12、13或14所示DNA序列；

优选地，所述真核表达载体选自pGX0001、pVAX1、pCAGGS和pcDNA系列载体。

在另一个具体实施方案中，所述嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒mRNA疫苗，所述mRNA疫苗包括：

(I)编码如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的mRNA序列，其中，所述编码如SEQ ID NO:1所示的重组嵌合抗原肽的mRNA序列选自：SEQ ID NO:6、 7、8或9所示mRNA序列，所述编码如SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的mRNA 序列选自：SEQID NO:15、16、17或18所示mRNA序列；优选地，所述mRNA序列为经5’端加帽修饰的；和

(II)脂质纳米颗粒。

在另一个具体实施方案中，所述嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒- 病毒载体疫苗，其包括：

(1)病毒骨架载体；和

(2)构建入所述病毒骨架载体中的、编码如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列，其中，所述编码如SEQ ID NO:1所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列选自：SEQ ID NO:2、3、4或5所示DNA序列，所述编码如SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列选自：SEQ ID NO:11、12、13或14所示DNA序列；

可选地，所述病毒骨架载体选自以下病毒载体中的一种或几种：腺病毒载体、痘病毒载体、流感病毒载体、腺相关病毒载体。

在可行的实现方式中，所述嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式；

优选地，所述鼻喷剂选自气雾剂、喷雾剂和粉雾剂；

优选地，所述口服制剂选自片剂、粉末剂、丸剂、散剂、颗粒剂、细粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂、小丸剂、舌下片和膏剂；

优选地，所述胃肠外制剂为经皮剂、软膏剂、硬膏剂、外用液剂、可注射或可推注制剂。

第八方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括如上述第七方面所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，以及任选地其他类型的新型冠状病毒疫苗，所述嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物与所述其他类型的新型冠状病毒疫苗单独包装；

优选地，所述其他类型的新型冠状病毒疫苗为新型冠状病毒灭活疫苗。

有益效果

本发明的发明人设计了编码新冠病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域与Beta变异株S 蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽的、经序列优化的DNA分子或mRNA分子，和编码新冠病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域与Omicron变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽的、经序列优化的DNA分子或mRNA分子；这些经序列优化的DNA分子或mRNA分子可在细胞内高水平地表达相应的重组嵌合抗原肽，所表达的重组嵌合抗原肽针对多种新冠病毒毒株均可提供较强的免疫保护效力，并且在与其他类型疫苗进行序贯免疫时可诱导针对新冠病毒各型毒株的(即，广谱的)、显著增高的免疫反应水平；鉴于这些DNA 分子或mRNA分子在体内的高水平表达，以及其所表达的嵌合抗原肽针对多种新冠病毒毒株所提供的广谱且较强的免疫保护效力，因此，基于这些序列优化的DNA分子或 mRNA分子的嵌合核酸疫苗也可针对多种新冠病毒毒株提供广谱且较强的免疫保护效力，这一点儿已得到了实验证实；进一步地，发明人进行的实验还证实，本发明的嵌合核酸疫苗在与其他类型疫苗(如灭活疫苗)进行序贯免疫时可诱导针对新冠病毒各型毒株的(即，广谱的)、显著增高的免疫反应水平。因此，本发明的基于上述序列优化的 DNA分子或mRNA分子的嵌合核酸疫苗将非常适用于当前复杂的疫情防控，具有潜在的临床应用价值和前景。

附图说明

一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。

图1是本发明实施例1中构建的新冠病毒原型株RBD二聚体mRNA疫苗(简称PP mRNA疫苗，作为对照疫苗)、Delta变异株RBD与Beta变异株RBD连接形成的嵌合RBD 二聚体mRNA疫苗(简称DB mRNA疫苗)、Delta变异株RBD与Omicron变异株RBD连接形成的嵌合RBD二聚体mRNA疫苗(简称DO mRNA疫苗)的结构示意图；图上标注了 mRNA疫苗的各个区段，其中，5’UTR表示5’端非翻译区，3’UTR表示3’端非翻译区， SP表示信号肽序列，Poly(A)表示多聚腺苷酸尾，Protype RBD表示原型株的RBD序列， Delta RBD表示Delta变异株的RBD序列，BetaRBD表示Beta变异株的RBD序列，Omicron (BA.1)RBD表示Omicron变异株的RBD序列，其中，Delta RBD、Beta RBD和Omicron RBD上还标注了其各自相对于原型株RBD的氨基酸突变。

图2显示了本发明实施例1中所构建的PP、DB、DO mRNA疫苗所激发的体液免疫水平，如实施例3和4中所检测的，其中，LNP代表采用脂质纳米颗粒免疫的阴性对照组；其中，图2a为mRNA疫苗免疫小鼠及采样程序示意图；图2b和图2c分别为在用mRNA 疫苗免疫小鼠后第14天、第28天所采集的血清分别针对新冠病毒原型株、Delta变异株、 Beta变异株和Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的RBD抗原的结合抗体滴度，在图2b和图2c的柱形图中，每个柱上方的数字表示该柱所代表的抗体滴度与LNP 组中的相应柱所代表的抗体滴度的比值，并且，如图中箭头所示，图2b和2c右侧的热图基于这些数字制作；图2d为在用mRNA疫苗免疫小鼠后第28天所采集的血清在假病毒中和实验中中和新冠病毒原型株、Delta变异株、Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、 BA.3亚型的假病毒的NT₅₀值，每个柱上方的数字代表该实验组所有样品的几何平均值 (GMT)，如图中箭头所示，右侧的热图基于这些数字制作；所有数据的展示方式为GMT ±95％CI(置信区间)。

图3显示了本发明实施例1中所构建的PP、DB、DO mRNA疫苗所激发的细胞免疫水平，如实施例5中所检测的，LNP代表采用脂质纳米颗粒免疫的阴性对照组；其中，图3a为mRNA疫苗免疫小鼠及脾脏样本采集时间示意图；图3b为显示ELISpot检验 mRNA疫苗免疫小鼠后第21天采集的脾脏细胞在分别被4种肽库(新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株、Omicron变异株亚型BA.1RBD构建的肽库)刺激后产生的 IFNγ+细胞数量的柱形图，柱形图上方的数字表示该柱所代表的IFNγ+细胞数量与LNP 组中相应的柱所代表的IFNγ+细胞数量的比值；所有数据的展示方式为Mean±SEM。

图4显示了采用灭活疫苗与本发明实施例1中所构建的PP、DB、DO mRNA疫苗对小鼠进行序贯免疫后，相较于序贯免疫前(即，未用mRNA疫苗加强的组)，血清结合抗体滴度的提高倍数；其中，图4a为小鼠序贯免疫和血清、脾脏采样程序示意图，IV 代表灭活疫苗；图4b显示了各免疫程序在第35天(以空心圆显示)、第49天(以实心圆显示)所采集的血清针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3RBD抗原的血清结合抗体滴度水平，以及后者(即，第49天)相对于前者(即，第35天)抗体滴度的提高倍数(每张图上面的“数字×”表示提高倍数)，其中，图4b(i)～(iv)分别代表两次灭活疫苗+PP mRNA疫苗免疫组、两次灭活疫苗+DB mRNA疫苗免疫组、两次灭活疫苗+DO mRNA疫苗免疫组、三次灭活疫苗免疫组。

图5显示了采用灭活疫苗与本发明实施例1中所构建的PP、DB、DO mRNA疫苗对小鼠进行序贯免疫后的免疫反应水平，其免疫程序参照图4a；在各柱形图中，“PP”代表两次灭活疫苗+PP mRNA疫苗免疫组，“DB”代表两次灭活疫苗+DB mRNA疫苗免疫组，“DO”代表两次灭活疫苗+DO mRNA疫苗免疫组，“IV”代表三次灭活疫苗免疫组，“LNP”代表两次灭活疫苗佐剂(即，Al佐剂)+脂质纳米颗粒(LNP)免疫组，作为阴性对照；其中，图5a为第49天采集的血清针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3抗原的血清结合抗体滴度，在图 5a的柱形图中，每个柱上方的第一行的数字表示该柱所代表的抗体滴度与灭活疫苗(IV) 组中的相应柱所代表的抗体滴度的比值，第二行的数字表示该柱所代表的抗体滴度与 LNP组中的相应柱所代表的抗体滴度的比值，并且如图中箭头所示，图5a右侧的热图基于第二行数字制作；图5b为第49天采集的血清在假病毒中和实验中中和6种假病毒(原型株、Delta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3)的NT₅₀值，在图 5b的柱形图中，每个柱上方的第一行数字表示该柱所代表的NT₅₀滴度值与灭活疫苗(IV) 组中的相应柱所代表的NT₅₀滴度值的比值，每个柱上方的第二行数字代表该实验组所有样品的几何平均值(GMT)，并且如图中箭头所示，右侧的热图基于第二行数字制作；图5a和图5b中数据的展示方式为GMT±95％CI(置信区间)；图5c显示ICS检验第 49天采集的脾脏的CD8+和CD4+细胞在分别被4种肽库(原型株、Delta、Beta、Omicron 亚型BA.1变异株RBD构建的肽库)刺激后产生IFNγ+细胞的比例，图5c中数据的展示方式为Mean±SEM；统计学差异由Mann-Whitney test方法计算(*,p<0.05；**,p<0.01)。

图6为实施例10中所记载的、通过Western Blot检测未优化的DB或DO mRNA和经过序列优化的DB或DO mRNA在细胞内的表达情况图，其中，DB、DO泳道代表未优化的DB、DOmRNA，DB1-4、DO1-4泳道分别代表经过序列优化的DB、DO mRNA，各四种。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。

除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。

实施例1：mRNA疫苗的构建、体外制备与包装

按照图1所示的PP、DB和DO mRNA疫苗的结构示意图，发明人设计了一种PP mRNA疫苗、五种DB mRNA疫苗和五种DO mRNA疫苗。

具体方案如下：

PP mRNA疫苗的DNA编码序列如SEQ ID NO:19所示；

五种DB mRNA疫苗分别称为DB、DB1、DB2、DB3和DB4 mRNA疫苗，其中，DB mRNA疫苗的编码区采用未优化版本的DNA编码序列(其序列如SEQ ID NO:20所示)， DB1、DB2、DB3和DB4 mRNA疫苗的编码区则为经过优化的DNA编码序列(其序列分别如SEQ ID NO:2、3、4或5所示)；

五种DO mRNA疫苗分别称为DO、DO1、DO2、DO3和DO4 mRNA疫苗，其中， DO mRNA疫苗的编码区采用未优化版本的DNA编码序列(其序列如SEQ ID NO:21所示)，DO1、DO2、DO3和DO4 mRNA疫苗的DNA编码区则为经过优化的DNA编码序列 (其序列分别如SEQ ID NO:11、12、13或14所示)。

然后，根据下述程序进行mRNA疫苗的构建、体外制备与包装：

1)mRNA疫苗的体外转录和加帽

本实施例中，用于体外转录mRNA疫苗的基础质粒为pUC57，由南京金斯瑞生物科技有限公司提供。

在基础质粒pUC57上，通过常规分子生物学手段引入mRNA疫苗的DNA表达元件，包括：(1)T7启动子，(2)mRNA疫苗的DNA编码区，(3)在编码区上游的5’端UTR 序列(几种mRNA疫苗的5’端UTR序列相同，均为如SEQ ID NO:22所示序列)，(4)信号肽序列(即SP，如SEQ IDNO:23所示序列)，和(5)下游的3’端UTR序列(几种 mRNA疫苗的3’端UTR序列相同，均为如SEQ ID NO:24所示序列)，和多聚腺苷酸尾 (Poly-Atail)。

首先，使用限制性内切酶BamHI对上述体外转录质粒进行酶切，将其线性化；使用常规DNA纯化方法进行纯化，获得体外转录的模板；然后，基于该模板，使用T7RNA 体外转录试剂盒(E131-01A，苏州近岸蛋白质科技股份有限公司)进行体外转录，获得体外转录的mRNA；最后，使用氯化锂回收试剂盒(S125，苏州近岸蛋白质科技股份有限公司)，通过氯化锂沉淀法对mRNA进行纯化，获得提纯的体外转录mRNA。

然后，使用加帽酶试剂盒Cap1加帽酶试剂盒(M082-01B，苏州近岸蛋白质科技股份有限公司)，对上述提纯的体外转录mRNA进行5’端Cap1加帽，使其满足在真核细胞内被翻译的条件；其后，使用与上述相同的氯化锂沉淀法对mRNA进行再次纯化，获得纯化的经5’端加帽修饰的mRNA。

2)脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticle,LNP)包装mRNA

将阳离子脂质、磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG脂质按照50：10：38.5：1.5的比例进行混合，然后使用Precision Nano Systems公司生产的Nanoassemblr Benchtop纳米脂质体包装仪，将其与上述5’端加帽修饰的mRNA进行混合、包装。包装完成后，使用离心或透析的方法更换缓冲溶液为PBS。完成包装后，使用Thermo Fisher公司的Quan-iT RibogreenRNAreagent试剂盒，对mRNA包装效率进行鉴定。结果显示，各mRNA疫苗的包装效率均符合使用需求。

实施例2：实验动物免疫和样品采集

本实施例中，使用6-8周龄的BALB/c品系的雌性小鼠(购自维通利华)进行动物实验；实验组分为mRNA疫苗免疫组和阴性对照组，其中，mRNA疫苗免疫组包括PP mRNA 疫苗免疫组、DB mRNA疫苗免疫组和DO mRNA疫苗免疫组，分别采用上述实施例1所制备的PP mRNA疫苗、DB mRNA疫苗和DO mRNA疫苗进行免疫；所述阴性对照组为 LNP免疫组。

mRNA疫苗免疫组的所有小鼠在第0天和第14天分别免疫接种同一种设计的mRNA疫苗(即，PP、DB或DO mRNA疫苗)，阴性对照组的小鼠在同样的时间、注射相同量的空的LNP；接种方法均为肌肉注射，接种剂量为每只小鼠每次5μg mRNA疫苗或空LNP；分别在第14天和第28天采集小鼠血清样本，用于检验免疫小鼠血清的结合抗体滴度和假病毒中和抗体滴度。此外，还在第21天采集小鼠脾脏样本，用于检验T细胞免疫。

mRNA疫苗免疫小鼠及采样程序如图2a、3a所示。

实施例3：小鼠血清抗体滴度的检验

用新冠病毒原型株(Protype)、Beta变异株、Delta变异株和Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的RBD抗原肽(0.2μg/ml，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:25-31 所示)分别包被ELISA板，将包被好的ELISA板在5％脱脂牛奶中封闭1小时；然后，将实施例2中的、由各实验组小鼠采集的血清在56℃孵育30分钟，进行灭活；将经过灭活的血清样本从1:200或1:1000开始进行三倍梯度稀释，然后将稀释液加入每个孔，随后将ELISA板在37℃下孵育1小时；将山羊抗小鼠IgG-HRP抗体(购自柏奥易杰 (EASYBio))添加到板中作为二抗，并在37℃下再次孵育1小时；最后，用3,3',5,5'- 四甲基联苯胺(TMB)底物进行显色，显色完成后用2M盐酸终止反应，使用酶标仪 (PerkinElmer)测量450nm和630nm处的吸光度。通过从同一孔的450nm处的吸光度减去630nm处的吸光度，来计算吸光度值。终点滴度定义为：血清产生的吸光度(如上所述，450nm的吸光度减去630nm的吸光度)大于背景值2.1倍时对应的血清稀释倍数。低于检测限的抗体滴度定义为检测限的三分之一。

各实验组小鼠在免疫程序的第14天、第28天所采集的血清针对上述七种新冠病毒RBD抗原的结合抗体滴度分别如图2b和图2c所示，在图2b和图2c中，左侧为终点滴度 vs疫苗种类的柱形图，右侧为相应的热图，所述热图是基于各mRNA疫苗的终点抗体滴度与LNP组的终点抗体滴度的比值制作的，如附图说明中所述。

图2c为抗体水平较为稳定的、第28天血清的结果，由图2c可以看出：

(1)DB mRNA疫苗

针对所测试的新冠病毒原型株和各变异株，DB mRNA疫苗均能诱导出较高的结合抗体水平；并且，其针对各型新冠病毒毒株所诱导的结合抗体滴度水平均远远高于PP mRNA疫苗，有的高达4倍以上；

(2)DO mRNA疫苗

针对所测试的新冠病毒原型株和各变异株，DO mRNA疫苗均能诱导出较高的结合抗体水平；特别是，其针对Omicron变异株的各亚型所诱导的血清抗体滴度水平均远远高于PP mRNA疫苗；例如，针对BA.1亚型，DO mRNA疫苗所诱导的抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高2倍以上，针对BA.1.1亚型，DO mRNA疫苗所诱导的抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高5倍以上，针对BA.2亚型所诱导的抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高将近6 倍，针对BA.3亚型所诱导的抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高3倍以上；这提示，本发明的DO mRNA疫苗针对Omicron变异株各亚型均可诱导出明显更高的抗体滴度水平，说明其针对Omicron各型变异株都将具有明显更高的免疫保护效力；并且，DO mRNA对于新冠病毒原型株和其他变异株也诱导出了较高的抗体滴度水平，这提示其具有很好的广谱性。

实施例4：新冠病毒毒株假病毒的包装和血清中和

本实施例中，分别检测上述实施例2所采集的免疫小鼠血清对新冠病毒原型株、Delta变异株和Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的假病毒的50％假病毒中和滴度(pVNT₅₀)；具体检测方法如下：

一、制备截短的新冠病毒S蛋白的表达质粒

分别将编码新冠病毒原型株、Delta变异株和Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的S蛋白的后18位氨基酸的核苷酸去掉，所得核苷酸分别命名为WT-S-del18、Delta-S-del18、BA.1-S-del18、BA.1.1-S-del18、BA.2-S-del18、BA.3-S-del18，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:32～37所示，由苏州金唯智公司进行合成；然后，将这些核苷酸序列各自克隆到pCAGGS表达载体上，分别得到表达质粒pCAGGS-WT-S-del18、 pCAGGS-Delta-S-del18、pCAGGS-BA.1-S-del18、pCAGGS-BA.1.1-S-del18、 pCAGGS-BA.2-S-del18、pCAGGS-BA.3-S-del18。

二、新冠病毒原型株和各型变异株的假病毒的包装

1)在10cm细胞培养皿中铺HEK293T细胞，使第二天细胞密度至80％左右。培养液为含10％FBS的DMEM培养基。

2)将上文所制备的截短的、新冠病毒各型株的S蛋白的表达质粒，用PEI转染培养皿中的细胞(30μg/10cm细胞培养皿)。目的质粒与PEI按1:3比例混匀后转染，4-6h换培养液(含10％FBS的DMEM培养基)，37℃培养24h。

3)将假病毒包装骨架病毒G*VSV-delG(武汉枢密脑科学技术有限公司)加入上述转染后的HEK293T细胞，37℃孵育2h，换培养液(含10％FBS的DMEM培养基)，并加入VSV-G抗体(表达该抗体杂交瘤细胞购自ATCC细胞库)，在培养箱中继续培养30h。

4)收上清，3000rpm离心10min，在超净工作台中经0.45μm无菌滤器过滤，去除细胞碎片，分装，-80℃冰箱冻存。

通过上述步骤，分别得到新冠病毒原型株、Delta变异株和Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的假病毒。

三、免疫小鼠血清对假病毒抑制效果的评价

将实施例2中的、于第28天采集的各实验组小鼠血清在56℃孵育30分钟，进行灭活；将灭活后的血清样本进行稀释，从1:80开始进行2倍梯度稀释。然后，将每种假病毒与等体积的稀释后血清混合，在37℃下孵育1小时。取100μl病毒-血清混合物加入到 96孔板中预铺板的Vero细胞上。孵育15小时后，使用CQ1共聚焦图像细胞仪，检测转导单位(TU)数，从而计算免疫小鼠血清对上述新冠病毒原型株、Delta变异株和Omicron 变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的假病毒的中和能力。

结果如图2d所示；如图2d的附图说明中所述，图2d的左侧柱形图显示了各免疫组血清中和原型株、Delta变异株和Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的假病毒的pVNT₅₀(即，50％假病毒中和滴度)，右侧热图显示了各mRNA疫苗的pVNT₅₀与LNP 组的pVNT₅₀的比值。

由图2d可以看出：

(1)DB mRNA疫苗针对原型株、Delta变异株、Omicron变异株各亚型所诱导的血清中和抗体滴度水平均远远高于PP mRNA疫苗；具体地，DB mRNA疫苗针对原型株所诱导的中和抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高3倍以上，针对Delta变异株所诱导的中和抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高5倍以上，针对Omicron变异株BA.1亚型所诱导的中和抗体滴度水平比PPmRNA疫苗高将近45倍，针对Omicron变异株BA.1.1亚型所诱导的中和抗体滴度水平比PPmRNA疫苗高将近30倍，针对Omicron变异株BA.2亚型所诱导的中和抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高将近48倍，针对Omicron变异株BA.3亚型所诱导的中和抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高将近69倍；这提示，本发明的DB mRNA疫苗针对新冠病毒各型毒株均可诱导出明显更高的中和抗体滴度水平，说明其针对新冠病毒各型毒株都将具有明显更高的免疫保护效力。

(2)DO mRNA疫苗针对原型株、Delta变异株、Omicron变异株各亚型所诱导的血清中和抗体滴度水平均远远高于PP mRNA疫苗；具体地，DO mRNA疫苗针对原型株所诱导的中和抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高将近13倍，针对Delta变异株所诱导的中和抗体滴度水平比PP mRNA疫苗高将近5倍，针对Omicron变异株BA.1亚型所诱导的中和抗体滴度水平比PPmRNA疫苗高将近200倍，针对Omicron变异株BA.1.1亚型所诱导的中和抗体滴度水平比PPmRNA疫苗高将近163倍，针对Omicron变异株BA.2亚型所诱导的中和抗体滴度水平比PPmRNA疫苗高将近230倍，针对Omicron变异株BA.3亚型所诱导的中和抗体滴度水平比PPmRNA疫苗高将近407倍；这提示，本发明的DO mRNA疫苗针对新冠病毒各型毒株均可诱导出明显更高的中和抗体滴度水平，说明其针对新冠病毒各型毒株都将具有明显更高的免疫保护效力。

实施例5：mRNA疫苗诱导细胞免疫水平的评价

本实施例中，采用实施例2中的、于第21天采集的各实验组小鼠的脾脏样本(小鼠免疫和脾脏样本采集时间示意图如图3a所示)，检测mRNA疫苗诱导的细胞免疫水平。

具体方法如下：

1)小鼠脾脏样品处理

用细胞匀浆器在1ml无血清DMEM中将小鼠脾脏细胞制备成单细胞匀浆，用40μm 细胞过滤器过滤，用红细胞裂解缓冲液(北京索莱宝科技有限公司，R1010)裂解红细胞；然后，细胞经过清洗液(PBS+0.5％FBS)清洗后，用0.4％台盼蓝溶液(Gibco，15250061) 染色，使用Cell drop FL自动细胞计数器进行计数。

2)ELISpot检验

将10μg/ml anti-mouse IFN-γ抗体(购自BD公司)在平底96孔板中在4℃过夜孵育，以包被该平底96孔板，第二天，在室温下封闭2小时。将新鲜的小鼠脾脏单细胞悬液 (4×10⁵/孔)加入上述抗体包被的96孔板，并分别用新冠病毒原型株、Delta、Beta、 Omicron变异株BA.1亚型的RBD构建的肽库(每条多肽2μg/ml)刺激20小时；所述肽库采用网站https://www.hiv.lanl.gov/content/sequence/PEPTGEN/peptgen.html上的软件PeptGenPeptide Generator进行设计，设计的关键参数包括：短肽的长度在18-20个氨基酸，重叠氨基酸片段在10个氨基酸作用等；设计好的肽库由中科亚光生物科技有限公司合成。阳性对照孔用植物血凝素(PMA)刺激以产生非特异细胞免疫反应，阴性对照孔不用肽库刺激。然后，丢弃细胞，并用生物素化的IFNγ抗体、链霉亲和素-HRP抗体和显色底物先后孵育96孔板。当板底显现斑点后，用去离子水彻底冲洗样品，停止显色。最后，使用Immuno Capture6.5.0拍照并对斑点数量进行计数。

结果如图3b所示，由图3b可知，在使用上述四种新冠病毒RBD肽库刺激后，DB、 DOmRNA疫苗免疫的小鼠脾脏细胞所产生的IFN-γ+细胞的数量与PP mRNA疫苗免疫的小鼠相当，它们均远远高于LNP对照组，这表明：DB、DO mRNA疫苗均能有效激发细胞免疫应答，并且其所激发的细胞免疫水平与PP mRNA疫苗相当。

实施例6：mRNA疫苗与灭活疫苗的序贯免疫

本实施例中，使用6-8周龄的BALB/c品系的雌性小鼠(购自维通利华)进行动物实验，所用灭活疫苗来自国药中生BBBIP-CorV。

实验分组为：三次灭活疫苗免疫组(即，“IV”组)、两次灭活疫苗+PP mRNA疫苗免疫组(简称“PP”组)、两次灭活疫苗+DB mRNA疫苗免疫组(简称“DB”组)、两次灭活疫苗+DOmRNA疫苗免疫组(简称“DO”组)和灭活疫苗佐剂+LNP免疫组(简称“LNP”组，作为阴性对照组)。

“IV”组：所有小鼠在第0天、第21天和第35天分别接种一剂灭活疫苗；

“DB”组、“DO”组：所有小鼠在第0天、第21天分别接种一剂灭活疫苗，然后在第35天接种一剂相应的mRNA疫苗；

“LNP”组：所有小鼠在第0天、第21天接种灭活疫苗的佐剂——Al佐剂，在第35 天接种空的LNP。

上述各疫苗的接种方法均为肌肉注射，其中，灭活疫苗接种剂量为每只小鼠每次2.6 U(为人用剂量的0.4剂)，各mRNA疫苗或空的LNP的接种剂量为每只小鼠每次5μg。

分别在第35天和第49天采集小鼠血清样本，用于检验免疫小鼠血清的结合抗体滴度和假病毒中和抗体滴度。此外，在第49天还采集了小鼠脾脏样本，用于检验T细胞免疫。

小鼠序贯免疫和血清、脾脏样本采样程序示意图如图4a所示。

实施例7：序贯免疫小鼠血清对新冠病毒各毒株RBD抗原的结合抗体滴度水平检测

本实施例中，采用实施例3中所记载的方法，检测了实施例6中所采集的各免疫组小鼠血清针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株、Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的RBD抗原的结合抗体滴度。

结果如图4b所示。其中，图4b(i)～(iv)分别显示了以PP、DB、DO和灭活疫苗进行第三次加强免疫的组，前三组为序贯免疫，最后一组为对照；如附图说明中所述，其显示了各免疫程序在第35天(以空心圆显示)、第49天(以实心圆显示)所采集的血清针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、 BA.2、BA.3RBD抗原的结合抗体滴度水平，以及后者(即，第49天)相对于前者(即，第35天)结合抗体滴度的提高倍数(每张图上面的“数字×”表示提高倍数)，这种血清抗体滴度的提高倍数反映了采用mRNA疫苗进行序贯免疫后、较序贯免疫前的抗体滴度水平的提高程度；由这些结果可知：采用各mRNA疫苗进行序贯免疫后，其血清抗体滴度水平基本上均较序贯免疫前有显著提高，表明：本申请的mRNA疫苗可用于序贯免疫，以加强免疫反应水平。

此外，与PP mRNA疫苗序贯免疫组相比：

1)DB mRNA疫苗序贯免疫组

针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株和Omicron亚型BA.2变异株，DBmRNA疫苗序贯免疫后血清抗体滴度的提高倍数均远远高于PP mRNA疫苗，最多可高出将近6倍(针对Beta变异株)；

2)DO mRNA疫苗序贯免疫组

针对上述七种新冠病毒毒株，DO mRNA疫苗序贯免疫后血清抗体滴度的提高倍数均远远高于PP mRNA疫苗，最多可高出5倍以上(针对原型株)。

此外，各免疫组在第49天采集的血清针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3抗原的结合抗体滴度结果如图 5a所示。

图5a显示，与PP mRNA疫苗序贯免疫组相比：

1)DB mRNA疫苗序贯免疫组

针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株和Omicron亚型BA.2变异株，其所诱导的结合抗体滴度水平均远远高于PP mRNA疫苗；而针对其他类型毒株，两者所诱导的结合抗体滴度水平相当；

2)DO mRNA疫苗序贯免疫组

针对上述七种新冠病毒毒株，其所诱导的结合抗体滴度水平均远远高于PP mRNA疫苗。

实施例8：序贯免疫小鼠血清对新冠病毒各毒株的假病毒的抑制效果的评价

本实施例中，采用实施例4中所记载的方法，检测了实施例6中在第49天所采集的各免疫组小鼠血清针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Beta变异株、Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.3亚型的假病毒的中和抗体滴度。

结果如图5b所示。图5b显示：与PP mRNA疫苗序贯免疫组相比：

1)DB mRNA疫苗序贯免疫组

针对除新冠病毒Omicron BA.1.1以外的其他所有类型毒株的假病毒所诱导的中和抗体滴度水平，DB mRNA疫苗均显著高于PP mRNA疫苗；而针对新冠病毒Omicron BA.1.1假病毒所诱导的中和抗体滴度水平，DB mRNA疫苗与PP mRNA疫苗效果相当；

2)DO mRNA疫苗序贯免疫组

针对新冠病毒Omicron变异株的各亚型毒株的假病毒，其所诱导的中和抗体滴度水平高于PP mRNA疫苗，或与其相当。

实施例9：序贯免疫所诱导细胞免疫水平的评价

本实施例中，采用实施例5中所记载的方法，和实施例6中在第49天所采集的各免疫组小鼠的脾脏样本，检测序贯免疫所诱导的细胞免疫水平。

结果如图5c所示，由图5c可知，在使用上述四种新冠病毒RBD肽库刺激后，DB、 DOmRNA疫苗序贯免疫的小鼠脾脏细胞所产生的IFN-γ+CD4+、IFN-γ+CD8+细胞的数量与PPmRNA疫苗序贯免疫的小鼠相当，它们均远远高于LNP对照组，这表明：采用DB、DO mRNA疫苗进行的序贯免疫均能有效激发细胞免疫应答，并且其所激发的细胞免疫水平与PP mRNA疫苗序贯免疫组相当。

实施例10：经序列优化的DB或DO mRNA的细胞内表达效果检验

本实施例中，通过如下实验，检验了实施例1中所构建的未优化的DB mRNA疫苗、经过序列优化的DB1、DB2、DB3和DB4 mRNA疫苗、未优化的DO mRNA疫苗、经过序列优化的DO1、DO2、DO3和DO4 mRNA疫苗的mRNA在细胞内的表达效果。

具体程序如下：

1)mRNA转染

在12孔板中铺HEK293T细胞，使第二天细胞密度至50％左右。分别将1μg未优化的DB或DO mRNA、经过序列优化的DB或DO mRNA(各4种)与TransIT-mRNA试剂(2μl) 和增强试剂(2μl)一起加入100ul无血清Opti-MEM中，孵育3分钟，然后滴加到12孔板中。转染后36小时，收集上清液。

未优化的DB mRNA序列如SEQ ID NO:38所示；

未优化的DO mRNA序列如SEQ ID NO:39所示；

经过序列优化的DB1、DB2、DB3和DB4 mRNA序列分别如SEQ ID NO:6、7、8或 9所示；

经过序列优化的DO1、DO2、DO3和DO4 mRNA序列分别如SEQ ID NO:15、16、 17或18所示。

2)Western Blot

将步骤1)所得上清液样品与含有二硫苏糖醇(DTT)的loading buffer混合，通过10％SDS-PAGE分离；分离完成后进行转膜，将蛋白转移到PVDF膜上；然后，用5％脱脂牛奶稀中封闭膜，用SARS-CoV-2Spike/RBD一抗(Sino Biological)和山羊抗兔 IgG-HRP(EASYBio)二抗先后孵育PVDF膜各1小时；最后，使用Beyotime Beyo ECL Plus显色液显色。

其结果如图6所示，图6显示了未优化的和经序列优化的DB或DO mRNA在细胞内的表达情况；由图6可知，与未优化的DB mRNA相比，经过序列优化的四种DB mRNA 在细胞内的表达水平明显增高，并且，与未优化的DO mRNA相比，经过序列优化的四种DO mRNA在细胞内的表达水平明显增高；这些结果提示，DB1、DB2、DB3和DB4 mRNA疫苗较DB mRNA疫苗有更高的体内表达水平，DO1、DO2、DO3和DO4 mRNA 疫苗较DO mRNA疫苗有更高的体内表达水平。

鉴于上述，经过序列优化的四种DB mRNA与未优化的DB mRNA均表达相同的嵌合抗原肽，而前者的细胞内表达效率明显高于后者，由此可知，经过序列优化的四种DB mRNA作为嵌合核酸疫苗将诱导明显高于未优化的DB mRNA的免疫水平；同理，经过序列优化的四种DO mRNA与未优化的DO mRNA均表达相同的嵌合抗原肽，而前者的细胞内表达效率明显高于后者，由此可知，经过序列优化的四种DO mRNA作为嵌合核酸疫苗将诱导明显高于未优化的DO mRNA的免疫水平；这一点也得到了发明人进一步的实验验证。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明技术方案的精神和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院微生物研究所

<120> 经优化的新冠病毒嵌合核酸疫苗及其用途

<130> 1087-220107F

<160> 39

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 434

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成多肽

<220>

<221> DB核酸疫苗所编码的重组嵌合抗原肽

<222> (1)..(434)

<400> 1

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val

210 215 220

Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn

225 230 235 240

Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser

245 250 255

Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser

260 265 270

Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys

275 280 285

Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val

290 295 300

Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr

305 310 315 320

Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn

325 330 335

Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu

340 345 350

Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu

355 360 365

Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn

370 375 380

Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val

385 390 395 400

Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His

405 410 415

Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys

420 425 430

Asn Lys

<210> 2

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DB1mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 2

agagtccaac caacagaatc tattgttaga tttcctaata ttacaaactt gtgccctttt 60

ggtgaagttt ttaacgccac cagatttgca tctgtttatg cttggaacag gaagagaatc 120

agcaactgtg ttgctgatta ttctgtccta tataattccg catcattttc cacttttaag 180

tgttatggag tgtctcctac taaattaaat gatctctgct ttactaatgt ctatgcagat 240

tcatttgtaa ttagaggtga tgaagtcaga caaatcgctc cagggcaaac tggaaagatt 300

gctgattata attataaatt accagatgat tttacaggct gcgttatagc ttggaattct 360

aacaatcttg attctaaggt tggtggtaat tataattacc ggtatagatt gtttaggaag 420

tctaatctca aaccttttga gagagatatt tcaactgaaa tctatcaggc cggtagcaaa 480

ccttgtaatg gtgttgaagg ttttaattgt tactttcctt tacaatcata tggtttccaa 540

cccactaatg gtgttggtta ccaaccatac agagtagtag tactttcttt tgaacttcta 600

catgcaccag caactgtttg tggacctaaa aagtctacta atttggttgt gcagcccacc 660

gagagcatcg tgcggttccc caacatcacc aacctgtgcc ccttcggcga ggtgttcaac 720

gccacccggt tcgccagcgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatcagcaa ctgcgtggcc 780

gactacagcg tgctgtacaa cagcgccagc ttcagcacct tcaagtgcta cggcgtgagc 840

cccaccaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgacagctt cgtgatccgg 900

ggcgacgagg tgcggcagat cgcccccggc cagaccggca acatcgccga ctacaactac 960

aagctgcccg acgacttcac cggctgcgtg atcgcctgga acagcaacaa cctggacagc 1020

aaggtgggcg gcaactacaa ctacctgtac cggctgttcc ggaagagcaa cctgaagccc 1080

ttcgagcggg acatcagcac cgagatctac caggccggca gcaccccctg caacggcgtg 1140

aagggcttca actgctactt ccccctgcag agctacggct tccagcccac ctacggcgtg 1200

ggctaccagc cctaccgggt ggtggtgctg agcttcgagc tgctgcacgc ccccgccacc 1260

gtgtgcggcc ccaagaagag caccaacctg gtgaagaaca ag 1302

<210> 3

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DB2 mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 3

cgggtgcagc ccaccgagag catcgtgcgg ttccccaaca tcaccaacct gtgccccttc 60

ggcgaggtgt tcaacgccac ccggttcgcc agcgtgtacg cctggaaccg gaagcggatc 120

agcaactgcg tggccgacta cagcgtgctg tacaacagcg ccagcttcag caccttcaag 180

tgctacggcg tgagccccac caagctgaac gacctgtgct tcaccaacgt gtacgccgac 240

agcttcgtga tccggggcga cgaggtgcgg cagatcgccc ccggccagac cggcaagatc 300

gccgactaca actacaagct gcccgacgac ttcaccggct gcgtgatcgc ctggaacagc 360

aacaacctgg acagcaaggt gggcggcaac tacaactacc ggtaccggct gttccggaag 420

agcaacctga agcccttcga gcgggacatc agcaccgaga tctaccaggc cggcagcaag 480

ccctgcaacg gcgtggaggg cttcaactgc tacttccccc tgcagagcta cggcttccag 540

cccaccaacg gcgtgggcta ccagccctac cgggtggtgg tgctgagctt cgagctgctg 600

cacgcccccg ccaccgtgtg cggccccaag aagagcacca acctggtggt ccaaccaaca 660

gaatctattg ttagatttcc taatattaca aacttgtgcc cttttggtga agtttttaac 720

gccaccagat ttgcatctgt ttatgcttgg aacaggaaga gaatcagcaa ctgtgttgct 780

gattattctg tcctatataa ttccgcatca ttttccactt ttaagtgtta tggagtgtct 840

cctactaaat taaatgatct ctgctttact aatgtctatg cagattcatt tgtaattaga 900

ggtgatgaag tcagacaaat cgctccaggg caaactggaa atattgctga ttataattat 960

aaattaccag atgattttac aggctgcgtt atagcttgga attctaacaa tcttgattct 1020

aaggttggtg gtaattataa ttacctgtat agattgttta ggaagtctaa tctcaaacct 1080

tttgagagag atatttcaac tgaaatctat caggccggta gcacaccttg taatggtgtt 1140

aaaggtttta attgttactt tcctttacaa tcatatggtt tccaacccac ttatggtgtt 1200

ggttaccaac catacagagt agtagtactt tcttttgaac ttctacatgc accagcaact 1260

gtttgtggac ctaaaaagtc tactaatttg gttaaaaaca aa 1302

<210> 4

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DB3 mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 4

cgggtgcagc ccaccgagag catcgtgcgg ttccccaaca tcaccaacct gtgccccttc 60

ggcgaggtgt tcaacgccac ccggttcgcc agcgtgtacg cctggaaccg gaagcggatc 120

agcaactgcg tggccgacta cagcgtgctg tacaacagcg ccagcttcag caccttcaag 180

tgctacggcg tgagccccac caagctgaac gacctgtgct tcaccaacgt gtacgccgac 240

agcttcgtga tccggggcga cgaggtgcgg cagatcgccc ccggccagac cggcaagatc 300

gccgactaca actacaagct gcccgacgac ttcaccggct gcgtgatcgc ctggaacagc 360

aacaacctgg acagcaaggt gggcggcaac tacaactacc ggtaccggct gttccggaag 420

agcaacctga agcccttcga gcgggacatc agcaccgaga tctaccaggc cggcagcaag 480

ccctgcaacg gcgtggaggg cttcaactgc tacttccccc tgcagagcta cggcttccag 540

cccaccaacg gcgtgggcta ccagccctac cgggtggtgg tgctgagctt cgagctgctg 600

cacgcccccg ccaccgtgtg cggccccaag aagagcacca acctggtggt gcagcccacc 660

gagagcatcg tgcggttccc caacatcacc aacctgtgcc ccttcggcga ggtgttcaac 720

gccacccggt tcgccagcgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatcagcaa ctgcgtggcc 780

gactacagcg tgctgtacaa cagcgccagc ttcagcacct tcaagtgcta cggcgtgagc 840

cccaccaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgacagctt cgtgatccgg 900

ggcgacgagg tgcggcagat cgcccccggc cagaccggca acatcgccga ctacaactac 960

aagctgcccg acgacttcac cggctgcgtg atcgcctgga acagcaacaa cctggacagc 1020

aaggtgggcg gcaactacaa ctacctgtac cggctgttcc ggaagagcaa cctgaagccc 1080

ttcgagcggg acatcagcac cgagatctac caggccggca gcaccccctg caacggcgtg 1140

aagggcttca actgctactt ccccctgcag agctacggct tccagcccac ctacggcgtg 1200

ggctaccagc cctaccgggt ggtggtgctg agcttcgagc tgctgcacgc ccccgccacc 1260

gtgtgcggcc ccaagaagag caccaacctg gtgaagaaca ag 1302

<210> 5

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DB4 mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 5

cgcgtccagc ctaccgagag catcgtgcgc ttccccaaca ttaccaatct gtgccccttc 60

ggggaggtct tcaatgctac ccgcttcgcc agcgtgtatg cctggaaccg gaagcggatt 120

tccaactgcg tggctgatta ttccgtcctc tacaactccg cttccttctc caccttcaag 180

tgctatggcg tgtcccccac caagctcaac gatctctgct tcaccaatgt gtacgccgac 240

tccttcgtca tccgcggcga tgaggtgcgc cagatcgccc ccggccagac cggcaagatc 300

gctgactata actataagct ccctgatgac ttcaccggct gcgtcatcgc ttggaatagc 360

aacaacctgg attccaaggt cgggggcaac tataactatc ggtaccggct cttccggaag 420

tccaatctga agcccttcga gcgggacatc agcaccgaga tctatcaagc tggcagcaag 480

ccttgcaatg gcgtcgaggg gttcaactgc tacttccctc tccaaagcta cggcttccaa 540

cccaccaatg gcgtggggta ccagccctac cgggtcgtcg tgctctcctt cgagctcctg 600

catgcccccg ccaccgtgtg cggccctaag aagtccacca acctcgtggt gcagcctacc 660

gagagcattg tccggttccc caatattacc aacctctgcc ccttcggcga ggtcttcaac 720

gctacccgct tcgccagcgt ctacgcctgg aatcggaagc gcatcagcaa ttgcgtcgct 780

gactactccg tgctgtataa tagcgcttcc ttctccacct tcaagtgcta cggcgtcagc 840

cctaccaagc tcaatgacct gtgcttcacc aatgtgtatg ctgacagctt cgtgattcgc 900

ggggatgagg tccggcagat cgctcctggg caaaccggga acatcgccga ctacaactac 960

aagctccccg atgatttcac cgggtgcgtc atcgcttgga attccaacaa tctcgacagc 1020

aaggtgggcg ggaattataa ttacctctat cggctgttcc gcaagagcaa tctgaagccc 1080

ttcgagcgcg acattagcac cgagatttac caagctggct ccaccccctg caatggcgtc 1140

aagggcttca attgctactt ccccctgcag agctatggct tccaacctac ctacggggtc 1200

ggctaccagc cctaccgcgt cgtcgtgctg agcttcgagc tcctccatgc ccctgctacc 1260

gtctgcgggc ccaagaagtc caccaatctg gtcaagaata ag 1302

<210> 6

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DB1 mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 6

agaguccaac caacagaauc uauuguuaga uuuccuaaua uuacaaacuu gugcccuuuu 60

ggugaaguuu uuaacgccac cagauuugca ucuguuuaug cuuggaacag gaagagaauc 120

agcaacugug uugcugauua uucuguccua uauaauuccg caucauuuuc cacuuuuaag 180

uguuauggag ugucuccuac uaaauuaaau gaucucugcu uuacuaaugu cuaugcagau 240

ucauuuguaa uuagagguga ugaagucaga caaaucgcuc cagggcaaac uggaaagauu 300

gcugauuaua auuauaaauu accagaugau uuuacaggcu gcguuauagc uuggaauucu 360

aacaaucuug auucuaaggu uggugguaau uauaauuacc gguauagauu guuuaggaag 420

ucuaaucuca aaccuuuuga gagagauauu ucaacugaaa ucuaucaggc cgguagcaaa 480

ccuuguaaug guguugaagg uuuuaauugu uacuuuccuu uacaaucaua ugguuuccaa 540

cccacuaaug guguugguua ccaaccauac agaguaguag uacuuucuuu ugaacuucua 600

caugcaccag caacuguuug uggaccuaaa aagucuacua auuugguugu gcagcccacc 660

gagagcaucg ugcgguuccc caacaucacc aaccugugcc ccuucggcga gguguucaac 720

gccacccggu ucgccagcgu guacgccugg aaccggaagc ggaucagcaa cugcguggcc 780

gacuacagcg ugcuguacaa cagcgccagc uucagcaccu ucaagugcua cggcgugagc 840

cccaccaagc ugaacgaccu gugcuucacc aacguguacg ccgacagcuu cgugauccgg 900

ggcgacgagg ugcggcagau cgcccccggc cagaccggca acaucgccga cuacaacuac 960

aagcugcccg acgacuucac cggcugcgug aucgccugga acagcaacaa ccuggacagc 1020

aaggugggcg gcaacuacaa cuaccuguac cggcuguucc ggaagagcaa ccugaagccc 1080

uucgagcggg acaucagcac cgagaucuac caggccggca gcacccccug caacggcgug 1140

aagggcuuca acugcuacuu cccccugcag agcuacggcu uccagcccac cuacggcgug 1200

ggcuaccagc ccuaccgggu gguggugcug agcuucgagc ugcugcacgc ccccgccacc 1260

gugugcggcc ccaagaagag caccaaccug gugaagaaca ag 1302

<210> 7

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DB2 mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 7

cgggugcagc ccaccgagag caucgugcgg uuccccaaca ucaccaaccu gugccccuuc 60

ggcgaggugu ucaacgccac ccgguucgcc agcguguacg ccuggaaccg gaagcggauc 120

agcaacugcg uggccgacua cagcgugcug uacaacagcg ccagcuucag caccuucaag 180

ugcuacggcg ugagccccac caagcugaac gaccugugcu ucaccaacgu guacgccgac 240

agcuucguga uccggggcga cgaggugcgg cagaucgccc ccggccagac cggcaagauc 300

gccgacuaca acuacaagcu gcccgacgac uucaccggcu gcgugaucgc cuggaacagc 360

aacaaccugg acagcaaggu gggcggcaac uacaacuacc gguaccggcu guuccggaag 420

agcaaccuga agcccuucga gcgggacauc agcaccgaga ucuaccaggc cggcagcaag 480

cccugcaacg gcguggaggg cuucaacugc uacuuccccc ugcagagcua cggcuuccag 540

cccaccaacg gcgugggcua ccagcccuac cggguggugg ugcugagcuu cgagcugcug 600

cacgcccccg ccaccgugug cggccccaag aagagcacca accugguggu ccaaccaaca 660

gaaucuauug uuagauuucc uaauauuaca aacuugugcc cuuuugguga aguuuuuaac 720

gccaccagau uugcaucugu uuaugcuugg aacaggaaga gaaucagcaa cuguguugcu 780

gauuauucug uccuauauaa uuccgcauca uuuuccacuu uuaaguguua uggagugucu 840

ccuacuaaau uaaaugaucu cugcuuuacu aaugucuaug cagauucauu uguaauuaga 900

ggugaugaag ucagacaaau cgcuccaggg caaacuggaa auauugcuga uuauaauuau 960

aaauuaccag augauuuuac aggcugcguu auagcuugga auucuaacaa ucuugauucu 1020

aagguuggug guaauuauaa uuaccuguau agauuguuua ggaagucuaa ucucaaaccu 1080

uuugagagag auauuucaac ugaaaucuau caggccggua gcacaccuug uaaugguguu 1140

aaagguuuua auuguuacuu uccuuuacaa ucauaugguu uccaacccac uuaugguguu 1200

gguuaccaac cauacagagu aguaguacuu ucuuuugaac uucuacaugc accagcaacu 1260

guuuguggac cuaaaaaguc uacuaauuug guuaaaaaca aa 1302

<210> 8

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DB3 mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 8

cgggugcagc ccaccgagag caucgugcgg uuccccaaca ucaccaaccu gugccccuuc 60

ggcgaggugu ucaacgccac ccgguucgcc agcguguacg ccuggaaccg gaagcggauc 120

agcaacugcg uggccgacua cagcgugcug uacaacagcg ccagcuucag caccuucaag 180

ugcuacggcg ugagccccac caagcugaac gaccugugcu ucaccaacgu guacgccgac 240

agcuucguga uccggggcga cgaggugcgg cagaucgccc ccggccagac cggcaagauc 300

gccgacuaca acuacaagcu gcccgacgac uucaccggcu gcgugaucgc cuggaacagc 360

aacaaccugg acagcaaggu gggcggcaac uacaacuacc gguaccggcu guuccggaag 420

agcaaccuga agcccuucga gcgggacauc agcaccgaga ucuaccaggc cggcagcaag 480

cccugcaacg gcguggaggg cuucaacugc uacuuccccc ugcagagcua cggcuuccag 540

cccaccaacg gcgugggcua ccagcccuac cggguggugg ugcugagcuu cgagcugcug 600

cacgcccccg ccaccgugug cggccccaag aagagcacca accugguggu gcagcccacc 660

gagagcaucg ugcgguuccc caacaucacc aaccugugcc ccuucggcga gguguucaac 720

gccacccggu ucgccagcgu guacgccugg aaccggaagc ggaucagcaa cugcguggcc 780

gacuacagcg ugcuguacaa cagcgccagc uucagcaccu ucaagugcua cggcgugagc 840

cccaccaagc ugaacgaccu gugcuucacc aacguguacg ccgacagcuu cgugauccgg 900

ggcgacgagg ugcggcagau cgcccccggc cagaccggca acaucgccga cuacaacuac 960

aagcugcccg acgacuucac cggcugcgug aucgccugga acagcaacaa ccuggacagc 1020

aaggugggcg gcaacuacaa cuaccuguac cggcuguucc ggaagagcaa ccugaagccc 1080

uucgagcggg acaucagcac cgagaucuac caggccggca gcacccccug caacggcgug 1140

aagggcuuca acugcuacuu cccccugcag agcuacggcu uccagcccac cuacggcgug 1200

ggcuaccagc ccuaccgggu gguggugcug agcuucgagc ugcugcacgc ccccgccacc 1260

gugugcggcc ccaagaagag caccaaccug gugaagaaca ag 1302

<210> 9

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DB4 mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 9

cgcguccagc cuaccgagag caucgugcgc uuccccaaca uuaccaaucu gugccccuuc 60

ggggaggucu ucaaugcuac ccgcuucgcc agcguguaug ccuggaaccg gaagcggauu 120

uccaacugcg uggcugauua uuccguccuc uacaacuccg cuuccuucuc caccuucaag 180

ugcuauggcg ugucccccac caagcucaac gaucucugcu ucaccaaugu guacgccgac 240

uccuucguca uccgcggcga ugaggugcgc cagaucgccc ccggccagac cggcaagauc 300

gcugacuaua acuauaagcu cccugaugac uucaccggcu gcgucaucgc uuggaauagc 360

aacaaccugg auuccaaggu cgggggcaac uauaacuauc gguaccggcu cuuccggaag 420

uccaaucuga agcccuucga gcgggacauc agcaccgaga ucuaucaagc uggcagcaag 480

ccuugcaaug gcgucgaggg guucaacugc uacuucccuc uccaaagcua cggcuuccaa 540

cccaccaaug gcguggggua ccagcccuac cgggucgucg ugcucuccuu cgagcuccug 600

caugcccccg ccaccgugug cggcccuaag aaguccacca accucguggu gcagccuacc 660

gagagcauug uccgguuccc caauauuacc aaccucugcc ccuucggcga ggucuucaac 720

gcuacccgcu ucgccagcgu cuacgccugg aaucggaagc gcaucagcaa uugcgucgcu 780

gacuacuccg ugcuguauaa uagcgcuucc uucuccaccu ucaagugcua cggcgucagc 840

ccuaccaagc ucaaugaccu gugcuucacc aauguguaug cugacagcuu cgugauucgc 900

ggggaugagg uccggcagau cgcuccuggg caaaccggga acaucgccga cuacaacuac 960

aagcuccccg augauuucac cgggugcguc aucgcuugga auuccaacaa ucucgacagc 1020

aaggugggcg ggaauuauaa uuaccucuau cggcuguucc gcaagagcaa ucugaagccc 1080

uucgagcgcg acauuagcac cgagauuuac caagcuggcu ccacccccug caauggcguc 1140

aagggcuuca auugcuacuu cccccugcag agcuauggcu uccaaccuac cuacgggguc 1200

ggcuaccagc ccuaccgcgu cgucgugcug agcuucgagc uccuccaugc cccugcuacc 1260

gucugcgggc ccaagaaguc caccaaucug gucaagaaua ag 1302

<210> 10

<211> 434

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成多肽

<220>

<221> DO核酸疫苗所编码的重组嵌合抗原肽

<222> (1)..(434)

<400> 10

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val

210 215 220

Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn

225 230 235 240

Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser

245 250 255

Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Leu Ala Pro Phe Phe

260 265 270

Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys

275 280 285

Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val

290 295 300

Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr

305 310 315 320

Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn

325 330 335

Lys Leu Asp Ser Lys Val Ser Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu

340 345 350

Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu

355 360 365

Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn

370 375 380

Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser Tyr Ser Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val

385 390 395 400

Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His

405 410 415

Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys

420 425 430

Asn Lys

<210> 11

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DO1 mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 11

agagtccaac caacagaatc tattgttaga tttcctaata ttacaaactt gtgccctttt 60

ggtgaagttt ttaacgccac cagatttgca tctgtttatg cttggaacag gaagagaatc 120

agcaactgtg ttgctgatta ttctgtccta tataattccg catcattttc cacttttaag 180

tgttatggag tgtctcctac taaattaaat gatctctgct ttactaatgt ctatgcagat 240

tcatttgtaa ttagaggtga tgaagtcaga caaatcgctc cagggcaaac tggaaagatt 300

gctgattata attataaatt accagatgat tttacaggct gcgttatagc ttggaattct 360

aacaatcttg attctaaggt tggtggtaat tataattacc ggtatagatt gtttaggaag 420

tctaatctca aaccttttga gagagatatt tcaactgaaa tctatcaggc cggtagcaaa 480

ccttgtaatg gtgttgaagg ttttaattgt tactttcctt tacaatcata tggtttccaa 540

cccactaatg gtgttggtta ccaaccatac agagtagtag tactttcttt tgaacttcta 600

catgcaccag caactgtttg tggacctaaa aagtctacta atttggttgt gcagcccacc 660

gagagcatcg tgcggttccc caacatcacc aacctgtgcc ccttcgacga ggtgttcaac 720

gccacccggt tcgccagcgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatcagcaa ctgcgtggcc 780

gactacagcg tgctgtacaa cctggccccc ttcttcacct tcaagtgcta cggcgtgagc 840

cccaccaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgacagctt cgtgatccgg 900

ggcgacgagg tgcggcagat cgcccccggc cagaccggca acatcgccga ctacaactac 960

aagctgcccg acgacttcac cggctgcgtg atcgcctgga acagcaacaa gctggacagc 1020

aaggtgagcg gcaactacaa ctacctgtac cggctgttcc ggaagagcaa cctgaagccc 1080

ttcgagcggg acatcagcac cgagatctac caggccggca acaagccctg caacggcgtg 1140

gccggcttca actgctactt ccccctgcgg agctacagct tccggcccac ctacggcgtg 1200

ggccaccagc cctaccgggt ggtggtgctg agcttcgagc tgctgcacgc ccccgccacc 1260

gtgtgcggcc ccaagaagag caccaacctg gtgaagaaca ag 1302

<210> 12

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DO2 mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 12

cgggtgcagc ccaccgagag catcgtgcgg ttccccaaca tcaccaacct gtgccccttc 60

ggcgaggtgt tcaacgccac ccggttcgcc agcgtgtacg cctggaaccg gaagcggatc 120

agcaactgcg tggccgacta cagcgtgctg tacaacagcg ccagcttcag caccttcaag 180

tgctacggcg tgagccccac caagctgaac gacctgtgct tcaccaacgt gtacgccgac 240

agcttcgtga tccggggcga cgaggtgcgg cagatcgccc ccggccagac cggcaagatc 300

gccgactaca actacaagct gcccgacgac ttcaccggct gcgtgatcgc ctggaacagc 360

aacaacctgg acagcaaggt gggcggcaac tacaactacc ggtaccggct gttccggaag 420

agcaacctga agcccttcga gcgggacatc agcaccgaga tctaccaggc cggcagcaag 480

ccctgcaacg gcgtggaggg cttcaactgc tacttccccc tgcagagcta cggcttccag 540

cccaccaacg gcgtgggcta ccagccctac cgggtggtgg tgctgagctt cgagctgctg 600

cacgcccccg ccaccgtgtg cggccccaag aagagcacca acctggtggt ccaaccaaca 660

gaatctattg ttagatttcc taatattaca aacttgtgcc cttttgatga agtttttaac 720

gccaccagat ttgcatctgt ttatgcttgg aacaggaaga gaatcagcaa ctgtgttgct 780

gattattctg tcctatataa tctcgcacca tttttcactt ttaagtgtta tggagtgtct 840

cctactaaat taaatgatct ctgctttact aatgtctatg cagattcatt tgtaattaga 900

ggtgatgaag tcagacaaat cgctccaggg caaactggaa atattgctga ttataattat 960

aaattaccag atgattttac aggctgcgtt atagcttgga attctaacaa gcttgattct 1020

aaggttagtg gtaattataa ttacctgtat agattgttta ggaagtctaa tctcaaacct 1080

tttgagagag atatttcaac tgaaatctat caggccggta acaaaccttg taatggtgtt 1140

gcaggtttta attgttactt tcctttacga tcatatagtt tccgacccac ttatggtgtt 1200

ggtcaccaac catacagagt agtagtactt tcttttgaac ttctacatgc accagcaact 1260

gtttgtggac ctaaaaagtc tactaatttg gttaaaaaca aa 1302

<210> 13

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DO3 mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 13

cgggtgcagc ccaccgagag catcgtgcgg ttccccaaca tcaccaacct gtgccccttc 60

ggcgaggtgt tcaacgccac ccggttcgcc agcgtgtacg cctggaaccg gaagcggatc 120

agcaactgcg tggccgacta cagcgtgctg tacaacagcg ccagcttcag caccttcaag 180

tgctacggcg tgagccccac caagctgaac gacctgtgct tcaccaacgt gtacgccgac 240

agcttcgtga tccggggcga cgaggtgcgg cagatcgccc ccggccagac cggcaagatc 300

gccgactaca actacaagct gcccgacgac ttcaccggct gcgtgatcgc ctggaacagc 360

aacaacctgg acagcaaggt gggcggcaac tacaactacc ggtaccggct gttccggaag 420

agcaacctga agcccttcga gcgggacatc agcaccgaga tctaccaggc cggcagcaag 480

ccctgcaacg gcgtggaggg cttcaactgc tacttccccc tgcagagcta cggcttccag 540

cccaccaacg gcgtgggcta ccagccctac cgggtggtgg tgctgagctt cgagctgctg 600

cacgcccccg ccaccgtgtg cggccccaag aagagcacca acctggtggt gcagcccacc 660

gagagcatcg tgcggttccc caacatcacc aacctgtgcc ccttcgacga ggtgttcaac 720

gccacccggt tcgccagcgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatcagcaa ctgcgtggcc 780

gactacagcg tgctgtacaa cctggccccc ttcttcacct tcaagtgcta cggcgtgagc 840

cccaccaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgacagctt cgtgatccgg 900

ggcgacgagg tgcggcagat cgcccccggc cagaccggca acatcgccga ctacaactac 960

aagctgcccg acgacttcac cggctgcgtg atcgcctgga acagcaacaa gctggacagc 1020

aaggtgagcg gcaactacaa ctacctgtac cggctgttcc ggaagagcaa cctgaagccc 1080

ttcgagcggg acatcagcac cgagatctac caggccggca acaagccctg caacggcgtg 1140

gccggcttca actgctactt ccccctgcgg agctacagct tccggcccac ctacggcgtg 1200

ggccaccagc cctaccgggt ggtggtgctg agcttcgagc tgctgcacgc ccccgccacc 1260

gtgtgcggcc ccaagaagag caccaacctg gtgaagaaca ag 1302

<210> 14

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DO4 mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 14

cgcgtccagc ctaccgagag catcgtgcgc ttccccaaca ttaccaatct gtgccccttc 60

ggggaggtct tcaatgctac ccgcttcgcc agcgtgtatg cctggaaccg gaagcggatt 120

tccaactgcg tggctgatta ttccgtcctc tacaactccg cttccttctc caccttcaag 180

tgctatggcg tgtcccccac caagctcaac gatctctgct tcaccaatgt gtacgccgac 240

tccttcgtca tccgcggcga tgaggtgcgc cagatcgccc ccggccagac cggcaagatc 300

gctgactata actataagct ccctgatgac ttcaccggct gcgtcatcgc ttggaatagc 360

aacaacctgg attccaaggt cgggggcaac tataactatc ggtaccggct cttccggaag 420

tccaatctga agcccttcga gcgggacatc agcaccgaga tctatcaagc tggcagcaag 480

ccttgcaatg gcgtcgaggg gttcaactgc tacttccctc tccaaagcta cggcttccaa 540

cccaccaatg gcgtggggta ccagccctac cgggtcgtcg tgctctcctt cgagctcctg 600

catgcccccg ccaccgtgtg cggccctaag aagtccacca acctcgtggt gcagcctacc 660

gagagcattg tccggttccc caatattacc aacctctgcc ccttcgacga ggtcttcaac 720

gctacccgct tcgccagcgt ctacgcctgg aatcggaagc gcatcagcaa ttgcgtcgct 780

gactactccg tgctgtataa tctggctccc ttcttcacct tcaagtgcta cggcgtcagc 840

cctaccaagc tcaatgacct gtgcttcacc aatgtgtatg ctgacagctt cgtgattcgc 900

ggggatgagg tccggcagat cgctcctggg caaaccggga acatcgccga ctacaactac 960

aagctccccg atgatttcac cgggtgcgtc atcgcttgga attccaacaa gctcgacagc 1020

aaggtgagcg ggaattataa ttacctctat cggctgttcc gcaagagcaa tctgaagccc 1080

ttcgagcgcg acattagcac cgagatttac caagctggca acaagccctg caatggcgtc 1140

gccggcttca attgctactt ccccctgcgg agctatagct tccggcctac ctacggggtc 1200

ggccaccagc cctaccgcgt cgtcgtgctg agcttcgagc tcctccatgc ccctgctacc 1260

gtctgcgggc ccaagaagtc caccaatctg gtcaagaata ag 1302

<210> 15

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DO1 mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 15

agaguccaac caacagaauc uauuguuaga uuuccuaaua uuacaaacuu gugcccuuuu 60

ggugaaguuu uuaacgccac cagauuugca ucuguuuaug cuuggaacag gaagagaauc 120

agcaacugug uugcugauua uucuguccua uauaauuccg caucauuuuc cacuuuuaag 180

uguuauggag ugucuccuac uaaauuaaau gaucucugcu uuacuaaugu cuaugcagau 240

ucauuuguaa uuagagguga ugaagucaga caaaucgcuc cagggcaaac uggaaagauu 300

gcugauuaua auuauaaauu accagaugau uuuacaggcu gcguuauagc uuggaauucu 360

aacaaucuug auucuaaggu uggugguaau uauaauuacc gguauagauu guuuaggaag 420

ucuaaucuca aaccuuuuga gagagauauu ucaacugaaa ucuaucaggc cgguagcaaa 480

ccuuguaaug guguugaagg uuuuaauugu uacuuuccuu uacaaucaua ugguuuccaa 540

cccacuaaug guguugguua ccaaccauac agaguaguag uacuuucuuu ugaacuucua 600

caugcaccag caacuguuug uggaccuaaa aagucuacua auuugguugu gcagcccacc 660

gagagcaucg ugcgguuccc caacaucacc aaccugugcc ccuucgacga gguguucaac 720

gccacccggu ucgccagcgu guacgccugg aaccggaagc ggaucagcaa cugcguggcc 780

gacuacagcg ugcuguacaa ccuggccccc uucuucaccu ucaagugcua cggcgugagc 840

cccaccaagc ugaacgaccu gugcuucacc aacguguacg ccgacagcuu cgugauccgg 900

ggcgacgagg ugcggcagau cgcccccggc cagaccggca acaucgccga cuacaacuac 960

aagcugcccg acgacuucac cggcugcgug aucgccugga acagcaacaa gcuggacagc 1020

aaggugagcg gcaacuacaa cuaccuguac cggcuguucc ggaagagcaa ccugaagccc 1080

uucgagcggg acaucagcac cgagaucuac caggccggca acaagcccug caacggcgug 1140

gccggcuuca acugcuacuu cccccugcgg agcuacagcu uccggcccac cuacggcgug 1200

ggccaccagc ccuaccgggu gguggugcug agcuucgagc ugcugcacgc ccccgccacc 1260

gugugcggcc ccaagaagag caccaaccug gugaagaaca ag 1302

<210> 16

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DO2 mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 16

cgggugcagc ccaccgagag caucgugcgg uuccccaaca ucaccaaccu gugccccuuc 60

ggcgaggugu ucaacgccac ccgguucgcc agcguguacg ccuggaaccg gaagcggauc 120

agcaacugcg uggccgacua cagcgugcug uacaacagcg ccagcuucag caccuucaag 180

ugcuacggcg ugagccccac caagcugaac gaccugugcu ucaccaacgu guacgccgac 240

agcuucguga uccggggcga cgaggugcgg cagaucgccc ccggccagac cggcaagauc 300

gccgacuaca acuacaagcu gcccgacgac uucaccggcu gcgugaucgc cuggaacagc 360

aacaaccugg acagcaaggu gggcggcaac uacaacuacc gguaccggcu guuccggaag 420

agcaaccuga agcccuucga gcgggacauc agcaccgaga ucuaccaggc cggcagcaag 480

cccugcaacg gcguggaggg cuucaacugc uacuuccccc ugcagagcua cggcuuccag 540

cccaccaacg gcgugggcua ccagcccuac cggguggugg ugcugagcuu cgagcugcug 600

cacgcccccg ccaccgugug cggccccaag aagagcacca accugguggu ccaaccaaca 660

gaaucuauug uuagauuucc uaauauuaca aacuugugcc cuuuugauga aguuuuuaac 720

gccaccagau uugcaucugu uuaugcuugg aacaggaaga gaaucagcaa cuguguugcu 780

gauuauucug uccuauauaa ucucgcacca uuuuucacuu uuaaguguua uggagugucu 840

ccuacuaaau uaaaugaucu cugcuuuacu aaugucuaug cagauucauu uguaauuaga 900

ggugaugaag ucagacaaau cgcuccaggg caaacuggaa auauugcuga uuauaauuau 960

aaauuaccag augauuuuac aggcugcguu auagcuugga auucuaacaa gcuugauucu 1020

aagguuagug guaauuauaa uuaccuguau agauuguuua ggaagucuaa ucucaaaccu 1080

uuugagagag auauuucaac ugaaaucuau caggccggua acaaaccuug uaaugguguu 1140

gcagguuuua auuguuacuu uccuuuacga ucauauaguu uccgacccac uuaugguguu 1200

ggucaccaac cauacagagu aguaguacuu ucuuuugaac uucuacaugc accagcaacu 1260

guuuguggac cuaaaaaguc uacuaauuug guuaaaaaca aa 1302

<210> 17

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DO3 mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 17

cgggugcagc ccaccgagag caucgugcgg uuccccaaca ucaccaaccu gugccccuuc 60

ggcgaggugu ucaacgccac ccgguucgcc agcguguacg ccuggaaccg gaagcggauc 120

agcaacugcg uggccgacua cagcgugcug uacaacagcg ccagcuucag caccuucaag 180

ugcuacggcg ugagccccac caagcugaac gaccugugcu ucaccaacgu guacgccgac 240

agcuucguga uccggggcga cgaggugcgg cagaucgccc ccggccagac cggcaagauc 300

gccgacuaca acuacaagcu gcccgacgac uucaccggcu gcgugaucgc cuggaacagc 360

aacaaccugg acagcaaggu gggcggcaac uacaacuacc gguaccggcu guuccggaag 420

agcaaccuga agcccuucga gcgggacauc agcaccgaga ucuaccaggc cggcagcaag 480

cccugcaacg gcguggaggg cuucaacugc uacuuccccc ugcagagcua cggcuuccag 540

cccaccaacg gcgugggcua ccagcccuac cggguggugg ugcugagcuu cgagcugcug 600

cacgcccccg ccaccgugug cggccccaag aagagcacca accugguggu gcagcccacc 660

gagagcaucg ugcgguuccc caacaucacc aaccugugcc ccuucgacga gguguucaac 720

gccacccggu ucgccagcgu guacgccugg aaccggaagc ggaucagcaa cugcguggcc 780

gacuacagcg ugcuguacaa ccuggccccc uucuucaccu ucaagugcua cggcgugagc 840

cccaccaagc ugaacgaccu gugcuucacc aacguguacg ccgacagcuu cgugauccgg 900

ggcgacgagg ugcggcagau cgcccccggc cagaccggca acaucgccga cuacaacuac 960

aagcugcccg acgacuucac cggcugcgug aucgccugga acagcaacaa gcuggacagc 1020

aaggugagcg gcaacuacaa cuaccuguac cggcuguucc ggaagagcaa ccugaagccc 1080

uucgagcggg acaucagcac cgagaucuac caggccggca acaagcccug caacggcgug 1140

gccggcuuca acugcuacuu cccccugcgg agcuacagcu uccggcccac cuacggcgug 1200

ggccaccagc ccuaccgggu gguggugcug agcuucgagc ugcugcacgc ccccgccacc 1260

gugugcggcc ccaagaagag caccaaccug gugaagaaca ag 1302

<210> 18

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 经过序列优化的DO4 mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 18

cgcguccagc cuaccgagag caucgugcgc uuccccaaca uuaccaaucu gugccccuuc 60

ggggaggucu ucaaugcuac ccgcuucgcc agcguguaug ccuggaaccg gaagcggauu 120

uccaacugcg uggcugauua uuccguccuc uacaacuccg cuuccuucuc caccuucaag 180

ugcuauggcg ugucccccac caagcucaac gaucucugcu ucaccaaugu guacgccgac 240

uccuucguca uccgcggcga ugaggugcgc cagaucgccc ccggccagac cggcaagauc 300

gcugacuaua acuauaagcu cccugaugac uucaccggcu gcgucaucgc uuggaauagc 360

aacaaccugg auuccaaggu cgggggcaac uauaacuauc gguaccggcu cuuccggaag 420

uccaaucuga agcccuucga gcgggacauc agcaccgaga ucuaucaagc uggcagcaag 480

ccuugcaaug gcgucgaggg guucaacugc uacuucccuc uccaaagcua cggcuuccaa 540

cccaccaaug gcguggggua ccagcccuac cgggucgucg ugcucuccuu cgagcuccug 600

caugcccccg ccaccgugug cggcccuaag aaguccacca accucguggu gcagccuacc 660

gagagcauug uccgguuccc caauauuacc aaccucugcc ccuucgacga ggucuucaac 720

gcuacccgcu ucgccagcgu cuacgccugg aaucggaagc gcaucagcaa uugcgucgcu 780

gacuacuccg ugcuguauaa ucuggcuccc uucuucaccu ucaagugcua cggcgucagc 840

ccuaccaagc ucaaugaccu gugcuucacc aauguguaug cugacagcuu cgugauucgc 900

ggggaugagg uccggcagau cgcuccuggg caaaccggga acaucgccga cuacaacuac 960

aagcuccccg augauuucac cgggugcguc aucgcuugga auuccaacaa gcucgacagc 1020

aaggugagcg ggaauuauaa uuaccucuau cggcuguucc gcaagagcaa ucugaagccc 1080

uucgagcgcg acauuagcac cgagauuuac caagcuggca acaagcccug caauggcguc 1140

gccggcuuca auugcuacuu cccccugcgg agcuauagcu uccggccuac cuacgggguc 1200

ggccaccagc ccuaccgcgu cgucgugcug agcuucgagc uccuccaugc cccugcuacc 1260

gucugcgggc ccaagaaguc caccaaucug gucaagaaua ag 1302

<210> 19

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> PP mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 19

cgagtgcagc ctaccgaaag catcgtccgt ttcccgaata ttactaatct ctgtccattc 60

ggagaagtct tcaatgccac ccgattcgct tccgtttacg cgtggaaccg taaacgaata 120

tctaattgtg ttgcggacta ttccgtgttg tacaactcag catcattctc tacttttaaa 180

tgctatggag tgtcgccgac taaactcaac gacttgtgtt tcactaatgt ttatgctgac 240

tctttcgtta ttcgtggaga cgaagttcgt caaatcgcac cagggcaaac tggcaagatt 300

gcggactata attataagct gccagatgac tttaccggat gtgtaatagc ctggaactca 360

aataatctcg acagtaaagt gggaggcaac tataattatc tttatcgact cttcagaaag 420

tctaacctta agccatttga acgtgacatt tctacagaaa tttaccaagc cggctctaca 480

ccttgcaatg gcgtggaagg gtttaactgt tatttcccat tacagtctta tggtttccag 540

ccaactaatg gtgtgggata ccaaccttac cgcgtcgttg tcctgtcgtt tgaattgctt 600

cacgcaccag ccaccgtttg tgggccaaag aagagcacta atctcgtagt tcagcctact 660

gaatcgatcg tgaggttccc aaatattacc aatctgtgtc cgttcggaga ggtcttcaat 720

gcgactcgat tcgcgtctgt ttacgcctgg aacaggaaac ggattagcaa ttgtgtcgct 780

gactattcgg tcttatacaa ctctgcatca ttctcaacct tcaagtgtta tggtgtcagc 840

cctacaaagc tgaatgactt atgtttcacc aatgtttatg cggacagttt cgtaatacga 900

ggtgatgaag tccgccaaat tgcacccgga caaaccggca agatagccga ctataattat 960

aagctccctg atgactttac gggctgtgtc atagcttgga atagtaataa tttggactcg 1020

aaagtgggag gtaattataa ttatctctat agactgttcc ggaaatcaaa tctcaagccc 1080

tttgaacggg acataagtac agaaatctac caagctggtt ccacgccgtg taatggagtc 1140

gaggggttta actgttattt cccgctccag tcgtatgggt tccagccaac gaatggcgtc 1200

ggataccaac cttaccgcgt tgtagtatta agctttgaac tgttgcacgc gcccgcgact 1260

gtttgtggcc cgaagaagtc gactaatcta gtaaagaata ag 1302

<210> 20

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 未优化的DB mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 20

cgagtgcagc ctaccgaaag catcgtccgt ttcccgaata ttactaatct ctgtccattc 60

ggagaagtct tcaatgccac ccgattcgct tccgtttacg cgtggaaccg taaacgaata 120

tctaattgtg ttgcggacta ttccgtgttg tacaactcag catcattctc tacttttaaa 180

tgctatggag tgtcgccgac taaactcaac gacttgtgtt tcactaatgt ttatgctgac 240

tctttcgtta ttcgtggaga cgaagttcgt caaatcgcac cagggcaaac tggcaagatt 300

gcggactata attataagct gccagatgac tttaccggat gtgtaatagc ctggaactca 360

aataatctcg acagtaaagt gggaggcaac tataattatc gttatcgact cttcagaaag 420

tctaacctta agccatttga acgtgacatt tctacagaaa tttaccaagc cggctctaag 480

ccttgcaatg gcgtggaagg gtttaactgt tatttcccat tacagtctta tggtttccag 540

ccaactaatg gtgtgggata ccaaccttac cgcgtcgttg tcctgtcgtt tgaattgctt 600

cacgcaccag ccaccgtttg tgggccaaag aagagcacta atctcgtagt tcagcctact 660

gaatcgatcg tgaggttccc aaatattacc aatctgtgtc cgttcggaga ggtcttcaat 720

gcgactcgat tcgcgtctgt ttacgcctgg aacaggaaac ggattagcaa ttgtgtcgct 780

gactattcgg tcttatacaa ctctgcatca ttctcaacct tcaagtgtta tggtgtcagc 840

cctacaaagc tgaatgactt atgtttcacc aatgtttatg cggacagttt cgtaatacga 900

ggtgatgaag tccgccaaat tgcacccgga caaaccggca acatagccga ctataattat 960

aagctccctg atgactttac gggctgtgtc atagcttgga atagtaataa tttggactcg 1020

aaagtgggag gtaattataa ttatctctat agactgttcc ggaaatcaaa tctcaagccc 1080

tttgaacggg acataagtac agaaatctac caagctggtt ccacgccgtg taatggagtc 1140

aaggggttta actgttattt cccgctccag tcgtatgggt tccagccaac gtatggcgtc 1200

ggataccaac cttaccgcgt tgtagtatta agctttgaac tgttgcacgc gcccgcgact 1260

gtttgtggcc cgaagaagtc gactaatcta gtaaagaata ag 1302

<210> 21

<211> 1302

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 未优化的DO mRNA疫苗的DNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 21

cgagtgcagc ctaccgaaag catcgtccgt ttcccgaata ttactaatct ctgtccattc 60

ggagaagtct tcaatgccac ccgattcgct tccgtttacg cgtggaaccg taaacgaata 120

tctaattgtg ttgcggacta ttccgtgttg tacaactcag catcattctc tacttttaaa 180

tgctatggag tgtcgccgac taaactcaac gacttgtgtt tcactaatgt ttatgctgac 240

tctttcgtta ttcgtggaga cgaagttcgt caaatcgcac cagggcaaac tggcaagatt 300

gcggactata attataagct gccagatgac tttaccggat gtgtaatagc ctggaactca 360

aataatctcg acagtaaagt gggaggcaac tataattatc gttatcgact cttcagaaag 420

tctaacctta agccatttga acgtgacatt tctacagaaa tttaccaagc cggctctaag 480

ccttgcaatg gcgtggaagg gtttaactgt tatttcccat tacagtctta tggtttccag 540

ccaactaatg gtgtgggata ccaaccttac cgcgtcgttg tcctgtcgtt tgaattgctt 600

cacgcaccag ccaccgtttg tgggccaaag aagagcacta atctcgtagt tcagcctact 660

gaatcgatcg tgaggttccc aaatattacc aatctgtgtc cgttcgacga ggtcttcaat 720

gcgactcgat tcgcgtctgt ttacgcctgg aacaggaaac ggattagcaa ttgtgtcgct 780

gactattcgg tcttatacaa cttggcacca ttcttcacct tcaagtgtta tggtgtcagc 840

cctacaaagc tgaatgactt atgtttcacc aatgtttatg cggacagttt cgtaatacga 900

ggtgatgaag tccgccaaat tgcacccgga caaaccggca acatagccga ctataattat 960

aagctccctg atgactttac gggctgtgtc atagcttgga atagtaataa gttggactcg 1020

aaagtgtcag gtaattataa ttatctctat agactgttcc ggaaatcaaa tctcaagccc 1080

tttgaacggg acataagtac agaaatctac caagctggta acaagccgtg taatggagtc 1140

gcagggttta actgttattt cccgctccgg tcgtattcct tccggccaac gtatggcgtc 1200

ggacaccaac cttaccgcgt tgtagtatta agctttgaac tgttgcacgc gcccgcgact 1260

gtttgtggcc cgaagaagtc gactaatcta gtaaagaata ag 1302

<210> 22

<211> 47

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 5'端UTR

<222> (1)..(47)

<400> 22

gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccacc 47

<210> 23

<211> 45

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 信号肽的DNA编码序列

<222> (1)..(45)

<400> 23

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgc 45

<210> 24

<211> 110

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 3' 端UTR

<222> (1)..(110)

<400> 24

tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 60

ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccgt ggtctttgaa taaagtctga 110

<210> 25

<211> 223

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2原型株

<220>

<221> SARS-CoV-2 原型株的RBD抗原肽

<222> (1)..(223)

<400> 25

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 26

<211> 223

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2 Beta变异株

<220>

<221> SARS-CoV-2 Beta变异株的RBD抗原肽

<222> (1)..(223)

<400> 26

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 27

<211> 223

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2 Delta变异株株

<220>

<221> SARS-CoV-2 Delta变异株的RBD抗原肽

<222> (1)..(223)

<400> 27

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 28

<211> 223

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.1亚型

<220>

<221> SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.1亚型的RBD抗原肽

<222> (1)..(223)

<400> 28

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Leu Ala Pro Phe Phe Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Ser

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser

165 170 175

Tyr Ser Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 29

<211> 223

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.1.1亚型

<220>

<221> SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.1.1亚型的RBD抗原肽

<222> (1)..(223)

<400> 29

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Leu Ala Pro Phe Phe Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Ser

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser

165 170 175

Tyr Ser Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 30

<211> 223

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.2亚型

<220>

<221> SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.2亚型的RBD抗原肽

<222> (1)..(223)

<400> 30

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu Val Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 31

<211> 223

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.3亚型

<220>

<221> SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.3亚型的RBD抗原肽

<222> (1)..(223)

<400> 31

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Ser

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 32

<211> 3765

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> WT-S-del18的核苷酸序列

<222> (1)..(3765)

<400> 32

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgaccaca 60

cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120

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atccggggct ggattttcgg caccacactc gactctaaga cacagtccct cctgattgtg 360

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tctagcgcca acaactgcac cttcgagtac gtgtcccagc ctttcctcat ggacctggag 540

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ttcaagattt actctaagca caccccaatt aacctcgtga gggacctccc tcagggcttc 660

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ctcctgttca acaaggtgac actggccgac gccggcttca ttaagcagta cggcgactgc 2520

ctgggcgaca ttgccgcccg ggacctgatt tgcgcccaga agttcaacgg cctcacagtg 2580

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acaattacat ctggctggac cttcggcgcc ggcgccgccc tgcagatccc tttcgccatg 2700

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aagctgatcg ccaaccagtt caacagcgcc attggcaaga ttcaggactc tctgagcagc 2820

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acactggtga agcagctgtc ttctaacttc ggcgccattt ctagcgtgct gaacgacatt 2940

ctgtcgcggc tggacaaggt ggaggccgag gtgcagattg acaggctcat cacaggcaga 3000

ctgcagtctc tgcagacata cgtgacccag cagctgatta gagccgccga gattagagcc 3060

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cactggttcg tgacccagcg gaacttctac gagcctcaga ttattaccac agacaacaca 3360

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<210> 33

<211> 3759

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> Delta-S-del18的核苷酸序列

<222> (1)..(3759)

<400> 33

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgagaaca 60

cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120

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acagagtcta ttgtgcggtt cccaaacatc acaaacctgt gccctttcgg cgaggtgttc 1020

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ctccacgtga catacgtgcc cgcccaggag aagaacttca ccacagcccc cgccatttgc 3240

cacgacggca aggcccactt ccctagggag ggcgtgttcg tgtctaacgg cacccactgg 3300

ttcgtgaccc agcggaactt ctacgagcct cagattatta ccacagacaa cacattcgtg 3360

agcggcaact gcgacgtggt gattggcatt gtgaacaaca cagtgtacga cccactgcag 3420

cctgagttgg actctttcaa ggaggaactc gacaagtact tcaagaacca cacatctcct 3480

gacgtggacc tgggcgacat tagcggcatt aacgcctctg tggtgaacat tcagaaggag 3540

attgacagac tgaacgaggt ggccaagaac ctgaacgagt ctctcattga cctgcaggag 3600

ctgggcaagt acgagcagta cattaagtgg ccttggtaca tttggctggg cttcattgcc 3660

ggcctgatcg ccattgtgat ggtgaccatc atgctgtgct gcatgacatc ttgctgcagc 3720

tgcctgaagg gctgctgctc ttgcggctct tgctgcaag 3759

<210> 34

<211> 3756

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> BA.1-S-del18的核苷酸序列

<222> (1)..(3756)

<400> 34

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgaccaca 60

cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120

aaggtgttcc ggtctagcgt gctccactct acacaggacc tgttcctccc tttcttcagc 180

aacgtgacat ggttccacgt gatctctggc acaaacggca caaagcggtt cgacaacccc 240

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ggctggattt tcggcaccac actcgactct aagacacagt ccctcctgat tgtgaacaac 360

gccacaaacg tggtgattaa ggtgtgcgag ttccagttct gcaacgaccc tttcctggac 420

cacaagaaca acaagtcttg gatggagtct gagttcagag tgtactctag cgccaacaac 480

tgcaccttcg agtacgtgtc ccagcctttc ctcatggacc tggagggcaa gcagggcaac 540

ttcaagaacc tgagagagtt cgtgttcaag aacattgacg gctacttcaa gatttactct 600

aagcacaccc caattattgt gagggaacca gaagacctcc ctcagggctt ctccgcctta 660

gaaccactgg tggacctccc tattggcatt aacatcacac gcttccagac actgctcgcc 720

ctccaccggt cttacctgac cccaggcgac tctagctctg gctggacagc cggcgccgcc 780

gcctactacg tgggctacct gcagcctagg accttcctcc tgaagtacaa cgagaacggc 840

acaattaccg acgccgtgga ctgcgccctg gacccactgt ccgagacaaa gtgcacactg 900

aagtccttca cagtggagaa gggcatttac cagacatcta acttccgggt gcagcctaca 960

gagtctattg tgcggttccc aaacatcaca aacctgtgcc ctttcgacga ggtgttcaac 1020

gccacccggt tcgcctctgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatctctaa ctgcgtggcc 1080

gactactccg tgctgtacaa cctggcccct ttcttcacat tcaagtgcta cggcgtgtcc 1140

cctacaaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgactcttt cgtgattaga 1200

ggcgacgagg tgaggcagat tgcccccggc cagacaggca acatcgccga ctacaactac 1260

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gccggcttca actgctactt cccactgcgc tcctactcct tccggcctac atacggcgtg 1500

ggccaccagc cttaccgggt ggtggtgctg tctttcgagc tgctccacgc ccccgccaca 1560

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atccctattg gcgccggcat ttgcgcctct taccagaccc agacaaagtc tcaccggaga 2040

gcccggtctg tggcctctca gagcattatt gcctacacca tgtctctggg cgccgagaac 2100

tctgtggcct actctaacaa ctctattgcc atccctacaa acttcacaat ttctgtgacc 2160

accgagattc tcccagtgtc tatgaccaag acatctgtgg actgcaccat gtacatttgc 2220

ggcgactcca ccgagtgctc taacctcctg ctccagtacg gctctttctg cacccagctc 2280

aagcgcgccc tgacaggcat cgccgtggag caggacaaga acacccagga ggtgttcgcc 2340

caggtgaagc agatttacaa gaccccccca attaagtact tcggcggctt caacttctct 2400

cagattctcc ccgacccatc caagcctagc aagcggtcct tcattgagga cctcctgttc 2460

aacaaggtga cactggccga cgccggcttc attaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520

attgccgccc gggacctgat ttgcgcccag aagttcaagg gcctcacagt gctcccccca 2580

ctgctcaccg acgagatgat tgcccagtac acatctgccc tcctggccgg cacaattaca 2640

tctggctgga ccttcggcgc cggcgccgcc ctgcagatcc ctttcgccat gcagatggcc 2700

taccgcttca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaacca gaagctgatc 2760

gccaaccagt tcaacagcgc cattggcaag attcaggact ctctgagcag cacagccagc 2820

gccctgggca agctgcagga cgtggtgaac cacaacgccc aggccctgaa cacactggtg 2880

aagcagctgt cttctaagtt cggcgccatt tctagcgtgc tgaacgacat tttctcgcgg 2940

ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatt gacaggctca tcacaggcag actgcagtct 3000

ctgcagacat acgtgaccca gcagctgatt agagccgccg agattagagc ctccgccaac 3060

ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctcggccagt ctaagcgggt ggacttctgc 3120

ggcaagggct accacctcat gtctttccct cagtccgccc ctcacggcgt ggtgttcctc 3180

cacgtgacat acgtgcccgc ccaggagaag aacttcacca cagcccccgc catttgccac 3240

gacggcaagg cccacttccc tagggagggc gtgttcgtgt ctaacggcac ccactggttc 3300

gtgacccagc ggaacttcta cgagcctcag attattacca cagacaacac attcgtgagc 3360

ggcaactgcg acgtggtgat tggcattgtg aacaacacag tgtacgaccc actgcagcct 3420

gagttggact ctttcaagga ggaactcgac aagtacttca agaaccacac atctcctgac 3480

gtggacctgg gcgacattag cggcattaac gcctctgtgg tgaacattca gaaggagatt 3540

gacagactga acgaggtggc caagaacctg aacgagtctc tcattgacct gcaggagctg 3600

ggcaagtacg agcagtacat taagtggcct tggtacattt ggctgggctt cattgccggc 3660

ctgatcgcca ttgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacatcttg ctgcagctgc 3720

ctgaagggct gctgctcttg cggctcttgc tgcaag 3756

<210> 35

<211> 3756

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> BA.1.1-S-del18的核苷酸序列

<222> (1)..(3756)

<400> 35

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgaccaca 60

cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120

aaggtgttcc ggtctagcgt gctccactct acacaggacc tgttcctccc tttcttcagc 180

aacgtgacat ggttccacgt gatctctggc acaaacggca caaagcggtt cgacaacccc 240

gtgctccctt tcaacgacgg cgtgtacttc gccagcattg agaagtctaa cattatccgg 300

ggctggattt tcggcaccac actcgactct aagacacagt ccctcctgat tgtgaacaac 360

gccacaaacg tggtgattaa ggtgtgcgag ttccagttct gcaacgaccc tttcctggac 420

cacaagaaca acaagtcttg gatggagtct gagttcagag tgtactctag cgccaacaac 480

tgcaccttcg agtacgtgtc ccagcctttc ctcatggacc tggagggcaa gcagggcaac 540

ttcaagaacc tgagagagtt cgtgttcaag aacattgacg gctacttcaa gatttactct 600

aagcacaccc caattattgt ggaaccagaa agggacctcc ctcagggctt ctccgcctta 660

gaaccactgg tggacctccc tattggcatt aacatcacac gcttccagac actgctcgcc 720

ctccaccggt cttacctgac cccaggcgac tctagctctg gctggacagc cggcgccgcc 780

gcctactacg tgggctacct gcagcctagg accttcctcc tgaagtacaa cgagaacggc 840

acaattaccg acgccgtgga ctgcgccctg gacccactgt ccgagacaaa gtgcacactg 900

aagtccttca cagtggagaa gggcatttac cagacatcta acttccgggt gcagcctaca 960

gagtctattg tgcggttccc aaacatcaca aacctgtgcc ctttcgacga ggtgttcaac 1020

gccaccaagt tcgcctctgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatctctaa ctgcgtggcc 1080

gactactccg tgctgtacaa cctggcccct ttcttcacat tcaagtgcta cggcgtgtcc 1140

cctacaaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgactcttt cgtgattaga 1200

ggcgacgagg tgaggcagat tgcccccggc cagacaggca acatcgccga ctacaactac 1260

aagctgcccg acgacttcac aggctgcgtg atcgcctgga actctaacaa gctggactct 1320

aaggtgtctg gcaactacaa ctacctgtac agactgttcc ggaagtctaa cctgaagcca 1380

ttcgagaggg acattagcac cgagatttac caggccggca acaagccatg caacggcgtg 1440

gccggcttca actgctactt cccactgcgc tcctactcct tccggcctac atacggcgtg 1500

ggccaccagc cttaccgggt ggtggtgctg tctttcgagc tgctccacgc ccccgccaca 1560

gtgtgcggcc caaagaagag cacaaacctc gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620

aacggcctca agggcacagg cgtgctcacc gagtctaaca agaagttcct ccctttccag 1680

cagttcggcc gcgacattgc cgacaccacc gacgccgtgc gggaccctca gacactggaa 1740

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acatctaacc aggtggccgt gctgtaccag ggcgtgaact gcaccgaggt gccagtggcc 1860

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atccctattg gcgccggcat ttgcgcctct taccagaccc agacaaagtc tcaccggaga 2040

gcccggtctg tggcctctca gagcattatt gcctacacca tgtctctggg cgccgagaac 2100

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attgccgccc gggacctgat ttgcgcccag aagttcaagg gcctcacagt gctcccccca 2580

ctgctcaccg acgagatgat tgcccagtac acatctgccc tcctggccgg cacaattaca 2640

tctggctgga ccttcggcgc cggcgccgcc ctgcagatcc ctttcgccat gcagatggcc 2700

taccgcttca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaacca gaagctgatc 2760

gccaaccagt tcaacagcgc cattggcaag attcaggact ctctgagcag cacagccagc 2820

gccctgggca agctgcagga cgtggtgaac cacaacgccc aggccctgaa cacactggtg 2880

aagcagctgt cttctaagtt cggcgccatt tctagcgtgc tgaacgacat tttctcgcgg 2940

ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatt gacaggctca tcacaggcag actgcagtct 3000

ctgcagacat acgtgaccca gcagctgatt agagccgccg agattagagc ctccgccaac 3060

ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctcggccagt ctaagcgggt ggacttctgc 3120

ggcaagggct accacctcat gtctttccct cagtccgccc ctcacggcgt ggtgttcctc 3180

cacgtgacat acgtgcccgc ccaggagaag aacttcacca cagcccccgc catttgccac 3240

gacggcaagg cccacttccc tagggagggc gtgttcgtgt ctaacggcac ccactggttc 3300

gtgacccagc ggaacttcta cgagcctcag attattacca cagacaacac attcgtgagc 3360

ggcaactgcg acgtggtgat tggcattgtg aacaacacag tgtacgaccc actgcagcct 3420

gagttggact ctttcaagga ggaactcgac aagtacttca agaaccacac atctcctgac 3480

gtggacctgg gcgacattag cggcattaac gcctctgtgg tgaacattca gaaggagatt 3540

gacagactga acgaggtggc caagaacctg aacgagtctc tcattgacct gcaggagctg 3600

ggcaagtacg agcagtacat taagtggcct tggtacattt ggctgggctt cattgccggc 3660

ctgatcgcca ttgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacatcttg ctgcagctgc 3720

ctgaagggct gctgctcttg cggctcttgc tgcaag 3756

<210> 36

<211> 3756

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> BA.2-S-del18的核苷酸序列

<222> (1)..(3756)

<400> 36

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgatcaca 60

cggacccaga gctacacaaa ctctttcacc cggggcgtgt actaccccga caaggtgttc 120

cggtctagcg tgctccactc tacacaggac ctgttcctcc ctttcttcag caacgtgaca 180

tggttccacg ccatccacgt gtctggcaca aacggcacaa agcggttcga caaccccgtg 240

ctccctttca acgacggcgt gtacttcgcc agcaccgaga agtctaacat tatccggggc 300

tggattttcg gcaccacact cgactctaag acacagtccc tcctgattgt gaacaacgcc 360

acaaacgtgg tgattaaggt gtgcgagttc cagttctgca acgacccttt cctggacgtg 420

tactaccaca agaacaacaa gtcttggatg gagtctgagt tcagagtgta ctctagcgcc 480

aacaactgca ccttcgagta cgtgtcccag cctttcctca tggacctgga gggcaagcag 540

ggcaacttca agaacctgag agagttcgtg ttcaagaaca ttgacggcta cttcaagatt 600

tactctaagc acaccccaat taacctcggc agggacctcc ctcagggctt ctccgcctta 660

gaaccactgg tggacctccc tattggcatt aacatcacac gcttccagac actgctcgcc 720

ctccaccggt cttacctgac cccaggcgac tctagctctg gctggacagc cggcgccgcc 780

gcctactacg tgggctacct gcagcctagg accttcctcc tgaagtacaa cgagaacggc 840

acaattaccg acgccgtgga ctgcgccctg gacccactgt ccgagacaaa gtgcacactg 900

aagtccttca cagtggagaa gggcatttac cagacatcta acttccgggt gcagcctaca 960

gagtctattg tgcggttccc aaacatcaca aacctgtgcc ctttcgacga ggtgttcaac 1020

gccacccggt tcgcctctgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatctctaa ctgcgtggcc 1080

gactactccg tgctgtacaa cttcgccccc ttcttcgcct tcaagtgcta cggcgtgtcc 1140

cctacaaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgactcttt cgtgattaga 1200

ggcaacgagg tgagccagat tgcccccggc cagacaggca acatcgccga ctacaactac 1260

aagctgcccg acgacttcac aggctgcgtg atcgcctgga actctaacaa gctggactct 1320

aaggtgggcg gcaactacaa ctacctgtac agactgttcc ggaagtctaa cctgaagcca 1380

ttcgagaggg acattagcac cgagatttac caggccggca acaagccatg caacggcgtg 1440

gccggcttca actgctactt cccactgcgg tcctacggct tccggcctac atacggcgtg 1500

ggccaccagc cttaccgggt ggtggtgctg tctttcgagc tgctccacgc ccccgccaca 1560

gtgtgcggcc caaagaagag cacaaacctc gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620

aacggcctca caggcacagg cgtgctcacc gagtctaaca agaagttcct ccctttccag 1680

cagttcggcc gcgacattgc cgacaccacc gacgccgtgc gggaccctca gacactggaa 1740

attctcgaca tcaccccttg cagcttcggc ggcgtgtccg tgatcacccc aggcacaaac 1800

acatctaacc aggtggccgt gctgtaccag ggcgtgaact gcaccgaggt gccagtggcc 1860

atccacgccg accagctcac cccaacatgg agggtgtaca gcacaggctc taacgtgttc 1920

cagacccggg ccggctgcct cattggcgcc gagtacgtga acaactctta cgagtgcgac 1980

atccctattg gcgccggcat ttgcgcctct taccagaccc agacaaagtc tcaccggaga 2040

gcccggtctg tggcctctca gagcattatt gcctacacca tgtctctggg cgccgagaac 2100

tctgtggcct actctaacaa ctctattgcc atccctacaa acttcacaat ttctgtgacc 2160

accgagattc tcccagtgtc tatgaccaag acatctgtgg actgcaccat gtacatttgc 2220

ggcgactcca ccgagtgctc taacctcctg ctccagtacg gctctttctg cacccagctc 2280

aagcgcgccc tgacaggcat cgccgtggag caggacaaga acacccagga ggtgttcgcc 2340

caggtgaagc agatttacaa gaccccccca attaagtact tcggcggctt caacttctct 2400

cagattctcc ccgacccatc caagcctagc aagcggtcct tcattgagga cctcctgttc 2460

aacaaggtga cactggccga cgccggcttc attaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520

attgccgccc gggacctgat ttgcgcccag aagttcaacg gcctcacagt gctcccccca 2580

ctgctcaccg acgagatgat tgcccagtac acatctgccc tcctggccgg cacaattaca 2640

tctggctgga ccttcggcgc cggcgccgcc ctgcagatcc ctttcgccat gcagatggcc 2700

taccgcttca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaacca gaagctgatc 2760

gccaaccagt tcaacagcgc cattggcaag attcaggact ctctgagcag cacagccagc 2820

gccctgggca agctgcagga cgtggtgaac cacaacgccc aggccctgaa cacactggtg 2880

aagcagctgt cttctaagtt cggcgccatt agcagcgtgc tgaacgacat tctgtcgcgg 2940

ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatt gacaggctca tcacaggcag actgcagtct 3000

ctgcagacat acgtgaccca gcagctgatt agagccgccg agattagagc ctccgccaac 3060

ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctcggccagt ctaagcgggt ggacttctgc 3120

ggcaagggct accacctcat gtctttccct cagtccgccc ctcacggcgt ggtgttcctc 3180

cacgtgacat acgtgcccgc ccaggagaag aacttcacca cagcccccgc catttgccac 3240

gacggcaagg cccacttccc tagggagggc gtgttcgtgt ctaacggcac ccactggttc 3300

gtgacccagc ggaacttcta cgagcctcag attattacca cagacaacac attcgtgagc 3360

ggcaactgcg acgtggtgat tggcattgtg aacaacacag tgtacgaccc actgcagcct 3420

gagttggact ctttcaagga ggaactcgac aagtacttca agaaccacac atctcctgac 3480

gtggacctgg gcgacattag cggcattaac gcctctgtgg tgaacattca gaaggagatt 3540

gacagactga acgaggtggc caagaacctg aacgagtctc tcattgacct gcaggagctg 3600

ggcaagtacg agcagtacat taagtggcct tggtacattt ggctgggctt cattgccggc 3660

ctgatcgcca ttgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacatcttg ctgcagctgc 3720

ctgaagggct gctgctcttg cggctcttgc tgcaag 3756

<210> 37

<211> 3747

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> BA.3-S-del18的核苷酸序列

<222> (1)..(3747)

<400> 37

atgttcgtgt tcctggtgct cctgcccctc gtgagctctc agtgcgtgaa cctgaccacc 60

cggacacagc tgccacctgc ctacaccaac tctttcacaa gaggcgtgta ctaccccgac 120

aaggtgttcc ggagcagcgt gctgcacagc acacaggatc tgttcctgcc cttcttcagc 180

aacgtgacct ggttccacgt gatcagcggc accaacggaa caaaaagatt tgacaacccc 240

gtgctgcctt ttaacgatgg cgtctacttc gcctccaccg agaagagcaa catcatccgc 300

ggctggatct tcggtacaac cctggattcc aagacccaga gcctgctgat cgtgaacaat 360

gccacaaacg tggtgatcaa ggtgtgtgag ttccagttct gtaacgaccc ttttctggga 420

cacaagaata acaagagctg gatggaaagc gagttccgag tgtactccag cgccaacaac 480

tgcactttcg agtacgtgag ccagcctttc ctgatggacc tggaaggcaa gcagggaaat 540

ttcaagaacc tgcgggagtt cgtgtttaag aacattgatg gctactttaa gatctacagc 600

aagcacaccc caatcatcgt gcgggacctg cctcaaggct tcagcgccct cgaacctctg 660

gtggacctgc ccatcggaat caacatcaca cggtttcaga ccctgctggc cctgcatagg 720

agctacctga cacctggcga cagcagctcc ggctggacag ccggagctgc cgcttattac 780

gttggctacc tgcagcctcg tacattcctg cttaagtata atgagaatgg cacaatcacc 840

gacgccgtgg actgcgccct ggaccccctg tctgagacaa aatgcaccct gaagtctttc 900

accgtggaaa agggcatcta ccagacctct aacttccgcg tccagcctac cgagtccatc 960

gtccggttcc ctaacataac caacctgtgc cctttcgacg aggtgtttaa cgccaccaga 1020

ttcgcttctg tgtacgcctg gaacagaaag agaatcagca attgtgtggc tgactacagc 1080

gtgctctaca actttgcccc ttttttcaca ttcaagtgct acggagtgag ccctacaaag 1140

ctgaacgacc tgtgcttcac caacgtgtac gccgacagct ttgttatccg gggcaatgag 1200

gtgagacaga tcgcccctgg acagaccgga aacatcgccg attacaacta caaactgcca 1260

gatgacttca ccggctgcgt gatcgcctgg aactccaaca agctggactc taaggtgagc 1320

ggcaattaca actacctgta cagactgttt cggaagagca acctgaagcc tttcgagaga 1380

gatataagca ccgagatcta ccaggctggc aataaacctt gcaacggcgt tgccggcttc 1440

aactgctact tccctctgag aagctacggc tttaggccca cctacggcgt gggccaccag 1500

ccctaccggg tggtggtgct gagcttcgag ctgctgcacg cccccgcaac cgtgtgcggc 1560

cctaagaaat ctacaaatct cgtgaaaaat aagtgcgtca acttcaactt caatggcctg 1620

accggcacgg gtgtactgac cgagtctaac aagaaattcc tgcccttcca acagttcggc 1680

agagacatcg ccgacaccac cgatgccgtg cgggacccac aaacccttga gatcctggat 1740

atcacacctt gtagttttgg cggcgtgtct gtcatcaccc ctggcaccaa cacctctaac 1800

caagtggccg tcctctacca gggcgttaat tgcaccgagg tccctgtggc aatccacgcc 1860

gaccagctga cccccacatg gagagtgtac agcacaggca gcaacgtgtt ccaaacaaga 1920

gccggctgcc tgatcggcgc tgaatacgtg aataacagct acgagtgcga catccccatc 1980

ggggctggga tctgcgccag ctaccagacc cagaccaaaa gccacagaag agcccggagc 2040

gttgccagcc agtcaatcat cgcctacacc atgagcctcg gcgctgagaa cagcgtggcc 2100

tattccaaca atagtatcgc catccctacc aatttcacca tctcggtgac caccgaaatc 2160

ctgcctgtga gtatgaccaa aacatcagtg gactgcacca tgtacatctg cggcgatagc 2220

accgagtgca gcaacctgct gctgcagtac gggagcttct gcacccaact gaagcgcgct 2280

ctgaccggca tcgctgtgga acaggataag aacacacagg aggtgttcgc ccaggtgaag 2340

cagatctaca agacgcctcc tatcaagtac ttcggcggct tcaacttttc tcagatcctg 2400

cctgacccct caaagcccag caagcggtcc ttcatcgagg acctgctctt taacaaggtg 2460

acgctggccg acgctggctt catcaaacag tatggggatt gcctgggcga catcgccgcc 2520

agagacctga tttgtgccca gaagttcaac ggcctgaccg tcctccctcc tctgctgaca 2580

gacgaaatga tcgcccagta cacaagcgct ctgctggccg gcacaatcac tagcggctgg 2640

accttcggcg ccggagccgc tctgcaaatc cctttcgcca tgcagatggc ctacagattc 2700

aacggcattg gtgttaccca gaacgtgctg tatgagaacc agaagctgat cgccaaccag 2760

tttaatagcg ccatcggaaa gatccaagac tctctgagca gcaccgccag cgccttagga 2820

aagctgcagg acgtggtgaa ccacaacgcc caggccctga atacactggt gaagcagctg 2880

agctccaagt tcggcgccat ctcatctgtc cttaacgaca ttctgagtag actggacaag 2940

gtggaagccg aagtgcagat cgacagactg atcaccggca gactgcaaag cctgcagaca 3000

tatgtgaccc agcagctgat cagagcggcc gagatcagag ccagcgctaa tctggctgcc 3060

acaaagatgt ccgaatgcgt gctcggccag tccaagagag tggatttctg cggcaaaggc 3120

taccacctga tgagcttccc ccagagcgcc cctcacggcg tggtgtttct gcatgtgacc 3180

tacgtgcctg ctcaggaaaa gaacttcaca acagctcctg ccatctgtca cgacggcaag 3240

gcccacttcc ccagagaggg cgtattcgtg tctaacggca cccactggtt cgtgacccag 3300

agaaacttct acgagcctca gatcatcaca accgacaaca ccttcgtgag cggcaactgt 3360

gatgtggtga tcggcatcgt gaacaacacc gtttacgacc ccttacagcc tgagctggat 3420

tctttcaagg aagaactgga taaatacttc aagaatcaca caagtcccga cgtggaccta 3480

ggggacatct ctggcataaa cgcctccgtc gtgaacatcc agaaagaaat cgatagactg 3540

aacgaagtgg ccaagaacct gaacgagagc ctgatcgacc tgcaggagct gggcaaatac 3600

gagcagtaca tcaagtggcc ttggtacatc tggctgggct tcatcgccgg actgatcgcc 3660

atcgtgatgg tgaccatcat gctgtgttgc atgaccagct gctgcagctg cctgaaggga 3720

tgttgctctt gtggctcatg ctgtaaa 3747

<210> 38

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 未优化的DB mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 38

cgagugcagc cuaccgaaag caucguccgu uucccgaaua uuacuaaucu cuguccauuc 60

ggagaagucu ucaaugccac ccgauucgcu uccguuuacg cguggaaccg uaaacgaaua 120

ucuaauugug uugcggacua uuccguguug uacaacucag caucauucuc uacuuuuaaa 180

ugcuauggag ugucgccgac uaaacucaac gacuuguguu ucacuaaugu uuaugcugac 240

ucuuucguua uucguggaga cgaaguucgu caaaucgcac cagggcaaac uggcaagauu 300

gcggacuaua auuauaagcu gccagaugac uuuaccggau guguaauagc cuggaacuca 360

aauaaucucg acaguaaagu gggaggcaac uauaauuauc guuaucgacu cuucagaaag 420

ucuaaccuua agccauuuga acgugacauu ucuacagaaa uuuaccaagc cggcucuaag 480

ccuugcaaug gcguggaagg guuuaacugu uauuucccau uacagucuua ugguuuccag 540

ccaacuaaug gugugggaua ccaaccuuac cgcgucguug uccugucguu ugaauugcuu 600

cacgcaccag ccaccguuug ugggccaaag aagagcacua aucucguagu ucagccuacu 660

gaaucgaucg ugagguuccc aaauauuacc aaucuguguc cguucggaga ggucuucaau 720

gcgacucgau ucgcgucugu uuacgccugg aacaggaaac ggauuagcaa uugugucgcu 780

gacuauucgg ucuuauacaa cucugcauca uucucaaccu ucaaguguua uggugucagc 840

ccuacaaagc ugaaugacuu auguuucacc aauguuuaug cggacaguuu cguaauacga 900

ggugaugaag uccgccaaau ugcacccgga caaaccggca acauagccga cuauaauuau 960

aagcucccug augacuuuac gggcuguguc auagcuugga auaguaauaa uuuggacucg 1020

aaagugggag guaauuauaa uuaucucuau agacuguucc ggaaaucaaa ucucaagccc 1080

uuugaacggg acauaaguac agaaaucuac caagcugguu ccacgccgug uaauggaguc 1140

aagggguuua acuguuauuu cccgcuccag ucguaugggu uccagccaac guauggcguc 1200

ggauaccaac cuuaccgcgu uguaguauua agcuuugaac uguugcacgc gcccgcgacu 1260

guuuguggcc cgaagaaguc gacuaaucua guaaagaaua ag 1302

<210> 39

<211> 1302

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<220>

<221> 未优化的DO mRNA疫苗的mRNA编码序列

<222> (1)..(1302)

<400> 39

cgagugcagc cuaccgaaag caucguccgu uucccgaaua uuacuaaucu cuguccauuc 60

ggagaagucu ucaaugccac ccgauucgcu uccguuuacg cguggaaccg uaaacgaaua 120

ucuaauugug uugcggacua uuccguguug uacaacucag caucauucuc uacuuuuaaa 180

ugcuauggag ugucgccgac uaaacucaac gacuuguguu ucacuaaugu uuaugcugac 240

ucuuucguua uucguggaga cgaaguucgu caaaucgcac cagggcaaac uggcaagauu 300

gcggacuaua auuauaagcu gccagaugac uuuaccggau guguaauagc cuggaacuca 360

aauaaucucg acaguaaagu gggaggcaac uauaauuauc guuaucgacu cuucagaaag 420

ucuaaccuua agccauuuga acgugacauu ucuacagaaa uuuaccaagc cggcucuaag 480

ccuugcaaug gcguggaagg guuuaacugu uauuucccau uacagucuua ugguuuccag 540

ccaacuaaug gugugggaua ccaaccuuac cgcgucguug uccugucguu ugaauugcuu 600

cacgcaccag ccaccguuug ugggccaaag aagagcacua aucucguagu ucagccuacu 660

gaaucgaucg ugagguuccc aaauauuacc aaucuguguc cguucgacga ggucuucaau 720

gcgacucgau ucgcgucugu uuacgccugg aacaggaaac ggauuagcaa uugugucgcu 780

gacuauucgg ucuuauacaa cuuggcacca uucuucaccu ucaaguguua uggugucagc 840

ccuacaaagc ugaaugacuu auguuucacc aauguuuaug cggacaguuu cguaauacga 900

ggugaugaag uccgccaaau ugcacccgga caaaccggca acauagccga cuauaauuau 960

aagcucccug augacuuuac gggcuguguc auagcuugga auaguaauaa guuggacucg 1020

aaagugucag guaauuauaa uuaucucuau agacuguucc ggaaaucaaa ucucaagccc 1080

uuugaacggg acauaaguac agaaaucuac caagcuggua acaagccgug uaauggaguc 1140

gcaggguuua acuguuauuu cccgcuccgg ucguauuccu uccggccaac guauggcguc 1200

ggacaccaac cuuaccgcgu uguaguauua agcuuugaac uguugcacgc gcccgcgacu 1260

guuuguggcc cgaagaaguc gacuaaucua guaaagaaua ag 1302

Claims (20)

1.一种多核苷酸，其编码如SEQ ID NO:1所示的新型冠状病毒Delta变异株与Beta变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽；

其特征在于：

所述多核苷酸为DNA分子，所述DNA分子由如下序列之一组成：SEQ ID NO:2、3、4或5所示DNA序列；或者，

所述多核苷酸为mRNA分子，所述mRNA分子由如下序列之一组成：SEQ ID NO:6、7、8或9所示mRNA序列。

2.一种多核苷酸，其编码如SEQ ID NO:10所示的新型冠状病毒Delta变异株与Omicron变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽；

其特征在于：

所述多核苷酸为DNA分子，所述DNA分子由如下序列之一组成：SEQ ID NO:11、12、13或14所示DNA序列；或者，

所述多核苷酸为mRNA分子，所述mRNA分子由如下序列之一组成：SEQ ID NO:15、16、17或18所示mRNA序列。

3.一种核酸构建体，其包含如权利要求1或2所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。

4.一种表达载体，其包含如权利要求3所述的核酸构建体。

5.一种宿主细胞，其中转化或转染有如权利要求1或2所述的多核苷酸、如权利要求3所述的核酸构建体或如权利要求4所述的表达载体。

6.如权利要求1或2所述的多核苷酸、如权利要求3所述的核酸构建体、如权利要求4所述的表达载体或如权利要求5所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗新型冠状病毒的疫苗中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述疫苗用于单独免疫或者与其他类型的新型冠状病毒疫苗进行序贯免疫。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述其他类型的新型冠状病毒疫苗包括灭活疫苗。

9.一种嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其包含如权利要求1或2所述的多核苷酸、如权利要求3所述的核酸构建体、如权利要求4所述的表达载体或如权利要求5所述的宿主细胞，以及生理学可接受的媒介物、佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。

10.根据权利要求9所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒DNA疫苗，所述DNA疫苗包括：

(i)真核表达载体；和

(ii)构建入所述真核表达载体中的、编码如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列，其中，所述编码如SEQ ID NO:1所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列选自：SEQ ID NO:2、3、4或5所示DNA序列，所述编码如SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列选自：SEQ ID NO:11、12、13或14所示DNA序列。

11.根据权利要求10所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述真核表达载体选自pGX0001、pVAX1、pCAGGS和pcDNA系列载体。

12.根据权利要求9所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒mRNA疫苗，所述mRNA疫苗包括：

(I)编码如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的mRNA序列，其中，所述编码如SEQ ID NO:1所示的重组嵌合抗原肽的mRNA序列选自：SEQ ID NO:6、7、8或9所示mRNA序列，所述编码如SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的mRNA序列选自：SEQ ID NO:15、16、17或18所示mRNA序列；和

(II)脂质纳米颗粒。

13.根据权利要求12所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述mRNA序列为经5’端加帽修饰的。

14.根据权利要求9所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒-病毒载体疫苗，其包括：

(1)病毒骨架载体；和

(2)构建入所述病毒骨架载体中的、编码如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列，其中，所述编码如SEQ ID NO:1所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列选自：SEQ ID NO:2、3、4或5所示DNA序列，所述编码如SEQ ID NO:10所示的重组嵌合抗原肽的DNA序列选自：SEQ ID NO:11、12、13或14所示DNA序列。

15.根据权利要求14所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒骨架载体选自以下病毒载体中的一种或几种：腺病毒载体、痘病毒载体、流感病毒载体、腺相关病毒载体。

16.根据权利要求9-15任一项所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述疫苗或免疫原性组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式。

17.根据权利要求16所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述鼻喷剂选自气雾剂、喷雾剂和粉雾剂；

和/或，所述口服制剂选自片剂、粉末剂、丸剂、散剂、颗粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂和膏剂；

和/或，所述胃肠外制剂为经皮剂或可注射制剂。

18.根据权利要求17所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述片剂为舌下片；

和/或，所述丸剂为小丸剂；

和/或，所述颗粒剂为细粒剂；

和/或，所述经皮剂为软膏剂、硬膏剂或外用液剂；

和/或，所述可注射制剂为可推注制剂。

19.一种试剂盒，其包括根据权利要求9-18任一项所述的嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物，以及任选地其他类型的新型冠状病毒疫苗，所述嵌合核酸疫苗或免疫原性组合物与所述其他类型的新型冠状病毒疫苗单独包装。

20.根据权利要求19所述的试剂盒，其特征在于，所述其他类型的新型冠状病毒疫苗为新型冠状病毒灭活疫苗。