CN115634234A - 一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶及制备与应用 - Google Patents
一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶及制备与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及医药产品的技术领域，特别是涉及一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶及制备与应用。包括透明质酸、氯己定、栀子苷、泊洛沙姆407、NaCl。本发明将氯己定、透明质酸、NaCl、栀子苷、泊洛沙姆407组合，经处方和工艺的筛选和优化成功设计出一种用于皮肤和黏膜创面治疗和修复的温敏型凝胶，透明质酸的使用使其具有优良的吸渗保湿、促进创面愈合的功效。本发明对大面积创伤，能以喷涂方式给药，30秒内即可形成原位凝胶薄膜，患者可方便地自行给药。对于小型、隐蔽性、有缝隙和褶皱部位的创口，可采用推注方式给药，其良好的流动性便于渗入，其良好的胶凝性便于附着和填充。
Description
技术领域
本发明涉及医药产品的技术领域，特别是涉及一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶及制备与应用。
背景技术
人体的皮肤和黏膜是维持人体内环境稳定和阻止微生物侵入的屏障，由于溃疡、创烧伤、褥疮及炎症等原因引起的皮肤及黏膜损伤，会引起机体一系列的问题，比如细菌感染、新陈代谢加剧、水分和蛋白质过度流失、内分泌及免疫系统功能失调等，严重的可能危及生命。
目前市场上用于皮肤及黏膜损伤修复的有敷料、软膏和凝胶。敷料固定时间久，但不能到达伤口较深的区域；软膏不适于黏膜使用，且透气性差、病人不适感强；已成型的凝胶不能渗入伤口中细小的缝隙且不易涂抹均匀。温敏水凝胶具有温度刺激性溶胶-凝胶转变行为，在室温下是溶液状态，可方便地以推注等方式施用于病变部位，因其良好的流动性可以渗入伤口深处及褶皱处，然后在体温的驱动下迅速形成凝胶薄膜，发挥保持伤口湿润、吸收分泌物、缓解疼痛并控制出血的作用，从而促进伤口快速愈合。
发明内容
为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种黏附性好、药物局部效应延长、胶凝时间短、黏度和强度适宜、生物相容性良好、制备工艺简单、患者依从性好且兼具抑菌和抗炎作用的用于皮肤和黏膜损伤后治疗和修复的温敏水凝胶及制备与应用。该温敏水凝胶对以大肠杆菌为代表的革兰氏阳性菌和以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阴性菌具有很强的抑菌作用，对黏膜溃疡具有显著的治疗和修复效果。该温敏水凝胶施用后可快速附着创面形成一层原位凝胶薄膜，为受损区域提供一层物理防护屏障，保障药物仅停留和作用于受损区域并以恒定速率释放，提高疗效，降低全身毒副作用，方便患者自行给药。该温敏水凝胶0.5％透明质酸的应用可增强创面内蛋白质积累，增加皮肤通透性，防止细菌入侵，其有效的保湿和透气能力有助于防止伤口感染，保护伤口，在促进创面愈合的同时，还具有抑菌抗炎、止血、镇痛等效果。该温敏水凝胶可用于小面积皮肤以及黏膜创伤和溃疡的治疗，如口腔溃疡、口腔黏膜炎等，也可用于大面积、不规则创伤的治疗，如烧伤、脓疱疮、褥疮、手足癣以及女性阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂等。
壳聚糖是最常用的温敏型凝胶基质，但为了使其具备适宜的凝胶理化性质比如胶凝温度、胶凝时间、黏度、强度和附着力等，需要对其进行化学改性，工艺复杂、研发成本高。泊洛沙姆是合成的非离子三嵌段共聚物(PEO-PPO-PEO)，其中泊洛沙姆407在体温下具有良好的溶胶-凝胶转变行为。文献表明泊洛沙姆407形成凝胶的浓度范围为15～30％。我们的前期研究发现，泊洛沙姆407浓度越小，形成的凝胶黏度、机械强度越低。但是，泊洛沙姆407浓度高时，一方面没有文献证明高浓度的泊洛沙姆407也如低浓度的一样没有细胞毒性；另一方面形成的凝胶降解慢，当用于治疗黏膜溃疡时，破碎的凝胶不易去除。因此，需加入一些附加剂调节其性能以理想地施用于皮肤和黏膜。
透明质酸具有生物相容性、生物降解性和非免疫原性，可以通过抑制环氧化酶改变前列腺素的生物合成从而起到抗炎作用；也可以通过调节炎症细胞募集、炎症细胞因子的释放和细胞迁移，起到缓解炎症、帮助组织损伤后愈合、启动修复的作用。国内已有多家透明质酸医用敷料上市。由于泊洛沙姆407与透明质酸可形成分子间氢键，透明质酸的加入可显著提高泊洛沙姆407的机械强度、黏度和附着力。为此，本发明将以泊洛沙姆407-透明质酸为载体开发一种具有抑菌、抗炎作用的温敏水凝胶。
氯己定是一种双胍类防腐剂，临床使用成熟，被国内外列为抑菌剂金标准。它对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广泛的杀菌活性，能有效对抗一些真菌和酵母，包括念珠菌，以及一些病毒，如艾滋病毒和乙肝病毒。
栀子苷是从栀子的干燥成熟果实中提取的天然产物，为环烯醚萜苷类化合物，具有良好的抗炎作用。与广泛使用的糖皮质激素、抗生素等抗炎药物相比毒副作用小、安全系数高，在治疗慢性炎症性疾病中具有明显优势。
为此本发明选择氯己定为抑菌剂、栀子苷为抗炎剂进行温敏水凝胶的研究。实验发现，栀子苷与载体间无配伍禁忌，但是氯己定一旦与透明质酸接触由于成盐反应立刻形成大量絮状物。另一方面经透明质酸修饰的泊洛沙姆407凝胶黏度和强度太大，不易在皮肤和黏膜处附着。为了克服上述问题，本发明进行了制备方法、附加物的一系列筛选和优化，成功地制备出一种具有优良抑菌、抗炎活性，附着力好，理化性质适宜的温敏水凝胶。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，包括下列原料组分，透明质酸、氯己定、栀子苷、泊洛沙姆407、NaCl。
作为上述温敏水凝胶技术方案的进一步改进，所述透明质酸为0.1～0.8％、氯己定为0.05～0.1％、栀子苷为0.5％、泊洛沙姆407为14.0～15.0％、NaCl为0.05～0.2％。
作为上述温敏水凝胶技术方案的进一步改进，所述透明质酸为0.5％、氯己定为0.1％、栀子苷为0.5％、泊洛沙姆407为15.0％、NaCl为0.1～0.2％。
本发明进一步提供了一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，是由下列重量百分比的原料组分组成的，透明质酸为0.1～0.8％、氯己定为0.05～0.1％、栀子苷为0.5％、泊洛沙姆407为14.0～15.0％、NaCl为0.05～0.2％，余量为水。
作为前述温敏水凝胶技术方案的进一步改进，所述透明质酸为0.5％、氯己定为0.1％、栀子苷为0.5％、泊洛沙姆407为15.0％、NaCl为0.1～0.2％。
本发明进一步提供了一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶的制备方法，包括如下步骤：
步骤1)：将氯己定加入水中充分溶解后加入泊洛沙姆407，静置，放置于4℃环境下过夜，使其充分溶胀溶解；
步骤2)：将NaCl加入水中溶解后，在其表面均匀撒入透明质酸，静置，使其在室温下充分溶胀溶解；
步骤3)：将步骤1)和步骤2)所得溶液混合，搅拌均匀后加入栀子苷，充分搅拌溶解后即得温敏水凝胶。
作为本发明制备方法技术方案的进一步改进，所述氯己定为醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、盐酸氯己定中的一种。
本发明还提供了一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶的制备方法制备得到的温敏水凝胶。
本发明进一步提供了所述温敏水凝胶在制备抑菌抗炎药物中的应用。
本发明进一步提供了所述温敏水凝胶在制备治疗和修复皮肤、黏膜损伤药物中的应用。
本发明的有益效果为：
1、本发明将氯己定、透明质酸、NaCl、栀子苷、泊洛沙姆407组合，经处方和工艺的筛选和优化成功设计出一种用于皮肤和黏膜创面治疗和修复的温敏型凝胶，0.5％透明质酸的使用使其具有优良的吸渗保湿、促进创面愈合的功效。
2、将氯己定先包载于泊洛沙姆407中，再与透明质酸混合，避免了透明质酸与氯己定的直接接触，使金牌抑菌剂氯己定与优良皮肤黏膜修复材料透明质酸成功配伍。
3、在使用能形成温敏凝胶的浓度范围内的透明质酸修饰泊洛沙姆407后，由于分子间氢键作用致使凝胶的黏度和强度显著增大，不利于成膜和在伤口的附着。本发明利用中性电解质可屏障电黏效应的原理，加入极少量NaCl以降低其黏度和强度，并筛选出使凝胶能够形成且适宜推注使用的最佳浓度。
4、NaCl与氯己定同时溶于泊洛沙姆407溶液中时由于盐析效应产生沉淀。本发明经筛选将NaCl溶解于透明质酸水溶液中再与含氯己定的泊洛沙姆407溶液混合，成功制备出外观性状适宜的温敏水凝胶，且该温敏水凝胶的稳定性较好。见附图1。
5、以醋酸致wistar大鼠口腔黏膜溃疡为模型评价该品对黏膜的修复作用，显示出显著的治疗效果。如附图4所示。
6、本发明对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌有良好的抑制作用，且显著优于市售含氯己定的同类制剂。如附图3所示。
7、本发明对大面积创伤，能以喷涂方式给药，30秒内即可形成原位凝胶薄膜，患者可方便地自行给药，避免了药物浪费、病人不适，降低了全身毒副作用，提高了患者依从性。
8.对于小型、隐蔽性、有缝隙和褶皱部位的创口，如牙槽、舌下等，可采用推注方式给药，其良好的流动性便于渗入，其良好的胶凝性便于附着和填充。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1实施例7经过放置18个月之后的实物图。图中A为室温下呈液态，B为体温下呈凝胶态。从图中可以看出：A图中温敏水凝胶在室温环境下为液体状态，液面随试管的倾斜而倾斜，流动性较好，便于以喷涂或推注方式给药；B图中温敏水凝胶在体温条件下变为凝胶，半固体状态，试管倾斜时，其物面未发生倾斜，说明该温敏水凝胶在皮肤和黏膜表面能够由液体形成凝胶，具有良好的胶凝性，便于附着和填充。由此可知，本发明的温敏水凝胶在放置18个月之后外观依然澄清透明，并表现出体温下的溶胶凝胶相转变行为，稳定性良好。
图2实施例的体外累积溶蚀率曲线(A)和栀子苷的累积释放率曲线(B)。
图3实施例对大肠杆菌(A)、金黄色葡萄球菌(B)、白色念珠菌(C)、绿脓杆菌(D)、肺炎链球菌(E)、化脓性链球菌(F)的抑菌效果评价。
图4实施例对大鼠口腔黏膜溃疡的恢复图。
图5实施例对大鼠口腔黏膜溃疡面积恢复百分率图。*表示与阴性对照组相比，p<0.05,****表示p<0.0001。
图6实施例7对大鼠舌黏膜的生物相容性结果。
图7为直接将氯己定与泊洛沙姆407、透明质酸混合接触产生白色絮状沉淀的实物图(A)和NaCl与氯己定同时溶于泊洛沙姆407溶液中由于盐析效应产生沉淀(B)。
具体实施方式
下面对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，包括下列原料组分，透明质酸、氯己定、栀子苷、泊洛沙姆407、NaCl。其中所述透明质酸为0.1～0.8％、氯己定为0.05～0.1％、栀子苷为0.5％、泊洛沙姆407为14.0～15.0％、NaCl为0.05～0.2％。各原料组分均为重量百分比。在本发明全文上下中，如无特殊说明，各原料组分的百分比均为重量百分比。
本发明还提供了另外一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶的具体实施例，所述透明质酸为0.5％、氯己定为0.1％、栀子苷为0.5％、泊洛沙姆407为15.0％、NaCl为0.1～0.2％。
在本发明进一步提供了一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，是由下列重量百分比的原料组分组成的，透明质酸为0.1～0.8％、氯己定为0.05～0.1％、栀子苷为0.5％、泊洛沙姆407为14.0～15.0％、NaCl为0.05～0.2％，余量为水。
本发明更进一步提供了另外一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶的具体实施例，所述透明质酸为0.5％、氯己定为0.1％、栀子苷为0.5％、泊洛沙姆407为15.0％、NaCl为0.1～0.2％。
本发明还提供了一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶的制备方法，包括如下步骤：
步骤1)：将氯己定加入水中充分溶解后加入泊洛沙姆407，静置，放置于4℃环境下过夜，使其充分溶胀溶解；
步骤2)：将NaCl加入水中溶解后，在其表面均匀撒入透明质酸，静置，使其在室温下充分溶胀溶解；
步骤3)：将步骤1)和步骤2)所得溶液混合，搅拌均匀后加入栀子苷，充分搅拌溶解后即得温敏水凝胶。
本发明提供的一个具体实施例中，所述氯己定为醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、盐酸氯己定中的一种。
本发明提供了所述温敏水凝胶在制备抑菌抗炎药物中的应用。
本发明还提供了所述温敏水凝胶在制备治疗和修复皮肤、黏膜损伤药物中的应用。
下面结合具体实施例来对本发明的技术方案进行详细的说明。
实验例1
泊洛沙姆407温敏凝胶和透明质酸修饰的泊洛沙姆407温敏凝胶的制备和表征，处方和表征结果见表1。
制备方法：
采用冷溶法按表1处方制备。
泊洛沙姆407温敏凝胶的制备：按表1所示浓度制备100g泊洛沙姆407温敏凝胶，其方法为按处方浓度称取相应量的泊洛沙姆407和去离子水，置于100mL烧杯中，然后放置于4℃冰箱充分溶胀溶解后，搅拌即得。
透明质酸修饰的泊洛沙姆407温敏凝胶的制备：按表1所示浓度制备100g透明质酸修饰的泊洛沙姆407温敏凝胶，其方法为按处方称取相应量的泊洛沙姆407、透明质酸和去离子水，先将透明质酸在100mL烧杯中用去离子水充分溶胀溶解后再加入泊洛沙姆407，放置于4℃冰箱充分溶解，搅拌即得。
表征方法：
(1)胶凝温度的测定：采用试管翻转法。在带刻度试管中装入温敏凝胶溶液2mL，于恒温水浴锅中插入精度为0.1℃的精密温度计。温度计的水银球完全浸没在水面以下，并使凝胶液面低于水浴液面2cm。设定水浴锅初始温度为25℃，升温速度为0.5℃·min-1。每升温0.5℃拿出试管进行翻转，观察胶凝情况，直至溶液凝固瞬间即在倒置试管后30s内没有检查到流动时，读下温度计刻度数值，此温度即为胶凝温度，每个样品平行测定3次，结果取平均值。
(2)胶凝时间的测定：取温敏凝胶2mL，置于10mL试管中，先将样品预热至25℃，再置于37℃恒温水浴中，立即用秒表计时，当样品由自由流动的液体变为不可流动的半固体时所需时间，即为胶凝时间。样品平行测定三次取平均值。
(3)黏度的测定：取100mL温敏凝胶溶液置于干净透明的烧杯中，放入37℃恒温水浴锅中胶凝半小时使凝胶完全胶凝，一直保持装有凝胶的烧杯处在37℃的恒温水浴锅中，用Brookfield旋转流变仪以64号转子和1.0rpm的转速测定黏度，平行测定三次取平均值。
(4)凝胶强度的测量：凝胶强度，即凝胶在生理温度下的黏度，本发明用70g重量的砝码在制备的凝胶中下沉1cm所需的时间(s)对凝胶强度进行定量。将30g的凝胶置于50mL量筒中，并在37℃的恒温器中胶凝。将砝码渗透到凝胶中，记录砝码下沉1cm所需的时间。样品平行测定三次取平均值。
表1透明质酸修饰的泊洛沙姆407溶液的理化性质表征
注：“-”表示形不成凝胶，“600+”表示黏度值超过测量范围，“900+”表示强度值超过900s。
结果：
实验表明，当泊洛沙姆407浓度大于14％时可形成温敏凝胶，为了降低泊洛沙姆407用量，避免因浓度提高可能产生的细胞毒性，选择泊洛沙姆407浓度在14～15％范围内进行试验。由表1可知：
(1)随泊洛沙姆407浓度的增大，胶凝温度和胶凝时间逐渐降低，形成凝胶的黏度和强度逐渐增大。
(2)当透明质酸浓度小于0.5％时，若泊洛沙姆407浓度低于14.2％则不能形成凝胶；当透明质酸浓度大于0.5％时，透明质酸/泊洛沙姆407溶液的黏度太大，不易推注。为此选择透明质酸的浓度为0.5％，泊洛沙姆407浓度进一步限定在14.2～15％之间。
(3)0.5％透明质酸修饰泊洛沙姆407后形成凝胶的胶凝温度和胶凝时间较未修饰的凝胶有所减小，但黏度和强度急剧增大，超过测量范围。
实验例2
为了降低透明质酸修饰的泊洛沙姆407温敏凝胶的强度和黏度，选择NaCl屏障部分电黏效应，NaCl调节的透明质酸/泊洛沙姆407温敏凝胶的制备方法如下，处方如表2所示。
制备方法：
按照表2的处方配制透明质酸浓度为0.5％、NaCl浓度在0.05-0.2％之间、泊洛沙姆407浓度在14-15％之间的系列溶液各100g。按处方称取相应量的泊洛沙姆407、透明质酸和去离子水，先将透明质酸在100mL烧杯中用去离子水充分溶胀溶解后再加入泊洛沙姆407，放置于4℃冰箱过夜，使之充分溶胀溶解后搅拌均匀，然后在其中加入处方量的NaCl，搅拌均匀即得。
表征方法：同实验例1，结果如表2所示。
结果：
随着NaCl浓度增大，能形成凝胶所需的泊洛沙姆407浓度逐渐增大。
在能形成凝胶的处方中，随NaCl浓度增大，胶凝温度略有增大，最高29.8℃，适合体温下使用；胶凝时间也逐渐增大，最高209.53s，不大于4min；而凝胶的黏度和强度则显著降低。可见，NaCl能够有效调节透明质酸修饰的泊洛沙姆407温敏凝胶的黏度和强度，使其易于在皮肤和黏膜附着。
(3)为了能形成温敏凝胶，且形成的凝胶具有适宜的理化性质，提高用药舒适度和患者依从性，选择NaCl用量为0.15-0.2％，泊洛沙姆407用量为14.8-15.0％。
表2不同浓度NaCl对泊洛沙姆407/透明质酸复合水凝胶参数的影响
注：“-”表示溶液不具有温敏性，“900+”表示强度值超过900s。
实施例1-10
含透明质酸/氯己定/栀子苷的泊洛沙姆407温敏水凝胶
按表3中处方分别制备实施例1-10的温敏水凝胶溶液100g。
(1)按处方组成分别精密称定泊洛沙姆407、氯己定、栀子苷、NaCl和透明质酸。
(2)按处方组成称定去离子水，按大约1:1比例分置于两个100mL烧杯中，记作烧杯1和烧杯2。
(3)将称定的氯己定加入烧杯1中，搅拌直至完全溶解后，加入称定的泊洛沙姆407，然后放置于4℃冰箱冷藏过夜使其慢慢充分溶胀并溶解得到澄清透明的溶液。
(4)实施例1-5中，将称定的透明质酸粉末均匀撒在烧杯2的去离子水液面上，室温下溶胀溶解直至得到澄清透明的溶液。实施例6-10中，先将称定的NaCl在烧杯2的去离子水中完全溶解，然后将称定的透明质酸粉末均匀撒在其液面上，室温下溶胀溶解直至得到澄清透明的溶液。
(5)将烧杯1和烧杯2中的两溶液混合，搅拌均匀后加入称定的栀子苷，搅拌待其充分溶解后，即得澄清透明、无团块、分散均匀的含透明质酸/氯己定/栀子苷的泊洛沙姆407温敏水凝胶溶液。
表3实施例1-10的处方组成
注：表中“-”表示无该成分，相应的制备方法中省略该组分的加入步骤。
评价例1
实施例1-7的体外溶蚀与药物释放试验
实验方法：采用无膜溶出法测定凝胶溶蚀率及药物释放度。
(1)溶蚀率测定方法取7支10mL的试管分别编号为管1，2，3，4，5，6，7，然后分别称重，质量记作Wi-0，其中i对应于试管的编号。分别取1mL实施例1-7的凝胶溶液放入对应编号的试管中后，迅速称重，质量记作Wi-1，其中i也是对应于试管的编号。然后将7支试管置于37℃的恒温水浴锅中0.5h，使其胶凝完全后，沿着试管壁逐个轻轻加入预热至相同温度的pH 6.68的磷酸盐缓冲液3mL，加入过程要慢到保持凝胶液面不受损。然后将7支试管放入37℃，50r/min的恒温水浴振荡器中振荡，分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12、13h倾倒出上层溶液，用滤纸吸干试管表面释放介质后，迅速精密称定，质量记作Wi-j，其中i还是对应于试管的编号，j对应于测定时间。称量完后在每个试管中立即补充等温的体积为3mL的磷酸盐缓冲液，继续恒温振荡，反复以上操作直到13h。按照公式(1)计算各个测试点的累积溶蚀率(Rc％)。每个实施例重复进行3次，结果取其平均值，溶蚀曲线见图2-A。
(2)药物释放度测定方法在测定体外溶蚀率的同时，对实施例4、5、6、7进行药物释放的研究。精确吸取实施例4-7每个时间点倾出的释放介质1mL，置于5mL EP管中，加pH6.68磷酸盐缓冲液1mL，超声20min，采用HPLC法测定样品中栀子苷的浓度并按照公式2和3计算药物累积释放率。每个样品平行测3次，结果取其平均值，累积释放曲线见图2-B。
式中，n为取样时间点，Xn为n时刻的药物释药量，Cn为n时刻测得的药物浓度，Vn为取样体积(1mL)，i为n时刻前的任一取样点。
式中，F为累积释放率，M为1mL凝胶中含药物的量，单位为mg。
结果：
从图2-A可以看出，实施例1-5中随着泊洛沙姆407的浓度从14.2％增大到15.0％，凝胶溶蚀速率逐渐降低。原因可能是，随着泊洛沙姆407浓度的增加，凝胶交联的三维结构内部胶束数量和尺寸增加，使水通道数量和尺寸下降，导致凝胶溶蚀率降低。
实施例6、7分别是实施例4、5中加了0.15％和0.2％的NaCl，可见，NaCl的加入使其溶蚀率显著提高。
(3)文献表明，凝胶溶蚀越快，药物释放越快。对比图2-A和图2-B，可以得出NaCl的加入提高凝胶溶蚀速率的同时，提高了栀子苷从凝胶中释放的速率，与文献结果一致。原因是NaCl的高亲水性很容易从凝胶水通道扩散出来，析出的钠盐会在凝胶中留下孔隙，外部液体更容易进入凝胶基质，从而增加凝胶的扩散和溶蚀速度。
(4)对实施例7的药物释放数据拟合发现栀子苷的释放符合零级动力学规律，说明药物以恒定的速率持续释放，避免任何初始的爆发性释放(峰谷现象)，有利于减少毒副作用，提高药物疗效。
评价例2
实施例7、8的抑菌效果考察
实验方法：以去离子水为阴性对照，市售氯己定(0.05-0.1％)漱口水为阳性对照，考察实施例7、8对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌的抑菌效果。
分别从大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌的LB琼脂平板上收集1个菌落，分别置于含有LB液体基15mL的培养管中。然后将培养管放入37℃、200rpm的培养箱中培养12h。将装有LB液体培养基150mL的摇瓶在120℃条件下灭菌40min，冷却。吸取液体培养管中的菌液2mL到摇瓶中，同时加入待测样品3mL，置于37℃、200rpm的培养箱中。每隔1h取样1mL，摇匀，用200μL移液枪滴到96孔板中，平行滴三个孔，用酶标仪测定600nm的光密度值(OD)，结果取三次的平均值。用OD值对细菌浓度定量，0.1的OD值相当于细菌浓度为108个/cm3。连续取样11小时，以时间t为横坐标，OD为纵坐标绘制细菌生长曲线，结果如图3所示。
结果分析：
(1)从图3A-F可知，对照组的OD值在测量时间内均显著高于阳性对照组和实施例组，说明阳性对照组和实施例组对6种细菌具有不同程度的抑制作用。
(2)图3A-D中阳性对照组的OD值显著高于实施例组，说明实施例7、8对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌的抑菌效果显著优于市售氯己定漱口水。
(3)图3A-F中实施例7在0-11h内OD值几乎不变，维持很小的水平，说明实施例7对6种菌均有很好的抑制作用。实施例8仅在图3D中OD值随时间增加，说明氯己定对绿脓杆菌的抑菌效果受浓度影响，浓度低时效果差；但增加的程度显著低于阳性对照，说明其仍具有优于市售漱口水的抑制绿脓杆菌生长的水平。
(4)图3E-F中，实施例7、8和阳性对照组的细菌生长率曲线几乎重合，OD值很低且几乎不随时间变化，说明低浓度的氯己定凝胶(实施例8)和市售漱口水对肺炎链球菌、化脓性链球菌的抑菌效果与高浓度的实施例7一致，效果非常好。
评价例3
实施例7、9、10对大鼠口腔黏膜溃疡的恢复效果
方法：将健康雄性Wistar白化大鼠15只随机分为正常对照组(Normal)、阴性对照组(NegCon)、实施例7组、实施例9组和实施例10组，每组3只。正常对照组大鼠不作口腔黏膜溃疡诱导，不作任何处理/给药，其他组大鼠给予口腔黏膜溃疡诱导。阴性对照组大鼠不给予治疗，其他组分别给予对应的实施例温敏凝胶0.1g/次。大鼠腹腔注射水合氯醛(每100克大鼠给予浓度为10％的水合氯醛0.4mL)麻醉，以使口腔黏膜溃疡诱导程序顺利进行。用长和宽为5mm的滤纸蘸取20μL浓度为70％醋酸，将其放置在大鼠舌头背面正中间持续2min，用以诱导口腔黏膜溃疡。在溃疡形成的第1天，测定最大溃疡面积(溃疡面积以100％计)。从致疡第1天开始局部施药，1次/d，连续给药7天。每隔一天进行拍照记录，采用
计算机软件通过对溃疡边缘进行循环测量溃疡面积，用公式4计算大鼠溃疡面积恢复率，结果如图4和图5。
结果分析：
从图4和图5可知，治疗一周后，各组溃疡均有明显好转。
实施例10溃疡面积恢复率约76％，较实施例9组高，表明透明质酸对损伤修复具有促进作用。
实施例7治疗的黏膜外观最接近正常(图4)，溃疡面积恢复率最高，为86％左右，说明抑菌剂氯己定和抗炎剂栀子苷在口腔黏膜溃疡恢复中发挥了作用。
评价例4
实施例7的生物相容性评价
实验方法：取健康雄性Wistar白化大鼠6只，分为正常对照组和试验组，每组各3只。正常对照组不做任何处理。试验组每天在大鼠舌头背面正中间给予0.1g/次实施例7的凝胶，连续给药7天。将大鼠舌头样本放入多聚甲醛溶液中保存，用于HE染色，结果如图6所示。
结果分析：图6-A和图6-B分别为正常舌黏膜组织图像和给予实施例7凝胶7天后的舌黏膜组织组织学图像，两者非常相似，均显示出健康的骨骼肌纤维，没有明显的炎症、坏死，说明实施例7水凝胶组具有高度的生物相容性。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，其特征在于，包括下列原料组分，透明质酸、氯己定、栀子苷、泊洛沙姆407、NaCl。
2.根据权利要求1所述的一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，其特征在于，所述透明质酸为0.1～0.8%、氯己定为0.05～0.1%、栀子苷为0.5%、泊洛沙姆407为14.0～15.0%、NaCl为0.05～0.2%。
3.根据权利要求2所述的一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，其特征在于，所述透明质酸为0.5%、氯己定为0.1%、栀子苷为0.5%、泊洛沙姆407为15.0%、NaCl为0.1～0.2%。
4.一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，其特征在于，是由下列重量百分比的原料组分组成的，透明质酸为0.1～0.8%、氯己定为0.05～0.1%、栀子苷为0.5%、泊洛沙姆407为14.0～15.0%、NaCl为0.05～0.2%，余量为水。
5.根据权利要求4所述的一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶，其特征在于，所述透明质酸为0.5%、氯己定为0.1%、栀子苷为0.5%、泊洛沙姆407为15.0%、NaCl为0.1～0.2%。
6.一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1）：将氯己定加入水中充分溶解后加入泊洛沙姆407，静置，放置于4℃环境下过夜，使其充分溶胀溶解；
步骤2）：将NaCl加入水中溶解后，在其表面均匀撒入透明质酸，静置，使其在室温下充分溶胀溶解；
步骤3）：将步骤1）和步骤2）所得溶液混合，搅拌均匀后加入栀子苷，充分搅拌溶解后即得温敏水凝胶。
7.根据权利要求6所述的一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，所述氯己定为醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、盐酸氯己定中的一种。
8.一种权利要求6或7所述一种含氯己定/枙子苷/透明质酸的泊洛沙姆407抑菌抗炎温敏水凝胶的制备方法制备得到的温敏水凝胶。
9.权利要求8所述温敏水凝胶在制备抑菌抗炎药物中的应用。
10.权利要求8所述温敏水凝胶在制备治疗和修复皮肤、黏膜损伤药物中的应用。
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