CN115595352A - 提高赤霉菌中赤霉素ga3含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物发酵领域，公开了一种提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法。该方法包括：将赤霉菌接入到含有调节因子的培养基中进行发酵；所述调节因子选自氯贝丁酯、芳氧苯氧丙酸酯、烯草酮和环己二酮中的至少一种。该方法能够有效提高赤霉菌中赤霉素GA3的含量，进而提高赤霉素GA3的产量。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵，具体涉及一种提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法。
背景技术
赤霉素GA3是一种二萜类羧酸，属于赤霉素家族，是一种天然的植物生长激素。GA3是目前最畅销和最重要的植物生长调节剂（PGR）之一，广泛应用于蔬菜、水果、粮食等植物的打破休眠、保花保果、缓解逆境胁迫中。在农林业、酿造业，特别是粮食生产等领域创造了巨大的经济效益与社会效益。GA3的主要生产方法有三种，分别为植物提取、化学合成和微生物发酵。虽然多数植物都可以合成赤霉素，但是提取率很低，远远不能满足生产需求。化学合成法存在成本高、效率低、污染大等缺点。因此，GA3的大规模工业化生产主要通过微生物发酵法进行。而微生物发酵中的GA3产量的研究大多仍集中在诱变筛选高产菌株、优化培养基等方面，但是，诱变筛选所花费的时间较长，难以掌握诱导突变的方向，突变体难以集中多种理想性状，现有技术中发酵调控只能有限地提高赤霉素GA3的产量。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的诱变筛选花费时间长、诱变方向难以把握以及发酵调控GA3产量有待提高的问题，提供一种提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法，该方法能够有效提高赤霉菌中赤霉素GA3的含量，进而提高赤霉素GA3的产量。
为了实现上述目的，本发明提供一种提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法，该方法包括：将赤霉菌接入到含有调节因子的培养基中进行发酵；
所述调节因子选自氯贝丁酯、芳氧苯氧丙酸酯、烯草酮和环己二酮中的至少一种。
优选地，所述芳氧苯氧丙酸酯选自噁唑酰草胺、氟吡甲禾灵、吡氟禾草灵、噻唑禾草灵、噁唑禾草灵、炔草酯、和草灵、氰氟草酯、喔草酯和异恶草醚中的至少一种。
优选地，所述调节因子为氯贝丁酯和/或烯草酮。
进一步优选地，所述调节因子为氯贝丁酯和烯草酮。
更优选地，所述氯贝丁酯和所述烯草酮的摩尔比为1:0.5-2。
优选地，相对于1L的所述培养基，所述调节因子的添加量为5-60μmol。
优选地，所述培养基中还含有辅助因子，所述辅助因子为泛醇和/或黄酮醇。
更优选地，所述辅助因子为泛醇和黄酮醇，所述泛醇和所述黄酮醇的摩尔比为1:1-5。
优选地，在所述培养基中，所述辅助因子与所述调节因子的摩尔比为1:1-2。
优选地，所述发酵包括：将所述赤霉菌接种至种子培养基中进行种子培养后得到种子液，将所述种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，其中，所述调节因子和所述辅助因子添加在所述种子培养基和/或发酵培养基中。
优选地，所述种子培养基含有：3-7质量%碳源、2.3-4质量%氮源、0.08-0.16质量%KH2PO4和0.05-0.15质量% MgSO4∙7H2O；
所述发酵培养基含有：8-12质量%碳源、2.5-4质量%氮源、0.08-0.12质量% MgSO4∙7H2O和0.15-0.3质量% KH2PO4。
通过上述技术方案，本发明的有益效果为：
（1）通过在赤霉菌的培养基中添加调节因子，并将调节因子限定为选自氯贝丁酯、芳氧苯氧丙酸酯、烯草酮和环己二酮中的至少一种，能够有效促进赤霉菌在发酵过程中将吸收的营养成分转化为赤霉素GA3，进而提高赤霉素GA3的产量。
（2）通过在培养基中添加作为辅助因子的泛醇和/或黄酮醇，能够与调节因子相互作用，进一步促进赤霉菌在发酵过程中将吸收的营养成分转化为赤霉素GA3，进而提高赤霉素GA3的产量。
附图说明
图1是GA3浓度和其对应的峰面积之间的标准曲线。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
如前所述，本发明提供一种提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法，该方法包括：将赤霉菌接入到含有调节因子的培养基中进行发酵；所述调节因子选自氯贝丁酯、芳氧苯氧丙酸酯、烯草酮和环己二酮中的至少一种。
本发明的发明人在研究过程中发现，在赤霉菌的发酵过程中加入调节因子，并将调节因子限制为选自氯贝丁酯、芳氧苯氧丙酸酯、烯草酮和环己二酮中的至少一种，能够有效促进赤霉菌在发酵过程中将吸收的营养成分转化为赤霉素GA3，进而提高赤霉菌中赤霉素GA3含量，从而提高赤霉素GA3的产量。
所述芳氧苯氧丙酸酯可以为任意一种芳氧苯氧基丙酸酯类化合物。作为本发明的一个具体实施方式，所述芳氧苯氧丙酸酯选自噁唑酰草胺、氟吡甲禾灵、吡氟禾草灵、噻唑禾草灵、噁唑禾草灵、炔草酯、和草灵、氰氟草酯、喔草酯和异恶草醚中的至少一种。进一步优选地，所述芳氧苯氧丙酸酯选自噁唑禾草灵、炔草酯和异恶草醚中的至少一种。
为了能够进一步提高赤霉菌中赤霉素GA3的含量，优选地，所述调节因子为氯贝丁酯和/或烯草酮。从更进一步提高赤霉菌中赤霉素GA3的含量来考虑，进一步优选地，所述调节因子为氯贝丁酯和烯草酮。更优选地，所述氯贝丁酯和所述烯草酮的摩尔比为1:0.5-2，具体可以为1:0.5、1:1、1:1.5、1:2，或者上述任意两个数值所构成的范围中的任意值。
在本发明中，所述调节因子的加入量不做限定，可以是操作人员根据实际情况确定。作为本发明的一个优选实施方式，相对于1L的所述培养基，所述调节因子的添加量为5-60μmol。具体地，相对于1L的所述培养基，所述调节因子的添加量具体可以为5μmol、10μmol、15μmol、20μmol、25μmol、30μmol、35μmol、40μmol、45μmol、50μmol、55μmol、60μmol或上述任意两个数值所构成的范围中的任意值。进一步优选地，相对于1L的所述培养基，所述调节因子的添加量为20-40μmol。
优选地，所述培养基中还含有辅助因子，所述辅助因子为泛醇和/或黄酮醇。发明人研究过程中发现，在培养基中加入泛醇和/或黄酮醇，能够促进调节因子对赤霉菌的作用效果，进一步促进赤霉菌在发酵过程中将吸收的营养成分转化为赤霉素GA3，进而提高赤霉素GA3的产量。从能够更进一步提高赤霉素GA3的产量来考虑，优选地，所述辅助因子为泛醇和黄酮醇。所述泛醇和所述黄酮醇的质量比可以是研究人员根据实际情况确定，示例性地，所述泛醇和所述黄酮醇的摩尔比为1:1-20。作为本发明的一个优选实施方式，所述泛醇和所述黄酮醇的摩尔比为1:1-5，具体可以为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5或上述任意两个数值所构成的范围中的任意值。
所述辅助因子的添加量可以是实验人员根据实际情况确定。为了能够进一步提高辅助因子和调节因子的协同效果，进而提高赤霉素GA3的产量，优选地，在所述培养基中，所述辅助因子和所述调节因子的摩尔比为1:1-2。具体可以为1:1、1:1.2、1:1.4、1:1.6、1:1.8、1:2或上述任意两个数值所构成的范围中的任意值。
作为本发明的一个具体实施方式，所述发酵包括：将所述赤霉菌接种至种子培养基中进行种子培养后得到种子液，将所述种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，其中，所述调节因子和所述辅助因子添加在种子培养基和/或发酵培养基中。具体地，调节因子和辅助因子可以都添加在种子培养基中，也可以都添加在发酵培养基中，还可以都添加在种子培养基和发酵培养基中。当只添加调节因子的时候，调节因子可以添加在种子培养基中，也可以添加在发酵培养基中，还可以添加在种子培养基和发酵培养基中。从更进一步提高赤霉素GA3的产量来考虑，所述调节因子添加在种子培养基和发酵培养基中，所述辅助因子添加在种子培养基和发酵培养基中。
所述种子培养基和所述发酵培养基中的碳源、氮源、金属离子、盐、微量元素等可以是任意能够用于生物发酵的碳源、氮源、金属离子、盐、微量元素等。为了能够进一步提高赤霉菌中赤霉素GA3的含量，优选地，所述种子培养基含有：3-7质量%碳源、2.3-4质量%氮源、0.08-0.16质量% KH2PO4和0.05-0.15质量% MgSO4∙7H2O，余量为水；所述发酵培养基含有：8-12质量%碳源、2.5-4质量%氮源、0.08-0.12质量% MgSO4∙7H2O和0.15-0.3质量%KH2PO4，余量为水。其中，种子培养基的接种量一般为0.5-2体积%，若以甘油管保藏的微生物菌种进行接种，则每个甘油管内的菌种接种至100mL的种子培养基中。种子液的接种量一般为0.5-10体积%。
根据本发明，所述碳源选自淀粉液化液、糊精、饴糖、麦芽糖和葡萄糖中的至少一种；所述氮源选自黄豆饼粉、花生饼粉、玉米蛋白粉，大米蛋白粉，(NH4)2SO4、NH4COOH、NaNO3和KNO3中的至少一种。作为本发明的一个具体实施方式，所述碳源为葡萄糖和糊精、或者是液化淀粉液、或者是饴糖，所述氮源为黄豆饼粉、花生饼粉和硫酸铵。
优选地，所述种子培养的条件包括：温度为28-30℃，转速为300-400rpm，时间为18-36h；所述发酵培养的条件包括：温度为26-32℃，转速为200-300rpm，时间为6-9天。
作为本发明的一个具体实施方式，所述发酵包括：将所述赤霉菌接种至活化培养基中进行活化培养，得到活化菌液；将活化菌液接种至种子培养基中进行种子培养后得到种子液；将所述种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养；其中，所述调节因子和所述辅助因子添加在种子培养基中和/或发酵培养基中。
所述活化培养基、种子培养基和发酵培养基可以是任意能够用于赤霉菌活化培养、种子培养和发酵培养的培养基，优选地，所述活化培养基含有2-5质量%葡萄糖、1.5-2.5质量%黄豆饼粉、0.8-1.5质量%花生饼粉、0.8-1.6质量%KH2PO4、0.005-0.015质量% (NH4)2SO4和0.05-0.15质量%MgSO4∙7H2O，余量为水；所述种子培养基含有1-3质量%葡萄糖、2-4质量%糊精、1.5-2.5质量%黄豆饼粉、0.8-1.5质量%花生饼粉、0.01-0.03质量% (NH4)2SO4、0.08-0.16质量% KH2PO4和0.05-0.15质量% MgSO4∙7H2O，余量为水；所述发酵培养基含有：8-12质量%液化淀粉酶或饴糖、1.5-2.5质量%黄豆饼粉、1-1.5质量%花生饼粉、0.02-0.04质量% (NH4)2SO4、0.08-0.12质量% MgSO4∙7H2O和0.15-0.3质量% KH2PO4，余量为水。
优选地，所述活化培养的条件包括：温度为28-30℃，转速为200-300rpm，时间为24-48h；所述种子培养的条件包括：温度为28-30℃，转速为300-400rpm，时间为18-36h；所述发酵培养的条件包括：温度为26-32℃，转速为200-300rpm，时间为6-9天。
优选地，活化菌液的接种量为5-10体积%，种子液的接种量为10-15体积%。
根据本发明一种特别优选的实施方式，提供一种提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法，包括如下步骤：
（1）将赤霉菌接种至种子培养基中在温度为28-30℃、转速为300-400rpm的条件下种子培养18-36h，得到种子液；
（2）将种子液接种至发酵培养基中在温度为28-30℃、转速为300-400rpm的条件下发酵培养18-36h；
其中，所述种子培养基含有1-3质量%葡萄糖、2-4质量%糊精、1.5-2.5质量%黄豆饼粉、0.8-1.5质量%花生饼粉、0.01-0.03质量% (NH4)2SO4、0.8-1.6质量% KH2PO4和0.05-0.15质量 % MgSO4∙7H2O，余量为水；所述发酵培养基含有：8-12质量%液化淀粉液或饴糖、1.5-2.5质量%黄豆饼粉、1-1.5质量%花生饼粉、0.02-0.04质量% (NH4)2SO4、0.08-0.12质量%MgSO4∙7H2O和0.15-0.3质量% KH2PO4，余量为水，相对于IL的发酵培养基，所述调节因子的添加量为5-60μmol，辅助因子与调节因子的摩尔比为1:1-2，在辅助因子中，泛醇和黄酮醇的摩尔比为1:1-5；调节因子选自氯贝丁酯、芳氧苯氧丙酸酯、烯草酮和环己二酮中的至少一种。
上述优选实施方式提供的方法，能够有效提高GA3的产量。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，
藤仓赤霉菌Fusariumfujikuroi，现保藏在中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC），保藏编号为CCTCC NO M2015614；藤仓赤霉菌Gibberellafujikuroi，购于上海市工业微生物研究所，菌株保藏编号CICC 40272；实施例采用的试剂均通过商购得到。
实施例1
（1）将藤仓赤霉菌Fusariumfujikuroi（CCTCC NO M2015614）接种至活化培养基中，并在温度为28℃、转速为250rpm的条件下培养36h，得到活化菌液；
（2）将活化菌液以8体积%的接种量接种至种子培养基中，并在温度为30℃、转速为350rpm的条件下培养24h，得到种子液；
（3）将种子液以12体积%的接种量接种至发酵培养基中，并在温度30℃、转速为250rpm的条件下培养8天，得到含有赤霉素GA3的发酵醪液；
其中，活化培养基含有3质量%葡萄糖、2质量%黄豆饼粉、1质量%花生饼粉、1.2质量%KH2PO4、0.01质量% (NH4)2SO4和0.1质量%MgSO4∙7H2O，余量为水；种子培养基含有2质量%葡萄糖、3质量%糊精、2质量%黄豆饼粉、1.2质量%花生饼粉、0.02质量% (NH4)2SO4、0.12质量% KH2PO4和0.1质量% MgSO4∙7H2O，余量为水；发酵培养基含有：10质量%液化淀粉液、2质量%黄豆饼粉、1.2质量%花生饼粉、0.03质量% (NH4)2SO4、0.1质量% MgSO4∙7H2O和0.2质量%KH2PO4，余量为水，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例2
按照实施例1的方法，不同的是，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为10μmol，黄酮醇的添加量为10μmol。
实施例3
按照实施例1的方法，不同的是，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为3.4μmol，黄酮醇的添加量为16.6μmol。
实施例4
按照实施例1的方法，不同的是，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为1μmol，黄酮醇的添加量为19μmol。
实施例5
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯、泛醇和黄酮醇的组合替换成氯贝丁酯和泛醇的组合，其中，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为20μmol。
实施例6
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯、泛醇和黄酮醇的组合替换成氯贝丁酯和黄酮醇的组合，其中，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，黄酮醇的添加量为20μmol。
实施例7
按照实施例1的方法，不同的是，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为40μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例8
按照实施例1的方法，不同的是，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为20μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例9
按照实施例1的方法，不同的是，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为60μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例10
按照实施例1的方法，不同的是，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为5μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例11
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，不添加泛醇和黄酮醇。
实施例12
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯替换成烯草酮。
实施例13
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯替换成环己二酮。
实施例14
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯替换成噁唑禾草灵。
实施例15
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯替换成炔草酯。
实施例16
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯替换成异恶草醚。
实施例17
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯替换成氯贝丁酯和烯草酮的组合，且相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为15μmol，烯草酮的添加量为15μmol。
实施例18
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯替换成氯贝丁酯和烯草酮的组合，且相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为20μmol，烯草酮的添加量为10μmol。
实施例19
按照实施例1的方法，不同的是，在所述发酵培养基中，将氯贝丁酯替换成氯贝丁酯和烯草酮的组合，且相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为10μmol，烯草酮的添加量为20μmol。
实施例20
（1）将藤仓赤霉菌Fusariumfujikuroi（CCTCC NO M2015614）接种至活化培养基中，并在温度为30℃、转速为200rpm的条件下培养24h，得到活化菌液；
（2）将活化菌液以5体积%的接种量接种至种子培养基中，并在温度为28℃、转速为300rpm的条件下培养36h，得到种子液；
（3）将种子液以10体积%的接种量接种至发酵培养基中，并在温度32℃、转速为200rpm的条件下培养6天，得到含有赤霉素GA3的发酵醪液；
其中，活化培养基含有2质量%葡萄糖、1.5质量%黄豆饼粉、0.8质量%花生饼粉、1.6质量%KH2PO4、0.015质量% (NH4)2SO4和0.05质量%MgSO4∙7H2O，余量为水；所述种子培养基含有3质量%葡萄糖、4质量%糊精、2.5质量%黄豆饼粉、1.5质量%花生饼粉、0.01质量% (NH4)2SO4、0.08质量% KH2PO4和0.05质量 % MgSO4∙7H2O，余量为水；所述发酵培养基含有：8质量%液化淀粉酶、1.5质量%黄豆饼粉、1质量%花生饼粉、0.04质量% (NH4)2SO4、0.12质量% MgSO4∙7H2O和0.15质量% KH2PO4，余量为水，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例21
（1）将藤仓赤霉菌Fusariumfujikuroi（CCTCC NO M2015614）接种至活化培养基中，并在温度为28℃、转速为300rpm的条件下培养48h，得到活化菌液；
（2）将活化菌液以10体积%的接种量接种至种子培养基中，并在温度为30℃、转速为400rpm的条件下培养18h，得到种子液；
（3）将种子液以15体积%的接种量接种至发酵培养基中，并在温度26℃、转速为300rpm的条件下培养9天，得到含有赤霉素GA3的发酵醪液；
其中，活化培养基含有5质量%葡萄糖、2.5质量%黄豆饼粉、1.5质量%花生饼粉、0.8质量%KH2PO4、0.005质量% (NH4)2SO4和0.15质量%MgSO4∙7H2O，余量为水；所述种子培养基含有1质量%葡萄糖、2质量%糊精、1.5质量%黄豆饼粉、0.8质量%花生饼粉、0.03质量% (NH4)2SO4、0.16质量% KH2PO4和0.15质量 % MgSO4∙7H2O，余量为水；所述发酵培养基含有：12质量%液化淀粉酶、2.5质量%黄豆饼粉、1.5质量%花生饼粉、0.02质量% (NH4)2SO4、0.08质量%MgSO4∙7H2O和0.3质量% KH2PO4，余量为水，相对于IL的发酵培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例22
按照实施例1的方法，不同的是，氯贝丁酯、泛醇和黄酮醇的组合添加在种子培养基中，相对于1L的种子培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例23
按照实施例1的方法，不同的是，氯贝丁酯、泛醇和黄酮醇的组合添加在种子培养基和发酵培养基中，相对于1L的种子培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol，相对于1L的种子培养基，氯贝丁酯的添加量为30μmol，泛醇的添加量为5μmol，黄酮醇的添加量为15μmol。
实施例24
按照实施例1的方法，不同的是，采用藤仓赤霉菌Gibberellafujikuroi（CICC40272）替换藤仓赤霉菌Fusariumfujikuroi（CCTCC NO M2015614）。
对比例1
按照实施例1的方法，不同的是，在发酵培养基中，不添加氯贝丁酯。
对比例2
按照实施例1的方法，不同的是，在发酵培养基中，不添加氯贝丁酯、泛醇和黄酮醇。
对比例3
按照实施例24的方法，不同的是，在发酵培养基中，不添加氯贝丁酯、泛醇和黄酮醇。
对比例4
按照实施例24的方法，不同的是，在发酵培养基中，不添加氯贝丁酯。
测试例
标准曲线的绘制：
配置GA3不同浓度的标准溶液，通过高效液相色谱仪进行检测，每个浓度平行测量5次，去掉异常值后求平均值。以GA3浓度为横坐标，该浓度对应的峰面积为纵坐标，计算出标准曲线为：y=20432153.9795x+14156790.9425（R2=0.9999），具体标准曲线参见图1。
实施例和对比例得到的发酵醪液中GA3浓度的确定：
取4mL的实施例或对比例发酵得到的发酵醪液，在6000rpm的转速下离心10min，离心得到的上清液经0.22μm的滤头过滤去除残渣，然后将过滤液装入液相进样瓶进行检测。每个实例取样五次分别进行测量，求平均值。
检测条件如下：使用Dionex U3000型高效液相色谱仪，采用填料粒径5μm的Venusil MPC18柱。流动相中甲醇、水、磷酸的体积比为68:32:0.05，流速设定为0.8mL/min，检测波长为210nm，进样量为10μL。
根据GA3的峰面积以及上述标准曲线计算其浓度，得到数据如表1所示。
通过表1的结果可以看出，实施例1-23发酵得到的发酵醪液中GA3的含量高于对比例1-2，实施例24发酵得到发酵醪液中GA3的含量高于对比例3-4，说明本发明提供的方法能够有效提高GA3的产量。实施例1-8和实施例12发酵得到的发酵醪液中GA3的含量高于实施例11，且对比例1发酵得到的发酵醪液中GA3的含量和对比例2相当，对比例3发酵得到的发酵醪液中GA3的含量和对比例4相当，说明单独添加泛醇和/或黄酮醇并不能提高发酵醪液中GA3的含量，但是将泛醇和/或黄酮醇与调节因子配合使用，能够促进调节因子对赤霉菌的作用效果，进一步促进赤霉菌在发酵过程中将吸收的营养成分转化为赤霉素GA3，进而提高赤霉素GA3的产量。
表1
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法，其特征在于，该方法包括：
将赤霉菌接入到含有调节因子的培养基中进行发酵；
所述调节因子选自氯贝丁酯、芳氧苯氧丙酸酯、烯草酮和环己二酮中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述芳氧苯氧丙酸酯选自噁唑酰草胺、氟吡甲禾灵、吡氟禾草灵、噻唑禾草灵、噁唑禾草灵、炔草酯、和草灵、氰氟草酯、喔草酯和异恶草醚中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述调节因子为氯贝丁酯和/或烯草酮。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，相对于1L的所述培养基，所述调节因子的添加量为5-60μmol。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述培养基中还含有辅助因子，所述辅助因子为泛醇和/或黄酮醇。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述辅助因子为泛醇和黄酮醇。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述泛醇和所述黄酮醇的摩尔比为1:1-5。
8.根据权利要求5所述的方法，在所述培养基中，所述辅助因子与所述调节因子的摩尔比为1:1-2。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵包括：将所述赤霉菌接种至种子培养基中进行种子培养后得到种子液，将所述种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，其中，所述调节因子和所述辅助因子添加在所述种子培养基和/或所述发酵培养基中。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述种子培养基含有：3-7质量%碳源、2.3-4质量%氮源、0.08-0.16质量% KH2PO4和0.05-0.15质量% MgSO4∙7H2O；
所述发酵培养基含有：8-12质量%碳源、2.5-4质量%氮源、0.08-0.12质量% MgSO4∙7H2O和0.15-0.3质量% KH2PO4。
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