CN115586292A - 一种百贝益肺胶囊的质量控制方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种百贝益肺胶囊的质量控制方法及应用，属于生物医药技术领域。该质量控制方法包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法。本发明对产品生产的全过程进行质量管理，实现了药品的安全性、有效性、可控性。鉴别项目增加到6项，并改进了三七的鉴别方法，比原标准增加了3项，新增了甘草、白及、浙贝母的TLC法鉴别；同时，在含量测定时，使人参皂苷Rg1含量由现标准的不低于0.4mg/粒提升到不低于0.6mg/粒，其提升幅度达50%，准确度更高、更好。临床研究表明，百贝益肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病（COPD）和肺结核治疗具有良好的效果，且配合抗肺结核药治疗，可达到减毒增效的作用，易于推广应用。

Description

一种百贝益肺胶囊的质量控制方法及应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种百贝益肺胶囊的质量控制方法及应用。

背景技术

百贝益肺胶囊为云南永孜堂制药有限公司收购的原昆明群芳药业有限公司研制开发的，是“一种治疗肺咳及支气管炎的药物”专利(专利权人：张琼芳，专利号：ZL200310121018.9)的优化产物。现在由云南永孜堂制药有限公司所有和生产的上市多年的彝族药(国药准字Z20025124，执行标准WS-10115(ZD-0115)-2002-2012Z)。由百部、百合、浙贝母、桔梗、紫菀、功劳木、白及、海浮石、三七、甘草10味药组成，具有滋阴活血，止咳化痰的功效。用于治疗肺阴不足之久咳，以及支气管炎、肺痨久咳，临床上使用久矣，效果良好。

然中医药博大精深，深入研究，挖掘其潜力，发扬光大中医药显然是一历史责任。依据中医理论，此药究其本质，仍是有许多值得探索和开发的价值。若能将百贝益肺胶囊中的应用(功效)拓展至肺结核和COPD的治疗，有所建树，爱莫大焉。

肺结核的病变脏腑主要在肺，以肺阴虚为主，据其“主平阴虚”的病理特点，临床最常见的中医证型是肺阴亏损证，临床表现为干咳少痰，痰中带血或咯血、咳声短促、手足心热、口舌干燥。慢性阻塞性肺疾病(COPD)简称慢阻肺，是一种常见的、可以预防和治疗的疾病。COPD临床上以咳嗽、咯痰、气喘、胸闷为主症。近年来，该病在全球患病率和死亡率呈现明显的上升趋势，不仅严重影响了患者的生活质量，而且其劳动能力也在一定程度上受到影响。近年来中医药对COPD的防治效果显著，临床上观察表明，无论是在缓解期还是急性加重期，肺阴不足是COPD的常见证型，根据中医对本病的认识及相应的治则治法，百贝益肺胶囊应该有所作为。

现有药品标准中，鉴别项目只有3项，且三七的鉴别方法和含量测定存在问题，三七鉴别时，薄层色谱拖尾严重，较难判断是否存在显相同颜色的斑点；在含量测定中，由于其检测方法的限制，无法准确的检测出人参皂苷Rg1的含量，所以对于质量控制的含量一直只能处于较低水平。另外，现行国家要求药品标准中鉴别项目需要覆盖原料的1/3～1/2，所以目前该药品标准不符合国家相关要求。因此如何克服现有技术的不足是目前生物医药技术领域亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种百贝益肺胶囊的质量控制方法及在制备治疗COPD和肺结核药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种百贝益肺胶囊的质量控制方法，包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法，具体如下：

第一，原料控制：

所述的1000个单剂量百贝益肺胶囊由以下活性成分重量配比原料制备：

白及118g、浙贝母40g、桔梗67g、百部67g、百合67g、海浮石67g、紫菀67g、三七40g、功劳木67g、甘草20g；

以上白及、百部、紫菀、甘草、浙贝母、百合、三七、桔梗、功劳木九味药应符合《中国药典》中相应的药材标准，海浮石应符合《黑龙江省中药材标准》中相应的药材标准；

第二，制备方法控制：

步骤(1)，将白及、海浮石、三七、浙贝母分别粉碎成细粉、灭菌备用；

步骤(2)，将桔梗、百部、百合、紫菀、功劳木和甘草一起用水煎煮三次，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液常压下浓缩成常温下相对密度大于等于1.25的稠膏；三次煎煮加水质量分别是该6味药材总质量的6倍量、5倍量、4倍量，且第一次加水后，先浸泡1小时再进行煎煮；

步骤(3)，将步骤(2)得到的稠膏与步骤(1)获得的细粉混匀后烘干，粉碎，过筛，装入胶囊，制成1000粒即得；

第三，鉴别方法：

A.镜检：

取本品置显微镜下观察：淀粉粒卵形、广卵形或椭圆形，直径6-56μm，脐点点状、裂缝状、人字状或马蹄状；草酸钙针晶成束或散在，针晶长18-88μm；

B.三七的薄层色谱检测：

取内容物5g，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用水饱和的正丁醇15ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，将体积比为15:40:22:10三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水混匀后10℃以下放置分层，取下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.浙贝母的薄层色谱检测：

取内容物5g，加浓氨试液3ml与三氯甲烷15ml，放置过夜，滤过，取续滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品和贝母素乙对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5-10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17:2:1的乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

D.甘草的薄层色谱检测：

取内容物2g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇15m1加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇提取三次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2-5ul、对照药材溶液2u1，分别点于同一含1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的主斑点；

E.白及的薄层色谱检测：

取内容物3g，加70％甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥至1ml，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5-10u1、对照药材溶液5ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为6:2.5:1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热5-10分钟，然后放置30-60分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

F.桔梗的薄层色谱检测：

取本品内容物7g，加甲醇40ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流1小时，放冷，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，用水25ml洗涤，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5-10u1、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的三氯甲烷-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

第四，含量测定方法：

按照《中国药典》高效液相色谱法测定；

a.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以体积比为18:82的乙腈-水为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于3000。

b.对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg的溶液，即得；

c.供试品溶液的制备：取20粒内容物，精密称定，混匀，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加水10ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水100ml洗脱，弃去水液；再用20％乙醇100ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液；继用95％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

d.测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

每粒含三七以人参皂苷Rg1计，不得少于0.6mg。

进一步，优选的是，步骤(1)中，细粉粒径为80-100目；步骤(2)中，过滤采用80-100目筛，取筛下物。

进一步，优选的是，步骤(3)中，过筛为过60目筛，取筛下物；烘干温度为70-80℃。

进一步，优选的是，含量测定方法的c步骤中，D101型大孔吸附树脂柱内径为2cm，柱长为15cm。

本发明第二方面提供上述百贝益肺胶囊的质量控制方法获得的百贝益肺胶囊在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用。

本发明第三方面提供上述百贝益肺胶囊的质量控制方法获得的百贝益肺胶囊在制备治疗肺纤维化药物中的应用。

本发明第四方面提供上述百贝益肺胶囊的质量控制方法获得的百贝益肺胶囊在制备治疗肺结核药物中的应用。

本发明与现有技术相比，其有益效果为：

1.对产品生产的全过程进行质量管理，实现了药品的安全性、有效性、可控性。

2.鉴别项目增加到6项，并改进了三七的鉴别方法，比原标准增加了3项，新增了甘草、白及、浙贝母的TLC法鉴别，达到国家要求的占全方的1/3-1/2。

3.含量测定是方法的新建，使人参皂苷Rg1含量由现标准的不低于0.4mg/粒提升到不低于0.6mg/粒，其提升幅度达50％，准确度更高、更好。

4.药理学研究表明：

(1)百贝益肺胶囊对内毒素及烟熏引起的大鼠慢性阻塞性肺病(COPD)具有改善肺功能和肺组织病理学变化。

(2)百贝益肺胶囊对博来霉素引起的肺纤维化具有改善作用。

(3)减少炎性细胞、降低IL-8、IL-17、ET-1及MDA水平，增加SOD及NO水平可能是作用机理之一。

(4)百贝益肺胶囊具有抑菌、抗炎、止咳、平喘和祛痰作用。

5.临床研究表明：

(1)百贝益肺胶囊结合常规抗肺结核治疗效果优于单纯常规基础治疗，使用安全，在减轻常规西药治疗毒副作用方面效果显著。本发明产品配合抗肺结核药治疗，可达到减毒增效的作用：

a.胸部影像学病灶吸收疗效评价

治疗组总吸收率87.10％；对照组总有效率63.64％。两组间胸部影像学疗效比较具有统计学意义(P＜0.05)。说明治疗组病灶吸收率大于对照组，且两组治疗方案均有治疗效果，治疗组方案优于对照组。

b.痰涂片或痰培养结果评价

将两组患者治疗前后的痰涂片或痰培养结果分别进行组内比较，结果具有统计学差异(P值＜0.01)，说明两组治疗方案均有治疗效果。

将治疗组和对照组在治疗前的痰涂片或痰培养结果进行组间比较，结果无统计学意义(P值＞0.05)，说明治疗前两组患者痰涂片或痰培养结果无明显差异。

将两组患者治疗后的痰涂片或痰培养结果进行组间比较，具有统计学差异(P<0.05)，治疗组患者的痰涂片或痰培养结果在治疗后均低于对照组。痰菌阴转率：治疗组阴转率80.00％；对照组阴转率42.86％。说明治疗组治疗效果优于对照组。

c.中医证候积评价

治疗组总有效率96.77％，治愈率为9.68％；对照组总有效率69.70％，治愈率3.03％。治疗组疗效较对照组更优，有统计学意义(P＜0.05)。

将治疗组和对照组患者治疗后的中医证候积分分别进行组内比较，结果均有显著统计学差异(P＜0.01)，说明在中医证候上两组治疗方案均可改善证候症状。

将治疗组和对照组在治疗前的中医证候积分进行组间比较，结果无统计学意义(P＞0.05)，说明治疗前无差异。将治疗组和对照组在治疗后的中医证候积分进行组间比较，结果具有统计学差异(P＜0.05)。且对比两组患者的中医证候积分发现，治疗组患者治疗后积分低于对照组，可见治疗组的治疗方案较之对照组的更有优势。

d.安全性评价

治疗组和对照组患者的UA均升高(P＜0.05)，且治疗组UA在治疗结束后升高程度较对照组低(P＜0.05)，说明抗结核西药有增高患者血尿酸的副作用，且百贝益肺胶囊在治疗过程中能降低患者血尿酸；两组患者ALT、AST异常在治疗后有统计学差异(P＜0.05)，说明百贝益肺胶囊在疗程中有较明显保肝降酶作用；两组患者胃肠道症状例数在治疗后有统计学差异(P＜0.05)，说明百贝益肺胶囊在疗程中对减轻患者胃肠道症状有效；而轻微过敏反应症状例数在治疗后无统计学意义(P＞0.05)，表明百贝益肺胶囊在疗程中对减轻患者轻微过敏反应无明显效果。其余安全性指标均处于正常范围。

(2)百贝益肺胶囊治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺阴不足证具有改善中医证候的作用，在咳嗽、气喘、胸闷气短等症状方面疗效优于对照组：

a.试验组与对照组患者治疗前后的中医证候总积分及中医各主症与次症积分进行组内比较，结果显示，差异均有显著性意义(P＜0.01)，说明两组药物都有明显的治疗效果。

b.在改善中医证候疗效上，治疗后试验组的有效率为83.75％，对照组有效率为75.0％，经秩和检验，试验组与对照组组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明试验组在改善中医证候疗效方面优于对照组。

c.治疗前后两组患者各中医单项症状积分变化的比较：试验组在改善咳嗽、气喘症状方面明显优于对照组(P＜0.01)；在改善胸闷气短症状方面优于对照组(P＜0.05)，而在改善痰色性状、口感咽燥症状上二者比较未见明显差异(P＞0.05)。

d.临床使用安全，未发现明显不良反应及毒副作用。

附图说明

图1为本发明百贝益肺胶囊制备方法流程图；

图2为三七的薄层色谱检测TLC色谱图；其中，1.三七皂苷R1、人参皂苷Rg，混合对照品溶液；2.三七皂苷R，对照品溶液；3.人参皂苷Rg1对照品溶液；4-13.百贝益肺胶囊供试品溶液(批号分别为:20151007、2015051、20160504、20150201、20150504、20150708、20151206、20160109、20160306、20160521)；

图3为浙贝母的薄层色谱检测TLC色谱图；其中，1～10.百贝益肺胶囊(批号分别为:20151007、20150512、20160504、20150201、20150504、20150708、20151206、20160109、20160306、20160521)；11.贝母素甲对照品溶液；12.贝母素乙对照品溶液；

图4为甘草的薄层色谱检测TLC色谱图；其中，1～10、12～14.百贝益肺胶囊供试品溶液(批号分别为:20151007、20150512、20160504、20150201、20150504、20150708、20151206、20160109、20160306、20160521、20160306、20150520、20160206；11、15.甘草对照药材溶液；

图5为白及的薄层色谱检测TLC色谱图；其中，1、15白及药材；2、8、14白及对照药材；3～7、9-13百贝益肺胶囊(批号:20160521、20150708、20170105、20160109、20151007、20160504、20150504、20150201、20160520、20161206)；

图6为百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD肺组织病理学的影响(200×)；

图7为百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD肺动脉病理学的影响(200×)；

图8为百贝益肺胶囊对烟熏诱导大鼠COPD肺组织病理学的影响(200×)；

图9为百贝益肺胶囊对烟熏诱导大鼠COPD肺动脉病理学的影响(200×)；

图10为百贝益肺胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化肺组织病理学的影响(200×)；

图11为百贝益肺胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化肺组织masson染色的影响(400×)；

图12为两组患者性别情况；

图13为治疗前痰涂片或痰培养结果组间比较；

图14为治疗后痰涂片或痰培养结果组间比较；

图15为治疗组中医证候疗效百分比；

图16为对照组中医证候疗效百分比。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。

本发明采用的试剂、材料均按照药典的要求。

实施例1

一种百贝益肺胶囊的质量控制方法，包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法，具体如下：

第一，原料控制：

所述的1000个单剂量百贝益肺胶囊由以下活性成分重量配比原料制备：

白及118g、浙贝母40g、桔梗67g、百部67g、百合67g、海浮石67g、紫菀67g、三七40g、功劳木67g、甘草20g；

以上白及、百部、紫菀、甘草、浙贝母、百合、三七、桔梗、功劳木九味药应符合《中国药典》中相应的药材标准，海浮石应符合《黑龙江省中药材标准》中相应的药材标准；

第二，制备方法控制：

步骤(1)，将白及、海浮石、三七、浙贝母分别粉碎成细粉、灭菌备用；

步骤(2)，将桔梗、百部、百合、紫菀、功劳木和甘草一起用水煎煮三次，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液常压下浓缩成常温下相对密度大于等于1.25的稠膏；三次煎煮加水质量分别是该6味药材总质量的6倍量、5倍量、4倍量，且第一次加水后，先浸泡1小时再进行煎煮；

步骤(3)，将步骤(2)得到的稠膏与步骤(1)获得的细粉混匀后烘干，粉碎，过筛，装入胶囊，制成1000粒即得；

第三，鉴别方法：

A.镜检：

取本品置显微镜下观察：淀粉粒卵形、广卵形或椭圆形，直径6-56μm，脐点点状、裂缝状、人字状或马蹄状；草酸钙针晶成束或散在，针晶长18-88μm；

B.三七的薄层色谱检测：

取内容物5g，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用水饱和的正丁醇15ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，将体积比为15:40:22:10三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水混匀后10℃以下放置分层，取下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.浙贝母的薄层色谱检测：

取内容物5g，加浓氨试液3ml与三氯甲烷15ml，放置过夜，滤过，取续滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品和贝母素乙对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17:2:1的乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

D.甘草的薄层色谱检测：

取内容物2g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇15m1加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇提取三次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2ul、对照药材溶液2u1，分别点于同一含1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的主斑点；

E.白及的薄层色谱检测：

取内容物3g，加70％甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥至1ml，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5u1、对照药材溶液5ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为6:2.5:1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热5分钟，然后放置30分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

F.桔梗的薄层色谱检测：

取本品内容物7g，加甲醇40ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流1小时，放冷，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，用水25ml洗涤，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5u1、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的三氯甲烷-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

第四，含量测定方法：

按照《中国药典》高效液相色谱法测定；

a.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以体积比为18:82的乙腈-水为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于3000。

b.对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg的溶液，即得；

c.供试品溶液的制备：取20粒内容物，精密称定，混匀，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加水10ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水100ml洗脱，弃去水液；再用20％乙醇100ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液；继用95％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

d.测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

每粒含三七以人参皂苷Rg1计，不得少于0.6mg。

实施例2

一种百贝益肺胶囊的质量控制方法，包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法，具体如下：

第一，原料控制：

所述的1000个单剂量百贝益肺胶囊由以下活性成分重量配比原料制备：

白及118g、浙贝母40g、桔梗67g、百部67g、百合67g、海浮石67g、紫菀67g、三七40g、功劳木67g、甘草20g；

以上白及、百部、紫菀、甘草、浙贝母、百合、三七、桔梗、功劳木九味药应符合《中国药典》中相应的药材标准，海浮石应符合《黑龙江省中药材标准》中相应的药材标准；

第二，制备方法控制：

步骤(1)，将白及、海浮石、三七、浙贝母分别粉碎成细粉、灭菌备用；

步骤(2)，将桔梗、百部、百合、紫菀、功劳木和甘草一起用水煎煮三次，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液常压下浓缩成常温下相对密度大于等于1.25的稠膏；三次煎煮加水质量分别是该6味药材总质量的6倍量、5倍量、4倍量，且第一次加水后，先浸泡1小时再进行煎煮；

步骤(3)，将步骤(2)得到的稠膏与步骤(1)获得的细粉混匀后烘干，粉碎，过筛，装入胶囊，制成1000粒即得；

第三，鉴别方法：

A.镜检：

取本品置显微镜下观察：淀粉粒卵形、广卵形或椭圆形，直径6-56μm，脐点点状、裂缝状、人字状或马蹄状；草酸钙针晶成束或散在，针晶长18-88μm；

B.三七的薄层色谱检测：

取内容物5g，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用水饱和的正丁醇15ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，将体积比为15:40:22:10三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水混匀后10℃以下放置分层，取下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.浙贝母的薄层色谱检测：

取内容物5g，加浓氨试液3ml与三氯甲烷15ml，放置过夜，滤过，取续滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品和贝母素乙对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17:2:1的乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

D.甘草的薄层色谱检测：

取内容物2g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇15m1加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇提取三次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2ul、对照药材溶液2u1，分别点于同一含1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的主斑点；

E.白及的薄层色谱检测：

取内容物3g，加70％甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥至1ml，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5u1、对照药材溶液5ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为6:2.5:1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热5分钟，然后放置30分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

F.桔梗的薄层色谱检测：

取本品内容物7g，加甲醇40ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流1小时，放冷，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，用水25ml洗涤，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5u1、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的三氯甲烷-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

第四，含量测定方法：

按照《中国药典》高效液相色谱法测定；

a.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以体积比为18:82的乙腈-水为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于3000。

b.对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg的溶液，即得；

c.供试品溶液的制备：取20粒内容物，精密称定，混匀，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加水10ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水100ml洗脱，弃去水液；再用20％乙醇100ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液；继用95％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

d.测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

每粒含三七以人参皂苷Rg1计，不得少于0.6mg。

步骤(1)中，细粉粒径为80目；步骤(2)中，过滤采用80目筛，取筛下物。

步骤(3)中，过筛为过60目筛，取筛下物；烘干温度为70℃。

含量测定方法的c步骤中，D101型大孔吸附树脂柱内径为2cm，柱长为15cm。

实施例3

一种百贝益肺胶囊的质量控制方法，包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法，具体如下：

第一，原料控制：

所述的1000个单剂量百贝益肺胶囊由以下活性成分重量配比原料制备：

白及118g、浙贝母40g、桔梗67g、百部67g、百合67g、海浮石67g、紫菀67g、三七40g、功劳木67g、甘草20g；

以上白及、百部、紫菀、甘草、浙贝母、百合、三七、桔梗、功劳木九味药应符合《中国药典》中相应的药材标准，海浮石应符合《黑龙江省中药材标准》中相应的药材标准；

第二，制备方法控制：

步骤(1)，将白及、海浮石、三七、浙贝母分别粉碎成细粉、灭菌备用；

步骤(2)，将桔梗、百部、百合、紫菀、功劳木和甘草一起用水煎煮三次，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液常压下浓缩成常温下相对密度大于等于1.25的稠膏；三次煎煮加水质量分别是该6味药材总质量的6倍量、5倍量、4倍量，且第一次加水后，先浸泡1小时再进行煎煮；

步骤(3)，将步骤(2)得到的稠膏与步骤(1)获得的细粉混匀后烘干，粉碎，过筛，装入胶囊，制成1000粒即得；

第三，鉴别方法：

A.镜检：

取本品置显微镜下观察：淀粉粒卵形、广卵形或椭圆形，直径6-56μm，脐点点状、裂缝状、人字状或马蹄状；草酸钙针晶成束或散在，针晶长18-88μm；

B.三七的薄层色谱检测：

取内容物5g，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用水饱和的正丁醇15ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，将体积比为15:40:22:10三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水混匀后10℃以下放置分层，取下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.浙贝母的薄层色谱检测：

取内容物5g，加浓氨试液3ml与三氯甲烷15ml，放置过夜，滤过，取续滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品和贝母素乙对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17:2:1的乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

D.甘草的薄层色谱检测：

取内容物2g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇15m1加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇提取三次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5ul、对照药材溶液2u1，分别点于同一含1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的主斑点；

E.白及的薄层色谱检测：

取内容物3g，加70％甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥至1ml，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10u1、对照药材溶液5ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为6:2.5:1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热10分钟，然后放置60分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

F.桔梗的薄层色谱检测：

取本品内容物7g，加甲醇40ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流1小时，放冷，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，用水25ml洗涤，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10u1、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的三氯甲烷-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

第四，含量测定方法：

按照《中国药典》高效液相色谱法测定；

a.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以体积比为18:82的乙腈-水为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于3000。

b.对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg的溶液，即得；

c.供试品溶液的制备：取20粒内容物，精密称定，混匀，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加水10ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水100ml洗脱，弃去水液；再用20％乙醇100ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液；继用95％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

d.测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

每粒含三七以人参皂苷Rg1计，不得少于0.6mg。

步骤(1)中，细粉粒径为100目；步骤(2)中，过滤采用100目筛，取筛下物。

步骤(3)中，过筛为过60目筛，取筛下物；烘干温度为80℃。

含量测定方法的c步骤中，D101型大孔吸附树脂柱内径为2cm，柱长为15cm。

实施例4

一种百贝益肺胶囊的质量控制方法，包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法，具体如下：

第一，原料控制：

所述的1000个单剂量百贝益肺胶囊由以下活性成分重量配比原料制备：

白及118g、浙贝母40g、桔梗67g、百部67g、百合67g、海浮石67g、紫菀67g、三七40g、功劳木67g、甘草20g；

以上白及、百部、紫菀、甘草、浙贝母、百合、三七、桔梗、功劳木九味药应符合《中国药典》中相应的药材标准，海浮石应符合《黑龙江省中药材标准》中相应的药材标准；

第二，制备方法控制：

步骤(1)，将白及、海浮石、三七、浙贝母分别粉碎成细粉、灭菌备用；

步骤(2)，将桔梗、百部、百合、紫菀、功劳木和甘草一起用水煎煮三次，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液常压下浓缩成常温下相对密度大于等于1.25的稠膏；三次煎煮加水质量分别是该6味药材总质量的6倍量、5倍量、4倍量，且第一次加水后，先浸泡1小时再进行煎煮；

步骤(3)，将步骤(2)得到的稠膏与步骤(1)获得的细粉混匀后烘干，粉碎，过筛，装入胶囊，制成1000粒即得；

第三，鉴别方法：

A.镜检：

取本品置显微镜下观察：淀粉粒卵形、广卵形或椭圆形，直径6-56μm，脐点点状、裂缝状、人字状或马蹄状；草酸钙针晶成束或散在，针晶长18-88μm；

B.三七的薄层色谱检测：

取内容物5g，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用水饱和的正丁醇15ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，将体积比为15:40:22:10三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水混匀后10℃以下放置分层，取下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.浙贝母的薄层色谱检测：

取内容物5g，加浓氨试液3ml与三氯甲烷15ml，放置过夜，滤过，取续滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品和贝母素乙对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17:2:1的乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

D.甘草的薄层色谱检测：

取内容物2g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇15m1加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇提取三次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4ul、对照药材溶液2u1，分别点于同一含1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的主斑点；

E.白及的薄层色谱检测：

取内容物3g，加70％甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥至1ml，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8u1、对照药材溶液5ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为6:2.5:1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热8分钟，然后放置45分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

F.桔梗的薄层色谱检测：

取本品内容物7g，加甲醇40ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流1小时，放冷，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，用水25ml洗涤，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液7u1、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的三氯甲烷-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

第四，含量测定方法：

按照《中国药典》高效液相色谱法测定；

a.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以体积比为18:82的乙腈-水为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于3000。

b.对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg的溶液，即得；

c.供试品溶液的制备：取20粒内容物，精密称定，混匀，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加水10ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水100ml洗脱，弃去水液；再用20％乙醇100ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液；继用95％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

d.测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

每粒含三七以人参皂苷Rg1计，不得少于0.6mg。

步骤(1)中，细粉粒径为90目；步骤(2)中，过滤采用90目筛，取筛下物。

步骤(3)中，过筛为过60目筛，取筛下物；烘干温度为75℃。

含量测定方法的c步骤中，D101型大孔吸附树脂柱内径为2cm，柱长为15cm。

实施例5

一、百贝益肺胶囊的质量控制

一种百贝益肺胶囊的质量控制方法，包括了原料控制、制备方法的质量控制和产品的质量控制。一个好药，应该建立在适宜的更高标准能充分保证药品质量；实施GMP，一套完整、可控的生产工艺。坚信药品的质量是生产出来的。

1.原料控制

百贝益肺胶囊的处方

白及118g浙贝母40g桔梗67g百部67g

百合67g海浮石67g紫菀67g三七40g

功劳木67g甘草20g

其中白及、百部、紫菀、甘草、浙贝母、百合、三七、桔梗、功劳木九味执行中国药典标准；海浮石执行《黑龙江省中药材标准》2001年版标准。

2.制备方法控制

(1)生产工艺流程如图1所示；

按处方的药材品种质量比称取药材

白及、海浮石、三七、浙贝母等四味粉碎成细粉、灭菌备用；桔梗、百部、百合、紫菀、功劳木、甘草等六味加6倍量的水煎煮第一次，加5倍量水煎煮第二次，加4倍量水煎煮第三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液常压下浓缩成稠膏(d≥1.25，常温)与白及等四味的细粉混匀、烘干、粉碎、过筛(60目)装入胶囊，制成1000粒即得。

(2)药材的分拣、清洗、干燥、粉碎、提取、浓缩以及制剂、包装均在D级洁净区进行。

(3)生产过程中执行GMP规范。

(4)制得胶囊应符合《中国药典》2020年版四部通则01037中的相关规定，菌检合格，崩解度合格。

3.产品的质量控制

鉴别方法：

A.镜检：

取本品，置显微镜下观察：淀粉粒卵形、广卵形或椭圆形，直径6～56μm，脐点点状、裂缝状、人字状或马蹄状(浙贝母)。草酸钙针晶成束或散在，针晶长18～88μm(白及)。

B.三七的薄层色谱检测：

取内容物5g，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用水饱和的正丁醇15ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，将体积比为15:40:22:10三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水混匀后10℃以下放置分层，取下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

对10批次百贝益肺胶囊进行三七的薄层色谱检测，TLC色谱图如图2所示；

C.浙贝母的薄层色谱检测：

取内容物5g，加浓氨试液3ml与三氯甲烷15ml，放置过夜，滤过，取续滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品和贝母素乙对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5～10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17:2:1的乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

对10批次百贝益肺胶囊进行浙贝母的薄层色谱检测，TLC色谱图如图3所示；

D.甘草的薄层色谱检测：

取内容物2g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇15m1加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇提取三次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2～5ul、对照药材溶液2u1，分别点于同一含1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的主斑点；

对10批次百贝益肺胶囊进行甘草的薄层色谱检测，TLC色谱图如图4所示；

E.白及的薄层色谱检测：

取内容物3g，加70％甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥至1ml，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5～10u1、对照药材溶液5ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为6:2.5:1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热5-10分钟，然后放置30～60分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

对10批次百贝益肺胶囊进行白及的薄层色谱检测，TLC色谱图如图5所示；

F.桔梗的薄层色谱检测：

取本品内容物7g，加甲醇40ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流1小时，放冷，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，用水25ml洗涤，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5～1u1、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的三氯甲烷-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

其中，薄层色谱法试验参照《中国药典》2020年版四部通则0502。

【检查】应符合胶囊剂项下有关的各项规定(《中国药典》2020版四部通则0103)。

【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》2020版四部通则0512)测定

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以乙腈-水(18:82)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1 0.3mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加水10ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水100ml洗脱，弃去水液；再用20％乙醇100ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液；继用95％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含三七以人参皂苷Rg1(C₄₂H₇₂O₁₄)计，不得少于0.6mg。

表1百贝益肺胶囊中人参皂苷Rg1含量测定结果

序号	批号	取样量(g)	含量(mg/g)	含量(mg/粒)
					1	20150504	2.0017	3.2671	1.0079
2	20150512	2.0155	3.2314	0.9875
					3	20150708	2.0032	3.3034	1.0161
4	20151206	2.003	2.6291	0.8126
					5	20160109	2.0009	2.6403	0.7768
6	20160306	2.016	2.9544	0.9194
					7	20160520	2.0119	2.7136	0.8309
8	20160301	2.0096	2.7277	0.8199
					9	20170101	2.0008	2.8924	0.8613
10	20160201	2.0015	3.2559	0.9865

10批百贝益肺胶囊中，人参皂苷Rg1含量测定结果平均值为0.9019/粒，考虑到处方中药味较多成分复杂，且提取步骤较多，将其含量限度定位0.60mg/粒。即规定含量测定的限度为：本品每粒含三七以人参皂苷Rg1(C₄₂H₇₂O₁₄)计，不得少于0.6mg。

二、治疗实验性慢性阻塞性肺病的药效学试验

方法：分别采用内毒素(LPS)和烟熏法复制大鼠COPD模型，气管内注入博来霉素复制大鼠肺纤维化模型，分别于给药2周、4周及8周用生物信号采集系统检测肺功能；用药8周后，检测上述各组动物的肺条张力，支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数及分类计数；采用ELISA法检测BALF和肺组织SOD、MDA、NO、IL-8、IL-17、ET-1的含量。采用琼脂单相免疫扩散法测定IgG、IgA和IgM水平。HE染色进行肺组织及肺血管病理学观测，Masson染色进行肺纤维化病理学检测。二甲苯致小鼠耳肿胀、大鼠棉球肉芽肿方法观测其抗炎作用；结核杆菌用改良罗氏培养基，肺炎克雷伯杆菌用LB营养琼脂培养基，肺炎链球菌用脑心浸出液肉汤，绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌菌株用营养肉汁琼脂培养基分别检测药物的最小抑菌浓度，如表22。分别采用浓氨水、枸橼酸方法及电刺激猫喉上神经引咳法评价对咳嗽的影响；乙酰胆碱与组胺混合液喷雾法检测对喘息的影响，用生物信号采集系统检测豚鼠离体气管平滑肌张力。气管段酚红法及毛细管法检测药物对排痰量的影响。

结果：

1.百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD的影响

(1)对内毒素诱导COPD大鼠肺功能的影响：造模后2-8周，内毒素模型组的呼吸频率明显加快、潮气量明显减少、呼吸峰流值显著降低、呼吸阻力均显著增大(^bP<0.01)。与等时间点的模型组比较，125mg/kg百贝益肺胶囊用药8周、250mg/kg用药4-8周及500mg/kg百贝益肺胶囊、1mg/kg地塞米松及250mg/kg利肺片两种阳性对照药用药2-8周明显减慢呼吸频率、增加潮气量和呼吸峰流值、降低呼吸阻力(^cP<0.05，^dP<0.01)。与两种阳性对照药组比较，三种剂量的百贝益肺胶囊用药2-8周的作用均较弱(^efP<0.05)，具体如表2。

(2)对COPD大鼠肺条张力的影响：与模型组比较，500mg/kg百贝益肺胶囊、两种阳性对照药组的肺条张力均明显降低(^dP<0.01)，且作用强度相当，具体如表3。

(3)对COPD支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数及分类计数的影响：与模型组比较，125mg/kg百贝益肺胶囊无明显影响，250mg/kg百贝益肺胶囊仅减少白细胞总数及嗜酸性粒细胞计数，但弱于两种阳性对照药。500mg/kg百贝益肺胶囊及两种阳性对照药可明显减少白细胞总数及分类计数(^dP<0.01)，具体如表4。

(4)对COPD大鼠支气管肺泡灌洗液和肺组织抗氧化及炎性指标的影响：与模型组比较，125mg/kg百贝益肺胶囊对SOD、MDA及NO水平均无明显影响，250mg/kg百贝益肺胶囊仅降低MDA水平，对SOD及NO无明显影响，500mg/kg百贝益肺胶囊、两种阳性对照药均明显升高SOD及NO水平，降低MDA水平(^cP<0.05，^dP<0.01)。

与模型组比较，3种剂量的百贝益肺胶囊均明显降低IL-8、IL-17及ET-1水平(^cP<0.05，^dP<0.01)，但125及250mg/kg百贝益肺胶囊的作用均弱于两种阳性对照药(^efP<0.05)，具体如表5和表6。

(5)对COPD大鼠肺组织免疫蛋白的影响：与模型组比较，125mg/kg百贝益肺胶囊均无明显影响，250mg/kg组仅升高IgG和IgM水平，500mg/kg百贝益肺胶囊升高IgG、IgA及IgM的水平(^cP<0.05，^dP<0.01)，具体如表7。

(6)肺组织、肺血管病理学

模型组：支气管管腔可见明显狭窄，支气管纤毛上皮细胞变性、坏死、脱落；支气管周围可见大量炎性细胞浸润；肺泡结构紊乱，肺泡壁变薄或断裂，肺泡腔扩大，融合成肺大泡。肺动脉壁明显增厚，出现内皮细胞脱落现象，有大量炎性细胞浸润，血管平滑肌细胞增殖明显。

高剂量百贝益肺胶囊组可减轻支气管纤毛上皮细胞变性、坏死、脱落，减少炎性细胞浸润，改善肺泡结构。改善肺动脉的病理学变化，具体如图6和图7所示。

2.百贝益肺胶囊对烟熏法诱导大鼠COPD的影响

(1)对COPD大鼠肺功能的影响：造模后2-8周，烟熏模型组的呼吸频率明显加快、潮气量明显减少、呼吸峰流值均显著降低、呼吸阻力均显著增大(^bP<0.01)。125mg/kg百贝益肺胶囊用药2-8及250mg/kg用药2-4周无明显影响呼吸频率，用药8周减慢呼吸频率(^cP<0.01)，但弱于两种阳性对照药。125、250mg/kg百贝益肺胶囊用药2-8周对呼吸峰流值、潮气量及呼吸阻力无明显影响，500mg/kg可改善上述指标，但作用均弱于两种阳性对照药(^efP<0.05)，具体如表8。

(2)对COPD大鼠肺条张力的影响：与模型组比较，250及500mg/kg百贝益肺胶囊、两种阳性对照药组的肺条张力均明显降低(^dP<0.01)，且作用强度相当，具体如表9。

(3)对COPD支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数及分类计数的影响：与模型组比较，125mg/kg百贝益肺胶囊无明显影响，250mg/kg百贝益肺胶囊仅减少白细胞总数及嗜酸性粒细胞计数，但弱于两种阳性对照药。500mg/kg百贝益肺胶囊可明显减少白细胞总数及分类计数(^dP<0.01)，具体如表10。

(4)对COPD大鼠支气管肺泡灌洗液和肺组织抗氧化及炎性指标的影响：与模型组比较，125及250mg/kg百贝益肺胶囊升高SOD水平，但对MDA及NO无明显影响，500mg/kg百贝益肺胶囊明显升高SOD及NO水平，降低MDA水平(^cP<0.05，^dP<0.01)。

与模型组比较，250及500mg/kg百贝益肺胶囊明显降低IL-8、IL-17及ET-1(^cP<0.05，^dP<0.01)，但弱于两种阳性对照药(^efP<0.05)，具体如表11和表12。

(5)对COPD大鼠肺组织免疫蛋白的影响：与模型组比较，250mg/kg组仅升高IgG和IgM水平，500mg/kg百贝益肺胶囊升高IgG、IgA及IgM的水平(^cP<0.05，^dP<0.01)，具体如表13。

(6)肺组织、肺血管病理学

模型组：支气管管腔可见明显狭窄，支气管纤毛上皮细胞变性、坏死、脱落；支气管周围可见大量炎性细胞浸润；肺泡结构紊乱，肺泡壁变薄或断裂，肺泡腔扩大，融合成肺大泡。肺动脉壁明显增厚，出现内皮细胞脱落现象，有大量炎性细胞浸润，血管平滑肌细胞增殖明显。

高剂量百贝益肺胶囊组可减轻支气管纤毛上皮细胞变性、坏死、脱落，减少炎性细胞浸润，改善肺泡结构。改善肺动脉的病理学变化，具体如图8和图9所示。

3.百贝益肺胶囊对博来霉素诱导大鼠肺纤维化的影响

(1)对肺纤维化大鼠肺功能的影响：125mg/kg百贝益肺胶囊对肺功能4项指标均无明显影响，250mg/kg对呼吸峰流值无明显影响，可减慢呼吸频率和呼吸阻力，增加潮气量，作用弱于等效剂量的利肺片，具体如表14。

(2)对肺纤维化大鼠肺条张力的影响：与模型组比较，125及250mg/kg百贝益肺胶囊对肺条张力无明显影响，500mg/kg百贝益肺胶囊组的张力明显降低(^dP<0.01)，具体如表15。

(3)对肺纤维化支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数及分类计数的影响：与模型组比较，125mg/kg百贝益肺胶囊无明显影响，250mg/kg百贝益肺胶囊仅减少白细胞总数及嗜酸性粒细胞计数，但弱于两种阳性对照药。500mg/kg百贝益肺胶囊明显减少白细胞总数及分类计数(^dP<0.01)，具体如表16。

(4)对肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液和肺组织抗氧化及炎性指标的影响：与模型组比较，125mg/kg百贝益肺胶囊对SOD、MDA及NO水平均无明显影响，250mg/kg百贝益肺胶囊仅降低MDA水平，升高SOD水平，对肺组织的NO无明显影响，弱于两种阳性对照药；500mg/kg百贝益肺胶囊明显升高SOD及NO水平，降低MDA水平(^cP<0.05，^dP<0.01)。

与模型组比较，中、高剂量的百贝益肺胶囊均明显降低IL-8、IL-17及ET-1水平(^cP<0.05，^dP<0.01)，但250mg/kg百贝益肺胶囊的作用均弱于两种阳性对照药(^efP<0.05)，具体如表17和表18。

(5)对肺纤维化大鼠肺组织免疫蛋白的影响：与模型组比较，125mg/kg百贝益肺胶囊均无明显影响，250mg/kg组仅升高IgG和IgA水平，对IgM无明显影响；500mg/kg百贝益肺胶囊升高IgG、IgA及IgM的水平(^cP<0.05，^dP<0.01)，具体如表19。

(6)肺组织、肺血管病理学(HE染色)

模型组：支气管管腔可见明显狭窄，支气管纤毛上皮细胞变性、坏死、脱落；支气管周围可见大量炎性细胞浸润；肺泡结构紊乱，肺泡壁变薄或断裂，肺泡腔扩大，融合成肺大泡。肺动脉壁明显增厚，出现内皮细胞脱落现象，有大量炎性细胞浸润，血管平滑肌细胞增殖明显。

高剂量百贝益肺胶囊组可减轻支气管纤毛上皮细胞变性、坏死、脱落，减少炎性细胞浸润，改善肺泡结构。改善肺动脉的病理学变化，具体如图10所示。

(7)肺纤维化(Masson染色)

模型组可见肺泡腔和间质内肌成纤维细胞增生聚集，出现大量宽带状及片状胶原纤维，呈弥漫纤维化改变，胶原纤维大量堆积。

250及500mg/kg百贝益肺胶囊组的肌纤维增生、胶原纤维较模型组明显减少，具体如图11所示。

4.百贝益肺胶囊对炎症的影响

(1)对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响：200、400mg/kg的百贝益肺胶囊均无明显抑制肿胀作用，800mg/kg抗炎消肿作用明显，但弱于阿司匹林，具体如表20。

(2)对大鼠棉球肉芽肿的影响：与模型组比较，250、500mg/kg的百贝益肺胶囊及两种阳性对照药均明显减轻肉芽肿重量(^a P<0.05，^b P<0.01)，250mg/kg百贝益肺胶囊的作用弱于两种阳性对照药，具体如表21。

5.百贝益肺胶囊对咳嗽的影响：在浓氨水致小鼠咳嗽、枸橼酸引发豚鼠咳嗽及电刺激猫喉上神经引咳模型中，低剂量的百贝益肺胶囊均无明显作用，中、高剂量可减少咳嗽次数、延长潜伏期、提高电刺激阈值，中剂量的作用弱于利肺片及可待因，具体如表23-25所示。

6.对喘息的影响：在乙酰胆碱和组织胺混合液喷雾引喘模型中，三种剂量的百贝益肺胶囊均延长豚鼠喘息潜伏期，低、中剂量的百贝益肺胶囊的作用均弱于阳性对照药氨茶碱及利肺片，具体如表26所示.

7.对离体豚鼠气管条张力的影响：百贝益肺胶囊呈浓度依赖性抑制组胺诱导的豚鼠气管条的收缩，但均弱于氨茶碱(^cP<0.01)，具体如表27所示.

8.对排痰量的影响：小鼠气管段酚红法结果表明，中、高剂量明显增加OD值，但弱于氯化铵及利肺片。大鼠毛细管法结果显示250、500mg/kg百贝益肺胶囊增加毛细管中痰液长度，均弱于氯化铵，具体如表28和表29所示.

结论：

(1)百贝益肺胶囊对内毒素及烟熏引起的大鼠慢性阻塞性肺病(COPD)具有改善肺功能和肺组织病理学变化；

(2)百贝益肺胶囊对博来霉素引起的肺纤维化具有改善作用；

(3)减少炎性细胞、降低IL-8、IL-17、ET-1及MDA水平，增加SOD及NO水平可能是作用机理之一；

(4)百贝益肺胶囊具有抑菌、抗炎、止咳、平喘和祛痰作用；

(5)体外最小抑菌浓度：百贝益肺胶囊体外主要对肺炎链球菌及肺炎克雷伯杆菌的抑制作用较强，对结核杆菌和金葡菌有一定抑制作用。

表2.百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD肺功能的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与等时间点正常对照组及假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与等时间点模型组比较；^eP<0.05，与等时间点地塞米松组比较，^fP<0.05，与等时间点利肺片组比较.

表3.百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD离体肺条张力的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组及假处理组比较；^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表4.百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD支气管肺泡灌洗液白细胞总数及分类计数的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组及假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，

^fP<0.05，与利肺片组比较.

表5.百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD支气管肺泡灌洗液抗氧化及炎性指标的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组及假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表6.百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD肺组织抗氧化及炎性指标的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组及假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表7.百贝益肺胶囊对内毒素诱导大鼠COPD肺组织免疫蛋白的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组及假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表8.百贝益肺胶囊对烟熏诱导大鼠COPD肺功能的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与等时间点正常对照组及假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与等时间点模型组比较；^eP<0.05，与等时间点地塞米松组比较，^fP<0.05，与等时间点利肺片组比较.

表9.百贝益肺胶囊对烟熏诱导COPD大鼠离体肺条张力的影响

n＝10，x±s，^b P<0.01，模型组与正常对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表10.百贝益肺胶囊对烟熏诱导大鼠COPD支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数及分类计数的影响

n＝10，x±s，^aP<0.05，^bP<0.01，模型组与正常对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表11.百贝益肺胶囊对烟熏诱导大鼠COPD支气管肺泡灌洗液(BALF)中抗氧化及炎性指标的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表12.百贝益肺胶囊对烟熏诱导大鼠COPD肺组织中抗氧化及炎性指标的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表13.百贝益肺胶囊对烟熏诱导大鼠COPD肺组织免疫指标的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表14.百贝益肺胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化肺功能的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组或假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表15.百贝益肺胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化离体肺条张力的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表16.百贝益肺胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数及分类计数的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表17.百贝益肺胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化支气管肺泡灌洗液(BALF)中抗氧化及炎性指标的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组或假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表18百贝益肺胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化肺组织中抗氧化及炎性指标的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组或假处理组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表19.百贝益肺胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化肺组织免疫蛋白的影响

n＝10，x±s，^bP<0.01，模型组与正常对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与模型组比较；^eP<0.05，与地塞米松组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表20.百贝益肺胶囊对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的影响

n＝10，x±s，^aP<0.05，^bP<0.01，与空白对照组比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与阿司匹林及利肺片组比较.

表21.百贝益肺胶囊对大鼠棉球肉芽肿的影响

n＝10，x±s，^aP<0.05，^bP<0.01，与模型对照组比较；^cP<0.05，与地塞米松组比较，^dP<0.05，与利肺片组比较.

表22.最小抑菌浓度(MIC)

表23.百贝益肺胶囊对浓氨水致小鼠咳嗽的影响

n＝10，x±s，^a P<0.05，^b P<0.01，与空白对照组比较；^cP<0.05，与利肺片组比较；^dP<0.01，与磷酸可待因阳性组比较.

表24.百贝益肺胶囊对枸橼酸致豚鼠咳嗽的影响

n＝10，x±s，^cP<0.05，^dP<0.01，与空白对照组比较；^eP<0.05，与磷酸可待因阳性组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表25.百贝益肺胶囊对电刺激猫喉上神经引咳的影响

n＝10，x±s，^aP<0.05，^bP<0.01，与同组别给药前比较；^cP<0.05，^dP<0.01，与空白对照组比较；^eP<0.05，与可待因组比较，^fP<0.05，与中药阳性对照组比较.

表26.百贝益肺胶囊对喷雾法诱发豚鼠喘息的影响

n＝10，x±s，^cP<0.05，^dP<0.01，与空白对照组比较；^eP<0.05，与氨茶碱组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表27.百贝益肺胶囊对组胺诱导豚鼠离体气管平滑肌张力变化的影响

n＝6，x±s，^bP<0.01，与生理盐水组比较；^cP<0.01，与氨茶碱组比较.

表28.百贝益肺胶囊对小鼠祛痰的影响(气管段酚红法)

n＝10，x±s，^dP<0.01，与空白对照组比较；^eP<0.05，与氯化铵组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

表29.百贝益肺胶囊对大鼠祛痰的影响(毛细管法)

n＝10，x±s，^cP<0.05，^dP<0.01，与空白对照组比较；^eP<0.05，与氯化铵组比较，^fP<0.05，与利肺片组比较.

三、百贝益肺胶囊治疗COPD的临床试验

目的：在百贝益肺胶囊临床已确切的适应证基础上，再进一步评价百贝益肺胶囊治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺阴不足证的有效性及安全性。

方法：依据纳入标准，选取COPD(肺阴不足证)患者120例。将患者随机分为试验组合对照组，试验组90例，对照组30例。试验组：口服百贝益肺胶囊，每次3粒，一日3次。对照组：口服养阴清肺丸，每次1丸，一日3次。用药疗程均为2周。观察试验组与对照组患者治疗前后的中医证候和各单项主症、次症及实验室检查指标(血常规、肝肾功、尿常规、粪便常规以及心电图)的变化，对试验药和对照药的有效性及安全性进行评价。

结果：

1.试验组与对照组患者治疗前后的中医证候总积分及中医各主症与次症积分进行组内比较，结果显示，差异均有显著性意义(P＜0.01)，说明两组药物都有明显的治疗效果。

2.在改善中医证候疗效上，治疗后试验组的有效率为83.75％，对照组有效率为75.0％，经秩和检验，试验组与对照组组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明试验组在改善中医证候疗效方面优于对照组。

3.治疗前后两组患者各中医单项症状积分变化的比较：试验组在改善咳嗽、气喘症状方面明显优于对照组(P＜0.01)；在改善胸闷气短症状方面优于对照组(P＜0.05)，而在改善痰色性状、口感咽燥症状上二者比较未见明显差异(P＞0.05)。

4.将治疗前后的肺功能情况进行比较：两组患者治疗前后的肺功能情况组内比较差异无统计学意义(P＞0.05)，说明试验组与对照组在改善肺功能方面效果不明显。但根据表格，治疗后试验组患者的肺功能有所改善，而对照组患者的肺功能改善甚微。

5.治疗前后两组患者血常规、肝功、肾功组内比较差异无统计学意义(P＞0.05)。其余安全性指标均未发现明显异常变化，实验过程中也未出现明显不良反应和副作用。

结论：百贝益肺胶囊治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺阴不足证具有改善其中医证候的作用，且在改善咳嗽、气喘、胸闷气短等症状方面效果优于对照组。是用安全，未发现明显不良反应及毒副作用。

四、百贝益肺胶囊治疗肺结核的临床试验

1临床资料

1.1病例来源

本试验所观察研究的72例患者均来自云南省传染病专科医院住院和门诊病人，符合纳入标准，考虑到脱落因素，按随机数字表分为治疗组、对照组各36例。

1.2诊断标准

1.2.1西医诊断标准

符合2017年11月09日发布的《中华人民共和国卫生行业标准-肺结核诊断(WS288-2017)》关于肺结核的诊断标准，以及WHO对2009年制定《结核病诊疗指南(第四版)》最新修订的《WHO药物敏感结核病治疗和患者关怀指南(2017更新版)，2016年1月13日英国国家卫生与临床优化研究所发布2016NICE指南：结核病(NG.33)。

1.2.2中医辨证标准

中医证候诊断标准根据《中医内科常见病诊疗指南·中医病证部分》(中华中医药学会2008年8月5日发布)以及肺结核的诊断依据、证候分类、疗效评定—中华人民共和国中医药行业标准《中医内科病证诊断疗效标准》(ZY/T001.1-94)、《中医内科学》(吴勉华王新月主编2012版)。

肺阴亏损证：(1)干咳无痰，咳声短促，或咯少量黏痰，或痰中带血丝；(2)潮热盗汗，伴胸部隐隐闷痛，口干咽燥，手足心热，皮肤干灼；(3)舌质红，舌苔薄，脉细带数。

具备(1)中2项，结合第(2)、(3)项，可辨证为肺阴亏损证。

1.3疗效判定

1.3.1证候分级量化表，见表30。

表30肺结核肺阴亏损证候分级量化表

注：轻度，0-7分，中度8-14分，重度15-21分。

1.3.2痰涂片结果，见表31。

表31痰涂片结果评价标准

分类	抗酸杆菌	评价
			1	连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌	-
2	报告抗酸杆菌菌数，1-8条/300个视野
			3	报告抗酸杆菌阳性，3-9条/100个视野	+
4	报告抗酸杆菌阳性，1-9条/10个视野	++
			5	报告抗酸杆菌阳性，1-9条/每个视野	+++
6	报告抗酸杆菌阳性，≥10条/每个视野	++++

1.3.3痰培养结果，见表32。

表32痰培养结果评价标准

分类	结核分枝杆菌	评价
			1	无菌落生长报告培养阴性	-
2	菌落生长不及斜面面积1/4时	实际菌落数
			3	菌落占斜面面积1/4	+
4	菌落占斜面面积1/2	++
			5	菌落占斜面面积3/4	+++
6	菌落布满培养基斜面	++++

备注：为便于统计，仅将治疗组和对照组患者痰涂片或痰培养结果分为阴性和阳性。

1.3.4疾病病情程度分级标准

(1)明显吸收:病灶吸收≥1/2原病灶；

(2)吸收:病灶吸收<1/2原病灶；

(3)无改变:病灶无明显变化；

(4)恶化:病灶扩大或播散。

1.4试验病例标准

1.4.1纳入病例标准

(1)符合肺结核的西医诊断标准患者；

(2)符合中医肺痨肺阴亏损证辨证诊断标准；

(3)年龄在18-70岁之间；

(4)签署知情同意，自愿受试。

凡符合上述标准者，就可纳入试验。

1.4.2排除病例标准

(1)不符合纳入标准中任意一条者；

(2)拒绝中药治疗的患者；

(3)过敏体质或既往对多种药物有过敏史的患者，对本试验任何一种药物严重过敏者；

(4)合并肝、肾、自身免疫性疾病，合并严重肺部或皮肤感染患者；

(5)病情危重，难以对该药的有效性和安全性作出确切评价者；

(6)资料不全等影响疗效判断者；

(7)虽符合中西医诊断标准但正参加其他临床试验研究者。

凡属于上述标准，即可排除试验。

1.4.3脱落病例标准

(1)出现过敏反应或严重不良反应，根据医生判断应停止试验者；

(2)受试者依从性差；

(3)试验过程中，患者继发感染，发生严重并发症和特殊生理变化者；

(4)患者主动向主管医生提出退出试验者；

(5)患者虽未退出试验，但不再接受治疗用药及检查而失去联系者。

所有脱落病例，均应在病例报告表中填写脱落的原因，如患者出现不良反应，均应填写不良反映统计表。

1.4.4剔除病例标准

(1)被误纳入者，不符合纳入标准；

(2)符合纳入标准，纳入后但未曾用药者，或服药未按照试验者规定，或无任何随访记录者；

(3)经菌型鉴定后发现感染非结核杆菌导致者。

1.4.5中止试验标准

(1)试验中发生严重危害患者安全的问题；

(2)试验中发现药物治疗效果太差，临床价值不高；

(3)试验中发现试验设计方案有重大失误，或者试验中出现重要偏差，难以评价药物效应；

(4)研究者要求中止；

(5)主管部门要求撤销试验等。

2试验方法

2.1试验设计

(1)设计方法：采用分层随机化、区组随机化、平行对照试验的设计方法，全部临床试验由试验者在云南省传染病医院住院部及门诊诊室完成。

(2)样本含量：试验病例数预计60例，治疗组和对照组比例为1比1，考虑脱落病例因素，将病例数增加20％，即每组增加6例，故受试病例数总共为72例，治疗组与对照组各36例。

(3)随机分组方法：用随机数字表分组，分别对72例受试者(治疗组和对照组各36例)进行随机安排。

(4)对照法：对照组予单纯西医内科常规抗肺结核基础治疗。治疗组在此基础上予口服百贝益肺胶囊治疗，对比研究其增效性以及减毒性，为临床肺结核在西药常规治疗基础上结合彝族药治疗提供参考。

(5)盲法设计：由于治疗组和对照组治疗方式有所不同，故本试验采用“开放”法，即不进行设盲设计。

2.2治疗方案

2.2.1试验药物的名称和规格

百贝益肺胶囊，云南永孜堂制药有限公司生产的彝族药。规格：0.3g*12s*2板，批准文号：国药准字Z20025124。

2.2.2用药方案

治疗组与对照组均使用内科常规基础治疗。

⑴治疗组：在内科常规基础治疗的基础上，采用百贝益肺胶囊，每次3粒，每日3次。

⑵对照组：内科常规基础治疗。根据卫生部《肺结核门诊诊疗规范》(2012版)^[8]，推荐的药物治疗方案执行：

①初治肺结核：2HRZE/4HR，2H3R3Z3E3/4H3R3。

②复治肺结核：2HRZES/6HRE，3HRZE/6HRE。有药敏试验结果患者可根据药敏试验结果以及既往用药史制订治疗方案。

H:异烟肼，R:利福平，Z：吡嗪酰胺，E：乙胺丁醇，S：链霉素。

在进行化疗的同时，可针对患者的并发症或合并症进行治疗。

⑶疗程：4周。

2.2.3合并用药

(1)除试验所规定用药外，禁止服用其它影响试验药物疗效的中药或者西药；

(2)合并疾病所必须药物或治疗，必须在病例报告表中详细记录(包括药名及用量和时间、疗法名及使用次数和时间等)。

2.3试验药物的准备和管理

(1)按相应编号的药物对应相应编号病人，逐例发药；

(2)每次进行复诊时，试验者须如实记录受试者使用的药品数量以及时间，并认真及时记录。

2.4观测指标及观察时点

2.4.1安全性指标

(1)血、尿、大便常规；

(2)肝功能(ALT、AST)、肾功能(UA、BUN、Cr)；

(3)胸部CT。

以上检查指标应于治疗前后各作1次，如果发现检查结果治疗前正常，但治疗后出现异常，复查直至正常。

2.4.2疗效性指标

(1)中医证候疗效评价；

(2)疾病疗效评价指标。

2.4.3观查时点

(1)试验开始用药后，受试者于第2周后复诊1次，第4周后复诊1次，将症状、体征记录，并同时记录不良事件、合并用药等情况。

(2)试验用药结束后，复查中医证候评分，痰菌检查结果，以及查看胸部影像病灶吸收状况，并作有效率和治愈率对比评估。

(3)随访期：试验药物治疗结束后，试验者须进行电话随访(2个月)。

2.5疗效判定标准

2.5.1中医证候疗效评价

(1)临床痊愈：中医临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≥95％；

(2)显效：中医临床症状、体征明显改善，证候积分减少≥70％；

(3)有效：中医临床症状、体征均有好转，证候积分减少≥30％；

(4)无效：中医临床症状、体征均无明显改善甚或加重，证候积分减少不足30％。

注：计算公式：疗效指数＝(治疗前积分和-治疗后积分和)/治疗前积分和×100％

2.5.2疾病疗效评价

(1)试验者于治疗前收集受试者的即时痰、晨痰、夜间痰各一份进行涂片检查或痰菌培养检查，于治疗至4周末再次收集一份随机痰、晨痰、夜间痰进行涂片检查或痰菌培养检查。

痰菌阴转率＝(痰菌阴转患者例数/涂阳或痰菌培养阳性患者登记数)×100％。

(2)胸部CT，治疗前、治疗后4周末各1次，对比治疗前后胸部影像病灶吸收情况。评价方法按照1982年全国结核病学会制定的标准分为:

胸部CT病灶疗效评价:

明显吸收:病灶吸收≥1/2原病灶；

吸收:病灶吸收<1/2原病灶；

无改变:病灶无明显变化；

恶化:病灶扩大或播散。

2.6统计分析方法

本试验采用SPSS22.0版本软件进行统计分析。符合正态分布的各组计量资料，均采用均数±标准差进行统计描述，同组比较用配对样本t检验，组间比较用两独立样本t检验，计数资料用X²检验。对于等级资料以及不符合正态分布的计量资料采用秩和检验。t检验和秩和检验均以P＜0.05作为有显著性统计学意义。

3数据与统计结果

3.1一般资料分析

所研究的72例肺结核的患者均为云南省传染病专科医院2017年12月～2019年3月住院及门诊病人。其中，受试者因为自服其他治疗药物，影响本试验疗效以及安全性，4例退出试验，失联4例。脱落后剩64例，其中，治疗组31例，对照组33例。

3.1.1性别

符合研究的64例病例中，治疗组：男性17例，女性14例；对照组：男性17例，女性16例。治疗组和对照组两组性别构成情况，见表33、图1。

表33两组性别构成比较

将本试验治疗组与对照组两组受试者性别进行比较，X²检验结果无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

3.1.2年龄

符合研究的64例患者中，其中治疗组的31例，年龄分布在18岁～70岁，平均年龄44.19±14.54岁；对照组的33例，年龄分布在18～70岁，平均年龄44.18±15.42岁。年龄组经检验符合正态分布，采用独立样本t检验进行检验，t＝-0.003，p＝0.998＞0.05，说明两组患者年龄分布比较差异无统计学意义，提示两组患者在年龄上具有可比性。见表34。

表34治疗组与对照组年龄组间比较

表34经独立样本t检验，将本试验治疗组和对照组的受试者的年龄进行组间比较，发现无统计学意义(P>0.05)。

3.1.3病程

符合研究的64例患者中，由于两组患者病程不符合正态分布，故将病程以中位数±四分位间距表示，其中治疗组31例，表示为：23±70.5；对照组33例，表示为：6±101。见表35。

表35两组患者病程比较

表35：由于本试验治疗组和对照组患者的病程是不符合正态分布的，因此我们将病程以中位数±四分位间距表示，经秩和检验，对治疗组和对照组患者病程进行比较，发现无统计学意义(P>0.05)。

3.1.4治疗前中医证候积分组间比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗前积分表示为：7.65±1.76；对照组33例，治疗前积分表示为：7.64±2.23。t：0.017，P：0.986。见表36。

表36治疗前两组中医证候积分组间对比

表36：将本试验治疗组和对照组患者治疗前的中医证候积分进行比较，采用独立样本t检验，结果无统计学意义(P>0.05)。

3.1.5治疗前痰涂片或痰培养组间比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗前痰涂片或痰培养秩均值为：32.65，秩和为：1012.00；对照组33例，治疗前痰涂片或痰培养秩均值为：32.36，秩和为：1068.00。Z：-0.073，P：0.942。见表37、图13。

表37治疗前痰涂片或痰培养组间比较

表37：本试验治疗组和对照组患者治疗前痰涂片或痰培养结果(分为阴性和阳性)为等级资料，经过秩和检验，将治疗组和对照组患者治疗前的痰涂片或痰培养结果进行比较，发现无统计学意义(P>0.05)。

3.2疗效比较

3.2.1治疗前后痰涂片或痰培养结果组内比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗后痰涂片或痰培养秩均值为：8.50，秩和为：136.00，Z：-4.000，P：0.000；对照组33例，治疗后痰涂片或痰培养秩均值为：5.00，秩和为：45.00，Z：-3.000，P：0.003。见表38。

表38患者治疗前后痰涂片或痰培养组内比较

组别	例数	秩均值	秩和	Z	P
						治疗组	31	8.50	136.00	-4.000	0.000
对照组	33	5.00	45.00	-3.000	0.003

表38：治疗结束后，用配对秩和检验对治疗组患者和对照组患者分别进行治疗前后痰涂片或痰培养结果的组内对比，结果均有统计学意义(P<0.01)。说明本试验两种治疗方式均有较好的治疗效果。

3.2.2治疗前后中医证候积分组内比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗前中医证候积分为：7.65±1.76，治疗后积分为：2.81±1.89。t：14.742，P：0.000；对照组33例，治疗前中医证候积分为：7.64±2.23，治疗后积分为：4.00±2.36。t：11.608，P：0.000。见表39。

表39治疗前后中医证候积分组内比较

组别	n	治疗前积分	治疗后积分	t	P
						治疗组	31	7.65±1.76	2.81±1.89	14.742	0.000
对照组	33	7.64±2.23	4.00±2.36	11.608	0.000

表39：经配对样本t检验表明，治疗结束后，治疗组患者和对照组患者中医证候积分分别进行组内前后对比，结果均具有统计学意义(P<0.01)。说明从中医证候角度看，本试验两种治疗方式均有较好的治疗效果。

3.2.3治疗后痰涂片或痰培养结果组间比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗后痰涂片或痰培养秩均值为：28.63，秩和为：887.50，治疗前阳性患者20例，转阴患者16例，阴转率80％；对照组33例，治疗后痰涂片或痰培养秩均值为：36.14，秩和为：1192.50，治疗前阳性患者21例，转阴患者9例，阴转率42.86％。Z：-2.149，P：0.032。见表40、表41、图14。

表40两组治疗后痰涂片或痰培养结果组间比较

表41涂阳患者阴转率

分组	阳性患者	转阴患者	阴转率(％)
				治疗组	20	16	80.00
对照组	21	9	42.86

表40、表41：治疗结束后，采用秩和检验对本试验治疗组与对照组患者进行治疗后痰涂片或痰培养结果组间对比，结果有统计学意义(P＜0.05)。治疗组患者的痰涂片或痰培养在治疗后涂阳患者例数是低于对照组的，说明治疗组的治疗效果是优于对照组的。

3.2.4治疗后中医证候积分组间比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗后积分表示为：2.81±1.89；对照组33例，治疗后积分表示为：4.00±2.36。t：-2.226，P：0.030。见表42。

表42治疗后中医证候组间比较

表42：经独立样本t检验，将本试验治疗后的治疗组和对照组患者的中医证候积分进行组间比较，结果具有统计学差异(P值＜0.05)，治疗组患者的中医证候积分在治疗后是低于对照组的，基于中医证侯角度来说，本试验治疗组的疗效比对照组好。

3.2.5治疗后疗效比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗后胸部CT病灶无明显吸收病例，吸收27例，无改变4例，无恶化病例，总吸收率为87.10％；对照组33例，治疗后胸部CT病灶无明显吸收病例，吸收21例，无改变12例，无恶化病例。Z：-2.149；P：0.032。治疗组31例，治疗后中医症候疗效判定治愈3例，显效8例，有效19例，无效1例，总有效率96.77％；对照组33例，治疗后中医症候疗效判定治愈1例，显效7例，有效15例，无效10例。Z:-2.231；P：0.026。见表43、表44、图15、图16。

表43胸部CT疗效评价

表43：将本试验治疗组与对照组的疗效进行秩和检验，具有统计学意义(P＜0.05)。治疗组胸部影像学的病灶吸收率是高于对照组的。

表44中医证候疗效比较

表44：将本试验的治疗组和对照组患者中医证候疗效进行秩和检验，具有统计学意义(P<0.05)，说明治疗组基于中医证候疗效的治疗有效率高于对照组。

3.3安全性指标

3.3.1治疗前后血常规及肾功组内比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，对照组33例，见表45。

表45治疗前后血常规、肾功组内比较

表45：经配对样本t检验表明，治疗组的RBC前后对照有统计学意义(P<0.05)，治疗后的RBC值较前降低且处于正常值范围。除以上几项外，其他指标在治疗前后对比无统计学意义(P>0.05)。

3.3.2两组患者治疗前血尿酸及肝功能比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗前UA：294.10±42.13，ALT：19.33±7.02，AST：21.77±6.87。对照组33例，治疗前UA：295.94±41.33，ALT：19.70±8.40，AST：21.21±6.26。见表46。

表46治疗前UA、ALT、AST组间比较

组别	例数	UA	ALT	AST
					治疗组	31	294.10±42.13	19.33±7.02	21.77±6.87
对照组	33	295.94±41.33	19.70±8.40	21.21±6.26

治疗组和对照组治疗前UA比较，t＝-0.177，P＝0.860，P＞0.05，无统计学意义。

治疗组和对照组治疗前ALT比较，t＝-0.193，P＝0.848，P＞0.05，无统计学意义。

治疗组和对照组治疗前AST比较，t＝0.342，P＝0.733，P＞0.05，无统计学意义。

3.3.3治疗前后血尿酸指标比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗前：294.10±42.13，治疗后：504.58±83.69，t：-17.272，P：0.000。对照组33例，治疗前：295.94±41.33，治疗后：555.67±89.77，t：-14.601，P：0.000。见表47。

表47治疗前后血尿酸组内比较

组别	例数	治疗前	治疗后	t	P
						治疗组	31	294.10±42.13	504.58±83.69	-17.272	0.000
对照组	33	295.94±41.33	555.67±89.77	-14.601	0.000

治疗4周后：两组间UA组间比较，t＝2.351，P＝0.022，P＜0.05。

治疗组和对照组治疗后血尿酸均有增高(P＜0.05)，说明抗肺结核药对受试者血尿酸有增高副作用，但治疗组受试者血尿酸在治疗后升高程度比对照组要低(P＜0.05)，说明百贝益肺胶囊在疗程中有降低血尿酸作用。

3.3.4治疗前患者胃肠道症状和过敏反应例数比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗前出现胃肠道症状例数为17例，轻微过敏反应13例，对照组33例，治疗前出现胃肠道症状例数为18例，轻微过敏反应16例。见表48。

表48治疗前胃肠道症状和轻微过敏反应病例比较组间比较

注：胃肠道症状包括：受试者出现恶心呕吐、腹胀腹痛、食欲差等副反应；轻微过敏反应包括：受试者出现轻微皮疹、瘙痒等。

两组患者在治疗前出现胃肠道症状和轻微过敏反应组间比较均无统计学差异(P＞0.05)，说明在治疗前两组患者出现胃肠道症状和轻微过敏反应病例数无明显关系。

3.3.5治疗后肝功能异常及胃肠道症状和过敏反应例数比较

符合研究的64例患者中，其中治疗组31例，治疗后出现ALT异常5例，AST异常8例，胃肠道症状15例，轻微过敏反应10例，对照组33例，治疗后出现ALT异常14例，AST异常17例，出现胃肠道症状例数为26例，轻微过敏反应12例。见表49。

表49治疗后ALT、AST异常及胃肠道症状和轻微过敏反应病例组间比较

注：胃肠道症状包括：受试者出现恶心呕吐、腹胀腹痛、食欲差等副反应；轻微过敏反应包括：受试者出现轻微皮疹、瘙痒等。

两组患者ALT、AST异常在治疗后有统计学差异(P＜0.05)，说明百贝益肺胶囊在疗程中有较明显保肝降酶作用；两组患者胃肠道症状例数在治疗后有统计学差异(P＜0.05)，说明百贝益肺胶囊在疗程中对减轻患者胃肠道症状有效；而轻微过敏反应症状例数在治疗后无统计学意义(P＞0.05)，表明百贝益肺胶囊在疗程中对减轻患者轻微过敏反应无明显效果。

3.3.6二便常规情况

试验过程中，治疗组和对照组患者大便常规和小便常规在治疗前后均未见明显异常，说明本试验两种治疗方案对大便和小便常规无明显影响。

4临床疗效分析

本设计方案采用随机、对照临床试验设计方法，将符合中医辨证的72例肺结核患者进行随机分组为对照组36例与治疗组36例。所研究的72例肺结核的患者均为云南省传染病专科医院2017年12月～2019年3月住院及门诊病人，4例受试者因自服用影响疗效及安全性的其他治疗药物退出试验，4例受试者失联。其余64中，治疗组31例，对照组33例。两组均予常规基础治疗。因为西医抗结核药物仍然是肺结核的常规治疗手段，故本试验选用常规基础治疗为基础对照，治疗组在此基础上予百贝益肺胶囊治疗，对比研究其优效性。

4.1胸部影像学病灶吸收疗效评价

治疗组总吸收率87.10％；对照组总有效率63.64％。两组间胸部影像学疗效比较具有统计学意义(P＜0.05)。说明治疗组病灶吸收率大于对照组，且两组治疗方案均有治疗效果，治疗组方案优于对照组。

4.2痰涂片或痰培养结果评价

将两组患者治疗前后的痰涂片或痰培养结果分别进行组内比较，结果具有统计学差异(P值＜0.01)，说明两组治疗方案均有治疗效果。

将治疗组和对照组在治疗前的痰涂片或痰培养结果进行组间比较，结果无统计学意义(P值＞0.05)，说明治疗前两组患者痰涂片或痰培养结果无明显差异。

将两组患者治疗后的痰涂片或痰培养结果进行组间比较，具有统计学差异(P<0.05)，治疗组患者的痰涂片或痰培养结果在治疗后均低于对照组。痰菌阴转率：治疗组阴转率80.00％；对照组阴转率42.86％。说明治疗组治疗效果优于对照组。

4.3中医证候积评价

治疗组总有效率96.77％，治愈率为9.68％；对照组总有效率69.70％，治愈率3.03％。治疗组疗效较对照组更优，有统计学意义(P＜0.05)。

将治疗组和对照组患者治疗后的中医证候积分分别进行组内比较，结果均有显著统计学差异(P＜0.01)，说明在中医证候上两组治疗方案均可改善证候症状。

将治疗组和对照组在治疗前的中医证候积分进行组间比较，结果无统计学意义(P＞0.05)，说明治疗前无差异。将治疗组和对照组在治疗后的中医证候积分进行组间比较，结果具有统计学差异(P＜0.05)。且对比两组患者的中医证候积分发现，治疗组患者治疗后积分低于对照组，可见治疗组的治疗方案较之对照组的更有优势。

4.4安全性评价

治疗组和对照组患者的UA均升高(P＜0.05)，且治疗组UA在治疗结束后升高程度较对照组低(P＜0.05)，说明抗结核西药有增高患者血尿酸的副作用，且百贝益肺胶囊在治疗过程中能降低患者血尿酸；两组患者ALT、AST异常在治疗后有统计学差异(P＜0.05)，说明百贝益肺胶囊在疗程中有较明显保肝降酶作用；两组患者胃肠道症状例数在治疗后有统计学差异(P＜0.05)，说明百贝益肺胶囊在疗程中对减轻患者胃肠道症状有效；而轻微过敏反应症状例数在治疗后无统计学意义(P＞0.05)，表明百贝益肺胶囊在疗程中对减轻患者轻微过敏反应无明显效果。其余安全性指标均处于正常范围。

百贝益肺胶囊结合常规基础治疗效果优于单纯常规基础治疗，使用安全，在减轻常规西药治疗毒副作用方面效果显著。

5结论

5.1通过百贝益肺胶囊结合内科常规抗肺结核基础治疗肺结核的临床观察，结果表明，百贝益肺胶囊结合常规抗肺结核基础治疗肺结核的患者多数在1个疗程(4周)内症状、体征有显著改善。治疗组胸部CT病灶吸收率大于对照组，且痰菌阴转率高于对照组。表明百贝益肺胶囊结合内科常规抗肺结核基础治疗能促进病灶吸收、加快痰菌转阴速度，治疗效果明显优于单纯内科常规抗肺结核基础治疗。

5.2在全部治疗过程中，未见受试者由于服用百贝益肺胶囊而出现病情加重，且百贝益肺胶囊具有降低患者血尿酸作用；有较明显保肝降酶作用；对减轻患者胃肠道症状有效；但对减轻患者轻微过敏反应无明显效果。其余安全性指标均处于正常范围。百贝益肺胶囊使用安全，在减轻常规西药治疗毒副作用方面效果显著。

综上所述，百贝益肺胶囊结合西医常规抗肺结核基础治疗效果优于单纯西医常规基础治疗，并且使用安全，具有减轻西药毒副作用功效。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (7)

1.一种百贝益肺胶囊的质量控制方法，其特征在于，包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法，具体如下：

第一，原料控制：

所述的1000个单剂量百贝益肺胶囊由以下活性成分重量配比原料制备：

白及118g、浙贝母40g、桔梗67g、百部67g、百合67g、海浮石67g、紫菀67g、三七40g、功劳木67g、甘草20g；

以上白及、百部、紫菀、甘草、浙贝母、百合、三七、桔梗、功劳木九味药应符合《中国药典》中相应的药材标准，海浮石应符合《黑龙江省中药材标准》中相应的药材标准；

第二，制备方法控制：

步骤（1），将白及、海浮石、三七、浙贝母分别粉碎成细粉、灭菌备用；

步骤（2），将桔梗、百部、百合、紫菀、功劳木和甘草一起用水煎煮三次，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液常压下浓缩成常温下相对密度大于等于1.25的稠膏；三次煎煮加水质量分别是该6味药材总质量的6倍量、5倍量、4倍量，且第一次加水后，先浸泡1小时再进行煎煮；

步骤（3），将步骤（2）得到的稠膏与步骤（1）获得的细粉混匀后烘干，粉碎，过筛，装入胶囊，制成1000粒即得；

第三，鉴别方法：

A.镜检：

取本品置显微镜下观察：淀粉粒卵形、广卵形或椭圆形，直径6-56μm，脐点点状、裂缝状、人字状或马蹄状；草酸钙针晶成束或散在，针晶长18-88μm；

B.三七的薄层色谱检测：

取内容物5g，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用水饱和的正丁醇15ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，将体积比为15:40:22:10三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水混匀后10℃以下放置分层，取下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.浙贝母的薄层色谱检测：

取内容物5g，加浓氨试液3ml与三氯甲烷15ml，放置过夜，滤过，取续滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品和贝母素乙对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5-10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17:2:1的乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

D.甘草的薄层色谱检测：

取内容物2g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇15m1加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇提取三次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2-5ul、对照药材溶液2u1，分别点于同一含1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的主斑点；

E.白及的薄层色谱检测：

取内容物3g，加70%甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥至1ml，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5-10u1、对照药材溶液5ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为6:2.5:1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热5-10分钟，然后放置30-60分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

F.桔梗的薄层色谱检测：

取本品内容物7g，加甲醇40ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流1小时，放冷，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，用水25ml洗涤，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5-10u1、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的三氯甲烷-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

第四，含量测定方法：

按照《中国药典》高效液相色谱法测定；

a.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以体积比为18:82的乙腈-水为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于3000；

b.对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1 0.3mg的溶液，即得；

c.供试品溶液的制备：取20粒内容物，精密称定，混匀，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加水10ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水100ml洗脱，弃去水液；再用20%乙醇100ml洗脱，弃去20%乙醇洗脱液；继用95%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

d.测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

每粒含三七以人参皂苷Rg1计，不得少于0.6mg。

2.根据权利要求1所述的百贝益肺胶囊的质量控制方法，其特征在于，步骤（1）中，细粉粒径为80-100目；步骤（2）中，过滤采用80-100目筛，取筛下物。

3.根据权利要求1所述的百贝益肺胶囊的质量控制方法，其特征在于，步骤（3）中，过筛为过60目筛，取筛下物；烘干温度为70-80℃。

4.根据权利要求1所述的百贝益肺胶囊的质量控制方法，其特征在于，含量测定方法的c步骤中，D101型大孔吸附树脂柱内径为2cm，柱长为15cm。

5.权利要求1所述的百贝益肺胶囊的质量控制方法获得的百贝益肺胶囊在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用。

6.权利要求1所述的百贝益肺胶囊的质量控制方法获得的百贝益肺胶囊在制备治疗肺纤维化药物中的应用。

7.权利要求1所述的百贝益肺胶囊的质量控制方法获得的百贝益肺胶囊在制备治疗肺结核药物中的应用。

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