CN115651096A - 一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法 - Google Patents

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公英华
李天铎
弗拉基米尔·维诺库罗夫
安东·谢苗诺夫
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Abstract

本发明提供一种从真菌中提取甲壳素‑葡聚糖的方法，主要涉及甲壳素‑葡聚糖的提取领域。一种从真菌中提取甲壳素‑葡聚糖的方法，选用双孢菇菌丝体作为提取的原材料，提取步骤如下：使用超声清洗装置将双孢菇菌丝体清洗干净，随后沥水切碎备用；将双孢菇菌丝体冻干；冻干的双孢菇菌丝体在磷酸钠缓冲液超声处理，离心；得到的沉淀物在氢氧化钠溶液中连续浴，得到碱不溶性产物；用乙酸处理碱不溶性产物，获得甲壳素‑葡聚糖复合物。本发明的有益效果在于：本发明能够明显的提高了甲壳素‑葡聚糖提取的收率。

Description

一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法
技术领域
本发明主要涉及甲壳素-葡聚糖的提取领域，具体是一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法。
背景技术
甲壳素葡聚糖是一种高纯、天然生物聚合物，由两种多糖组成，被发现于微观真菌的外骨骼。甲壳素-葡聚糖能够满足纯度、微生物质量和化妆品配方的兼容性方面的所有要求，是一种安全的皮肤年轻化剂。它结合了甲壳素和β-葡聚糖的优点，能够修复、促进和保护容光焕发的皮肤，是一种新型的化妆品添加成分。
目前主流的甲壳素-葡聚糖提取方法，主要是利用碱破坏蘑菇的细胞壁，随后经过一系列的离心、洗涤等得到最终产物。我们发现这种方式得到的收率很难达到40％，效率较低。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明提供了一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，它明显的提高了甲壳素-葡聚糖提取的收率。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，选用双孢菇菌丝体作为提取的原材料，提取步骤如下：
S1：使用超声清洗装置将双孢菇菌丝体清洗干净，随后沥水切碎备用；
S2：将双孢菇菌丝体冻干；
S3：冻干的双孢菇菌丝体在50mL的磷酸钠缓冲液超声处理15-25分钟，以破坏细胞壁，比例为1:20(w/v)～1:40(w/v)；
S4：随后将S3得到的原料离心10-20min，离心机转速为5000-9000r；
S5：将S4得到的沉淀物在0.5mol/L的氢氧化钠溶液中连续浴3-5h，比例为1:20(w/v)～1:40(w/v)，期间保证温度40±2℃，最后得到碱不溶性产物；
S6：用(2％v/v)的乙酸以1:100(w/v)的比例在95±1℃下处理碱不溶性产物5-6小时，获得甲壳素-葡聚糖复合物。
优选的，所述S1中，双孢菇菌丝体切碎后直径在1-2mm。
优选的，所述S3中，冻干的双孢菇菌丝体以1:30(w/v)的比例在50mL的磷酸钠缓冲液超声处理20分钟。
优选的，所述S5中，将S4得到的沉淀物以比例为1:30(w/v)在0.5mol/L的氢氧化钠溶液中连续浴4h，期间保证温度40±2℃，最后得到碱不溶性产物。
优选的，所述S5中，连续浴过程伴随搅拌，搅拌速率为20-50r/min。
优选的，所述S2中，首先将沥水粉碎的双孢菇菌丝体捣碎呈泥状，随后冻干呈粉状。
优选的，冻干的双孢菇菌丝体粉末过35目筛。
对比现有技术，本发明的有益效果是：
本发明采用了双孢菇菌丝体替代蘑菇菌丝作为提取的原材料，双孢菇菌丝体质地较软，处理时更为容易，避免了伞柄不容易破坏、提取物收率低的问题。
本发明针对双孢菇菌丝体设计了针对性的提取步骤，能够有效的结合双孢菇菌丝体质地较软的特征，高效的完成产物的提取。
本发明还针对菌丝体韧性较高的特点，将双孢菇菌丝体进行捣泥以及冻干粉的操作，进一步提高了提取效率，提高了最终的收率。经检测，最终收率可达43.4％，明显高于现有的提取方法。
具体实施方式
结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所限定的范围。
实施例1：
一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，选用双孢菇菌丝体作为提取的原材料，提取步骤如下：
使用超声清洗装置将双孢菇菌丝体清洗干净，随后沥水切碎备用，双孢菇菌丝体切碎后直径在1.5-2mm。随后将切碎的双孢菇菌丝体冻干，得到干双孢菇菌丝体碎。冻干的双孢菇菌丝体碎以1:40(w/v)的比例在50mL的磷酸钠缓冲液超声处理25分钟，以破坏细胞壁。随后将得到的原料离心20min，离心机转速为9000r，得到沉淀物。将得到的沉淀物以1:40(w/v)的比例在0.5mol/L的氢氧化钠溶液中连续浴3h，连续浴过程伴随搅拌，搅拌速率为30r/min，期间保证温度40±2℃，最后得到碱不溶性产物。用(2％v/v)的乙酸以1:100(w/v)的比例在95±1℃下处理碱不溶性产物5小时，获得甲壳素-葡聚糖复合物。
重复以上步骤若干次，本实施例所提供步骤的平均收率为42.1％。
实施例2：
一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，选用双孢菇菌丝体作为提取的原材料，提取步骤如下：
使用超声清洗装置将双孢菇菌丝体清洗干净，随后沥水切碎备用，双孢菇菌丝体切碎后直径在1-1.5mm。随后将切碎的双孢菇菌丝体冻干，得到干双孢菇菌丝体碎。冻干的双孢菇菌丝体碎以1:30(w/v)的比例在50mL的磷酸钠缓冲液超声处理25分钟，以破坏细胞壁。随后将得到的原料离心20min，离心机转速为9000r，得到沉淀物。将得到的沉淀物以1:30(w/v)的比例在0.5mol/L的氢氧化钠溶液中连续浴4h，连续浴过程伴随搅拌，搅拌速率为30r/min，期间保证温度40±2℃，最后得到碱不溶性产物。用(2％v/v)的乙酸以1:100(w/v)的比例在95±1℃下处理碱不溶性产物6小时，获得甲壳素-葡聚糖复合物。
重复以上步骤若干次，本实施例所提供步骤的平均收率为42.6％。由此可见，减小双孢菇菌丝体的直径，并提高冻干双孢菇菌丝体在超声处理、连续浴时的比例，提高碱不溶性产物在乙酸处理的时间，能够提高产品的收率。
实施例3：
一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，选用双孢菇菌丝体作为提取的原材料，提取步骤如下：
使用超声清洗装置将双孢菇菌丝体清洗干净，随后沥水切碎备用，双孢菇菌丝体切碎后直径在1-1.5mm。随后将切碎的双孢菇菌丝体冻干，得到干双孢菇菌丝体碎。冻干的双孢菇菌丝体碎以1:20(w/v)的比例在50mL的磷酸钠缓冲液超声处理25分钟，以破坏细胞壁。随后将得到的原料离心20min，离心机转速为9000r，得到沉淀物。将得到的沉淀物以1:20(w/v)的比例在0.5mol/L的氢氧化钠溶液中连续浴4h，连续浴过程伴随搅拌，搅拌速率为30r/min，期间保证温度40±2℃，最后得到碱不溶性产物。用(2％v/v)的乙酸以1:100(w/v)的比例在95±1℃下处理碱不溶性产物6小时，获得甲壳素-葡聚糖复合物。
重复以上步骤若干次，本实施例所提供步骤的平均收率为42.7％。由此可见，在其他参数保持不变的情况下，继续提高冻干双孢菇菌丝体在超声处理、连续浴时的比例，对于提高产品的收率效果有限。
实施例4：
一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，选用双孢菇菌丝体作为提取的原材料，提取步骤如下：
使用超声清洗装置将双孢菇菌丝体清洗干净，随后沥水切碎备用，双孢菇菌丝体切碎后直径在1-1.5mm。将粉碎的双孢菇菌丝体捣碎呈泥状，随后将泥状的双孢菇菌丝体冻干，得到双孢菇菌丝体冻干粉，将双孢菇菌丝体冻干粉过35目筛。冻干的双孢菇菌丝体碎以1:30(w/v)的比例在50mL的磷酸钠缓冲液超声处理25分钟，以破坏细胞壁。随后将得到的原料离心20min，离心机转速为9000r，得到沉淀物。将得到的沉淀物以1:30(w/v)的比例在0.5mol/L的氢氧化钠溶液中连续浴4h，连续浴过程伴随搅拌，搅拌速率为30r/min，期间保证温度40±2°C，最后得到碱不溶性产物。用(2％v/v)的乙酸以1:100(w/v)的比例在95±1℃下处理碱不溶性产物6小时，获得甲壳素-葡聚糖复合物。
重复以上步骤若干次，本实施例所提供步骤的平均收率为43.4％。与实施例2相比可见，通过捣泥进一步减小双孢菇菌丝体的直径，能够有效提高产品的收率。
与现有的自蘑菇菌丝体中提取甲壳素-葡聚糖相比，本提取方法的收率超过了40％，最高可达到43.4％，收率更高。

Claims (7)

1.一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，其特征在于，选用双孢菇菌丝体作为提取的原材料，提取步骤如下：
S1：使用超声清洗装置将双孢菇菌丝体清洗干净，随后沥水切碎备用；
S2：将双孢菇菌丝体冻干；
S3：冻干的双孢菇菌丝体在50mL的磷酸钠缓冲液超声处理15-25分钟，以破坏细胞壁，比例为1:20(w/v)～1:40(w/v)；
S4：随后将S3得到的原料离心10-20min，离心机转速为5000-9000r；
S5：将S4得到的沉淀物在0.5mol/L的氢氧化钠溶液中连续浴3-5h，比例为1:20(w/v)～1:40(w/v)，期间保证温度40±2℃，最后得到碱不溶性产物；
S6：用(2％v/v)的乙酸以1:100(w/v)的比例在95±1℃下处理碱不溶性产物5-6小时，获得甲壳素-葡聚糖复合物。
2.根据权利要求1所述的一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，其特征在于：所述S1中，双孢菇菌丝体切碎后直径在1-2mm。
3.根据权利要求1所述的一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，其特征在于：所述S3中，冻干的双孢菇菌丝体以1:30(w/v)的比例在50mL的磷酸钠缓冲液超声处理20分钟。
4.根据权利要求1所述的一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，其特征在于：所述S5中，将S4得到的沉淀物以比例为1:30(w/v)在0.5mol/L的氢氧化钠溶液中连续浴4h，期间保证温度40±2℃，最后得到碱不溶性产物。
5.根据权利要求1所述的一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，其特征在于：所述S5中，连续浴过程伴随搅拌，搅拌速率为20-50r/min。
6.根据权利要求1所述的一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，其特征在于：所述S2中，首先将沥水粉碎的双孢菇菌丝体捣碎呈泥状，随后冻干呈粉状。
7.根据权利要求6所述的一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法，其特征在于：冻干的双孢菇菌丝体粉末过35目筛。
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