CN109568301A - 一种没食子酸、大黄酸复合配方制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及畜禽医药技术领域，具体涉及没食子酸、大黄酸复方、制备方法及其应用，该产品能防治畜禽病毒性、细菌性疾病。其中，所述没食子酸、大黄酸复方包括按重量份计的下列组分：没食子酸75‑80份、大黄酸20‑25份，体内试验表明，没食子酸、大黄酸复方具有防治家禽流感H9N2亚型、法氏囊病毒病、鸡大肠杆菌等作用，同时可有效杀灭引起动物致病的细菌，例如：牛大肠杆菌、猪大肠杆菌、猪蜡样芽孢杆菌等。

Description

一种没食子酸、大黄酸复合配方制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及畜禽医药技术领域，具体涉及没食子酸、大黄酸复方、制备方法及其应用，该产品能防治畜禽病毒性、细菌性疾病。

背景技术

没食子酸(Gallic acid，GA)又名五倍子酸，结构如式Ⅰ所示，化学名称为3,4,5-三羟基苯甲酸，CAS登记号为149-91-7，分子式为C7H6O5，分子量: 170.12。

该产品的性质为白色或浅褐色针状结晶或粉末（由无水甲醇和氯仿中结晶），210℃升华时，得到一个稳定型结晶，258～265℃（分解）和一个不稳定型结晶。100～120℃失去结晶水空气中容易氧化变成微褐色。密度1.694g/cm3；熔点约252℃(分解)；溶解度：可溶于热水、碱性水溶液、乙醚、乙醇、丙酮和甘油，难溶于冷水，不溶于苯和氯仿及石油醚。没食子酸是一种已经被广泛研究的酚酸类化合物，国内大量研究资料证实，ＧＡ药理活性广泛。张浩楠等研究显示，ＧＡ对乌头碱、哇巴因和心肌缺血所致的心律失常具有明显抑制作用。

大黄酸：大黄酸为咖啡色针晶，升华后为黄色针晶。熔点：321-322℃,溶解度：不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氨仿、乙醚和石油醚。目前国内已有单体大黄酸作为一类新药已被国家科技部列为“十五”国家重大科技专项，旨在确证临床疗效、体内和体外活性实验结果的基础上，按照国家药品监督管理局有关中药一类新药的要求，完成临床前研制工作，并在获得临床研究批文的基础上，完成临床研究和取得新药证书。十一五期间大黄酸作为治疗糖尿病肾病一类新药进行临床研究。（1）抗菌作用，在1.5~25mg/ml深度，大黄酸对葡萄球菌、链球菌、白喉杆菌、枯草杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌等均有抑制作用。其作用之一是抑制线粒体呼吸链电子传递。大黄酸对金黄色葡萄球菌的核酸和蛋白质合成有较强的抑制作用，对无细胞系统DNA的生物合成也有抑制作用。（2）大黄酸本身无泻下作用，其肠内菌转化产物大黄酸蒽酮有泻下活性，能够降低结肠对钠和氯离子的吸收，增加钾离子分泌。前列腺素在大黄酸蒽酮泻下活性上起到了重要作用。（3）免疫抑制作用：大黄酸能抑制生物体抗体产生，抑制碳粒廓清能力，减轻免疫器官的重量，降低白细胞数。

随着近年来养禽业的快速发展，传染性疾病病的危害也日益突出，对人类健康也造成严重的威胁。其中：禽流感、法氏囊病、大肠杆菌病对家禽危害尤为严重，严重制约了养鸡业的健康发展。

禽流感病毒H9亚型：属于低致病性禽流感，可使鸡类出现轻度呼吸道症状，食量减少、产蛋量下降，出现零星死亡。肉鸡感染后出现表现慢性呼吸道病，发病率迅速增加，按20%速度增加，发病率达80%左右。临床使用抗慢性呼吸道病药物效果不好。发病的中期、后期，肉鸡出现严重的呼吸困难，腹泻增加，死亡增加。不采取有效措施的死亡率达到30%，措施得当死亡率可控在8%以内。其后遗症是肉鸡普遍采食量下降，出栏体重降低。近年来家鸡H9N2亚型禽流感病毒出现跨种间传播的趋势。禽流感H9N2亚型A/chicken/Jiangsu/07/2002株可以通过肺对肺传代能感染小鼠，并且毒性逐渐增强，4次传代后能使小鼠致死，10次传代后病毒的LD50为10-2.17（李梨平等,中国感染控制杂志,2008,7;372-375）。邓光存和毕建明的研究报告也证实从河北感染家鸡分离株A/Chicken/HB/4/2008(H9N2)连续传代5代以上，可以导致小鼠出现75%的死亡率(Guangcun Deng et al, Archives ofVirology, 2010, 155: 187-195; Jianmin Bi , PLoS ONE, 2010, 5(9): e13063)。以上结果显示H9N2型禽流感病毒能在实验条件下感染哺乳类，可以通过建立禽流感病毒的BALB/c小鼠模型来进行筛选药物。

传染性法氏囊病毒：是由鸡传染性法氏囊病毒（Infection bursal diseasevirus，IBDV）引起的雏鸡的一种急性高度接触性传染病，临床上以法氏囊肿大、肾脏损害为特征。目前该病是危害养鸡业的三大主要疫病之一，呈世界性分布，该病抑制雏鸡的免疫，使病鸡对大肠杆菌、腺病毒、沙门氏菌、鸡球虫等病原更易感，对马立克疫苗、新城疫疫苗等接种的反应能力下降，因此该病对养鸡业造成了巨大的危害。

大肠杆菌病：大肠杆菌在自然界中分布很广，凡是畜禽活动的场所，其空气、水源和土壤中均有该菌存在的可能。该病的发生常与鸡舍环境恶劣、空气质量差、饲养密度大、免疫接种不到位、饲料、饮水被污染等有关，也可成为其他疫病的并发症和继发症。大肠杆菌可分为非致病性、致病性和条件性致病菌。血清型极多，不同地区有不同的血清型，甚至同一鸡场、同一鸡群也可以同时存在多个血清型。大多数药物对大肠杆菌都有效，但都极易产生抗药性。投药的效果千差万别，即使是同一种成分的药物，由于其剂型和加工工艺不同，应用效果也各不相同。当前，顽固性耐药性大肠杆菌病呈多发现象，对养殖户的经济效益产生一定影响，成为养殖户养殖失败的主要诱因之一。养鸡场或鸭场一旦发生大肠杆菌病使鸡群和鸭群死亡率和淘汰率增加；从生物安全角度讲，大量用药会对食品安全造成一定威胁。大肠杆菌病主要以急性败血症表现，病鸡不显症状而突然死亡，或症状不明显，发病率、死亡率均较高。初次之外大肠杆菌还引起心肌炎、气囊炎、肝周炎、雏鸡和青年鸡关节炎、腹膜炎、输卵管炎、眼球炎等病变主要病变。禽类感染大肠杆菌病后临床上主要表现症状为腹泻、精神萎靡、食欲减退、产蛋禽产蛋减少或停止、眼室积液、失明等。

当今社会，随着科技的发展，抗生素的种类愈来愈多，在畜禽饲料添加剂中任意添加抗生素，直接导致禽畜细菌耐药性增高，出现耐药的细菌、病毒，使原来的抗生素失去作用，导致动物细菌病难以控制局面。滥用抗生素的动物禽类食品，如蛋奶、禽畜、水产品各食物链不断侵入人体，给人体健康带来危害。一旦患病很可能会无药可医，经常摄入低剂量的抗生素残留物，会逐渐在人体内蓄积而导致各种器官发生病变。这种含有抗生素的食品长期食用会使人类感染一些人畜共患的致病微生物或有明显变异的致病微生物。因此畜禽类食品的安全问题已经引起广大消费者的关注，化学抗病毒药如利巴韦林、金刚烷胺、盐酸吗啉双胍等抗病毒西药和四环素类药物、泰勒菌素等抗菌药物等也已经在家养动物上被禁用，对治疗细菌性疾病也提出了挑战。目前对于病毒病除接种疫苗预防外尚无有效的治疗办法；对于细菌性疾病的治疗很多的特效抗菌素已经被禁止使用。国家和社会对食品安全的要求不断提升的今天亟需广大科研人员开发出一种抗病毒和细菌新药。到目前为止，还没有见到有关没食子酸应用于防治上述鸡病毒性疾病和对大肠杆菌病治疗效果的报道。

发明内容

本发明目的是提供没食子酸、大黄酸复方的新用途，即在畜禽兽药、兽药添加剂领域中的应用。

本发明提供了没食子酸、大黄酸复方在防治鸡病毒感染性疾病的药物中的应用。

优选地，该病毒为禽流感病毒、传染性法氏囊病毒。

所述禽流感病毒是H9N2亚型禽流感病毒；所述的法氏囊病毒是IBDV BC-6/85型。

所述细菌包括鸡大肠杆菌、猪大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌。

所述预防和治疗畜禽病毒病、细菌病药物（以下称为没食子酸、大黄酸复方），包括按重量份计的下列组分：大黄酸20-25份、没食子酸75-80份。

优选地，所述复方没食子酸，包括按重量份计的下列组分：大黄酸25份、没食子酸75份。

复方没食子酸、大黄酸的制备方法如下：

按上述重量份称取各个组分，粉碎后，混合均匀，分装入瓶，得粉剂。

本发明的复方没食子酸、大黄酸还可以加入常规的辅料或载体或可以按照本领域的常规制剂方法制备成口服制剂等，例如，可以是粉剂、片剂、颗粒剂、口服液等，优选为口服液或颗粒剂。复方没食子酸、大黄酸复方药物按50-250mg/公斤体重，可通过口服途径给药。

本发明还提供没食子酸和大黄酸复方粉剂在预防和治疗畜禽病毒病或细菌病药物中的应用。

所述给药方式是拌料、饮水给药或注射给药。

本发明所述禽主要是指肉鸡（含黄鸡、麻鸡）、蛋鸡、鸭（含肉鸭、蛋鸭）等。

大量实验研究表明，没食子酸具有抗鸡病毒病、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌的活性，能有效防治禽流感H9N2亚型病毒、法氏囊病毒BC-6/85型、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌株，从而降低发病鸡群、死亡率，有效提高鸡成活率和生产性能。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例 1

本发明没食子酸、大黄酸复方包括下列组分：大黄酸10克、没食子酸90克。

其制备过程如下：按上述重量称取各个组分，粉碎后过80目筛，混合均匀，分装入瓶，得粉剂。

实施例 2

本发明没食子酸、大黄酸复方包括下列组分：大黄酸20克、没食子酸80克。

其制备过程如下：按上述重量称取各个组分，粉碎后过80目筛，混合均匀，分装入瓶，得粉剂。

实施例 3

本发明没食子酸、大黄酸复方包括下列组分：大黄酸25克、没食子酸75克。

其制备过程如下：按上述重量称取各个组分，粉碎后过80目筛，混合均匀，分装入瓶，得粉剂。

实施例4

本发明没食子酸、大黄酸复方包括下列组分：没食子酸75克、大黄酸25克。

其制备过程如下：将没食子酸75g，溶于40 ml无水乙醇中后，加入吐温-20 30ml，混匀后加入大黄酸25克，溶解，使用灭菌水定容至100ml,即得复方没食子酸口服液。

实施例5：

本发明没食子酸、大黄酸复方包括下列组分：没食子酸80克、大黄酸20克。

其制备过程如下：将没食子酸80克溶于40ml无水乙醇中，再加吐温-20 30ml，混匀后加入大黄酸20克，溶解，使用灭菌水定容至100ml,即得复方没食子口服。

实施例 6

本发明没食子酸、大黄酸复方包括下列组分：没食子酸80克、大黄酸20克、制备颗粒糊精300克。

按照等量递加法将原辅料混合均匀，制粒，过筛，整粒，分装，即得。

如未有特别说明，下述实验例提到的复方没食子酸为实施例4所得的复方没食子酸和大黄酸粉剂。

实验例1：复方没食子酸对人工感染H9N2流感病毒小鼠的治疗实验。

实验动物：18-22克体重清洁级昆明小鼠，购自北京大学实验动物部。

实验药物：实施例4制备的口服液；盐酸金刚烷胺，购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司； 没食子酸：遵义市倍缘化工有限责任公司，含量98%；大黄酸：西安金绿生物工程技术有限公司，含量98%。

毒株：禽流感A/Chicken/HB/4/2008(H9N2) (Genbank accession # FJ499463-FJ499470)，昆明小鼠的LD 50=10-4.25/0.1ml。

实验分组：分为复方没食子酸高剂量组、中剂量组和低剂量组，分别给予实施例4制备的复方没食子酸口服液的剂量为250mg/kg、100mg/kg和50mg/kg体重；盐酸金刚烷胺组为阳性对照组，批号A1260-5G，剂量为15mg/kg体重；攻毒对照组，给予注射用水15mg/kg体重。

实验方法：

除空白对照组外，其它各组均攻毒，100 LD 50（100倍的LD50）滴鼻0.1ml/只。攻毒72h后按照分组进行给药（第4天），50%小鼠出现呼吸困难，出现死亡时，开始连续给药5天，给药开始连续观察10天，共计14天。

观察指标：记录小鼠的死亡情况、存活数。实验第14天断颈处死全部小鼠，剖检观察肺脏出血、称取肺脏重量，测定肺脏指数。

相对增重率=相对增重/健康对照体重增重×100；

平均存活时间=总的存活天数/只数；

肺脏指数=肺脏重/实验末体重×100；

肺脏出血率=出血面积之和/肺脏面积×100。

实验结果：对小鼠存活率和存活时间的影响：

表1：药物对小鼠成活率和平均存活时间的影响

分组	只数	死亡数	存活率	平均存活时间
					复方高剂量	10	2	80.0<sup>a</sup>	12.4<sup>a</sup>
复方中剂量	10	3	70.0<sup>a</sup>	10.9<sup>a</sup>
					复方低剂量	10	4	60.0<sup>a</sup>	10.4<sup>a</sup>
盐酸金刚烷胺组	10	3	70.0<sup>b</sup>	7.7<sup>b</sup>
					攻毒对照组	10	7	30.0<sup>c</sup>	4.2<sup>c</sup>
空白对照组	10	0	100.0	14.0

注：同一列中a-bP<0.05, a-cP<0.01;b-cP<0.01

表1结果可以看出：

存活率：攻毒对照组成活率为30%，说明本模型复制成功。攻毒后的复方没食子酸高剂量组、中剂量组和低剂量组存活率分别为80.0%和70.0%和60.0%，与金刚烷胺对照组比较差异显著（P<0.05），与攻毒对照组相比，复方没食子酸三个剂量组呈现差异极显著（P<0.01）。在平均存活时间来看，复方三个剂量组分别为12.4天、10.9天和10.4天，显著性高于金刚烷胺对照组（P<0.05），极显著性高于攻毒对照组（P<0.01）。

对小鼠体重的影响：

表2 药物对小鼠体重的影响

分组	初体重(g)	末体重(g)	相对增重	相对增重率（%）
					复方高剂量	22.56±1.37	28.91±5.92	6.35	64.9<sup>a</sup>
复方中剂量	23.48±1.28	28.10±3.15	4.62	47.2<sup> a</sup>
					复方低剂量	22.85±1.32	26.15±2.67	3.3	33.8<sup>a</sup>
盐酸金刚烷胺组	23.15±1.33	27.12±3.59	3.97	40.6<sup>b</sup>
					攻毒对照组	23.74±1.40	25.43±4.12	1.69	17.2<sup> c</sup>
空白对照组	23.41±1.17	33.18±2.19	9.77	100

注：同一列中a-bP<0.05, a-cP<0.01;b-cP<0.01

从表2结果可以看出：复方没食子酸三个剂量组呈现量效关系，高剂

量组相对增重率显著性高于盐酸金刚烷胺组对照组（P<0.05），中剂量组、低剂量组与盐酸金刚烷胺组相比差异不显著；高剂量组和中剂量组与攻毒对照有极显著差异，低剂量组与攻毒也有显著性差异。

药物对小鼠肺脏病变以及病毒清除的影响

对小鼠肺脏病变指数的影响（表3）

表3：感染后药物对肺脏病变指数的影响

分组	肺脏出血病变指数（%）	肺脏指数
			复方高剂量	30.0	0.51±0.12<sup> a</sup>
复方中剂量	43.0	0.59±0.17<sup> b</sup>
			复方低剂量	52.0	0.65±0.20<sup> b</sup>
盐酸金刚烷胺组	65.0	0.89±0.21<sup> c</sup>
			攻毒对照组	80.0	1.22±0.14<sup> d</sup>
空白对照组	0.0	0.71±0.11

注：同一列中a-b,b-d P<0.05, a-c,a-dP<0.01;b-c,c-dP<0.05

从表3结果可以看出：显示没食子酸三个剂量组的肺脏出血面积分别为30.0%、43.0%和52.0%，显著性低于盐酸金刚烷胺对照组（65.0%）；结果显示肺脏出血面积减少提示药物控制炎症的效果越显著。同时肺脏指数降低也显示肺脏纤维化病变减轻，也预示药物的效果显著。肺脏指数（肺脏重量/体重）复方没食子酸三个剂量组分别为0.51、0.59和0.65，高剂量组极显著的低于盐酸金刚烷胺组（0.89）（P<0.01），中剂量组和低剂量组显著低于盐酸金刚烷胺组（P<0.05）。

对小鼠肺脏组织的影响（表4）

表4：人工感染后药物对小鼠肺脏组织禽流感病毒的影响

分组	存活数（只）	病毒分离率（%）
			复方高剂量	9	0.0<sup> a</sup>
复方中剂量	8	10.0<sup>a</sup>
			复方低剂量	7	35.0<sup> b</sup>
盐酸金刚烷胺组	8	45.0<sup> c</sup>
			攻毒对照组	3	75.0
空白对照组	10	0.0

注：同一列中a-b,b-c P<0.05, a-cP<0.01

从表4可以看出，没食子酸高剂量组和中剂量组的病毒分离率相比差异不显著，但低剂量组显著性低于盐酸金刚烷胺组（P<0.05），高剂量组和中剂量组极显著低于盐酸金刚烷胺组（P<0.01），这提示药物对病毒的清除效果显著。

结论：

从以上实验结果可以看出，禽流感病毒模型造模成功，复方没食子酸、大黄酸剂量达到250mg/kg体重时对禽流感病毒H9N2的攻击有较好的抵抗作用，保护率达到90%，同时能增加体重、显著性降低肺脏的病变指数，减少病毒在肺脏组织中的感染。

实验例2：复方没食子酸、大黄酸对鸡传染性法氏囊病的治疗。

实验动物：24日龄SPF鸡( specific pathogen free, SPF)。

毒株：IBDV- BC6/85（中国兽药监察所）为攻毒株。

实验药物：实施例4制备的没食子酸、大黄酸口服液

黄芪多糖口服液：购自北京生泰尔科技股份有限公司

没食子酸：遵义市倍缘化工有限责任公司，含量98%；大黄酸：西安金绿生物工程技术有限公司，含量98%。

实验分组：分为复方没食子酸高剂量、中剂量、低剂量组，分别给予实施例4制备的口服液250 mg/kg体重，100mg/kg体重，50mg/kg

体重（以复方没食子酸计）；阳性对照组给药为黄芪多糖250mg/kg体重；同时，设置病毒攻毒对照组、健康对照组，每组10只24日龄的SPF鸡，以饮水方式给药。

攻毒方法：

取人工感染传染性法氏囊病毒的患病SPF鸡的法氏囊组织，用玻璃研磨器研磨，1个法氏囊病毒加入1mL生理盐水稀释，制成组织匀浆，反复冻融三次，离心取上清，上清液用生理盐水进行1：10稀释，稀释液中按照4000单位/mL加入庆大霉素，作用30分钟后使用。除空白对照组外，其它各组均攻毒，每只鸡进行点眼、滴鼻共计0.2mL，攻毒12小时后连续给药5天，2次/天，饮水口服,给药后连续观察5天。

观察指标：

整体观察指标：增重率、死亡率和法氏囊指数。

相对增重率=相对增重/健康对照体重增重×100；

法氏囊指数：实验结束后采取鸡只的法氏囊进行称重，并计算法氏囊指数指数（法氏囊重量/体重）。

实验结果：对鸡体重的影响（表5）：

表5：药物对体重的影响

组别	只数	初平均体重（g/只）	末平均体重（g/只）	平均增重（g）	相对增重率（%）
						复方高剂量组	10	187.12±16.25	287.01±41.23	99.89	84.4<sup>a</sup>
复方中剂量组	10	186.61±15.35	283.75±12.31	97.14	82.1<sup>a</sup>
						复方低剂量组	10	183.43±11.93	274.19±25.22	90.76	76.7<sup> a</sup>
黄芪多糖组	10	178.00±14.98	260.71±39.82	82.71	69.9<sup> b</sup>
						感染对照组	10	175.25±15.28	240.46±40.52	65.21	55.1<sup> c</sup>
健康对照组	10	177.50±8.21	295.80±27.18	118.3	100.0

注：同一列中^a-b,b-c P<0.05, ^a-cP<0.01。

对鸡法氏囊人工感染的存活的影响（表6）

表6：药物对法氏囊人工感染后成活率的影响

组 别	只数	存活数	存活率(%)
				复方高剂量组	10	9	90<sup> a</sup>
复方中剂量组	10	8	80<sup> b</sup>
				复方低剂量组	10	8	80<sup> b</sup>
黄芪多糖组	10	6	60<sup> c</sup>
				感染对照组	10	5	50<sup> d</sup>
健康对照组	10	10	100

注：同一列中a-b,b-c,d-c P<0.05, a-c,a-d0.01

从表5和表6结果可以看出：复方没食子酸、大黄酸高剂量组、中剂量组和低剂量组的相对增重率均显著性高于黄芪多糖组（P<0.05），黄芪多糖对照组显著性高于攻毒对照组（P<0.05）；在存活率方面：黄芪多糖组存活率60%显著性高于感染对照组50%存活率，复方没食子酸、大黄酸高、中、低剂量组保护率分别为90%、80%和80%，显著性高于黄芪多糖组（P<0.05）和极显著性高于感染对照组。

对鸡法氏囊人工感染后的免疫器官的影响（表7）

表7：药物对法氏囊人工感染后免疫器官指数的影响

组 别	存活只数	法氏囊均重	法氏囊指数平均值
				复方高剂量组	9	0.287±0.11	0.068<sup> a</sup>
复方中剂量组	8	0.258±0.06	0.085<sup> a</sup>
				复方低剂量组	8	0.267±0.05	0.087<sup>a</sup>
黄芪多糖组	6	0.300±0.09	0.090<sup>b</sup>
				感染对照组	5	0.400±0.11	0.158<sup> c</sup>
健康对照组	10	0.287±0.10	0.062

注：同一列中a-b P<0.05, a-c,b-c P<0.01。

由表7可以看出：复方没食子酸、大黄酸高剂量组法氏囊指数显著性低于黄芪多糖组（P<0.05），中剂量组和低剂量组之间以及与黄芪多糖组相比差异不显著，但复方没食子酸、大黄酸给药组均极显著性低于感染对照组（P<0.01）。

结论：

复方没食子酸、大黄酸在250mg/kg体重时可以有效的提高人工感染法氏囊鸡的存活率，改善法氏囊病变指数，达到增强免疫力。

实验例3：复方没食子酸、大黄酸治疗鸡大肠杆菌病实验。

实验动物：试验动物 14日龄SPF雏公鸡，购自北京市实验动物中心。

试验菌株: 临床发病鸡分离得到的大肠杆菌菌株O78血清型（已经测定半数致死量LD50=1.5×108CFU）。

实验药物：实施例4制备的口服液；没食子酸：遵义市倍缘化工有限责任公司，含量98%；大黄酸：西安金绿生物工程技术有限公司，含量98%；5%环丙沙星粉剂：购自天津恒基利德科技有限公司。

实验分组和药物剂量：21日龄时随机分6组，分为复方没食子酸高剂量、中剂量、低剂量组，分别给予实施例4制备的口服液250 mg/kg体重，100mg/kg体重，50mg/kg体重（以复方没食子酸计）；阳性对照组给药为5%环丙沙星100mg/kg体重；同时，设置细菌感染对照组、健康对照组，以饮水方式给药；1-4组为试验药物组,第五组为感染对照组,第六组为空白对照组(既不给药也不感染)，共90只鸡。

攻毒方法：腹腔注射，每只0.5mL 3×108CFU/mL的菌液，空白对照组除外，隔离饲养。

攻毒感染后, 50%试验鸡出现精神萎靡，采食减少等症状时开始饮水给药，每天两次，剂量同上所述，连续给药物5天，停药后观察10天。

观察指标：试验期间每天观察鸡的精神状态，记录体重变化、死亡情况，对死亡鸡及时进行剖检，试验结束后对各组存活的鸡随机挑选机制进行剖检观察脏器病变以及炎症情况。

疗效判定指标：以治愈、有效、死亡来表示。试验期间攻毒组鸡给药后精神状态以及饮水和采食恢复正常，体重增加，不再出现拉稀等症状，判定为治愈。各组以治愈率来表示；试验期间攻毒组给药后症状明显好转或未死亡但表现有大肠杆菌病症，判定为有效。试验结束时以各组存活鸡数和试验鸡数百分比来表示有效率；试验期间攻毒给药出现典型的大肠杆菌症状并死亡，死亡鸡剖检有大肠杆菌典型病变，试验结束时各组以死亡鸡数和试验技术百分比来表示死亡率。

实验结果：大肠杆菌人工感染SPF鸡后对体重影响（表9）：

表9：人工感染大肠杆菌后药物对体重的影响表

组别	数量（只）	初体重	末体重	相对增重率（%）
					复方高剂量组	15	170.9±18.7	295.1±73.4	86.6<sup>a</sup>
复方中剂量组	15	171.1±17.4	286.6±80.3	80.5<sup>a</sup>
					复方低剂量组	15	172.5±17.2	267.8±63.7	66.5<sup> b</sup>
环丙沙星组	15	170.5±15.7	270.3±98.8	69.6<sup> c</sup>
					感染对照组	15	172.2±13.5	215.4±73.2	30.1<sup>d</sup>
空白对照组	15	172.8±14.6	316.2±40.6	100

注：同一列中a-b P<0.05,a-d，a-cP<0.01

表8结果显示：复方没食子酸、大黄酸高、中、低剂量组体重增重率分别为86.6%，80.5%和66.5%，环丙沙星组69.6%，经过统计学分析显示复方没食子酸、大黄酸高剂量组和中剂量组的相对增重率均显著高于环丙沙星组（P<0.05），高剂量组极显著性高于环丙沙星组（P<0.01）。

对人工感染大肠杆菌后试验药物疗效比对情况（表10）：

表10：人工感染大肠杆菌后药物的疗效结果

组别	数量（只）	死亡数（只）	存活数（只）	死亡率（%）	治愈率（%）	有效率（%）
							复方高剂量组	15	1	14	6.6<sup>a</sup>	92.9<sup>a</sup>	93.3<sup> a</sup>
复方中剂量组	15	2	13	13.3<sup>a</sup>	84.6<sup>a</sup>	86.6<sup> a</sup>
							复方低剂量组	15	4	11	26.7<sup>a</sup>	53.3<sup>a</sup>	73.3<sup>a</sup>
环丙沙星组	15	5	10	33.3<sup>b</sup>	60.0<sup>b</sup>	66.7<sup> b</sup>
							感染对照组	15	11	4	73.3<sup>c</sup>	6.7<sup>c</sup>	26.7<sup>c</sup>
空白对照组	15	0	15	0	-	-

注：同一列中a-b,a-cP<0.01

表10结果显示：复方没食子酸、大黄酸3个剂量组与感染对照组相比死亡率极显著低于感染对照组，治愈率和有效率极显著高于感染对照组（P<0.01）。中剂量组和高剂量组没食子酸死亡率、治愈率、有效率菌极显著好于环丙沙星组（P<0.01），低剂量组复方没食子酸、大黄酸死亡率、治愈率和有效率也显著性好于环丙沙星组（P<0.05）。这提示复方没食子酸、大黄酸对治疗大肠杆菌病具有很好的疗效。

Claims (7)

1.没食子酸、大黄酸在制备防治畜禽鸡病毒和细菌感染性疾病的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒为禽流感病毒、传染性法氏囊病毒;所述细菌为大肠杆菌和蜡样芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述禽流感病毒为H9亚型病毒；所述传染性法氏囊病毒IBDV BC-6/85型。

4.根据权利要求3所述的禽流感亚型病毒为禽流感H9N2亚型。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述预防和治疗畜禽病毒病、细菌病药物包括按重量份计的下列组分：没食子酸75-80份、大黄酸20-25份。

6.根据权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述预防和治疗畜禽病毒病、细菌病药物为没食子酸、大黄酸复方制剂。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，该制剂为粉剂、口服液、注射液、颗粒剂或者片剂。