CN115634276B - 一种利水渗湿的药物制剂在膜性肾病治疗领域的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种利水渗湿的药物制剂及在膜性肾病治疗领域的应用。膜性肾病是成人肾病综合征的常见病因，属于自身免疫性肾小球疾病，现有治疗方式主要为免疫抑制剂或激素治疗，对于患者的机体影响较大。本发明针对现有肾炎消肿片中药物组方的药味剂量和制剂工艺进行了优化，并验证了优化后药物制剂能够有效改善膜性肾病的蛋白尿症状，预防肾脏损伤。另外，本发明还证实了上述药物制剂与免疫抑制剂联合应用于膜性肾病的治疗，可有效降低免疫抑制剂的用量，实现积极的临床治疗效果。

Description

一种利水渗湿的药物制剂在膜性肾病治疗领域的应用

技术领域

本发明属于膜性肾病治疗药物技术领域，具体涉及一种具有利水渗湿功效的药物组合物、所述药物组合物的制剂及其在制备治疗膜性肾病药物中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

肾炎消肿片以泽泻为君，取其甘淡性寒，直达肾与膀胱，利水渗湿；臣以茯苓、香加皮、大腹皮、椒目、姜皮、冬瓜皮，消胀除满、下气行水，益母草活血调经、利尿消肿，增强君药利水渗湿之力，陈皮、苍术理气和胃、健脾化湿，转输精津，使水精四布，而不直驱于下，黄柏清热燥湿、泻肾浊，佐以桂枝一药二用，既外解太阳之表，又内助膀胱气化，通阳利水。诸药合用共奏利水消肿，理气健脾之功。

膜性肾病：(Membranous Nephropathy,MN)属于自身免疫性肾病，是肾病综合征常见的病理类型之一。多发于老年人，且近年来发病率逐渐上升趋势。目前西医主要治疗以免疫抑制治疗为主，但其存在诸多弊端，这也为中医药治疗本病带来了机遇与挑战。中医认为膜性肾病为本虚标实之症，基本病机为，先天禀赋不足，后天调摄失宜，中年脾胃之气渐衰导致脾肾气虚，水谷精微不得封藏而外流，出现蛋白尿；脾肾亏虚，气化失常，风邪外袭，水液停聚导致风、痰、湿三焦阻滞导致内郁脏腑，外溢肌肤而出现水肿。

海曼肾炎模型(heymann nephritis，HN)：是目前国内外公认的研究人类膜性肾病的大鼠动物模型。将大鼠肾皮质通过组织灌洗、匀浆、离心制成的近端肾小管上皮细胞刷状缘提取物Fx1A作为抗原直接注射给大鼠诱导肾小球肾炎的模型被称为主动型海曼肾炎(active heymann nephritis，AHN)；将近端肾小管上皮细胞刷状缘提取物注射给兔子或绵羊后，再提取其含有Fx1A抗体的血清，注射给大鼠诱导肾小球肾炎的模型被称为被动型海曼肾炎(passive heymann nephritis，PHN)。两组造模方式均可导致其出现大量蛋白尿，并在病理上与人类膜性肾病极其相似。

发明内容

基于上述技术背景，本发明针对现有肾炎消肿片的药物组方及制剂工艺进行了相应的调整和优化，并验证了优化后的药物组合在膜性肾病治疗领域的应用。本发明通过海曼肾炎模型证实了优化后的药物制剂能够有效改善膜性肾病伴随的蛋白尿症状，起到预防肾脏损伤的效果。另外，本发明还证实了上述药物制剂能够与免疫抑制剂联合用于治疗模型肾病，通过联合用药减轻免疫抑制剂的用量，提供了一种临床应用前景更好的应用方式。

本发明第一方面，提供一种利水肾湿的药物组合物，所述药物组合物中包括如下比例的药味：桂枝120～140份、泽泻120～140份、陈皮120～140份、香加皮120～140份、苍术120～140份、茯苓120～140份、姜皮120～140份、大腹皮120～140份、关黄柏120～140份、椒目80～90份、冬瓜皮120～140份、益母草120～140份。

上述药物组合物中，在《中国药典》中具有相应记载的中药材，其药材来源、药用部位及炮制方法符合《中国药典》中的相关规定；其中，药材陈皮可采用陈皮或广陈皮，苍术可采用茅苍术或北苍术。

未记载于《中国药典》的各药味相关说明如下：

姜皮，即生姜皮，为姜科植物姜的根茎的根茎外皮，其来源及炮制方式可参考《本草图经》；

椒目，别名川椒目，为芸香科植物花椒的种子，筛去灰屑，拣去杂质，炒出汗(油)用(出处《本草经集注》)。

冬瓜皮，为葫芦科植物冬瓜Benincasa hispida(Thunb.)Cogn.的干燥外层果皮，除去杂质，洗净，切块或宽丝，晒干(出处《全国中草药汇编》)。

优选的，所述药物组合物中，各药味及比例如下：桂枝125～135份、泽泻125～135份、陈皮125～135份、香加皮125～135份、苍术125～135份、茯苓125～135份、姜皮125～135份、大腹皮125～135份、关黄柏125～135份、椒目83～87份、冬瓜皮125～135份、益母草125～135份。

进一步优选的，上述各药味的比例如下：桂枝127～130份、泽泻127～130份、陈皮127～130份、香加皮127～130份、苍术127～130份、茯苓127～130份、姜皮127～130份、大腹皮127～130份、关黄柏127～130份、椒目85～87份、冬瓜皮127～130份、益母草127～130份。

本发明提供的一种效果较好的实施方式，所述药物组合物中各药味的比例如下：桂枝129份、泽泻129份、陈皮129份、香加皮129份、苍术129份、茯苓129份、姜皮129份、大腹皮129份、关黄柏129份、椒目86份、冬瓜皮129份、益母草129份。

又一种效果较好的实施方式中，所述药物组合物中各药味的比例如下：桂枝127份、泽泻127份、陈皮127份、香加皮127份、苍术127份、茯苓127份、姜皮127份、大腹皮127份、关黄柏127份、椒目85份、冬瓜皮127份、益母草127份。

又一种效果较好的实施方式中，所述药物组合物中各药味的比例如下：桂枝130份、泽泻130份、陈皮130份、香加皮130份、苍术130份、茯苓130份、姜皮130份、大腹皮130份、关黄柏130份、椒目87份、冬瓜皮130份、益母草130份。

本发明第二方面，提供一种利水渗湿的药物制剂，所述药物制剂为口服剂，以第一方面所述药物组合物作为原料。

上述第二方面所述的药物制剂为第一方面所述药物组合物的提取物形式，所述提取物中包括茯苓的全部位及其他药味的水提取物。现有肾炎消肿片的制剂工艺以水煎提取为主，现有提取工艺中，采用饮片直接煎煮的方式进行提取。本发明提供的药物制剂其优化方向包括提高上述药味的活性成分提取效率，为了实现该目的，本发明从原料预处理、浸泡时间等方面进行了考察，提供了效果更优的制备方式，所述药物制剂的制备方法如下：将关黄柏粗破成小块，与除茯苓之外的十种药味饮片混合，加入药材体积的12～16倍水浸泡40～80min，随后加热保持微沸状态进行回流提取并过滤，回流时间为1～3h；向过滤后的药渣中加入药材体积8～12倍的水，保持微沸状态回流提取1～2h后过滤，合并滤液减压浓缩得到稠膏；将茯苓粉碎成细粉与上述稠膏混匀后干燥得到所述药物制剂。

优选的，所述关黄柏可采用本领域常规的机械破碎方式，破碎成尺寸为0.8～1.2cm的小块即可。

优选的，所述茯苓粉碎后细粉的粒度为能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95％的粉末。

优选的，所述药物制剂为口服液体或口服固体制剂，具体为汤剂、混悬剂、糖浆剂、合剂、酊剂等口服液体制剂，或为膏剂、颗粒剂、丸剂(蜜丸、水丸、糊丸、蜡丸和浓缩丸)、散剂、片剂(肠溶片、包衣片、薄膜衣片、糖衣片、浸膏片、分散片、划痕片)、胶囊剂或滴剂中的一种；所述药物制剂中还包括药学上可接受的载体，在口服固体制剂的情况下，例如，可以将赋形剂，润滑剂，粘合剂，崩解剂等适当地添加至上述药物制剂；在口服液体制剂的情况下，例如，可以将溶剂，增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、舒缓剂等适当地添加至本发明的抗体及其载体。另外，根据需要可以适当地加入防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂和其他制剂添加剂。

一种具体的实施方式中，本发明提供一种利水渗湿的口服片剂，具体制备方式如下：药物组合物，粉碎，过60目筛，加0-10％玉米淀粉、0-0.05％硬脂酸镁，混合均匀，制粒，干燥，压片，包糖衣或薄膜衣。

本发明第三方面，提供第一方面所述药物组合物、第二方面所述药物制剂在制备治疗膜性肾病药物中的应用。

上述第三方面所称的膜性肾病是一种以足细胞损伤以及肾小球基底膜上皮下免疫复合物弥漫性沉积伴基底膜弥漫增厚为主要特征的肾小球疾病，临床以大量蛋白尿、水肿等为主要表现，其在原发性肾小球疾病中所占比高达29％。现代研究表明，M型磷脂酶A2受体在膜性肾病中也发挥着重要作用。现有的治疗用药，如激素以及免疫抑制剂的使用存在诸多弊端，因此，中医药治疗本病所发挥的优势逐渐崭露头角。本发明将膜性肾病基本病机概括为“脾虚湿盛、三焦气化不利”，肾炎消肿片常用于急慢性肾炎脾虚湿肿之患者，发挥了健脾渗湿，通阳利水的作用，主要通过利水渗湿治疗或缓解脾虚气滞、水湿内停所致的水肿症状，及急慢性肾炎引起的水肿等症状，临床疗效显著，但并非用于治疗肾炎。本发明提供的药物组合物不仅能够起到缓解水肿，还能发挥减少膜性肾病尿蛋白排泄的作用，将其应用在治疗膜性肾病方向并无相关报道及研究资料，非可预期的作用。

优选的，所述在制备治疗膜性肾病药物中的应用，其应用方式包括但不限于：将活性剂量的上述组合物或药物制剂施用于有需求的个体，其用药的剂量可以依据用药目的、施用对象等因素基于本领域常规方式获得，所述有需求的个体包括膜性肾病确诊患者、蛋白尿症状患者，优选的施用方式为口服。

优选的，所述应用方式还包括与其他活性成分联合施用，所述其他活性成分包括免疫抑制剂及非免疫抑制剂；其中，所述免疫抑制剂的具体实例如强的松、甲基强的松龙、环磷酰胺、环孢菌素A、他克莫司、吗替麦考酚酯、雷帕霉素、硫唑嘌呤、来氟米特；所述非免疫抑制剂包括ACEI或ARB类药物(如替米沙坦、贝那普利)、降血脂类药物(如他汀类药物)、抗凝药物(肝素类药物，如低分子的肝素钠、肝素钙)、中成药(百令胶囊、金水宝胶囊、雷公藤苷)。

本发明第四方面，提供一种膜性肾病治疗药物，所述治疗药物中包括活性剂量的第二方面所述药物制剂及免疫抑制剂。

优选的，所述免疫抑制剂选自环磷酰胺、环孢素、硫唑嘌呤、他克莫司、来氟米特中的一种或几种；本发明进一步优选的实施方式中，所述免疫抑制剂为他克莫司。

优选的，所述膜性肾病治疗药物为口服固体制剂；进一步优选的剂型为口服片剂或胶囊剂。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1为实施例4中药物制剂对被动型海曼肾炎大鼠模型蛋白尿的影响；

图2为实施例4中药物制剂对肾脏损伤形成后大鼠模型蛋白尿的影响；

图3为实施例4中药物制剂联合FK506对肾脏损伤形成后大鼠模型蛋白尿的影响；

上述图1-图3中，所述Ctrl代表空白组，PHN为被动型海曼肾炎疾病模型组，FK506为免疫抑制药物，SYXZ为实施例4中提供的药物制剂；

图4为实施例4中药物制剂对PHN大鼠血清白蛋白的影响；

图5为实施例4中药物制剂对PHN血清总胆固醇的影响；

图6为实施例4中药物制剂对PHN血清甘油三酯的影响；

图7为实施例4中药物制剂对PHN大鼠肾小球损伤的保护作用；

图8为实施例4中药物制剂对PHN大鼠肾小球补体C3沉积的改善作用；

图9为PHN大鼠肾小球足细胞免疫荧光结果；

图10为PHN大鼠肾小球足细胞损伤的保护作用。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。

实施例1

本实施例中，提供一种具有利水渗湿功效的药物组合物，所述组合物中各药味及用量比例如下：桂枝129g、泽泻129g、陈皮129g、香加皮129g、苍术129g、茯苓129g、姜皮129g、大腹皮129g、关黄柏129g、椒目86g、冬瓜皮129g、益母草129g。

实施例2

本实施例中，提供又一种具有利水渗湿功效的药物组合物，所述组合物中各药味及用量比例如下：桂枝127g、泽泻127g、陈皮127g、香加皮127g、苍术127g、茯苓127g、姜皮127g、大腹皮127g、关黄柏127g、椒目85g、冬瓜皮127g、益母草127g。

实施例3

本实施例中，提供又一种具有利水渗湿功效的药物组合物，所述组合物中各药味及用量比例如下：桂枝130g、泽泻130g、陈皮130g、香加皮130g、苍术130g、茯苓130g、姜皮130g、大腹皮130g、关黄柏130g、椒目87g、冬瓜皮130g、益母草130g。

实施例4

本实施例中，针对药物组合物的制剂工艺进行考察，以上述实施例1中提供的药物组合物为例，分别对制剂工艺中原料前处理、浸泡时间、煎煮加水量进行了考察：

【处方】

原工艺制备方法：按量称取以上十二味，茯苓粉碎成细粉；其余桂枝等十一味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩成相对密度为1.25～1.30(60℃)的稠膏，加入上述细粉，混匀，减压干燥。

1.提取工艺参数考察

1.1检测方法

照高效液相色谱法(《中国药典》2020年版通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速1ml/min；柱温30℃；检测波长246nm。

对照品溶液的制备精密称取木兰花碱、盐酸益母草碱、橙皮苷、盐酸小檗碱、6-姜辣素对照品适量，加甲醇制成木兰花碱每1ml含30μg的溶液、盐酸益母草碱每1ml含0.25mg、橙皮苷每1ml含0.40mg、盐酸小檗碱每1ml含40μg、6-姜辣素每1ml含70μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末(去包衣，研细)约2.0g，精密称定，精密加入甲醇溶液25ml，称定重量，超声30分钟，取出放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

测定法分别精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

1.2原料前处理考察

原工艺为饮片投料，优化工艺1将饮片粗破为1cm小块，制备方法同原工艺，将原工艺样品和优化样品按指纹图谱方法检测，结果如下表1。

表1

由实验数据可以得出，原料粗破后，木兰花碱、盐酸益母草碱、橙皮苷、6-姜辣素提取率无变化，盐酸小檗碱提取率升高，所以只需要粗破关黄柏即可。

1.3浸泡时间考察

分别考察浸泡45min、60min、75min，浸泡后按原工艺制备，将样品按照“1.1检测方法”部分记载的方法进行检测，结果如下表2。

表2

由实验数据可以得出，提取前增加浸泡后，木兰花碱、盐酸益母草碱、6-姜辣素提取率无变化，盐酸小檗碱、橙皮苷提取率升高，由不同浸泡时间数据可以得出，浸泡60min后，盐酸小檗碱、橙皮苷提取率基本无增加，所以选择浸泡60min。

1.4加水量考察

分别考察一煎10倍量，二煎8倍量(为原工艺)；一煎14倍量，二煎10倍量(记为优化工艺5)；一煎16倍量，二煎12倍量(记为优化工艺6)，结果如下表3。

表3

由实验数据可以得出，增加加水量后，5个成分提取率均升高，工艺优化5和工艺优化6基本无大差异，所以选择工艺优化5，一煎14倍量，二煎10倍量。

2.制剂工艺验证

处方：

药物制剂优化后制备方法：以上十二味，茯苓粉碎成细粉；关黄柏(粗破成1cm小块)，其余桂枝等十味为饮片，加14倍水浸泡60min，第一次煎煮2小时，第二次加10倍水煎煮1.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩成相对密度为1.25～1.30(60℃)的稠膏，加入上述细粉，混匀，减压干燥。

按上述处方及制备方法重复验证3批，结果如下表4：

表4

由3批数据可知，该制备方法稳定、可行。

3.优化后的药物制剂工艺

取茯苓粉碎成细粉，取129g，备用；

取盐黄柏饮片，粗破成1cm小块，取129g，取桂枝饮片、泽泻饮片、陈皮饮片、香加皮饮片、苍术饮片、姜皮饮片、大腹皮饮片各129g，椒目86g，加14倍量水浸泡60min，保持微沸提取2h，过滤，药渣加10倍量水，保持微沸提取1.5h，过滤，合并滤液，减压浓缩至1.25～1.30(60℃)的稠膏；

稠膏加入上述细粉，混匀，减压干燥，得361g。

膜性肾病治疗效果验证

以实施例4中制备的药物制剂作为施用药物，通过研究该组合物制剂对被动型海曼肾炎大鼠蛋白尿的影响，验证该组合物制剂在膜性肾病方向的应用。

1、动物及主要试剂

SPF级健康雄性SD大鼠40只，体重(180±20)g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司。

2、主要仪器

真空冷冻干燥机：宁波新芝生物科技股份有限公司LGJ-10；蛋白尿(24h)分光光度计：gohnson-gohnson巴西强生公司。

3、膜性肾病大鼠模型建立

实验动物:SD大鼠，雄性，体质量180～200g，被动式Heymann肾炎模型制作，适应性饲养观察1周后，按0.4ml/100g单次尾静脉注射兔抗大鼠Fx1A血清。10天后,收集各组大鼠24h尿液,用尿蛋白试纸测定大鼠尿蛋白阳性判定为造模成功进入下一步研究。

4、动物分组及给药

将40只清洁级雄性SD大鼠适应性喂养1周后，收集24h尿液，测24h尿蛋白定量，均在正常范围。然后随机分为4组，分别为正常对照组、模型组、低剂量组、高剂量组。

①正常对照组(Ctrl)：SD大鼠，予蒸馏水每日灌胃一次；

②肾炎模型组(PHN)：予蒸馏水每日灌胃一次；

③中剂量组(M)：予该组合物制剂9.45mg/kg每日灌胃一次；

④高剂量组(H)：予该组合物制剂28.35mg/kg每日灌胃一次；

每日灌胃一次，空白对照组每日用等量蒸馏水灌胃。每10天收集尿液标本，测量尿蛋白。于第50天灌胃后1小时麻醉并采集标本：10％水合氯醛麻醉，腹主动脉采血，留取双肾，左肾切片2mm厚，经固定、脱水后进行石蜡包埋和OCT包埋，石蜡切片厚3μm，冰冻切片厚10μm。右肾分装于冻存管，于-80℃冰箱保存，以备WB、PCR检测，注意取材过程无菌操作，WB、PCR要求无酶。

实验期间动物自由进食、饮水，给予普通鼠饲料喂养，室温23℃左右，相对湿度40％～50％。

5、组织学分析

肾皮质以4％多聚甲醛固定，包埋，3um切片，染色。

6、免疫组化法

采用非生物素二步法。3μm石蜡切片，脱蜡和水化，高压修复抗原，灭活内源性过氧化物酶，一抗4℃孵育过夜，复温并滴加二抗，DAB显色、苏木素复染，脱水、封片。

7、Western印迹检测蛋白表达

用RIPA组织裂解液提取蛋白。BCA蛋白定量分析试剂盒(美国Thermo Scientific)检测蛋白浓度。12％SDS-PAGE凝胶电泳分离，转膜，封闭，加入一抗4℃过夜，洗膜后加入二抗室温下孵育，洗膜后ECL试剂盒进行显影及图像分析。

8、ELISA检测

以碳酸酐酶试剂盒检测组织中碳酸酐酶水平，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书。

9、统计学方法

应用SPSS 16.0统计软件进行统计分析。实验数据用平均值(Mean)±标准误(S.E.M.)表示。多组间的比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，多组间的两两比较当总体方差齐时，选择Bonferroni法；当方差不齐时，选择Tamhane’sT2法。以P<0.05为差异有统计学意义。所有实验至少重复3次。

10、结果

10.1该组合物制剂于被动型海曼肾炎形成前给药大鼠蛋白尿的影响

本实施例通过对SD大鼠尾静脉注射抗Fx1A抗体制备被动型海曼肾炎模型来模拟人类膜性肾病的肾脏及免疫系统的异常。待注射完毕后立即按空白对照组、模型组、中剂量组、高剂量组予以灌胃给药。中剂量组及高剂量组予灌胃治疗，空白对照组与模型组不予灌胃。

如图1所示，高剂量组24小时蛋白尿显著低于模型组，而中剂量组则于第20天的24小时蛋白尿开始显著低于模型组。这表明该组合物制剂对于膜性肾病具有一定治疗作用(*与模型组相比，p<0.05)。

10.2该组合物制剂于被动型海曼肾炎形成后联合免疫抑制剂给药对大鼠蛋白尿的影响

本实施例待大鼠被动型海曼肾炎形成后再给药，具体给药时间为注射抗体后的第10天，用尿蛋白试纸测定大鼠尿蛋白阳性判定为造模成功。给药组(SYXZ)予实施例4中制备的药物制剂灌胃治疗，空白对照组(Ctrl)与模型组(PHN)不予灌胃。发明人发现第20天与第30天给药组的24小时尿蛋白定量与模型组相比未见显著差异。这可能表明，该组合物制剂在肾脏损伤形成后可能不易发挥其治疗作用。

10.3该组合物制剂对PHN大鼠血清指标影响

该组合物制剂能够显著升高PHN大鼠血清白蛋白，治疗50天后，与模型组相比，中剂量组可升高PHN大鼠血清白蛋白水平，差异有统计学意义(*P＜0.05)，高剂量组有升高血清白蛋白趋势，但无统计学差异，如图4。

该组合物制剂能够显著降低PHN大鼠血清总胆固醇，治疗50天后，与模型组相比，高剂量组可降低PHN大鼠血清总胆固醇水平，差异有统计学意义(*P＜0.05)，中剂量组有降低血清总胆固醇趋势，但无统计学差异，如图5。

该组合物制剂能够显著降低PHN大鼠血清甘油三酯，治疗50天后，与模型组相比，中剂量组与高剂量组均可降低PHN大鼠血清甘油三酯水平，且差异均有统计学意义(*P＜0.05)，如图6。

10.4该组合物制剂对PHN大鼠肾脏损伤的保护作用(放大倍数400X)

PHN大鼠表现出MN的典型病理特征:肾小球肥大，系膜细胞增生，基底膜增厚，部分小球硬化。与模型组比较，HE染色，PAS染色以及PASM染色，给药组大鼠肾小球损伤均有明显改善，如图7。

免疫组化结果显示，PHN大鼠肾小球补体C3沉积显著增加；与模型组比较，应用该药用组合物治疗后，PHN大鼠肾小球补体C3沉积减少，如图8。

10.5该组合物制剂对PHN大鼠肾小球足细胞的影响(放大倍数400X)

免疫荧光结果显示，较正常组相比，PHN大鼠肾小球Synaptopodin表达显著减弱；较模型组相比，应用该药用组合物治疗后，PHN大鼠肾小球Synaptopodin表达明显改善，如图9。

免疫组化结果显示，较正常组相比，PHN大鼠足细胞骨架蛋白Desmin表达显著增加；较模型组相比，应用该药用组合物制剂治疗后，PHN大鼠足细胞Desmin表达明显改善，如图10。

结论

被动型海曼肾炎是模拟人类特发性膜性肾病原位免疫复合物损伤肾小球所制备的模型。经上述实验验证该组合物制剂在不同给药时间降低24小时尿蛋白的作用不同，在肾脏损伤形成前给药可能发挥较好的治疗作用；该组合物制剂可以显著升高PHN大鼠血清白蛋白水平，降低总胆固醇以及甘油三酯水平，免疫组化以及免疫荧光结果均显示，该药用组合物能够减少补体沉积，保护足细胞而发挥肾脏保护作用。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种利水渗湿的药物制剂在制备治疗膜性肾病药物中的应用，其特征在于，所述药物制剂，以如下药物组合物作为原料，所述原料的重量分数为：桂枝125~135份、泽泻125~135份、陈皮125~135份、香加皮125~135份、苍术125~135份、茯苓125~135份、姜皮125~135份、大腹皮125~135份、关黄柏125~135份、椒目83~87份、冬瓜皮125~135份、益母草125~135份。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述原料的重量分数为：桂枝129份、泽泻129份、陈皮129份、香加皮129份、苍术129份、茯苓129份、姜皮129份、大腹皮129份、关黄柏129份、椒目86份、冬瓜皮129份、益母草129份；

或，所述原料的重量分数为：桂枝127份、泽泻127份、陈皮127份、香加皮127份、苍术127份、茯苓127份、姜皮127份、大腹皮127份、关黄柏127份、椒目85份、冬瓜皮127份、益母草127份；

或，所述原料的重量分数为：桂枝130份、泽泻130份、陈皮130份、香加皮130份、苍术130份、茯苓130份、姜皮130份、大腹皮130份、关黄柏130份、椒目87份、冬瓜皮130份、益母草130份。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物制剂的制备方法如下：将关黄柏粗破成小块，与除茯苓之外的十种药味饮片混合，加入药材体积的12~16倍水浸泡40~80min，随后加热保持微沸状态进行回流提取并过滤，回流时间为1~3h；向过滤后的药渣中加入药材体积8~12倍的水，保持微沸状态回流提取1~2h后过滤，合并滤液减压浓缩得到稠膏；将茯苓粉碎成细粉与上述稠膏混匀后干燥得到所述药物制剂。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述关黄柏破碎成尺寸为0.8~1.2cm的小块。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物制剂为口服液体或口服固体制剂；所述口服液体制剂为汤剂、混悬剂、糖浆剂、合剂或酊剂中的一种；所述口服固体制剂为膏剂、颗粒剂、丸剂、散剂、片剂、胶囊剂或滴剂中的一种；

所述药物制剂中还包括药学上可接受的载体，在口服固体制剂的情况下，所述载体包括润滑剂、粘合剂或崩解剂；在口服液体制剂的情况下，所述载体为溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、舒缓剂；所述载体还包括防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂或其他制剂添加剂中的一种。