CN115667536A - 用于巴尔得-别德尔综合征的基因治疗 - Google Patents

用于巴尔得-别德尔综合征的基因治疗 Download PDF

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Abstract

提供一种用于治疗与巴尔得‑别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性的载体，其中所述载体包括可操作地连接至BBS1基因的启动子，其中该启动子选自视紫红质激酶(RK)启动子、巨细胞病毒即早期(CMV)启动子和CAG启动子，并且其中所述载体选自AAV2/8载体、AAV2/7m8载体和AAV9载体。还公开了一种包括所述载体的药物组合物，以及所述载体在治疗与BBS相关的视网膜变性的方法中的用途，包括向患有BBS的患者给药治疗有效量的所述载体，其中，所述载体直接向患者眼给药。

Description

用于巴尔得-别德尔综合征的基因治疗
技术领域
本发明涉及用于治疗巴尔得-别德尔综合征(Bardet-Biedl Syndrome)的基因治疗载体。特别地，本发明涉及与巴尔得-别德尔综合征相关的视网膜变性的治疗。
背景技术
巴尔得-别德尔综合征(Bardet-Biedl Syndrome，BBS)是常染色体隐性遗疾患，并且与早发性失明、严重肥胖、复杂的内分泌功能障碍、认知受损和肾衰竭相关。先天患有遗传性巴尔得-别德尔综合征的患者会经历一系列使人衰弱的医学问题，其中一些限制寿命。受影响的儿童由于在眼后部(视网膜)的光敏细胞衰竭而最终通常会在其第一个十年开始失明。在生命的第一年内，他们将增长大量体重，这如果不加以控制的话将会进展为危及生命的肥胖、糖尿病和高血压。许多患者在其生命中的某个时刻也会发生肾衰竭(其可需要透析治疗和/或肾移植)，并且大多数患者会出现某种形式的学习困难。这些问题在一起将影响成人患者独立生活的能力，并且大多数人失业。即使提早诊断出来，基于症状的治疗也只会处理无法预防的并发症诸如视网膜变性和饮食措施难以控制的肥胖。
迄今为止，已经发现有22种基因是BBS致病的。这些基因产物中的许多在多亚基复合物中相互作用。例如，许多这些蛋白质形成称为BBSome的复合物。认为BBSome介导蛋白质运输至初级纤毛(primary cilium)。在BBS患者中最常见的突变基因是BBS1。42％的BBS患者发生BBS1基因突变。已在患有BBS的人中鉴定出超过30种的在BBS1基因中的突变。人BBS1基因位于11号染色体的长(q)臂上第13位。BBS1基因中的突变可能影响纤毛的正常形成和功能。这些细胞结构中的缺陷破坏发育过程中重要的化学信号传导途径，并且导致感官知觉异常。人BBS1基因包括17个外显子并且跨越约23kb。大多数BBS1基因突变是错义或终止突变，并且最常见的突变在蛋白质第390位用氨基酸精氨酸置换氨基酸甲硫氨酸(Met390Arg或M390R)。M390R突变占所有BBS1突变的约80％。
BBS的视网膜变性是快速进行性的并且对视力具有毁灭性，通常20岁前引起引起法定盲。BBS在青少年中还表现为夜盲症和眼震颤。
到目前为止，已经在小鼠模型中尝试使用视网膜下注射基因治疗载体来治疗眼的视网膜病变。该方法记载在Seo et al.,Invest Ophthalmol Vis Sci.54(9):6118-32(2013)中，其中在鸡β肌动蛋白启动子的控制下使用AAV2/5载体递送小鼠Bbsl基因。然而，这项研究表明，BBS1蛋白的过表达对小鼠的视网膜有毒。该作者指出，这可能是因为过量的蛋白质不能掺入到正常的蛋白质复合物中，并且在细胞中是游离的，与其他蛋白质相互作用并阻碍它们的正常功能或它们的正常运输。一种蛋白质组分的过量可能会破坏正常的BBSome组装。因此，这项研究表明，野生型(WT)BBS1蛋白在小鼠中的表达并不一定能恢复正常功能。
发明内容
在本发明的第一方面，提供了一种用于治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性的载体，其中该载体包括可操作地连接至BBS1基因的启动子，其中该启动子选自视紫红质激酶(RK)启动子、巨细胞病毒即早期(CMV)启动子和CAG启动子，并且其中所述载体选自AAV2/8载体、AAV2/7m8载体和AAV9载体。
载体用于治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性。特别地，BBS是由BBS1基因突变引起的。因此，该载体引起的BBS1基因的表达提供了对BBS的治疗。
载体包括BBS1基因。BBS1基因编码功能性BBS1蛋白。BBS1基因优选编码人蛋白质，例如野生型人蛋白质。在BBS患者中，它是在BBS1蛋白中的突变，其导致它的功能的不完全。这种突变的BBS1蛋白是BBS发作和相关的视网膜变性的原因。
BBS1基因编码的功能性BBS1蛋白优选不包括在野生型蛋白中不存在的另外的氨基酸。任何另外的氨基酸都可能干扰蛋白质的正常功能。例如，优选的是，功能性蛋白质不包括荧光蛋白诸如绿色荧光蛋白(GFP)或mCherry，或者标签诸如FLAG标签或多组氨酸标签。
在特定实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少70％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ IDNO.1的核苷酸序列或与其具有至少72％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少74％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在其他实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少76％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少78％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在特定实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少80％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少82％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少84％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少85％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少86％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少88％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在其他实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少90％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ IDNO.1的核苷酸序列或与其具有至少92％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少94％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少95％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少96％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少97％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少98％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少99％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在特定的实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列。
在以上的实施方式中，可对BBS1基因的核苷酸序列进行密码子优化以使蛋白质表达最大化。在密码子优化中，编码的蛋白质的氨基酸序列保持不变，因此其仍将具是功能性的。其仅对核苷酸序列进行修改。SEQ ID NO.8和9是密码子优化的编码BBS1的核苷酸序列。已发现这些序列使基因表达出乎意料地大幅提高。
在特定实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少70％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ IDNO.8的核苷酸序列或与其具有至少72％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少74％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在其他实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少76％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少78％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在特定实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少80％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少82％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少84％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少85％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少86％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少88％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在其他实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少90％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ IDNO.8的核苷酸序列或与其具有至少92％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少94％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少95％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少96％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少97％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少98％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列或与其具有至少99％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在特定的实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列。
在特定实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少70％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ IDNO.9的核苷酸序列或与其具有至少72％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少74％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在其他实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少76％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少78％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在特定实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少80％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少82％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少84％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少85％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少86％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少88％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在其他实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少90％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ IDNO.9的核苷酸序列或与其具有至少92％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少94％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少95％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少96％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少97％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少98％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列或与其具有至少99％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在特定的实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列。
在多个实施方式中，BBS1基因编码功能性BBS1蛋白，所述功能性BBS1蛋白具有SEQID NO.2的蛋白质序列或与其具有至少80％序列同一性。在一些实施方式中，功能性BBS1蛋白具有SEQ ID NO.2的蛋白质序列或与其具有至少85％序列同一性。在另一些实施方式中，功能性BBS1蛋白具有SEQ ID NO.2的蛋白质序列或与其具有至少90％序列同一性。在许多实施方式中，功能性BBS1蛋白具有SEQ ID NO.2的蛋白质序列或与其具有至少95％序列同一性。在特定的实施方式中，功能性BBS1蛋白具有SEQ ID NO.2的蛋白质序列。
在以上描述中，术语“同一性”用于指两个序列的相似性。为了本发明的目的，在此限定，为了确定两个序列的百分比同一性，为最佳比较目的而将序列对齐(例如，可在第一序列的序列中引入空位以与第二氨基酸序列或核酸序列进行最佳比对)。然后，比较每个位置处的核苷酸/氨基酸残基。当第一序列中的位置与第二序列中的相应位置被相同的氨基酸或核苷酸残基占据时，则分子在该位置是相同的。两个序列之间的百分比同一性是由序列共有的相同位置的数目的函数(即，％同一性＝相同位置的数目/总位置数目(即，重叠位置)×100)。通常来说，两个序列的长度相同。通常在所比较的两个序列的整个长度上进行序列比较。
技术人员将知晓以下事实：几种不同的计算机程序可用于确定两个序列之间的同一性。例如，可使用数学算法来完成序列的比较和两个序列之间百分比同一性的确定。在优选实施方式中，使用序列比对软件Clone Manager 9(Sci-Ed软件-www.scied.com)使用全局DNA比对(参数：两条链，评分矩阵：线性(错配2，开放空位(OpenGap)4，延伸空位(ExtGap)1))来确定两个核酸序列之间的百分比同一性。
或者，可使用Needleman和Wunsch(1970)算法使用Blosum 62矩阵或PAM250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重来确定两个氨基酸序列或核酸序列之间的百分比同一性，该算法已并入到Accelrys GCG软件包中的GAP程序(可在http://www.accelrys.com/products/gcg/获得)中。评估两个氨基酸序列或核酸序列之间百分比同一性的另一种方法可以是使用可在国家生物技术信息中心(Naional Center forBiotechnology Information，NCBI)网站(www.blast.ncbi.nlm.nih.gov)获得的BLAST序列比较工具，例如使用默认参数针对核苷酸序列使用BLASTn或针对氨基酸序列使用BLASTp。
BBS1基因编码‘功能性’蛋白质。这意味着该蛋白质在表达时与野生型人蛋白质具有相同的功能和活性。本领域技术人员可容易地确定这一点。由BBS1基因编码的蛋白质可以是野生型人蛋白质。BBS1蛋白的野生型人序列是本领域技术人员公知的。例如，可在国家生物技术信息中心的可公开访问数据库中找到它。此外，本领域技术人员可容易地发现或确定编码该蛋白质的核苷酸序列(并且其可包括在载体中)，例如使用使特定核苷酸密码子与特定氨基酸相关联的遗传密码。
该启动子选自视紫红质激酶(RK)启动子、巨细胞病毒即早期(CMV)启动子和CAG启动子。这些启动子是本领域技术人员公知的。已经发现，当这些启动子用于在眼细胞中表达BBS1基因时，提供有利的结果。
这些启动子序列的实例为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7。因此，在一些实施方式中，启动子具有选自SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQID NO.5、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7的序列。
在一些实施方式中，启动子是视紫红质激酶(RK)启动子。优选地，它是人视紫红质激酶(RK)启动子，其可以具有任选地SEQ ID NO.7的核苷酸序列。例如，载体可以包括SEQID NO.16的序列。
在一些实施方式中，启动子是CAG启动子，其可以任选地具有SEQ ID NO.3或SEQID NO.4的核苷酸序列。例如，载体可以包括SEQ ID NO.13、14和15之一的序列。
在各种实施方式中，启动子是CMV启动子，其可以任选地具有SEQ ID NO.5或SEQID NO.6的核苷酸序列。例如，载体可以包括SEQ ID NO.10、11和12之一的序列。
上文描述的载体用于治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性。为了实现这一点，载体可以转导眼的细胞诸如视网膜感光细胞和/或视网膜色素上皮细胞。特别地，当通过视网膜下递送时，载体可以转导视网膜感光细胞(外核层，内段和外段)和视网膜色素上皮细胞。替换地，可以通过玻璃体内递送载体。可以使用这种方式靶向视网膜内层。
载体选自AAV2/8载体、AAV2/7m8载体和AAV9载体。AAV2/8载体是已经用来自AAV8的衣壳蛋白假型化的AAV2载体。这样的载体在WO2005/033321中描述。AAV2/7m8载体是已经用来自AAV血清型7m8的衣壳蛋白假型化的AAV2载体。AAV 7m8载体记载在BiotechnolBioeng.2016Dec；113(12):2712-2724.doi:10.1002/bit.26031.Mol Ther.2018May2；26(5):1343-1353.doi:10.1016/j.ymthe.2018.02.027.J Struct Biol.2020 Feb1；209(2):107433.doi:10.1016/j.jsb.2019.107433。在一些实施方式中，载体是AAV2/8载体。在其它实施方式中，载体是AAV2/7m8载体。AAV2/7m8载体特别地适合用于玻璃体内给药。在各种实施方式中，载体是AAV9载体。
在一些实施方式中，载体是AAV2/8载体，启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
在各种实施方式中，载体是AAV2/8载体，启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
在某些实施方式中，载体是AAV2/8载体，启动子是CAG启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
在一些实施方式中，载体是AAV2/7m8载体，启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
在各种实施方式中，载体是AAV2/7m8载体，启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
在某些实施方式中，载体是AAV2/7m8载体，启动子是CAG启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
在特定的实施方式中，载体是AAV9载体，启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
在各种实施方式中，载体是AAV9载体，启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
在几种实施方式中，载体是AAV9载体，启动子是CAG启动子，以及BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
腺相关病毒载体可以是重组腺相关病毒(rAAV)载体。AAV是细小病毒科(Parvoviridae)家族的成员，其在Kenneth I.Berns,"Parvoviridae:The Viruses andTheir Replication,"Chapter 69in Fields Virology(3d Ed.1996)中描述。
所有已知AAV血清型的基因组结构都非常相似。AAV的基因组是线性的单链DNA分子，其长度小于约5,000个核苷酸(nt)。末端反向重复(inverted terminal repeat，ITR)位于非结构复制(Rep)蛋白和结构(VP)蛋白的独特编码核苷酸序列的侧翼。VP蛋白(VP1、-2和-3)形成衣壳。末端145nt是自互补的并且被组织使得可以形成能量稳定的分子内双链体(形成的T形发夹)。这些发夹结构用作病毒DNA复制的起点，充当细胞DNA聚合酶复合物的引物。在哺乳动物细胞中野生型(wt)AAV感染后，分别从P5启动子和P19启动子表达Rep基因(即编码Rep78和Rep52蛋白)，并且这两种Rep蛋白在病毒基因组的复制中均具有功能。RepORF中的剪接事件导致实际上四种Rep蛋白(即Rep78、Rep68、Rep52和Rep40)的表达。然而，已显示，在哺乳动物细胞中编码Rep78和Rep52蛋白的未剪接的mRNA足以产生AAV载体。同样在昆虫细胞中，Rep78和Rep52蛋白也足以产生AAV载体。
在适合用作基因治疗载体的AAV中，载体基因组通常包括待包装用于递送至靶细胞的核酸(例如，BBS1基因)。根据这个具体实施方式，异源核苷酸序列位于载体基因组的任一端处的病毒ITR之间。在另一些优选实施方式中，使细小病毒(例如AAV)cap基因和细小病毒(例如AAV)rep基因从模板基因组中缺失(并且因此从由此产生的病毒体(virion)DNA中缺失)。这种构造最大化细小病毒衣壳能够携带的一个或多个核酸序列的尺寸。
根据该具体实施方式，核酸位于底物的任一端处的病毒ITR之间。细小病毒基因组具有仅一个ITR也能够发挥功能。因此，在基于细小病毒的基因治疗载体中，载体基因组侧接至少一个ITR，但是，更通常地侧接两个AAV ITR(通常在载体基因组的每一侧各有一个，即，一个在5’端并且一个在3’端)。在载体基因组中的核酸与一个或多个ITR之间可以存在间插序列。
通常来说，将BBS1基因掺入到细小病毒基因组中，其位于两个常规ITR之间或位于用两个D区改造的ITR的任一侧。
在一方面，本发明提供了药物组合物，包括如上所述的载体，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。所述一种或多种赋形剂包括载体、稀释剂和/或其他医用试剂、药用剂或佐剂等。
本发明还提供一种治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性的方法，包括向患有BBS患者给药上文所描述的治疗有效量的载体。优选地，患者是人。患者应具有引起BBS1蛋白功能不完全的突变。这可能是双等位基因突变。
当以上文中的方法“治疗”视网膜变性时，这意味着与BBS相关的视网膜变性速度减慢，因此患者视力的恶化速率没有治疗之前那样快速。在一些实施方式中，载体可以阻止任何进一步的视网膜变性，从而患者的视力没有进一步地恶化。虽然优选在用载体治疗后患者的视力将改善，但这并非在所有的情况下都会发生。
“治疗有效量”是指在必需的剂量下和时间段内有效达到期望治疗结果、诸如提高受试者中功能性蛋白质的水平(以引起足以改善与BBS相关的病理的水平)的量。
该治疗方法引起受试者中功能性蛋白质的水平提高。在一些实施方式中，该治疗方法引起功能性蛋白质水平提高至约正常水平(即，存在于正常健康受试者中的水平)。在一个实施方式中，该治疗方法引起功能性蛋白质水平提高至最多正常水平。
载体可以以任何合适的方式给药以允许BBS1基因在眼的细胞中表达。在特定的实施方式中，载体的单次给药能够用于提供基因表达以改善与BBS相关的病理状况。载体应当直接向眼给药。例如，这可以是视网膜下或玻璃体内给药诸如通过视网膜下注射或玻璃体内注射。在视网膜下给药/注射中，载体被递送到视网膜色素上皮(RPE)细胞和感光细胞之间的视网膜下空间。在视网膜下空间中，给药的物质与感光细胞的质膜以及RPE细胞和视网膜下泡直接接触。这使它成为与BBS相关的视网膜变性患者药物递送的出色的位点。
载体可以在单时间点给药。例如，可以给予单次注射。在一些实施方式中，可以提供载体的一次或多次的另外给药。
此外，本发明提供了上述载体在治疗中的用途，例如在治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性中的用途。
另外，本发明提供了如上所述的载体在制备用于治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性的药物中的用途。
本说明书中引用的所有专利和参考文献均在此通过引用整体并入。
附图说明
现在将参照如下附图仅通过实例的方式详细描述本发明：
图1：BBS1突变导致在Bbs1M390R/M390R小鼠中感光层的变性。组织学分析显示出生后6个月外核层的变性和感光细胞数量的退行。还通过与野生型同窝出生仔畜相比，6月龄的Bbs1M390R/M390R小鼠在明适应和暗适应振幅两方面的减少观察到这种变性。
图2：仅在感光细胞中补充BBS1的AAV2/8.RK.hBBS1对于Bbs1M390R/M390R小鼠并不是长期有效的治疗策略。AAV2/8.RK.hBBS1载体的递送在递送后3个月达到了ERG反应的小的短期恢复，但是正如在治疗11个月后看到的与对侧的对照眼相比，不能长期地维持恢复。蓝点表示用AAV2/8.RK.hBBS1注射的眼的反应，以及红点表示对照的对侧眼的反应。误差条为标准偏差(SD)。
图3：AAV2/8.CMV.hBBS1的视网膜下递送导致其挽救Bbs1M390R/M390R小鼠视网膜变性的效率的不稳定性。我们发现在用AAV2/8.CMV.hBBS1载体注射的动物的ERG反应中存在高度的多变性。统计分析显示，对于P7-9和P30注射的视网膜的暗适应和明适应b波，在不同光刺激下，在注射后的挽救长达6个月。蓝点表示用AAV2/8.CMV.hBBS1注射的眼的反应，以及红点表示对照的对侧眼的反应。误差条为标准偏差(SD)。
图4：AAV2/8.CMV.hBBS1的视网膜下递送在一些治疗的动物中完全阻止了的Bbs1M390R/M390R的视网膜变性，持续了一年。在治疗后长达11个月对所有光强度进行a波和b波暗适应和b波明适应反应测试，一半的P7-9治疗的视网膜在注射后达到完全的视网膜变性挽救，长达11个月。蓝点表示用AAV2/8.RK.hBBS1注射的眼的反应，以及红点表示对照的对侧眼的反应。误差条为标准偏差(SD)。治疗后视网膜的组织学分析显示，外核层完全恢复，维持了层中的核。对侧对照的未治疗的眼显示完全丧失所有感光细胞和细胞核。
图5：BBS1的过表达在野生型(WT)或在Bbs1M390R/M390R小鼠中无毒性。我们用低剂量和高剂量的AAV2/8.RK-hBBS1测试了BBS1转基因在野生型P30动物的感光细胞中的过表达，并测量了明适应和暗适应的ERG反应。进行TUNEL染色以寻找注射的眼中细胞凋亡的任何增加。在从三个对照和三个注射的视网膜中测试的任何切片中均未观察到TUNEL染色，表明没有发生细胞凋亡。使用总视网膜蛋白提取物进行蛋白质印迹。顶部小图显示了使用具有对凋亡蛋白酶-3(caspase-3)的活化形式具有特异性的抗体探测的印迹(用箭头标记)。第二小图显示了载有β肌动蛋白的对照。注入效价：A：1x1011、B：8x1011和C：4x1012vg/ml。
具体实施方式
发明人已经开发出一种眼基因疗法，以阻断和进一步预防与BBS1缺乏相关的视网膜变性表型。本发明人发现，尽管Bbs1M390R/M390R小鼠主要呈现出如在患者中所看见的外核层的感光细胞变性，但是仅在感光细胞中补充人BBS1并不总是有效或并不足以防止视网膜变性。然后，本发明人探索了将BBS1也递送至靶向视网膜色素上皮(RPE)细胞的治疗效果，这些细胞高度纤毛化并且对感光细胞的存活至关重要。BBS1转基因在感光细胞和RPE两者中的表达能够完全防止感光层的变性。观察到不同治疗个体之间在治疗效果方面的多变性。BBS1基因作为多复杂单元的一部分的功能的复杂性可以解释观察到的治疗效果的多变性。
本发明人证明，在感光细胞和RPE中补充BBS1导致对Bbs1M390R/M390R动物的视网膜变性的功能性挽救和细胞的挽救。
材料和方法
已产生构建体，其中已经克隆了人BBS1 cDNA(SEQ ID NO.1-NM_024649.4)，在AAV2病毒质粒中在人视紫红质激酶(RK)启动子的控制下。有关病毒产生，使用通用方法产生AAV2/8病毒。用包括RK-BBS1-AAV-ITR的质粒、AAV2 Rep-Cap质粒和辅助质粒转染4000cm2的HEK293T细胞的单层细胞。一旦显示致细胞病变，就收获细胞并裂解以释放病毒。通过Sephacryl S300柱纯化腺相关病毒，然后使用POROS 50 HQ柱进行阴离子交换层析。使用AAV特异性探针和SV-40探针(作为标准)，通过实时定量PCR测定最终产物的效价。
病毒给药和效价
为Bbs1M390R/+雄性和Bbs1M390R/+雌性之间准备定时交配。对幼崽针对Bbs1基因型进行基因分型。腺病毒相关载体的提供通过在P7-9和P30视网膜下单侧注射1x1012vg/ml(载体基因组/ml)实现。本发明人对2组不同的动物组进行注射；Bbs1M390R/M390R动物、野生型动物。每一组的对侧眼作为对照。使用总共n＝10只动物/组。在注射后12个月之后，治疗的动物没有显示任何身体或行为痛苦。
结果
图1：BBS1突变导致在Bbs1M390R/M390R小鼠中感光层的变性。组织学分析显示出生后6个月外核层的变性和感光细胞数量的退行。还通过与野生型同窝出生仔畜相比，6月龄的Bbs1M390R/M390R小鼠在明适应和暗适应振幅两方面的减少观察到这种变性。
图2：仅在感光细胞中补充BBS1的AAV2/8.RK.hBBS1对于Bbs1M390R/M390R小鼠并不是长期有效的治疗策略。AAV2/8.RK.hBBS1载体的递送在递送后3个月达到了ERG反应的小的短期恢复，但是正如在治疗11个月后看到的与对侧的对照眼相比，不能长期地维持恢复。蓝点表示用AAV2/8.RK.hBBS1注射的眼的反应，以及红点表示对照的对侧眼的反应。误差条为标准偏差(SD)。
图3：AAV2/8.CMV.hBBS1的视网膜下递送导致其挽救Bbs1M390R/M390R小鼠视网膜变性的效率的不稳定性。我们发现在用AAV2/8.CMV.hBBS1载体注射的动物的ERG反应中存在高度的多变性。统计分析显示，对于P7-9和P30注射的视网膜的暗适应和明适应b波，在不同光刺激下，在注射后的挽救长达6个月。蓝点表示用AAV2/8.CMV.hBBS1注射的眼的反应，以及红点表示对照的对侧眼的反应。误差条为标准偏差(SD)。
图4：AAV2/8.CMV.hBBS1的视网膜下递送在一些治疗的动物中完全阻止了的Bbs1M390R/M390R的视网膜变性，持续了一年。在治疗后长达11个月对所有光强度进行a波和b波暗适应和b波明适应反应测试，一半的P7-9治疗的视网膜在注射后达到完全的视网膜变性挽救，长达11个月。蓝点表示用AAV2/8.RK.hBBS1注射的眼的反应，以及红点表示对照的对侧眼的反应。误差条为标准偏差(SD)。治疗后视网膜的组织学分析显示，外核层完全恢复，维持了层中的核。对侧对照的未治疗的眼显示完全丧失所有感光细胞和细胞核。
图5：BBS1的过表达在野生型(WT)或在Bbs1M390R/M390R小鼠中无毒性。我们用低剂量和高剂量的AAV2/8.RK-hBBS1测试了BBS1转基因在野生型P30动物的感光细胞中的过表达，并测量了明适应和暗适应的ERG反应。进行TUNEL染色以寻找注射的眼中细胞凋亡的任何增加。在从三个对照和三个注射的视网膜中测试的任何切片中均未观察到TUNEL染色，表明没有发生细胞凋亡。使用总视网膜蛋白提取物进行蛋白质印迹。顶部小图显示了使用具有对凋亡蛋白酶-3(caspase-3)的活化形式具有特异性的抗体探测的印迹(用箭头标记)。第二小图显示了载有β肌动蛋白的对照。注入效价：A：1x1011、B：8x1011和C：4x1012vg/ml。
这些结果表明，与Seo等人(Invest Ophthalmol Vis Sci.54(9):6118-32(2013))中使用的载体相比，该载体具有有利的特性，其中Seo等人的BBS1蛋白的过表达被证明对小鼠视网膜有毒性。
序列
SEQ ID NO.1-人巴尔得-别德尔综合征1(BBS1)核苷酸序列(WT)、cDNA
(NM_024649.4)
SEQ ID NO.2-人BBS1全蛋白序列(Q8NFJ9)
SEQ ID NO.3-CAG启动子序列
SEQ ID NO.4-替代的CAG启动子序列
SEQ ID NO.5-巨细胞病毒(CMV)即早期启动子序列
SEQ ID NO.6-替代的CMV启动子序列
SEQ ID NO.7-视紫红质激酶启动子序列
SEQ ID NO.8-密码子优化的编码人BBS1蛋白的核苷酸序列(也称为
COSEQ1-BBS1)
SEQ ID NO.9-密码子优化的编码人BBS1蛋白的核苷酸序列(也称为
COSEQ2-BBS1)
SEQ ID NO.10-包括CMV启动子(nt 52-256)和野生型BBS1核苷酸序列(nt
324-2108)的构建体
SEQ ID NO.11-包括CMV启动子(nt 367-570)和COSEQ1-BBS1核苷酸序列
(nt 630-2411)的构建体
SEQ ID NO.12-包括CMV启动子(nt 367-570)和COSEQ2-BBS1核苷酸序列
(nt 630-2411)的构建体
SEQ ID NO.13-包括CAG启动子(nt 35-562)和野生型BBS1核苷酸序列(nt
712-2493)的构建体
SEQ ID NO.14-包括CAG启动子(nt 35-562)和COSEQ1-BBS1核苷酸序列
(nt 716-2497)的构建体
SEQ ID NO.15-包括CAG启动子(nt 35-562)和COSEQ2-BBS1核苷酸序列
(nt 716-2497)的构建体
SEQ ID NO.16-包括RK启动子(nt 16-255)和野生型人BBS1核苷酸序列(nt
546-2330)的构建体
SEQ ID NO.17-包括RK启动子(nt 16-255)和野生型人BBS1核苷酸序列(nt
546-2330)的AAV2/8构建体
SEQ ID NO.18-包括CMV启动子(nt 52-256)和野生型人BBS1核苷酸序列
(nt 324-2108)的AAV2/8构建体。
序列表
<110> UCL商业有限公司 (UCL Business Ltd)
<120> 用于巴尔得-别德尔综合征的基因治疗
<130> PPI22171941GB
<150> GB 2005641.2
<151> 2020-04-17
<160> 18
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1782
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 1
atggccgctg cgtcctcatc ggattccgac gcctgcggag ctgagagcaa tgaggccaat 60
tcgaagtggt tggatgcgca ctacgaccca atggccaata tccacacctt ttctgcctgc 120
ctagcgctgg cagatttaca tggggatggg gaatacaagc tggtggtagg ggaccttggc 180
cctggtgggc agcagccccg cctgaaggtg ctcaaaggac cactggtgat gaccgaaagc 240
ccgctacctg ctctgccagc tgctgctgcc accttcctca tggagcaaca tgagccccgg 300
accccagctc tggcacttgc ttcaggccct tgtgtctatg tgtataagaa tctcagaccc 360
tacttcaagt tcagcctgcc ccaattgcct ccaaatcctc tggaacaaga cctttggaac 420
caggccaaag aggaccgaat cgacccctta accctgaagg agatgctgga gagcatccgg 480
gagacggcag aggagccttt gtccatccag tcactcaggt ttctgcagct ggagctaagt 540
gaaatggagg catttgtaaa ccaacacaag tccaactcca tcaagcggca gacagtcatc 600
accaccatga ccaccttgaa gaagaacctg gctgacgagg atgctgtgtc ttgcctggtg 660
ctgggcaccg agaacaagga gctcctggtg cttgaccccg aggccttcac cattttagcc 720
aagatgagcc ttcccagcgt ccccgtcttc ctagaggttt ctggccagtt tgatgttgag 780
ttccggcttg ccgcggcctg ccgcaatgga aacatctata ttctgagaag agactccaag 840
caccccaagt actgcatcga gctgagcgcc cagcctgtgg gacttatccg ggtacacaag 900
gtcctagtgg tgggcagcac ccaagacagc ctgcatggct tcacccacaa ggggaagaag 960
ctgtggacag tgcagatgcc cgcagccatc ctgaccatga acctcctgga gcagcattcc 1020
cggggcctgc aggccgtcat ggctgggctg gccaatggag aggtccgcat ttatcgtgac 1080
aaggccctgc tcaatgtcat ccacaccccg gatgcagtga ccagcctttg ctttggccgg 1140
tacgggcggg aggacaacac cctcatcatg accactcgag gtggtggcct gatcatcaag 1200
atcctgaagc gtacagcagt gtttgtagag ggaggaagtg aggtgggtcc cccaccagcc 1260
caggccatga aactcaatgt gccccgaaag acccggcttt acgtggatca gacactgcga 1320
gagcgggagg ctggcaccgc catgcaccgg gccttccaga cagacctata cctgctgcgc 1380
ctacgtgctg cccgcgccta cctgcaggcc ctcgagtcca gcctgagccc cctgtccacg 1440
acagcccgag agccactcaa gctgcacgcc gtggttcagg gccttggccc cacctttaag 1500
ctcacacttc acctgcagaa cacctcaaca acccgtcctg tcctggggct gctggtctgc 1560
ttcctgtaca acgaggcgct ctattccctg ccccgggcct tcttcaaggt acccttgctg 1620
gtgccagggc tcaactaccc cctggagacc tttgtggaga gtctcagtaa caagggcatc 1680
tcagacatca tcaaggtgct ggtgcttcga gaaggccaaa gtgcacccct gctgagtgcc 1740
cacgtcaaca tgcctgggag cgaggggctg gcggccgcct ga 1782
<210> 2
<211> 593
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 2
Met Ala Ala Ala Ser Ser Ser Asp Ser Asp Ala Cys Gly Ala Glu Ser
1 5 10 15
Asn Glu Ala Asn Ser Lys Trp Leu Asp Ala His Tyr Asp Pro Met Ala
20 25 30
Asn Ile His Thr Phe Ser Ala Cys Leu Ala Leu Ala Asp Leu His Gly
35 40 45
Asp Gly Glu Tyr Lys Leu Val Val Gly Asp Leu Gly Pro Gly Gly Gln
50 55 60
Gln Pro Arg Leu Lys Val Leu Lys Gly Pro Leu Val Met Thr Glu Ser
65 70 75 80
Pro Leu Pro Ala Leu Pro Ala Ala Ala Ala Thr Phe Leu Met Glu Gln
85 90 95
His Glu Pro Arg Thr Pro Ala Leu Ala Leu Ala Ser Gly Pro Cys Val
100 105 110
Tyr Val Tyr Lys Asn Leu Arg Pro Tyr Phe Lys Phe Ser Leu Pro Gln
115 120 125
Leu Pro Pro Asn Pro Leu Glu Gln Asp Leu Trp Asn Gln Ala Lys Glu
130 135 140
Asp Arg Ile Asp Pro Leu Thr Leu Lys Glu Met Leu Glu Ser Ile Arg
145 150 155 160
Glu Thr Ala Glu Glu Pro Leu Ser Ile Gln Ser Leu Arg Phe Leu Gln
165 170 175
Leu Glu Leu Ser Glu Met Glu Ala Phe Val Asn Gln His Lys Ser Asn
180 185 190
Ser Ile Lys Arg Gln Thr Val Ile Thr Thr Met Thr Thr Leu Lys Lys
195 200 205
Asn Leu Ala Asp Glu Asp Ala Val Ser Cys Leu Val Leu Gly Thr Glu
210 215 220
Asn Lys Glu Leu Leu Val Leu Asp Pro Glu Ala Phe Thr Ile Leu Ala
225 230 235 240
Lys Met Ser Leu Pro Ser Val Pro Val Phe Leu Glu Val Ser Gly Gln
245 250 255
Phe Asp Val Glu Phe Arg Leu Ala Ala Ala Cys Arg Asn Gly Asn Ile
260 265 270
Tyr Ile Leu Arg Arg Asp Ser Lys His Pro Lys Tyr Cys Ile Glu Leu
275 280 285
Ser Ala Gln Pro Val Gly Leu Ile Arg Val His Lys Val Leu Val Val
290 295 300
Gly Ser Thr Gln Asp Ser Leu His Gly Phe Thr His Lys Gly Lys Lys
305 310 315 320
Leu Trp Thr Val Gln Met Pro Ala Ala Ile Leu Thr Met Asn Leu Leu
325 330 335
Glu Gln His Ser Arg Gly Leu Gln Ala Val Met Ala Gly Leu Ala Asn
340 345 350
Gly Glu Val Arg Ile Tyr Arg Asp Lys Ala Leu Leu Asn Val Ile His
355 360 365
Thr Pro Asp Ala Val Thr Ser Leu Cys Phe Gly Arg Tyr Gly Arg Glu
370 375 380
Asp Asn Thr Leu Ile Met Thr Thr Arg Gly Gly Gly Leu Ile Ile Lys
385 390 395 400
Ile Leu Lys Arg Thr Ala Val Phe Val Glu Gly Gly Ser Glu Val Gly
405 410 415
Pro Pro Pro Ala Gln Ala Met Lys Leu Asn Val Pro Arg Lys Thr Arg
420 425 430
Leu Tyr Val Asp Gln Thr Leu Arg Glu Arg Glu Ala Gly Thr Ala Met
435 440 445
His Arg Ala Phe Gln Thr Asp Leu Tyr Leu Leu Arg Leu Arg Ala Ala
450 455 460
Arg Ala Tyr Leu Gln Ala Leu Glu Ser Ser Leu Ser Pro Leu Ser Thr
465 470 475 480
Thr Ala Arg Glu Pro Leu Lys Leu His Ala Val Val Gln Gly Leu Gly
485 490 495
Pro Thr Phe Lys Leu Thr Leu His Leu Gln Asn Thr Ser Thr Thr Arg
500 505 510
Pro Val Leu Gly Leu Leu Val Cys Phe Leu Tyr Asn Glu Ala Leu Tyr
515 520 525
Ser Leu Pro Arg Ala Phe Phe Lys Val Pro Leu Leu Val Pro Gly Leu
530 535 540
Asn Tyr Pro Leu Glu Thr Phe Val Glu Ser Leu Ser Asn Lys Gly Ile
545 550 555 560
Ser Asp Ile Ile Lys Val Leu Val Leu Arg Glu Gly Gln Ser Ala Pro
565 570 575
Leu Leu Ser Ala His Val Asn Met Pro Gly Ser Glu Gly Leu Ala Ala
580 585 590
Ala
<210> 3
<211> 584
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CAG启动子序列
<400> 3
gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat 60
tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc 120
aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc 180
caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt 240
acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta 300
ccatggtcga ggtgagcccc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac 360
ccccaatttt gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg 420
ggggggggcg cgcgccaggc ggggcggggc ggggcgaggg gcggggcggg gcgaggcgga 480
gaggtgcggc ggcagccaat cagagcggcg cgctccgaaa gtttcctttt atggcgaggc 540
ggcggcggcg gcggccctat aaaaagcgaa gcgcgcggcg ggcg 584
<210> 4
<211> 528
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CAG启动子序列
<400> 4
ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac tttccattga 60
cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat 120
atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc 180
cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct 240
attaccatgg tcgaggtgag ccccacgttc tgcttcactc tccccatctc ccccccctcc 300
ccacccccaa ttttgtattt atttattttt taattatttt gtgcagcgat gggggcgggg 360
gggggggggg ggcgcgcgcc aggcggggcg gggcggggcg aggggcgggg cggggcgagg 420
cggagaggtg cggcggcagc caatcagagc ggcgcgctcc gaaagtttcc ttttatggcg 480
aggcggcggc ggcggcggcc ctataaaaag cgaagcgcgc ggcgggcg 528
<210> 5
<211> 511
<212> DNA
<213> 人巨细胞病毒
<400> 5
gatctgacgg ttcactaaac gagctctgct tatatagacc tcccaccgta cacgcctacc 60
gcccatttgc gtcaatgggg cggagttgtt acgacatttt ggaaagtccc gttgattttg 120
gtgccaaaac aaactcccat tgacgtcaat ggggtggaga cttggaaatc cccgtgagtc 180
aaaccgctat ccacgcccat tgatgtactg ccaaaaccgc atcaccatgg taatagcgat 240
gactaatacg tagatgtact gccaagtagg aaagtcccat aaggtcatgt actgggcata 300
atgccaggcg ggccatttac cgtcattgac gtcaataggg ggcgtacttg gcatatgata 360
cacttgatgt actgccaagt gggcagttta ccgtaaatac tccacccatt gacgtcaatg 420
gaaagtccct attggtcatt attgacgtca atgggcgggg gtcgttgggc ggtcagccag 480
gcgggccatt taccgtaagt tatgtaacgg g 511
<210> 6
<211> 204
<212> DNA
<213> 人巨细胞病毒
<400> 6
gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt 60
ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac 120
tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg 180
tgggaggtct atataagcag agct 204
<210> 7
<211> 240
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 7
gggccccaga agcctggtgg ttgtttgtcc ttctcagggg aaaagtgagg cggccccttg 60
gaggaagggg ccgggcagaa tgatctaatc ggattccaag cagctcaggg gattgtcttt 120
ttctagcacc ttcttgccac tcctaagcgt cctccgtgac cccggctggg atttagcctg 180
gtgctgtgtc agccccgggc tcccaggggc ttcccagtgg tccccaggga accctcgaca 240
<210> 8
<211> 1782
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 密码子优化的编码人BBS1蛋白的核苷酸序列
<400> 8
atggctgccg ccagcagttc tgattctgat gcctgtggcg ccgagagcaa cgaggccaat 60
tctaaatggc tggacgccca ctacgacccc atggccaata tccacacctt tagcgcctgt 120
ctggccctgg ctgatcttca tggcgacggc gagtataagc tggttgtggg agatcttgga 180
cctggcggac agcagcctag actgaaggtg ctgaagggcc ctctcgtgat gacagagtct 240
cctcttcctg ctctgcctgc cgccgctgcc acatttctga tggaacagca cgagcccaga 300
acacccgctc tggctcttgc ttctggccct tgcgtgtacg tgtacaagaa cctgcggcct 360
tacttcaagt tcagcctgcc tcagctgcct cctaatcctc tggaacagga cctgtggaac 420
caggccaaag aggacagaat cgaccctctg acactgaaag agatgctgga atccatcaga 480
gagacagccg aggaacccct gtctatccag agcctgagat tcctgcagct ggaactgagc 540
gagatggaag ccttcgtgaa ccagcacaag agcaacagca tcaagcggca gaccgtgatc 600
accaccatga ccacactgaa gaagaacctg gccgacgagg atgccgtgtc ttgtctggtg 660
ctgggcaccg agaacaaaga gctgctggtt ctggatcccg aggccttcac aatcctggcc 720
aagatgtctc tgcctagcgt gcccgtgttt ctggaagtgt ccggccagtt cgacgtggaa 780
tttcggctgg ccgctgcctg cagaaacggc aacatctaca tcctgcggag ggacagcaag 840
caccccaagt actgtatcga gctgtctgcc cagcctgtgg gcctgattag agtgcacaag 900
gtgctggtcg tgggcagcac acaggatagc ctgcacggct ttacccacaa gggcaagaaa 960
ctgtggaccg tgcagatgcc agccgccatc ctgaccatga atctgctcga acagcacagc 1020
agaggactgc aggctgttat ggcaggactg gctaatggcg aagtgcggat ctacagagac 1080
aaggccctgc tgaacgtgat ccacacacct gatgccgtga caagcctgtg cttcggcaga 1140
tacggcagag aggacaacac cctgatcatg acaacaagag gcggcggact gatcatcaag 1200
atcctgaaga gaaccgccgt gttcgtggaa ggcggatctg aagttggacc tcctccagct 1260
caggccatga agctgaatgt gcccagaaag acccggctgt acgtggacca gacactgaga 1320
gaaagagaag ccggcacagc catgcacaga gccttccaga ctgacctgta cctgctgaga 1380
ctgagagccg ccagagccta tctgcaggcc ctggaatcta gcctgtctcc tctgagcaca 1440
accgccagag agcctctgaa actgcacgct gtggttcaag gcctgggacc taccttcaag 1500
ctgaccctgc atctgcagaa caccagcacc acaagaccag tgctgggcct gctcgtgtgc 1560
ttcctgtaca atgaggccct gtacagcctg ccacgggcct tttttaaggt gccactgctg 1620
gtgcccggcc tgaactaccc tctggaaacc tttgtggaaa gcctgagcaa caagggcatc 1680
agcgacatca tcaaagtgct ggtgctgaga gagggccagt ctgctcctct gctcagcgcc 1740
catgtgaata tgcctggctc tgaaggcctg gcagccgctt aa 1782
<210> 9
<211> 1782
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 密码子优化的编码人BBS1蛋白的核苷酸序列
<400> 9
atggctgccg cctctagctc tgactctgat gcatgtggag cagagtctaa cgaggccaat 60
agcaagtggc tggacgccca ctacgatcct atggccaaca tccacacatt ctctgcctgc 120
ctggccctgg cagacctgca cggcgatgga gagtataagc tggtggtggg cgacctggga 180
cctggcggcc agcagccacg gctgaaggtg ctgaagggcc ctctggtcat gacagagtcc 240
ccactgcccg ccctgccagc cgccgccgcc accttcctga tggagcagca cgagcctaga 300
accccagccc tggccctggc ctctggcccc tgcgtgtacg tgtataagaa cctgcggccc 360
tacttcaagt ttagcctgcc acagctgccc cctaaccctc tggagcagga tctgtggaat 420
caggccaagg aggacaggat cgatcctctg acactgaagg agatgctgga gagcatccgg 480
gagacagccg aggagccact gagcatccag tccctgagat tcctgcagct ggagctgtcc 540
gagatggagg cctttgtgaa ccagcacaag tctaatagca tcaagcgcca gaccgtgatc 600
accacaatga ccacactgaa gaagaacctg gccgacgagg atgccgtgtc ttgtctggtg 660
ctgggcacag agaataagga gctgctggtg ctggacccag aggccttcac catcctggcc 720
aagatgtctc tgccctctgt gcccgtgttc ctggaggtga gcggacagtt cgacgtggag 780
tttcggctgg ctgccgcctg cagaaacggc aatatctaca tcctgcggag agatagcaag 840
cacccaaagt attgtattga gctgtccgcc cagcctgtgg gcctgatcag agtgcacaag 900
gtgctggtgg tgggcagcac ccaggactcc ctgcacggct tcacacacaa gggcaagaag 960
ctgtggaccg tgcagatgcc cgccgccatc ctgaccatga acctgctgga gcagcacagc 1020
agaggcctgc aggccgtgat ggcaggcctg gcaaatggag aggtgaggat ctaccgcgac 1080
aaggccctgc tgaatgtgat ccacacccct gatgccgtga catccctgtg cttcggccgg 1140
tatggcagag aggataacac actgatcatg accacacggg gcggcggcct gatcatcaag 1200
atcctgaaga gaacagccgt gtttgtggag ggcggctctg aagtgggccc accccctgcc 1260
caggccatga agctgaatgt gcccaggaag acccgcctgt acgtggacca gacactgagg 1320
gaaagagagg caggaacagc aatgcacagg gccttccaga ccgatctgta cctgctgaga 1380
ctgagagcag caagagccta tctgcaggcc ctggagagct ccctgtcccc actgtctacc 1440
acagcaagag aacccctgaa gctgcacgca gtggtgcagg gcctgggacc caccttcaag 1500
ctgacactgc acctgcagaa cacatccacc acaaggcctg tgctgggcct gctggtgtgc 1560
ttcctgtaca atgaggccct gtattctctg ccacgcgcct tctttaaggt gccactgctg 1620
gtgcccggcc tgaactatcc cctggagaca ttcgtggagt ccctgtctaa taagggcatc 1680
tctgatatca tcaaggtgct ggtgctgaga gaaggacagt ccgcccctct gctgtctgcc 1740
cacgtgaata tgccaggcag cgagggcctg gctgccgcct ga 1782
<210> 10
<211> 2320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括CMV启动子和野生型BBS1核苷酸序列的构建体
<400> 10
ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg 60
gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct 120
ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa aatcaacggg actttccaaa 180
atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 240
ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatccgc tagcgctacc ggactcagat 300
ctcgagctca agcttcgaat tccgatggcc gctgcgtcct catcggattc cgacgcctgc 360
ggagctgaga gcaatgaggc caattcgaag tggttggatg cgcactacga cccaatggcc 420
aatatccaca ccttttctgc ctgcctagcg ctggcagatt tacatgggga tggggaatac 480
aagctggtgg taggggacct tggccctggt gggcagcagc cccgcctgaa ggtgctcaaa 540
ggaccactgg tgatgaccga aagcccgcta cctgctctgc cagctgctgc tgccaccttc 600
ctcatggagc aacatgagcc ccggacccca gctctggcac ttgcttcagg cccttgtgtc 660
tatgtgtata agaatctcag accctacttc aagttcagcc tgccccaatt gcctccaaat 720
cctctggaac aagacctttg gaaccaggcc aaagaggacc gaatcgaccc cttaaccctg 780
aaggagatgc tggagagcat ccgggagacg gcagaggagc ctttgtccat ccagtcactc 840
aggtttctgc agctggagct aagtgaaatg gaggcatttg taaaccaaca caagtccaac 900
tccatcaagc ggcagacagt catcaccacc atgaccacct tgaagaagaa cctggctgac 960
gaggatgctg tgtcttgcct ggtgctgggc accgagaaca aggagctcct ggtgcttgac 1020
cccgaggcct tcaccatttt agccaagatg agccttccca gcgtccccgt cttcctagag 1080
gtttctggcc agtttgatgt tgagttccgg cttgccgcgg cctgccgcaa tggaaacatc 1140
tatattctga gaagagactc caagcacccc aagtactgca tcgagctgag cgcccagcct 1200
gtgggactta tccgggtaca caaggtccta gtggtgggca gcacccaaga cagcctgcat 1260
ggcttcaccc acaaggggaa gaagctgtgg acagtgcaga tgcccgcagc catcctgacc 1320
atgaacctcc tggagcagca ttcccggggc ctgcaggccg tcatggctgg gctggccaat 1380
ggagaggtcc gcatttatcg tgacaaggcc ctgctcaatg tcatccacac cccggatgca 1440
gtgaccagcc tttgctttgg ccggtacggg cgggaggaca acaccctcat catgaccact 1500
cgaggtggtg gcctgatcat caagatcctg aagcgtacag cagtgtttgt agagggagga 1560
agtgaggtgg gtcccccacc agcccaggcc atgaaactca atgtgccccg aaagacccgg 1620
ctttacgtgg atcagacact gcgagagcgg gaggctggca ccgccatgca ccgggccttc 1680
cagacagacc tatacctgct gcgcctacgt gctgcccgcg cctacctgca ggccctcgag 1740
tccagcctga gccccctgtc cacgacagcc cgagagccac tcaagctgca cgccgtggtt 1800
cagggccttg gccccacctt taagctcaca cttcacctgc agaacacctc aacaacccgt 1860
cctgtcctgg ggctgctggt ctgcttcctg tacaacgagg cgctctattc cctgccccgg 1920
gccttcttca aggtaccctt gctggtgcca gggctcaact accccctgga gacctttgtg 1980
gagagtctca gtaacaaggg catctcagac atcatcaagg tgctggtgct tcgagaaggc 2040
caaagtgcac cctgctgagt gcccacgtca acatgcctgg gagcgagggg ctggcggccg 2100
cctgagactc tagatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa 2160
aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa 2220
cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa 2280
taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc 2320
<210> 11
<211> 2422
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括CMV启动子和COSEQ1-BBS1核苷酸序列的构建体
<400> 11
actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 60
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 120
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 180
caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 240
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 300
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 360
accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg gatagcggtt tgactcacgg 420
ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt tgttttggca ccaaaatcaa 480
cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt 540
gtacggtggg aggtctatat aagcagagct ggtttagtga accgtcagat ccgctagcgc 600
taccggactc agatctcgaa ttcgccacca tggctgccgc cagcagttct gattctgatg 660
cctgtggcgc cgagagcaac gaggccaatt ctaaatggct ggacgcccac tacgacccca 720
tggccaatat ccacaccttt agcgcctgtc tggccctggc tgatcttcat ggcgacggcg 780
agtataagct ggttgtggga gatcttggac ctggcggaca gcagcctaga ctgaaggtgc 840
tgaagggccc tctcgtgatg acagagtctc ctcttcctgc tctgcctgcc gccgctgcca 900
catttctgat ggaacagcac gagcccagaa cacccgctct ggctcttgct tctggccctt 960
gcgtgtacgt gtacaagaac ctgcggcctt acttcaagtt cagcctgcct cagctgcctc 1020
ctaatcctct ggaacaggac ctgtggaacc aggccaaaga ggacagaatc gaccctctga 1080
cactgaaaga gatgctggaa tccatcagag agacagccga ggaacccctg tctatccaga 1140
gcctgagatt cctgcagctg gaactgagcg agatggaagc cttcgtgaac cagcacaaga 1200
gcaacagcat caagcggcag accgtgatca ccaccatgac cacactgaag aagaacctgg 1260
ccgacgagga tgccgtgtct tgtctggtgc tgggcaccga gaacaaagag ctgctggttc 1320
tggatcccga ggccttcaca atcctggcca agatgtctct gcctagcgtg cccgtgtttc 1380
tggaagtgtc cggccagttc gacgtggaat ttcggctggc cgctgcctgc agaaacggca 1440
acatctacat cctgcggagg gacagcaagc accccaagta ctgtatcgag ctgtctgccc 1500
agcctgtggg cctgattaga gtgcacaagg tgctggtcgt gggcagcaca caggatagcc 1560
tgcacggctt tacccacaag ggcaagaaac tgtggaccgt gcagatgcca gccgccatcc 1620
tgaccatgaa tctgctcgaa cagcacagca gaggactgca ggctgttatg gcaggactgg 1680
ctaatggcga agtgcggatc tacagagaca aggccctgct gaacgtgatc cacacacctg 1740
atgccgtgac aagcctgtgc ttcggcagat acggcagaga ggacaacacc ctgatcatga 1800
caacaagagg cggcggactg atcatcaaga tcctgaagag aaccgccgtg ttcgtggaag 1860
gcggatctga agttggacct cctccagctc aggccatgaa gctgaatgtg cccagaaaga 1920
cccggctgta cgtggaccag acactgagag aaagagaagc cggcacagcc atgcacagag 1980
ccttccagac tgacctgtac ctgctgagac tgagagccgc cagagcctat ctgcaggccc 2040
tggaatctag cctgtctcct ctgagcacaa ccgccagaga gcctctgaaa ctgcacgctg 2100
tggttcaagg cctgggacct accttcaagc tgaccctgca tctgcagaac accagcacca 2160
caagaccagt gctgggcctg ctcgtgtgct tcctgtacaa tgaggccctg tacagcctgc 2220
cacgggcctt ttttaaggtg ccactgctgg tgcccggcct gaactaccct ctggaaacct 2280
ttgtggaaag cctgagcaac aagggcatca gcgacatcat caaagtgctg gtgctgagag 2340
agggccagtc tgctcctctg ctcagcgccc atgtgaatat gcctggctct gaaggcctgg 2400
cagccgctta agcgccgtcg ac 2422
<210> 12
<211> 2425
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括CMV启动子和COSEQ2-BBS1核苷酸序列的构建体
<400> 12
actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 60
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 120
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 180
caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 240
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 300
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 360
accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg gatagcggtt tgactcacgg 420
ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt tgttttggca ccaaaatcaa 480
cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt 540
gtacggtggg aggtctatat aagcagagct ggtttagtga accgtcagat ccgctagcgc 600
taccggactc agatctcgaa ttcgccacca tggctgccgc ctctagctct gactctgatg 660
catgtggagc agagtctaac gaggccaata gcaagtggct ggacgcccac tacgatccta 720
tggccaacat ccacacattc tctgcctgcc tggccctggc agacctgcac ggcgatggag 780
agtataagct ggtggtgggc gacctgggac ctggcggcca gcagccacgg ctgaaggtgc 840
tgaagggccc tctggtcatg acagagtccc cactgcccgc cctgccagcc gccgccgcca 900
ccttcctgat ggagcagcac gagcctagaa ccccagccct ggccctggcc tctggcccct 960
gcgtgtacgt gtataagaac ctgcggccct acttcaagtt tagcctgcca cagctgcccc 1020
ctaaccctct ggagcaggat ctgtggaatc aggccaagga ggacaggatc gatcctctga 1080
cactgaagga gatgctggag agcatccggg agacagccga ggagccactg agcatccagt 1140
ccctgagatt cctgcagctg gagctgtccg agatggaggc ctttgtgaac cagcacaagt 1200
ctaatagcat caagcgccag accgtgatca ccacaatgac cacactgaag aagaacctgg 1260
ccgacgagga tgccgtgtct tgtctggtgc tgggcacaga gaataaggag ctgctggtgc 1320
tggacccaga ggccttcacc atcctggcca agatgtctct gccctctgtg cccgtgttcc 1380
tggaggtgag cggacagttc gacgtggagt ttcggctggc tgccgcctgc agaaacggca 1440
atatctacat cctgcggaga gatagcaagc acccaaagta ttgtattgag ctgtccgccc 1500
agcctgtggg cctgatcaga gtgcacaagg tgctggtggt gggcagcacc caggactccc 1560
tgcacggctt cacacacaag ggcaagaagc tgtggaccgt gcagatgccc gccgccatcc 1620
tgaccatgaa cctgctggag cagcacagca gaggcctgca ggccgtgatg gcaggcctgg 1680
caaatggaga ggtgaggatc taccgcgaca aggccctgct gaatgtgatc cacacccctg 1740
atgccgtgac atccctgtgc ttcggccggt atggcagaga ggataacaca ctgatcatga 1800
ccacacgggg cggcggcctg atcatcaaga tcctgaagag aacagccgtg tttgtggagg 1860
gcggctctga agtgggccca ccccctgccc aggccatgaa gctgaatgtg cccaggaaga 1920
cccgcctgta cgtggaccag acactgaggg aaagagaggc aggaacagca atgcacaggg 1980
ccttccagac cgatctgtac ctgctgagac tgagagcagc aagagcctat ctgcaggccc 2040
tggagagctc cctgtcccca ctgtctacca cagcaagaga acccctgaag ctgcacgcag 2100
tggtgcaggg cctgggaccc accttcaagc tgacactgca cctgcagaac acatccacca 2160
caaggcctgt gctgggcctg ctggtgtgct tcctgtacaa tgaggccctg tattctctgc 2220
cacgcgcctt ctttaaggtg ccactgctgg tgcccggcct gaactatccc ctggagacat 2280
tcgtggagtc cctgtctaat aagggcatct ctgatatcat caaggtgctg gtgctgagag 2340
aaggacagtc cgcccctctg ctgtctgccc acgtgaatat gccaggcagc gagggcctgg 2400
ctgccgcctg agcggccgcg tcgac 2425
<210> 13
<211> 2504
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括CAG启动子和野生型BBS1核苷酸序列的构建体
<400> 13
actagttcct ggaggggtgg agtcgtgacc taggccattg acgtcaataa tgacgtatgt 60
tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta 120
aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt 180
caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc 240
tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtcgagg tgagccccac 300
gttctgcttc actctcccca tctccccccc ctccccaccc ccaattttgt atttatttat 360
tttttaatta ttttgtgcag cgatgggggc gggggggggg ggggggcgcg cgccaggcgg 420
ggcggggcgg ggcgaggggc ggggcggggc gaggcggaga ggtgcggcgg cagccaatca 480
gagcggcgcg ctccgaaagt ttccttttat ggcgaggcgg cggcggcggc ggccctataa 540
aaagcgaagc gcgcggcggg cgggagtcgc tgcgcgctgc cttcgccccg tgccccgctc 600
cgccgccgcc tcgcgccgcc cgccccggct ctgactgacc gcgttactcc cacaggtgag 660
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<210> 14
<211> 2508
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括CAG启动子和COSEQ1-BBS1核苷酸序列的构建体
<400> 14
actagttcct ggaggggtgg agtcgtgacc taggccattg acgtcaataa tgacgtatgt 60
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<210> 15
<211> 2511
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括CAG启动子和COSEQ2-BBS1核苷酸序列的构建体
<400> 15
actagttcct ggaggggtgg agtcgtgacc taggccattg acgtcaataa tgacgtatgt 60
tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta 120
aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt 180
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gttctgcttc actctcccca tctccccccc ctccccaccc ccaattttgt atttatttat 360
tttttaatta ttttgtgcag cgatgggggc gggggggggg ggggggcgcg cgccaggcgg 420
ggcggggcgg ggcgaggggc ggggcggggc gaggcggaga ggtgcggcgg cagccaatca 480
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cgccgccgcc tcgcgccgcc cgccccggct ctgactgacc gcgttactcc cacaggtgag 660
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tgccgcctct agctctgact ctgatgcatg tggagcagag tctaacgagg ccaatagcaa 780
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<210> 16
<211> 2479
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括RK启动子和野生型BBS1核苷酸序列的构建体
<400> 16
gatctcgatc gagttgggcc ccagaagcct ggtggttgtt tgtccttctc aggggaaaag 60
tgaggcggcc ccttggagga aggggccggg cagaatgatc taatcggatt ccaagcagct 120
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attccgatgg ccgctgcgtc ctcatcggat tccgacgcct gcggagctga gagcaatgag 600
gccaattcga agtggttgga tgcgcactac gacccaatgg ccaatatcca caccttttct 660
gcctgcctag cgctggcaga tttacatggg gatggggaat acaagctggt ggtaggggac 720
cttggccctg gtgggcagca gccccgcctg aaggtgctca aaggaccact ggtgatgacc 780
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<210> 17
<211> 6278
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括RK启动和野生型人BBS1核苷酸序列的AAV2/8构建体
<400> 17
gatctcgatc gagttgggcc ccagaagcct ggtggttgtt tgtccttctc aggggaaaag 60
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aggcaagggc cctcgatcga ggaactgaaa aaccagaaag ttaactggta agtttagtct 360
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attccgatgg ccgctgcgtc ctcatcggat tccgacgcct gcggagctga gagcaatgag 600
gccaattcga agtggttgga tgcgcactac gacccaatgg ccaatatcca caccttttct 660
gcctgcctag cgctggcaga tttacatggg gatggggaat acaagctggt ggtaggggac 720
cttggccctg gtgggcagca gccccgcctg aaggtgctca aaggaccact ggtgatgacc 780
gaaagcccgc tacctgctct gccagctgct gctgccacct tcctcatgga gcaacatgag 840
ccccggaccc cagctctggc acttgcttca ggcccttgtg tctatgtgta taagaatctc 900
agaccctact tcaagttcag cctgccccaa ttgcctccaa atcctctgga acaagacctt 960
tggaaccagg ccaaagagga ccgaatcgac cccttaaccc tgaaggagat gctggagagc 1020
atccgggaga cggcagagga gcctttgtcc atccagtcac tcaggtttct gcagctggag 1080
ctaagtgaaa tggaggcatt tgtaaaccaa cacaagtcca actccatcaa gcggcagaca 1140
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cacaaggtcc tagtggtggg cagcacccaa gacagcctgc atggcttcac ccacaagggg 1500
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cgtgacaagg ccctgctcaa tgtcatccac accccggatg cagtgaccag cctttgcttt 1680
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agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca gttgcgcagc ctgaatggcg aatggcgcct 3000
gatgcggtat tttctcctta cgcatctgtg cggtatttca caccgcatat ggtgcactct 3060
cagtacaatc tgctctgatg ccgcatagtt aagccagccc cgacacccgc caacacccgc 3120
tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt 3180
ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc accgtcatca ccgaaacgcg cgagacgaaa 3240
gggcctcgtg atacgcctat ttttataggt taatgtcatg ataataatgg tttcttagac 3300
gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat 3360
acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg 3420
aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc 3480
attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga 3540
tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga actggatctc aacagcggta agatccttga 3600
gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg 3660
cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca tacactattc 3720
tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag catcttacgg atggcatgac 3780
agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat aacactgcgg ccaacttact 3840
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cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata gacagatcgc 4260
tgagataggt gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt actcatatat 4320
actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt 4380
tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc 4440
cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt 4500
gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac 4560
tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt 4620
gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct 4680
gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga 4740
ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac 4800
acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg 4860
agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt 4920
cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc 4980
tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg 5040
gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc 5100
ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc 5160
ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag 5220
cgaggaagcg gaagagcgcc caatacgcaa accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca 5280
ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat 5340
taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg 5400
tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct atgaccatga 5460
ttacgccaag ctctagactt aattaaggat caattcactg gccgtcgttt tacaacgtcg 5520
tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt gcagcacatc cccctttcgc 5580
cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct 5640
gaatggcgaa tggcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg gtatttcaca 5700
ccgcatatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggaat 5760
tccaacatcc aataaatcat acaggcaagg caaagaatta gcaaaattaa gcaataaagc 5820
ctcagagcat aaagctaaat cggttgtacc aaaaacatta tgaccctgta atacttttgc 5880
gggagaagcc tttatttcaa cgcaaggata aaaattttta gaaccctcat atattttaaa 5940
tgcaatgcct gagtaatgtg taggtaaaga ttcaaacggg tgagaaaggc cggagacagt 6000
caaatcacca tcaatatgat attcaaccgt tctagctgat aaattcatgc cggagagggt 6060
agctattttt gagaggtctc tacaaaggct atcaggtcat tgcctgagag tctggagcaa 6120
acaagagaat cgctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg cccgggcaaa gcccgggcgt 6180
cgggcgacct ttggtcgccc ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagaga gggagtggcc 6240
aactccatca ctgatgtaat acgactcact agtgggca 6278
<210> 18
<211> 6401
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包括CMV启动子和野生型BBS1核苷酸序列的AAV2/8构建体
<400> 18
ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg 60
gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct 120
ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa aatcaacggg actttccaaa 180
atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 240
ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatccgc tagcgctacc ggactcagat 300
ctcgagctca agcttcgaat tccgatggcc gctgcgtcct catcggattc cgacgcctgc 360
ggagctgaga gcaatgaggc caattcgaag tggttggatg cgcactacga cccaatggcc 420
aatatccaca ccttttctgc ctgcctagcg ctggcagatt tacatgggga tggggaatac 480
aagctggtgg taggggacct tggccctggt gggcagcagc cccgcctgaa ggtgctcaaa 540
ggaccactgg tgatgaccga aagcccgcta cctgctctgc cagctgctgc tgccaccttc 600
ctcatggagc aacatgagcc ccggacccca gctctggcac ttgcttcagg cccttgtgtc 660
tatgtgtata agaatctcag accctacttc aagttcagcc tgccccaatt gcctccaaat 720
cctctggaac aagacctttg gaaccaggcc aaagaggacc gaatcgaccc cttaaccctg 780
aaggagatgc tggagagcat ccgggagacg gcagaggagc ctttgtccat ccagtcactc 840
aggtttctgc agctggagct aagtgaaatg gaggcatttg taaaccaaca caagtccaac 900
tccatcaagc ggcagacagt catcaccacc atgaccacct tgaagaagaa cctggctgac 960
gaggatgctg tgtcttgcct ggtgctgggc accgagaaca aggagctcct ggtgcttgac 1020
cccgaggcct tcaccatttt agccaagatg agccttccca gcgtccccgt cttcctagag 1080
gtttctggcc agtttgatgt tgagttccgg cttgccgcgg cctgccgcaa tggaaacatc 1140
tatattctga gaagagactc caagcacccc aagtactgca tcgagctgag cgcccagcct 1200
gtgggactta tccgggtaca caaggtccta gtggtgggca gcacccaaga cagcctgcat 1260
ggcttcaccc acaaggggaa gaagctgtgg acagtgcaga tgcccgcagc catcctgacc 1320
atgaacctcc tggagcagca ttcccggggc ctgcaggccg tcatggctgg gctggccaat 1380
ggagaggtcc gcatttatcg tgacaaggcc ctgctcaatg tcatccacac cccggatgca 1440
gtgaccagcc tttgctttgg ccggtacggg cgggaggaca acaccctcat catgaccact 1500
cgaggtggtg gcctgatcat caagatcctg aagcgtacag cagtgtttgt agagggagga 1560
agtgaggtgg gtcccccacc agcccaggcc atgaaactca atgtgccccg aaagacccgg 1620
ctttacgtgg atcagacact gcgagagcgg gaggctggca ccgccatgca ccgggccttc 1680
cagacagacc tatacctgct gcgcctacgt gctgcccgcg cctacctgca ggccctcgag 1740
tccagcctga gccccctgtc cacgacagcc cgagagccac tcaagctgca cgccgtggtt 1800
cagggccttg gccccacctt taagctcaca cttcacctgc agaacacctc aacaacccgt 1860
cctgtcctgg ggctgctggt ctgcttcctg tacaacgagg cgctctattc cctgccccgg 1920
gccttcttca aggtaccctt gctggtgcca gggctcaact accccctgga gacctttgtg 1980
gagagtctca gtaacaaggg catctcagac atcatcaagg tgctggtgct tcgagaaggc 2040
caaagtgcac cctgctgagt gcccacgtca acatgcctgg gagcgagggg ctggcggccg 2100
cctgagactc tagatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa 2160
aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa 2220
cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa 2280
taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta 2340
aggcctaggt gagctctggt accctctagt caaggatcag tgatggagtt ggccactccc 2400
tctctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gggcgaccaa aggtcgcccg acgcccgggc 2460
tttgcccggg cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagct gctgcattaa tgaatcggcc 2520
aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgctctagac ttaattaagg 2580
atcaattcac tggccgtcgt tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa 2640
cttaatcgcc ttgcagcaca tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc 2700
accgatcgcc cttcccaaca gttgcgcagc ctgaatggcg aatggcgcct gatgcggtat 2760
tttctcctta cgcatctgtg cggtatttca caccgcatat ggtgcactct cagtacaatc 2820
tgctctgatg ccgcatagtt aagccagccc cgacacccgc caacacccgc tgacgcgccc 2880
tgacgggctt gtctgctccc ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt ctccgggagc 2940
tgcatgtgtc agaggttttc accgtcatca ccgaaacgcg cgagacgaaa gggcctcgtg 3000
atacgcctat ttttataggt taatgtcatg ataataatgg tttcttagac gtcaggtggc 3060
acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat 3120
atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag 3180
agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc attttgcctt 3240
cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt 3300
gcacgagtgg gttacatcga actggatctc aacagcggta agatccttga gagttttcgc 3360
cccgaagaac gttttccaat gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta 3420
tcccgtattg acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac 3480
ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag catcttacgg atggcatgac agtaagagaa 3540
ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg 3600
atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc 3660
cttgatcgtt gggaaccgga gctgaatgaa gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg 3720
atgcctgtag caatggcaac aacgttgcgc aaactattaa ctggcgaact acttactcta 3780
gcttcccggc aacaattaat agactggatg gaggcggata aagttgcagg accacttctg 3840
cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg 3900
tctcgcggta tcattgcagc actggggcca gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc 3960
tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt 4020
gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt actcatatat actttagatt 4080
gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc 4140
atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag 4200
atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa 4260
aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg 4320
aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag 4380
ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg 4440
ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga 4500
tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc 4560
ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc 4620
acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga 4680
gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt 4740
cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg 4800
aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac 4860
atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga 4920
gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg 4980
gaagagcgcc caatacgcaa accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc 5040
tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtgagt 5100
tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg tatgttgtgt 5160
ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct atgaccatga ttacgccaag 5220
ctctagactt aattaaggat caattcactg gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa 5280
aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt 5340
aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa 5400
tggcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg gtatttcaca ccgcatatgc 5460
ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggaat tccaacatcc 5520
aataaatcat acaggcaagg caaagaatta gcaaaattaa gcaataaagc ctcagagcat 5580
aaagctaaat cggttgtacc aaaaacatta tgaccctgta atacttttgc gggagaagcc 5640
tttatttcaa cgcaaggata aaaattttta gaaccctcat atattttaaa tgcaatgcct 5700
gagtaatgtg taggtaaaga ttcaaacggg tgagaaaggc cggagacagt caaatcacca 5760
tcaatatgat attcaaccgt tctagctgat aaattcatgc cggagagggt agctattttt 5820
gagaggtctc tacaaaggct atcaggtcat tgcctgagag tctggagcaa acaagagaat 5880
cgctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg cccgggcaaa gcccgggcgt cgggcgacct 5940
ttggtcgccc ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagaga gggagtggcc aactccatca 6000
ctgatgtaat acgactcact agtgggcaga tcttcgaatg catcgcgcgc accgtacgtc 6060
tcgaggaatt cctgcaggat atcctgcagt agttattaat agtaatcaat tacggggtca 6120
ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct 6180
ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta 6240
acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac 6300
ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt 6360
aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat g 6401

Claims (34)

1.一种用于治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性的载体，其中所述载体包括可操作地连接至BBS1基因的启动子，其中该启动子选自视紫红质激酶(RK)启动子、巨细胞病毒即早期(CMV)启动子和CAG启动子，并且其中所述载体选自AAV2/8载体、AAV2/7m8载体和AAV9载体。
2.根据权利要求1所述的载体，其中，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子。
3.根据权利要求2所述的载体，其中，所述启动子是人视紫红质激酶(RK)启动子。
4.根据权利要求3所述的载体，其中，所述视紫红质激酶(RK)启动子具有SEQ ID NO.7的序列。
5.根据权利要求1所述的载体，其中，所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子。
6.根据权利要求5所述的载体，其中，所述巨细胞病毒即早期(CMV)启动子具有选自SEQID NO.5和SEQ ID NO.6的序列。
7.根据权利要求1所述的载体，其中，所述启动子是CAG启动子。
8.根据权利要求7所述的载体，其中，所述CAG启动子具有选自SEQ IDNO.3和SEQ IDNO.4的序列。
9.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述载体是AAV2/8载体。
10.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述载体是AAV2/7m8载体。
11.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述载体是AAV9载体。
12.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述BBS1基因编码具有SEQ ID NO.2的蛋白质序列或与其具有80％序列同一性的功能性人BBS1蛋白。
13.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述BBS1基因编码野生型人BBS1蛋白。
14.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述BBS1基因具有SEQID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少70％序列同一性，并且编码功能性人BBS1蛋白。
15.根据权利要求14所述的载体，其中所述BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列。
16.根据权利要求1至14中任一项所述的载体，其中所述BBS1基因具有SEQ ID NO.8或9的核苷酸序列。
17.根据权利要求1所述的载体，其中：
1)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列，以及所述启动子是人视紫红质激酶(RK)启动子；
2)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列，以及所述启动子是人视紫红质激酶(RK)启动子；或
3)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列，以及所述启动子是人视紫红质激酶(RK)启动子。
18.根据权利要求1所述的载体，其中：
1)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列，以及所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子；
2)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列，以及所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子；或
3)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列，以及所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子。
19.根据权利要求1所述的载体，其中：
1)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列，以及所述启动子是CAG启动子；
2)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列，以及所述启动子是CAG启动子；或
3)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列，以及所述启动子是CAG启动子。
20.根据权利要求1所述的载体，其中：
1)所述载体是AAV2/8载体，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；
2)所述载体是AAV2/8载体，所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；
3)所述载体是AAV2/8载体，所述启动子是CAG启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；
4)所述载体是AAV2/7m8载体，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；
5)所述载体是AAV2/7m8载体，所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；
6)所述载体是AAV2/7m8载体，所述启动子是CAG启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；
7)所述载体是AAV9载体，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；
8)所述载体是AAV9载体，所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；或
9)所述载体是AAV9载体，所述启动子是CAG启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
21.根据权利要求1所述的载体，其中：
1)所述载体是AAV2/8载体，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；或
2)所述载体是AAV9载体，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
22.根据权利要求1所述的载体，其中：
1)所述载体是AAV2/7m8载体，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；
2)所述载体是AAV2/7m8载体，所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白；或
3)所述载体是AAV2/7m8载体，所述启动子是CAG启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
23.根据权利要求1所述的载体，其中，所述载体是AAV2/7m8载体，所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子，以及所述BBS1基因编码功能性人BBS1蛋白。
24.一种药物组合物，包括根据权利要求1至23中任一项所述的载体，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
25.一种治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性的方法，包括向患有BBS的患者给药根据权利要求1至23中任一项所述的治疗有效量的载体，其中，所述载体直接向患者的眼给药。
26.根据权利要求25所述的方法，其中视网膜下或玻璃体内给药所述载体。
27.根据权利要求25或26所述的方法，其中通过视网膜下注射给药所述载体。
28.根据权利要求25或26所述的方法，其中通过玻璃体内注射给药所述载体。
29.根据权利要求1至23中任一项所述的载体，用于在治疗中的用途。
30.根据权利要求1至23中任一项所述的载体，用于在治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性中的用途，其中所述载体用于直接向眼给药。
31.根据权利要求1至23中任一项所述的载体在制备用于治疗与巴尔得-别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性的药物中的用途，其中所述载体用于直接向眼给药。
32.根据权利要求30或权利要求31所述的用途，其中所述载体用于视网膜下或玻璃体内给药。
33.根据权利要求32所述的用途，其中所述载体用于视网膜下注射给药。
34.根据权利要求32所述的用途，其中所述载体用于玻璃体内注射给药。
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