CN115669911A - 一种含甜叶菊的组合物及应用 - Google Patents

一种含甜叶菊的组合物及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115669911A
CN115669911A CN202211161676.XA CN202211161676A CN115669911A CN 115669911 A CN115669911 A CN 115669911A CN 202211161676 A CN202211161676 A CN 202211161676A CN 115669911 A CN115669911 A CN 115669911A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stevia
extract
containing composition
crystals
ethanol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211161676.XA
Other languages
English (en)
Inventor
谭家忠
张宝堂
王会文
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HUNAN NUTRAMAX Inc
Original Assignee
HUNAN NUTRAMAX Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HUNAN NUTRAMAX Inc filed Critical HUNAN NUTRAMAX Inc
Priority to CN202211161676.XA priority Critical patent/CN115669911A/zh
Publication of CN115669911A publication Critical patent/CN115669911A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Seasonings (AREA)

Abstract

本发明公开了一种含甜叶菊的组合物,属于食品添加剂技术领域,包括如下组分:甜叶菊提取物、柠檬酸、赤藓糖醇和三叶苷;且甜叶菊提取物、柠檬酸、赤藓糖醇和三叶苷的质量之比为20∶2‑3∶31‑35∶30‑40;该组合物在甜味剂领域的应用。本发明采用甜叶菊提取物作为组合基质,通过对甜叶菊提取过程中超声、纤维素酶、提取溶剂以及分离纯化过程的控制,能够大幅减弱产生苦涩等不良口感的物质,得到的甜叶菊提取物为高纯度瑞鲍迪苷A;高纯瑞鲍迪苷A具有甜度高、甜度纯正、口感清凉的特点,但本身仍然有一定的苦味;通过将其与柠檬酸、赤藓糖醇、三叶苷进行复配,能够改善其泛苦的特性,获得甜度高、无杂味、不泛苦的甜味剂组合物。

Description

一种含甜叶菊的组合物及应用
技术领域
本发明属于食品添加剂技术领域,具体地,涉及一种含甜叶菊的组合物及应用。
背景技术
天然卡路里甜味剂(例如蔗糖、葡萄糖和果糖)具有期望的味道特性,但是它们增加产品的卡路里含量。因此,消费者更感兴趣的是认为更健康的备选的低卡路里或无卡路里甜味剂。无卡路里天然和合成的高效甜味剂为已知的,但是它们最通常具有对于消费者来说不如糖所期望的香味特性。因此,期望开发可替代糖并且具有更期望的味道特性的无卡路里甜味剂。
物种甜叶菊为某些天然存在的甜斯替维醇糖苷的来源。已进行相当多的研究和开发来评价使用甜叶菊的甜斯替维醇糖苷作为无卡路里甜味剂。可从甜叶菊提取的甜斯替维醇糖苷包括六种莱鲍迪甙(即,莱鲍迪甙A-F)、甜菊苷(来自野生类型甜叶菊的提取物中的主要的糖苷)和甜甙。
如公开号为CN1314102的中国发明专利,公开了一种甜味剂,由甜菊糖甙、蔗糖、磷酸二氢钾、苹果酸以及天然香料组成,其组成重量比(%)为:1~3∶4~10∶0.03~0.10∶0.04~0.08∶0.01~0.1。该发明提供的甜味剂,只需使用极少的量,就能达到人们口感所需的甜度,但其主要成分仍为蔗糖,甜味剂的热量值较高;而且甜味剂组分中没有一种组分可有效掩盖甜菊糖甙的这种苦涩味,因而该甜味剂仍然存在甜菊糖甙本身的苦涩味,导致其口感不够纯正。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷,提供了一种含甜叶菊的组合物及应用。
本发明采用甜叶菊提取物作为组合基质,通过对甜叶菊提取过程中超声、纤维素酶、提取溶剂以及分离纯化过程的控制,能够大幅减弱甜菊糖多糖中产生苦涩等不良口感的物质,得到的甜叶菊提取物为纯度高于97%的瑞鲍迪苷A;高纯度的瑞鲍迪苷A具有甜度高、甜度纯正、口感清凉的特点,优点非常明显,但是本身仍然具有一定的苦味;通过将其与柠檬酸、赤藓糖醇、三叶苷进行一定比例的复配,能够改善其泛苦的特性,获得甜度高、无杂味、不泛苦的甜味剂组合物。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现:
一种含甜叶菊的组合物,包括如下组分:甜叶菊提取物、柠檬酸、赤藓糖醇和三叶苷;
且甜叶菊提取物、柠檬酸、赤藓糖醇和三叶苷的质量之比为20:2-3:31-35:30-40。
其中,三叶苷是一种功能性天然甜味剂,甜味清爽、纯正,带有微弱的茶风味及回甘,可以增加食品的独特风味,同时还具有一定的生物活性(降血糖、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用),将其作为组合物原料之一,能够获得具有生物活性的健康型食品添加剂。
进一步地,甜叶菊提取物通过如下步骤制备:
S1、预处理:将甜叶菊叶子于65℃真空干燥箱中烘干,研磨粉碎,过20目筛,得到甜叶菊粉体;
一般来说,提取植物过程中原料粒度越细,提取的越完全,提取效果越好,但是原料越细,提取液过滤时越难,越容易阻塞滤纸,即使采用加压过滤也很难过滤下来,因此,综合效果,使用20目的甜叶菊粉体,能够兼并提取效果好和易于过滤的特点;
S2、提取:称取甜叶菊粉末按料液比1mg:40mL加入混合提取溶剂,加入纤维素酶,并调节pH值至4.5,于50℃超声提取35min,抽滤,向滤渣中加入等体积的混合提取溶剂,同等条件二次提取,合并滤液,加热至80℃,在25℃、10000r/min下离心10min(去除蛋白质等不溶性物质),离心后,取上清液,浓缩至原体积的1/10,加入3倍体积的无水乙醇,置于4℃条件下醇沉24h,然后在4℃、4000r/min下离心20min,取沉淀物置于60℃真空干燥箱烘干,得甜菊糖粗提物;
同时采用超声波和纤维素酶对甜叶菊进行提取,不仅具有操作简单、耗时短、溶剂用量少的优点,还可以有效提高甜菊糖的提取率;
S3、分离纯化:采用重结晶法,第一次结晶:以90%乙醇作为溶剂,料液比1mg:40mL,75℃下溶解甜菊糖粗提物,按照8.75℃/h的降温速率降低温度至5℃并在5℃条件下保持24h,用纯乙醇洗晶,置于60℃真空干燥箱烘干;第二次结晶:采用第一次结晶体为原料,以75%乙醇作为溶剂,料液比1mg:40mL,75℃下溶解,按照8.75℃/h的降温速率降低温度至5℃并在5℃条件下保持24h,用纯乙醇洗晶,置于60℃真空干燥箱烘干,得到甜叶菊提取物;
经过分离纯化后,能够大幅减弱甜菊糖中产生苦涩等不良口感的物质,得到的甜叶菊提取物为纯度高于97%的瑞鲍迪苷A;高纯度的瑞鲍迪苷A具有甜度高、甜度纯正、口感清凉的特点,优点非常明显,但是本身仍然具有一定的苦味;通过将其与柠檬酸、赤藓糖醇、三叶苷进行一定比例的复配,能够改善其泛苦的特性,获得甜度高、无杂味、不泛苦的甜味剂组合物。
进一步地,纤维素酶的加入量为体系质量的0.5%。
进一步地,步骤S2中混合提取溶剂为1,2-丙二醇、甘油和超纯水按照体积比8:1:1混合所得;
1,2-丙二醇作为溶剂的扩散性强,使甜叶菊的破壁速度与有效成分的溶出速率加快,有助于提高提取效率,但是1,2-丙二醇浓度太高会导致溶剂黏度变大、流动性变差,且1,2-丙二醇的含量增加会使混合溶剂的极性降低,可能减弱了其余目标成分的相互作用,从而使提取率降低,而当1,2-丙二醇与甘油和水复配时,能改善流动性和极性,因此,采用混合提取溶剂能够实现高的提取效率。
一种含甜叶菊的组合物在食品添加剂领域中的应用,特别是能够作为甜味剂使用。
本发明的有益效果:
本发明采用甜叶菊提取物作为组合基质,通过对甜叶菊提取过程中超声、纤维素酶、提取溶剂以及分离纯化过程的控制,能够大幅减弱甜菊糖多糖中产生苦涩等不良口感的物质,得到的甜叶菊提取物为纯度高于97%的瑞鲍迪苷A;高纯度的瑞鲍迪苷A具有甜度高、甜度纯正、口感清凉的特点,优点非常明显,但是本身仍然具有一定的苦味;通过将其与柠檬酸、赤藓糖醇、三叶苷进行一定比例的复配,能够改善其泛苦的特性,获得甜度高、无杂味、不泛苦的甜味剂组合物;
本发明的甜味剂组合物中加入了三叶苷,三叶苷是一种功能性天然甜味剂,甜味清爽、纯正,带有微弱的茶风味及回甘,可以增加食品的独特风味,同时还具有一定的生物活性(降血糖、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用),将其作为组合物原料之一,能够获得具有生物活性的健康型天然食品添加剂。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
制备甜叶菊提取物:
S1、预处理:将甜叶菊叶子于65℃真空干燥箱中烘干,研磨粉碎,过20目筛,得到甜叶菊粉体;
S2、提取:称取10mg甜叶菊粉末并加入400mL混合提取溶剂,加入20.5mg纤维素酶,并调节pH值至4.5,于50℃超声提取35min,抽滤,向滤渣中加入等体积的混合提取溶剂,同等条件二次提取,合并滤液,加热至80℃,在25℃、10000r/min下离心10min(去除蛋白质等不溶性物质),离心后,取上清液,浓缩至原体积的1/10,加入3倍体积的无水乙醇,置于4℃条件下醇沉12h,然后在4℃、4000r/min下离心20min,取沉淀物置于60℃真空干燥箱烘干,得甜菊糖粗提物;
混合提取溶剂为1,2-丙二醇、甘油和超纯水按照体积比8:1:1混合所得;
S3、分离纯化:采用重结晶法,第一次结晶:以90%乙醇作为溶剂,料液比1mg:40mL,75℃下溶解甜菊糖粗提物,按照8.75℃/h的降温速率降低温度至5℃并在5℃条件下保持24h,用纯乙醇洗晶,置于60℃真空干燥箱烘干;第二次结晶:采用第一次结晶体为原料,以75%乙醇作为溶剂,料液比1mg:40mL,75℃下溶解,按照8.75℃/h的降温速率降低温度至5℃并在5℃条件下保持24h,用纯乙醇洗晶,置于60℃真空干燥箱烘干,得到甜叶菊提取物。
实施例2
制备甜叶菊提取物:
S1、预处理:将甜叶菊叶子于65℃真空干燥箱中烘干,研磨粉碎,过20目筛,得到甜叶菊粉体;
S2、提取:称取20mg甜叶菊粉末并加入800mL混合提取溶剂,加入41mg纤维素酶,并调节pH值至4.5,于50℃超声提取35min,抽滤,向滤渣中加入等体积的混合提取溶剂,同等条件二次提取,合并滤液,加热至80℃,在25℃、10000r/min下离心10min(去除蛋白质等不溶性物质),离心后,取上清液,浓缩至原体积的1/10,加入3倍体积的无水乙醇,置于4℃条件下醇沉12h,然后在4℃、4000r/min下离心20min,取沉淀物置于60℃真空干燥箱烘干,得甜菊糖粗提物;
混合提取溶剂为1,2-丙二醇、甘油和超纯水按照体积比8:1:1混合所得;
S3、分离纯化:采用重结晶法,第一次结晶:以90%乙醇作为溶剂,料液比1mg:40mL,75℃下溶解甜菊糖粗提物,按照8.75℃/h的降温速率降低温度至5℃并在5℃条件下保持24h,用纯乙醇洗晶,置于60℃真空干燥箱烘干;第二次结晶:采用第一次结晶体为原料,以75%乙醇作为溶剂,料液比1mg:40mL,75℃下溶解,按照8.75℃/h的降温速率降低温度至5℃并在5℃条件下保持24h,用纯乙醇洗晶,置于60℃真空干燥箱烘干,得到甜叶菊提取物。
实施例3
一种含甜叶菊的组合物,包括如下组分:20g甜叶菊提取物、2g柠檬酸、31g赤藓糖醇和30g三叶苷。
实施例4
一种含甜叶菊的组合物,包括如下组分:20g甜叶菊提取物、2.5g柠檬酸、33g赤藓糖醇和35g三叶苷。
实施例5
一种含甜叶菊的组合物,包括如下组分:20g甜叶菊提取物、3g柠檬酸、35g赤藓糖醇和40g三叶苷。
以5%蔗糖溶液的甜度为标准,分别将实施例3-5的组合物配制成相当于5%蔗糖溶液的甜度,分别以柔和、清新、涩味、苦味、回味维持、呛(刺激)和综合7个指标作甜味对比(人工品尝),所得甜味对比数据如以下表所示:
Figure BDA0003859690350000071
由上表数据可知,本发明获得的甜叶菊组合物是一种热量值低,甜度高,口感好且无毒副作用的以天然植物提取物为原料的甜味剂,尤其适用于饮食行业。
在说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明,所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代,只要不偏离发明或者超越本权利要求书所定义的范围,均应属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种含甜叶菊的组合物,其特征在于,包括如下组分:甜叶菊提取物、柠檬酸、赤藓糖醇和三叶苷;
其中,甜叶菊提取物通过如下步骤制备:
S1、预处理:将甜叶菊叶子于65℃真空干燥箱中烘干,研磨粉碎,过筛,得到甜叶菊粉体;
S2、提取:称取甜叶菊粉末按料液比1mg∶40mL加入混合提取溶剂,加入纤维素酶,并调节pH值至4.5,于50℃超声提取35min,抽滤,向滤渣中加入等体积的混合提取溶剂,同等条件二次提取,合并滤液,加热至80℃,在25℃、10000r/min下离心10min,离心后,取上清液,浓缩至原体积的1/10,醇沉,取沉淀物置于60℃直空干燥箱烘干,得甜菊糖粗提物;
S3、分离纯化:采用重结晶法,第一次结晶:以90%乙醇作为溶剂,料液比1mg∶40mL,75℃下溶解甜菊糖粗提物,按照8.75℃/h的降温速率降低温度至5℃并在5℃条件下保持24h,用纯乙醇洗晶,置于60℃直空干燥箱烘干;第二次结晶:采用第一次结晶体为原料,以75%乙醇作为溶剂,料液比1mg∶40mL,75℃下溶解,按照8.75℃/h的降温速率降低温度至5℃并在5℃条件下保持24h,用纯乙醇洗晶,置于60℃真空干燥箱烘干,得到甜叶菊提取物。
2.根据权利要求1所述的一种含甜叶菊的组合物,其特征在于,甜叶菊提取物、柠檬酸、赤藓糖醇和三叶苷的质量之比为20∶2-3∶31-35∶30-40。
3.根据权利要求1所述的一种含甜叶菊的组合物,其特征在于,步骤S1中过筛为过20目筛。
4.根据权利要求1所述的一种含甜叶菊的组合物,其特征在于,步骤S2中纤维素酶的加入量为体系质量的0.5%。
5.根据权利要求1所述的一种含甜叶菊的组合物,其特征在于,步骤S2中混合提取溶剂为1,2-丙二醇、甘油和超纯水按照体积比8∶1∶1混合所得。
6.根据权利要求1所述的一种含甜叶菊的组合物,其特征在于,步骤S2中醇沉操作具体为:向浓缩液中加入3倍体积的无水乙醇,置于4℃条件下醇沉12h,燃后在4℃、4000r/min下离心20min,收集沉淀物。
7.根据权利要求1-6任一项所述的一种含甜叶菊的组合物在食品添加剂领域中的应用。
CN202211161676.XA 2022-09-22 2022-09-22 一种含甜叶菊的组合物及应用 Pending CN115669911A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211161676.XA CN115669911A (zh) 2022-09-22 2022-09-22 一种含甜叶菊的组合物及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211161676.XA CN115669911A (zh) 2022-09-22 2022-09-22 一种含甜叶菊的组合物及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115669911A true CN115669911A (zh) 2023-02-03

Family

ID=85062162

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211161676.XA Pending CN115669911A (zh) 2022-09-22 2022-09-22 一种含甜叶菊的组合物及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115669911A (zh)

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101805768A (zh) * 2010-03-01 2010-08-18 江苏健佳药业有限公司 高品质甜菊糖生物酶解提纯方法
US20110091634A1 (en) * 2009-10-15 2011-04-21 Purecircle Sdn Bhd High-Purity Rebaudioside D And Low-Calorie Carbonated Lemon-Flavored Beverage Containing The Same
US20120021111A1 (en) * 2010-07-23 2012-01-26 Aexelon Therapeutics, Inc. Natural Low Caloric Sweetener Compositions for Use in Beverages, Foods and Pharmaceuticals, and Their Methods of Manufacture
CN104705618A (zh) * 2015-04-09 2015-06-17 佛山市金骏康健康科技有限公司 一种新型复配甜味剂的制作方法
CN105294790A (zh) * 2015-12-07 2016-02-03 湖南华诚生物资源股份有限公司 一种从甜叶菊中提取高纯度甜叶菊糖苷的方法
WO2016112129A1 (en) * 2015-01-06 2016-07-14 James And Carol May Family, Llp Compositions and methods for sweeteners
CN105935121A (zh) * 2007-06-08 2016-09-14 奇华顿股份有限公司 增甜的消费品以及形成所述增甜的消费品的方法
CN106490160A (zh) * 2015-09-07 2017-03-15 哈尔滨达济仁科技开发有限公司 一种采用甜菊糖和赤藓糖醇加工饮料的配方及工艺
CN106632540A (zh) * 2016-10-27 2017-05-10 广西金秀香料香精有限责任公司 一种甜茶苷的提取方法
CN107048321A (zh) * 2011-09-06 2017-08-18 百事可乐公司 甜叶菊甙 d 甜味剂以及用甜叶菊甙 d 增甜的食品
CN109563118A (zh) * 2016-08-09 2019-04-02 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 甜菊醇糖苷的结晶
CN109563117A (zh) * 2016-08-09 2019-04-02 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 甜菊醇糖苷的结晶
CN111777652A (zh) * 2020-06-19 2020-10-16 上海交通大学 从甜叶菊中提取甜菊苷和莱鲍迪苷a的天然低共熔溶剂

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105935121A (zh) * 2007-06-08 2016-09-14 奇华顿股份有限公司 增甜的消费品以及形成所述增甜的消费品的方法
US20110091634A1 (en) * 2009-10-15 2011-04-21 Purecircle Sdn Bhd High-Purity Rebaudioside D And Low-Calorie Carbonated Lemon-Flavored Beverage Containing The Same
CN101805768A (zh) * 2010-03-01 2010-08-18 江苏健佳药业有限公司 高品质甜菊糖生物酶解提纯方法
US20120021111A1 (en) * 2010-07-23 2012-01-26 Aexelon Therapeutics, Inc. Natural Low Caloric Sweetener Compositions for Use in Beverages, Foods and Pharmaceuticals, and Their Methods of Manufacture
CN107048321A (zh) * 2011-09-06 2017-08-18 百事可乐公司 甜叶菊甙 d 甜味剂以及用甜叶菊甙 d 增甜的食品
WO2016112129A1 (en) * 2015-01-06 2016-07-14 James And Carol May Family, Llp Compositions and methods for sweeteners
CN104705618A (zh) * 2015-04-09 2015-06-17 佛山市金骏康健康科技有限公司 一种新型复配甜味剂的制作方法
CN106490160A (zh) * 2015-09-07 2017-03-15 哈尔滨达济仁科技开发有限公司 一种采用甜菊糖和赤藓糖醇加工饮料的配方及工艺
CN105294790A (zh) * 2015-12-07 2016-02-03 湖南华诚生物资源股份有限公司 一种从甜叶菊中提取高纯度甜叶菊糖苷的方法
CN109563118A (zh) * 2016-08-09 2019-04-02 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 甜菊醇糖苷的结晶
CN109563117A (zh) * 2016-08-09 2019-04-02 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 甜菊醇糖苷的结晶
CN106632540A (zh) * 2016-10-27 2017-05-10 广西金秀香料香精有限责任公司 一种甜茶苷的提取方法
CN111777652A (zh) * 2020-06-19 2020-10-16 上海交通大学 从甜叶菊中提取甜菊苷和莱鲍迪苷a的天然低共熔溶剂

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10004245B2 (en) Granulation of a stevia sweetener
Grenby Intense sweeteners for the food industry: an overview
WO2018149065A1 (zh) 一种天然复配甜味剂及其制备方法
AU2013296597B2 (en) Sweetener compositions containing rebaudioside B
US20120183648A1 (en) Sweetener composition
US20130344217A1 (en) Sweetener Compositions and Methods of Making Same
US20210092971A1 (en) Granulation of a stevia sweetener
CN1409988A (zh) 不含蔗糖的降糖果蔬汁果冻及其制作方法
US20130284164A1 (en) Processes of Purifying Steviol Glycosides Reb C
CN107712808B (zh) 一种复配甜味剂的制作方法
CN112120204A (zh) 一种降血脂甜味组合物及其制备方法
CN115669911A (zh) 一种含甜叶菊的组合物及应用
CN115606787B (zh) 一种拌和型粉末香精及其制备方法与应用
AU2019339501B2 (en) Granulation of a stevia sweetener
US11432573B2 (en) Food and beverage sweeteners
CN111685302A (zh) 一种复合型零卡砂糖及其制备方法
CN109043469B (zh) 一种复合甜味剂及其制备方法
CN112533489A (zh) 具有特定粒径分布的甜菊糖苷聚集体
CN109527168A (zh) 一种用于果脯中的含纽甜的复合甜味剂
CN111574607B (zh) 一种基于微生物发酵从非洲竹芋中提取索马甜的方法
JP7457510B2 (ja) 野菜/果物劣化臭マスキング剤、並びにその使用
CN113519824A (zh) 高甜度、低热量的复合甜味剂的制备方法
CN115381076A (zh) 一种含d-阿洛酮糖的味剂组合物及其制备方法
CN114223878A (zh) 一种发酵低钠海盐的生产工艺
WO2022110520A1 (zh) 一种改善甜茶苷口感的复配甜味剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination