CN115645390A - 沃尼妙林有机酸盐类兽药的制备及其在制备治疗家禽气囊炎及猪胸膜肺炎药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了沃尼妙林有机酸盐在制备治疗家禽气囊炎的药物和猪胸膜肺炎的药物中的应用，特别是酒石酸沃尼妙林或富马酸沃尼妙林。本发明的酒石酸沃尼妙林急性毒性较低，小鼠的口服酒石酸沃尼妙林的半数致死量(LD50)约是现有产品盐酸沃尼妙林的2倍。上述沃尼妙林有机酸盐可溶性粉可通过饮水给药治疗鸡毒支原体感染引起的鸡气囊损伤疾病；治疗胸膜肺炎放线杆菌感染引起的猪胸膜肺炎放线杆菌病等呼吸道感染性疾病和其它呼吸系统相关病症，效果显著，增重率高。

Description

沃尼妙林有机酸盐类兽药的制备及其在制备治疗家禽气囊炎 及猪胸膜肺炎药物中的应用

【技术领域】

本发明涉及兽药技术领域，特别涉及沃尼妙林有机酸盐类兽药的制备，并应用于制备治疗家禽气囊炎及猪胸膜肺炎的药物。

【背景技术】

沃尼妙林是20世纪90年代中期正式上市的一种动物专用抗生素，主要用于防治猪、牛、羊及家禽的支原体和革兰氏阳性菌感染。商品化的盐酸沃尼妙林易分解、具引湿性、刺激性强而影响治疗效果，因此急需研制新的应用形式。

盐酸沃尼妙林可溶性粉对人工感染鸡慢性呼吸道病的疗效试验(孟志敏，牛小飞，李连缺等，动物保健品，2013，10，136～139)显示盐酸沃尼妙林可溶性粉对鸡慢性呼吸道病有疗效。中国发明专利申请CN 110179757 A描述了盐酸沃尼妙林可溶性粉用于鸡的安全性试验，对自然感染支原体引发慢性呼吸道疾病的鸭、鹅和肉鸽有临床疗效，对自然感染猪痢疾的病猪也有临床疗效。

然而，现有技术中对于鸡毒支原体引起的气囊炎和猪胸膜肺炎菌引起的肺部感染疾病的治疗很少报道，由于此类病菌引起的多数生病畜禽发病后常与其它多种病原体发生混合感染，加重发病率和死亡率，而现有药物疗效不佳，给畜禽养殖业造成极大经济损失。

根据猪传染性胸膜肺炎的流行特点与防治措施(夏伦斌等人)，引起猪传染性胸膜肺炎的胸膜肺炎放线杆菌(APP)存在普遍耐药现象，对多黏菌素、新霉素、复方新诺明、克林霉素、阿米卡星、环丙沙星、恩诺沙星、阿奇霉素、四环素、壮观霉素、卡那霉素、强力霉素等多种抗生素药物耐药。因此，寻找一种新的、适用于鸡毒支原体引起的禽气囊炎和猪胸膜肺炎菌引起的肺部感染疾病的药物至关重要。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有药物对鸡毒支原体R株引起的禽气囊炎和猪胸膜肺炎放线杆菌引起的猪胸膜肺炎疗效不佳的缺陷，提供沃尼妙林有机酸盐新的应用。

针对上述目的，本发明提供沃尼妙林有机酸盐在制备治疗家禽气囊炎药物中的应用。

在本发明中，所述家禽气囊炎是鸡毒支原体感染所致的家禽气囊炎。

作为一种优选的实施方式，沃尼妙林有机酸盐在家禽饮水中的浓度为以沃尼妙林计10～1000mg/L，特别优选地75～300mg/L。

优选地，本发明中，所述沃尼妙林有机酸盐是酒石酸沃尼妙林或富马酸沃尼妙林。

所述酒石酸沃尼妙林晶体的X射线粉末衍射图谱在衍射角5.563,6.361,8.741,10.560,11.223,11.891,12.775,13.486,15.048,16.384,17.689,和17.689(2θ±0.2°)处有特征峰；

所述富马酸沃尼妙林晶体的X射线粉末衍射图谱在衍射角6.835，9.403，9.832，10.5 89，10.949，11.454，11.775，12.444，12.912，14.371，14.923，15.647，16.531，16.978，19.272，19.855，21.477，21.825，22.128，22.630，23.512，24.645，25.163，26.446和27.180(2θ±0.2°)处有特征峰。

本发明还提供沃尼妙林有机酸盐在制备治疗猪胸膜肺炎的药物中的应用。

在本发明中，所述猪胸膜肺炎是猪胸膜肺炎放线杆菌病。

作为一种优选的实施方式，沃尼妙林有机酸盐在猪饮水中的浓度为以沃尼妙林计100～400mg/L。

基于沃尼妙林有机酸盐稳定性和适口性，本发明优选地将沃尼妙林有机酸盐制备为可溶性粉，且其中只含有药物和辅料两种成分，生产过程包括原料过筛、干燥、混合等，简单方便。其制备方法步骤如下：

(1)过筛在温度40℃～60℃的条件下，将沃尼妙林有机酸盐和辅料(选自乳糖、葡萄糖、蔗糖或者可溶性淀粉等一种或者几种)分别研磨粉碎10～60min，过50～100目筛。

(2)干燥将过筛后的辅料于60～125℃干燥0.5～8h，沃尼妙林有机酸盐于40～80℃真空干燥2～8h，然后冷却备用。

(3)混合按照重量比为(5～50):(95～50)的比例准确称取沃尼妙林有机酸盐和辅料倒入容器内，按照倍比稀释法混合均匀，继续混合10～30min。

(4)灌装等产品检验合格后，称量样品至准备好的塑料封口袋中进行灌装，封口。

本发明验证了沃尼妙林有机酸盐可溶性粉通过饮水给药方式能够克服固体给药的飞散性和对生物体有刺激性的缺陷，利于畜禽接受，易于达到给药时畜禽个体服药均匀的效果。经测试，在饮水装置中，沃尼妙林在10～1000mg/L浓度范围室温存放30天，含量稳定，因此药物使用时无需特意考虑环境温度、湿度和光照等条件，简单便利。

本发明还验证了上述沃尼妙林有机酸盐可溶性粉急性毒性LD₅₀值约为商业化产品盐酸沃尼妙林的2倍。经试验证明受试物酒石酸沃尼妙林原料药对ICR小鼠的经口LD₅₀为3458mg/kg体重，LD₅₀ 95％的可信限为3001～3985mg/kg体重，远高于报道值(何凤艳,王德忠,刘国彬等，新兽药沃尼妙林的研究进展及应用，中国畜牧兽医，2009,36(4)，164～165)：盐酸沃尼妙林对雄性小鼠的口服半数致死量(LD₅₀)1710mg/kg体重，雌性小鼠的(LD₅₀)1482mg/kg体重，具备良好的安全性。

本发明通过试验验证了酒石酸沃尼妙林可溶性粉对由鸡毒支原体感染引起的鸡气囊炎治疗效果良好。沃尼妙林或其可药用有机酸盐可溶性粉在治疗由鸡毒支原体R株引起的鸡慢性呼吸道病结果表明，沃尼妙林或其可药用有机酸盐能明显降低鸡肺部气囊的病理损伤，减轻鸡群体重下降。

酒石酸沃尼妙林可溶性粉对猪胸膜肺炎放线杆菌病治疗效果良好。沃尼妙林或其可药用有机酸盐可溶性粉在治疗由胸膜肺炎放线杆菌引起的猪胸膜肺炎放线杆菌病治疗实验结果表明，受试药物组的猪经治疗后治愈率、有效率、平均增重率均高于药物对照组。

【附图说明】

图1A和1B为鸡毒支原体感染的鸡气囊，图1A为阳性对照组，图1B为剂量Ⅱ组；

图2A和2B为猪胸膜肺炎放线杆菌感染的猪肺，图2A为阳性对照组，图2B为剂量Ⅲ组。

【具体实施方式】

通过下述实施例将能够更好地理解本发明。

实施例1：制备沃尼妙林有机酸盐可溶性粉

以重量比计，称取(以沃尼妙林计)10％酒石酸沃尼妙林或富马酸沃尼妙林，余量为无水葡萄糖。分别将酒石酸沃尼妙林或富马酸沃尼妙林与无水葡萄糖研磨粉碎20min，过50目筛。将过筛后的辅料于60℃干燥0.5h，酒石酸沃尼妙林或富马酸沃尼妙林于40℃真空干燥2h，冷却。然后将沃尼妙林有机酸盐和辅料倒入容器内，按照倍比稀释法混合均匀后，继续混合10min，停止混合，取样检测。产品检验合格后，称量样品至准备好的塑料封口袋中进行灌装，封口。

实施例2：酒石酸沃尼妙林的急性毒性试验

为了评价沃尼妙林或其可药用有机酸盐可溶性粉的急性毒性，采用酒石酸沃尼妙林(参考中国发明专利申请CN1530370A)进行试验。将60只ICR小鼠，体重18～22g，随机分为6组，每组10只(雌雄各半)，设1616mg/kg、2101mg/kg、2731mg/kg、3550mg/kg、4615mg/kg、6000mg/kg六个剂量组。将受试物用0.5％羧甲基纤维素钠溶液配置成相应浓度的混悬液，经口对ICR小鼠灌胃，染毒后观察小鼠的一般表现、中毒症状和死亡情况，并对死亡小鼠进行剖检。

各组动物死亡情况详见表1，按寇氏计算法，受试物酒石酸沃尼妙林原料药对ICR小鼠的经口LD₅₀为3458mg/kg体重，LD₅₀95％的可信限为3001～3985mg/kg体重。相比于何凤艳等人的报道，盐酸沃尼妙林对雄性小鼠的口服半数致死量(LD₅₀)为1710mg/kg体重，雌性小鼠的(LD₅₀)为1482mg/kg体重，本发明的酒石酸沃尼妙林急性毒性显著低于盐酸沃尼妙林。

表1各剂量组的死亡统计结果

实施例3：酒石酸沃尼妙林可溶性粉溶液在饮水管线中的稳定性

为了确认沃尼妙林有机酸盐在饮水中的稳定性，配置三种使用剂量：低浓度组(10mg/L)、中浓度组(200mg/L)、高浓度组(1000mg/L)(以沃尼妙林计)。在室温条件下，用自来水溶解实施例1制备的酒石酸沃尼妙林可溶性粉，在饮水管线供水的应用条件下，分别在0～30天取样，利用高效液相色谱进行使用状态下稳定性考察试验。结果见表2。

表2酒石酸沃尼妙林可溶性粉溶液在饮水管线中的稳定性

稳定性试验结果表明，室温放置30天，样品含量没有明显变化，因此本发明产品在使用过程中稳定性良好。

实施例4：酒石酸沃尼妙林可溶性粉对鸡感染鸡毒支原体R株的治疗效果

采用实施例1制备的酒石酸沃尼妙林可溶性粉，评价对鸡毒支原体感染性疾病的治疗效果。试验选用70只40～60日龄SPF鸡进行。对照药物为盐酸沃尼妙林预混剂(10％)延胡索酸泰妙菌素可溶性粉(10％)。分组情况及处理方式见表3。

表3试验鸡分组与处理

试验前对每只鸡进行称重。将鸡毒支原体R株培养物注射各感染组鸡左右胸气囊，健康对照组气囊注射生理盐水。待感染组鸡只表现出咳嗽、气喘、精神沉郁、食欲下降、呼吸急促、张口呼吸等症状时，按照表3给药方式连续给药5天，观察期为初次给药当日至第20天。每天观察鸡的各种临床反应，并于试验结束后对试验鸡进行称重，结果见表4。

表4各组试验鸡增重结果比较

由表4可知:试验结束后，各治疗组鸡的平均增重均高于阳性对照组，也高于泰妙菌素组和盐酸沃尼妙林预混剂药物对照组。用药组与阳性对照组和两组药物对照药相比对治疗鸡气囊损伤，增重差异较显著(P＜0.05)。本发明制备的酒石酸沃尼妙林可溶性粉药物组的效果优于对照药物组，可有效防止由鸡毒支原体R株感染引起的鸡慢性气囊炎导致的生产性能下降。

给药疗程结束后，对受试鸡只进行剖检，观察气囊的病理变化，进行气囊损伤评分。气囊损伤减少率＝(阳性对照组平均气囊评分–试验组平均气囊评分)/阳性对照组平均气囊评分。根据每组试验鸡只的平均气囊损伤进行评分，计算气囊损伤减少率。

剖检结果如附图1所示，其中，阳性攻毒组鸡的气囊上沉积乳酪状沉积物(附图1A)，剂量Ⅱ治疗组气囊透明清亮(附图1B)。

表5各组试验鸡气囊损伤度比较

由表5可知，各用药组与阳性对照组比较，均能显著降低雏鸡由于鸡毒支原体R株感染引起的肺部气囊损伤。酒石酸酸沃尼妙林可溶性粉剂量Ⅰ组和Ⅱ、Ⅲ组的治愈效果显著，损伤减少率分别为89.3％和92.9％与92.9％，而盐酸预混剂和泰妙菌素组损伤减少率分别为57.1％和78.6％,本药与现有两组对照药物组相比对鸡气囊损伤疗效差异较显著(P＜0.05)，因此。各用药组气囊损伤减少率显著高于药物对照组，说明使用酒石酸沃尼妙林可溶性粉在降低鸡气囊损伤方面效果优良。

试验结果表明，酒石酸沃尼妙林可溶性粉能显著降低由鸡毒支原体R株感染引起的鸡慢性气囊炎的病理损伤，减轻鸡群体重下降。

实施例5：沃尼妙林有机酸盐可溶性粉对猪人工感染胸膜肺炎放线杆菌病药效试验

为了评价沃尼妙林或其可药用有机酸盐可溶性粉对猪人工感染胸膜肺炎放线杆菌病的治疗效果，采用实施例1制备的酒石酸沃尼妙林可溶性粉，进行临床疗效试验。对11～12周70头健康猪进行分组，随机分为7组，每组10头，将受试药物拟设三个剂量水平，另设盐酸沃尼妙林预混剂对照组和延胡索酸泰妙菌素对照组(药物对照组)、感染不给药对照组(阳性对照组)和健康对照组(空白对照组)。连续给药14天，观察期为初次给药当日至第21天，具体分组见表6。

表6试验分组与给药处理

试验前对每只猪进行称重。将猪胸膜肺炎培养菌液注射各感染组猪气管，健康对照组注射生理盐水。人工感染后进行临床观察，当攻毒后试验猪出现呼吸困难、精神沉郁、被毛粗乱、咳嗽、体温平均升高超过1～2℃的临床症状时，按照表6中给药方式连续给药14天。开始给药后每天观察猪的各种临床反应，连续观察至第21d，于试验结束后对试验猪进行称重，结果见表7。并对受试猪只剖检，观察肺部病理变化，

结果如附图2所示，其中，阳性攻毒组猪的肺部有脓结(附图2A)，剂量Ⅲ治疗组肺部光滑完整(附图2B)

表7各组猪平均体重增重(单位：kg)

从表7可以看出，对低、中、高三个剂量组、药物对照组Ⅳ、药物对照组Ⅴ、阳性对照组和健康对照组比较可以看出，平均增重率分别为：41.9％、44.5％、51.9％、38.8、42.0％，36.0和63.8％，低、中剂量组平均增重率低于高剂量组，低剂量组的平均增重率与药物对照组Ⅴ相当药物，高于对照组Ⅳ，高剂量组平均增重率数值最高，阳性对照组最低。相同使用剂量条件下，本药与对照药物组、阳性对照组相比治疗猪胸膜肺炎病，疗效差异较显著(P＜0.05)。

畜禽养殖中总常采用料肉比来评价饲料报酬，计算公式为：料肉比(FCE)＝消耗饲料总量(kg)/增重总量(kg)。由表8可知，在试验过程中，酒石酸沃尼妙林可溶性粉高剂量组平均饲料利用率最高，为0.74，其次是中剂量组为0.95，中、低剂量组与略优于药物对照药，无显著差异(P＞0.05)，高剂量组差异较显著(P＜0.05)。

表8各组猪平均料肉比(FCE)

治疗试验结果

可用死亡率、治愈率、有效率、无效率进行判断，并与各对照组进行比较分析。通过胸膜肺炎放线杆菌建立的胸膜肺炎模型,感染猪只均出现体温升高、咳嗽、呼吸困难、精神抑郁、食欲下降等症状。由表9可知：经用药治疗，受试药物组和药物对照组,临床症状有不同程度的改善。其中,酒石酸沃尼妙林可溶性粉高、中剂量组的治愈率、有效率均高于酒石酸沃尼妙林可溶性粉低剂量组,低剂量组和对照药物组Ⅳ治愈率相当,中剂量组和对照药物组Ⅴ治愈率相当,无显著差异(P＞0.05)。高剂量组的治愈率、有效率高于药物对照组。因此,在用酒石酸沃尼妙林可溶性粉治疗猪传染性胸膜性肺炎时,推荐根据病情服药，给药剂量为200～400mg/L(以药物有效成分计),连续服用14天。

表9酒石酸沃尼妙林可溶性粉治疗猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病数据统计

注：

治愈率：试验猪用药后，症状消失，精神、食欲、体温、呼吸、咳嗽等恢复正常，剖检后肺部无明显病例症状，判定为治愈。每组动物的治愈率＝治愈猪的数量/试验猪数量。

有效率：试验猪用药后，呼吸困难、体温升高、咳嗽、关节肿胀等症状减轻或者好转，均判定为有效。每组动物的有效率＝(治愈猪的数量+治疗有效猪数量)/试验猪数量。

综上所述，本发明利用鸡肺部气囊接种鸡毒支原体R株建立鸡气囊炎性模型，利用猪气管接种胸膜肺炎放线杆菌建立猪胸膜肺炎模型。试验证明比较于感染未治疗组和药物对照组，沃尼妙林或其可药用有机酸盐药物可使发病动物的气囊、肺部损伤率显著减少、临床症状消失，食欲恢复正常。平均增重率，肉饲比增加明显，优于现有药物对同种疾病的疗效。

Claims (9)

1.沃尼妙林有机酸盐在制备治疗家禽气囊炎的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述家禽气囊炎是鸡毒支原体感染所致的家禽气囊炎。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于沃尼妙林有机酸盐在家禽饮水中的浓度为以沃尼妙林计10～1000mg/L。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于沃尼妙林有机酸盐在家禽饮水中的浓度为以沃尼妙林计75～300mg/L。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述沃尼妙林有机酸盐是酒石酸沃尼妙林或富马酸沃尼妙林。

6.沃尼妙林有机酸盐在制备治疗猪胸膜肺炎的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述猪胸膜肺炎是猪胸膜肺炎放线杆菌病。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于沃尼妙林有机酸盐在猪饮水中的浓度为以沃尼妙林计100～400mg/L。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述沃尼妙林有机酸盐是酒石酸沃尼妙林或富马酸沃尼妙林。

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