CN115586281A - 血清25-羟基维生素d的提取系统、方法及联合lc-msms检测法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了血清25‑羟基维生素D的提取系统、方法及联合LC‑MSMS检测法,其中提取方法,包括依次进行的I淋洗阶段和Ⅱ洗脱阶段,其中I淋洗阶段包括混匀(a)、左吸附(b)、右吸附(c)和移液(d),所述移液(d)为移出杂质;Ⅱ洗脱阶段包括混匀(e)、右吸附(f)、左吸附(g)和移液(h),所述移液(h)为移出25(OH)D洗脱液,提取方法可作为LC‑MSMS检测的前处理过程,也就是将25(OH)D洗脱液进样至LC‑MSMS仪器中,进行LC‑MS/MS分析。本发明方法利用交变的往复磁场使磁性纳米颗粒进行原位非接触式磁性搅拌,释放出其中夹杂的杂质,降低杂质干扰,提高样本净化效率。采用转移液体代替转移磁性纳米颗粒的原位处理方式,减少转移时磁性纳米颗粒丢失以及目标物氧化等问题,提高检测准确性与稳定性。
Description
技术领域
本发明属于25-羟基维生素D提取与检测技术领域,具体涉及血清25-羟 基维生素D提取系统、方法及联合LC-MSMS检测法。
背景技术
流行病学证据表明维生素D缺乏可导致自身免疫性疾病、癌症、心血管 疾病和肌肉骨骼功能下降等疾病。当前,临床上检测维生素D水平的金标准 之一是测量血清25-羟基维生素D[25(OH)D]的浓度,这对于诊断人体是否需 补充维生素D具有十分重要的指导意义。血清中25(OH)D的检测方法主要包 括液相色谱-串联质谱法(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)、高效液相色谱法和免疫测定法等。与其他检测方法相比, LC-MS/MS法能够实现对复杂基质中痕量目标物分离后进行高精确度和高灵 敏度的实时检测定量,但对生物样本前处理的要求较高,否则容易因为基质 效应,影响分析物的准确定量。
基于磁性纳米颗粒的固相萃取技术(Magnetic solid phase extraction,MSPE)是一种利用磁性纳米颗粒在复杂基质中分离痕量目标物的热门前处理技术。 MSPE能够在短时间内从待测体系中吸附并萃取低浓度待测物质,大大减少有 害有机溶剂的使用的同时还避免繁琐的过滤或离心等步骤,可作为LC-MS/MS 的一种高效前处理方式,在样本前处理领域具有极高的应用前景。但多数实 验室是通过手工移动永磁铁来收集磁球以及完成移液加液等步骤,这对实验 人员要较高的技能要求,也易出现人为因素导致检测结果的不稳定。此外, 磁性纳米颗粒在外加磁场中易产生团聚现象,团聚物中夹杂的杂质(如蛋白沉淀等)会干扰待测物的检测,限制了LC-MS/MS检测能力的进一步提高。
发明内容
针对现有技术存在的不足,本发明的目的是提供一种高效便捷提取25- 羟基维生素D的自动化原位磁固相萃取系统及方法,以解决前述问题,即手 工移动永磁铁来收集磁球以及完成移液加液等步骤对实验人员技能要求高、 易出现人为因素导致检测结果不稳定的问题和磁性纳米颗粒在外加磁场中易 产生团聚现象,团聚物中夹杂的杂质(如蛋白沉淀等)会干扰待测物检测的问题。
本发明第一目的,是提供一种原位磁固相萃取系统,所述原位磁固相萃 取系统由微振荡模块、磁分离模块以及移液模块组成,其中,微振荡模块由 振动马达和振动架组成,通过振动马达驱动样本管与振动架产生共振,使得 样本管在振动腔中快速自旋,从而使磁性纳米颗粒(Magnetic nanoparticles, MNPs)在溶液中充分分散并与目标物充分结合;磁分离模块由振动架两侧的 一对正对放置的线圈组组成,在混匀程序结束后交替开启,实现对MNPs的 往复迁移和集磁等过程;移液模块由移液针及其他移液相关模块组成,用于 样本或试剂的转移。
采用上述技术方案,本发明与目前商用磁固相萃取设备相比,利用共振 旋转使磁性纳米颗粒与生物样本中的待测目标物充分混合,提高前期磁微粒 对目标物的结合效率。之后利用交变的往复磁场使磁性纳米颗粒进行原位非 接触式磁性搅拌,释放出其中夹杂的杂质,从而降低杂质干扰,提高对样本 的净化效率。
本发明第二目的,是提供一种利用前述原位磁固相萃取系统萃取血清中 维生素D的提取方法,包括I淋洗阶段和Ⅱ洗脱阶段,其中I淋洗阶段包括混 匀(a)、左吸附(b)、右吸附(c)和移液(d);Ⅱ洗脱阶段包括混匀(e)、右吸附(f)、 左吸附(g)和移液(h)。
进一步地,所述I淋洗阶段前先进行加样混合处理,所述加样混合处理为 添加混匀血清样本、沉淀剂、蒸馏水和磁性纳米颗粒分散液,其中,所述沉 淀剂为体积比1:1的甲醇-乙腈溶液;所述磁性纳米颗粒分散液为0.01g/mL的 磁性纳米颗粒-甲醇溶液。
进一步地,所述加样混合处理中添加混合血清样本、沉淀剂、蒸馏水和 磁性纳米颗粒分散液的体积比为1:2:1:(0.2-0.9)。
优选地,所述加样混合处理中添加混合血清样本、沉淀剂、蒸馏水和磁 性纳米颗粒分散液的体积比为1:2:1:0.5。
进一步地,所述加样混合处理时间为4min。
进一步地,所述混匀(a)为淋洗液添加混匀,所述淋洗液为0.05%体积比 的甲酸-水溶液,所述淋洗液的添加量是样本体积的四倍。
进一步地,所述移液(d)为移出杂质。
进一步地,所述I淋洗阶段循环处理一至四次,每次处理时间为7min, 其中所述混匀(a)和移液(d)的处理时间各为1min,所述左吸附(b)和右吸附(c) 的处理时间各为2.5min。
优选地,所述I淋洗阶段循环处理三次。
进一步地,所述混匀(e)为洗脱液添加混匀,所述洗脱液为甲醇,所述洗 脱液的添加量与样本体积相等。
进一步地,所述移液(h)为移出25(OH)D洗脱液。
进一步地,所述混匀(e)和移液(h)的处理时间各为1min,所述左吸附(f) 和右吸附(g)的处理时间各为2.5min。
采用上述技术方案,本发明方法采用转移液体代替转移磁性纳米颗粒的 原位处理方式,可大大降低转运磁性纳米颗粒所带来的磁性纳米颗粒丢失以 及目标物氧化等问题,提高检测的准确性与稳定性。
本发明第三目的,是提供一种利用前述提取方法提取出血清中的 25(OH)D进行LC-MSMS检测的方法。具体如下:
一种血清25(OH)D的检测方法,将前述提取方法提取出的25(OH)D洗脱 液进样至LC-MSMS仪器中,进行LC-MS/MS分析。
进一步地,所述LC-MSMS仪器的色谱条件设置如下:色谱柱为Kinetex C18(3.0×50mm,2.6μm,);柱温30℃,流速0.6mL/min;进样量 10μL;流动相A为0.05%甲酸水溶液,流动相B为0.05%甲酸甲醇溶液;采 用梯度洗脱:0~0.7min,80% B;1.8~2.8min,97% B;3.0~5.0min,100% B;6.0~10.0min,80% B。
进一步地,所述LC-MSMS仪器的质谱条件设置如下:电喷雾ESI离子 源,正离子扫描方式,电喷雾电压5500V,气帘气(CUR)50psi,雾化气 (GS1)70psi,辅助气(GS2)80psi,离子源温度为450℃。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
(1)本发明提取系统,与目前商用磁固相萃取设备相比,利用共振旋转 使磁性纳米颗粒与生物样本中的待测目标物充分混合,提高前期磁微粒对目 标物的结合效率。之后利用交变的往复磁场使磁性纳米颗粒进行原位非接触 式磁性搅拌,释放出其中夹杂的杂质。不仅操作过程简单,自动化程度高, 还可减少杂质干扰、提高对样本的净化效率的同时保证高回收率,有效降低 人血清样本等复杂样本的基质干扰。
(2)本发明提取方法,采用转移液体代替转移磁性纳米颗粒的原位处理 方式,可大大降低转运磁性纳米颗粒所带来的磁性纳米颗粒丢失以及目标物 氧化等问题,提高检测的准确性与稳定性。这种原位磁固相自动化萃取方法 可解决生物样品中基质干扰大的检测难点,成为一种针对人体血液样本等复 杂生物样本的新型前处理方法,特别是磁性纳米颗粒分散液为样本的一半时 且进行三次喷淋处理后获得的25(OH)D提取率高,有效提高LC-MS/MS的检 测效果。
(3)本发明提取方法,有效提高磁固相萃取效率,结合现有的不同功能 设计的磁性纳米颗粒,可赋予不同的复杂基质下痕量化合物的提取能力,极 大拓宽了磁固相萃取技术的应用范围,有望成为LC-MS/MS新一代规模化的 针对复杂基质下痕量化合物的自动化前处理方式。
(4)本发明检测方法,将原位磁固相萃取法液相色谱-串联质谱法测定人 血清中25(OH)D,具有良好的准确性与稳定性。
附图说明
图1是本发明原位磁固相萃取系统结构示意图;
图2是本发明血清中维生素D的提取方法流程示意图;
图3是本发明提取方法中不同磁性纳米颗粒的使用量对萃取效果的影响 测试图;
图4是本发明提取方法中不同淋洗次数对萃取效果的影响测试图。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解, 下面结合具体实施方式,进一步阐述本发明。
实施例1
一种原位磁固相萃取系统,如图1所示,原位磁固相萃取系统由微振荡 模块、磁分离模块以及移液模块组成,其中,微振荡模块由振动马达和振动 架组成,通过振动马达驱动样本管与振动架产生共振,使得样本管在振动腔 中快速自旋,从而使磁性纳米颗粒(Magnetic nanoparticles,MNPs)在溶液 中充分分散并与目标物充分结合;磁分离模块由振动架两侧的一对正对放置 的线圈组组成,在混匀程序结束后交替开启,实现对MNPs的往复迁移和集 磁等过程;移液模块由移液针及其他移液相关模块组成,用于样本或试剂的转移。
实施例2
一种利用实施例1原位磁固相萃取系统萃取血清中维生素D的提取方法, 包括I淋洗阶段和Ⅱ洗脱阶段,其中I淋洗阶段包括混匀(a)、左吸附(b)、右 吸附(c)和移液(d);Ⅱ洗脱阶段包括混匀(e)、右吸附(f)、左吸附(g)和移液(h)。 具体流程图如图2所示。
具体地,I淋洗阶段前先进行加样混合处理,加样混合处理为添加混匀血 清样本、沉淀剂、蒸馏水和磁性纳米颗粒分散液,其中,沉淀剂为体积比1:1 的甲醇-乙腈溶液;磁性纳米颗粒分散液为0.01g/mL的磁性纳米颗粒-甲醇溶 液。混匀(a)为淋洗液添加混匀,淋洗液为0.05%体积比的甲酸-水溶液。移液 (d)为移出杂质。混匀(e)为洗脱液添加混匀,洗脱液为甲醇。移液(h)为移出25(OH)D洗脱液。
具体地如表1所示,加样混合处理中添加混合血清样本、沉淀剂、蒸馏 水和磁性纳米颗粒分散液的体积比为1:2:1:0.5。
具体地如表1所示,加样混合处理时间为4min。
具体地如表1所示,淋洗液的添加量是样本体积的四倍。
具体地如表1所示,I淋洗阶段循环处理三次,每次处理时间为7min, 其中混匀(a)和移液(d)的处理时间各为1min,左吸附(b)和右吸附(c)的处理时 间各为2.5min。
具体地如表1所示,洗脱液的添加量与样本体积相等。
具体地如表1所示,混匀(e)和移液(h)的处理时间各为1min,左吸附(f) 和右吸附(g)的处理时间各为2.5min。
表1原位磁固相萃取系统测定人血清维生素D的优化条件
实施例3
一种利用实施例1原位磁固相萃取系统萃取血清中维生素D的提取方法, 与实施例2的区别在于,加样混合处理中添加混合血清样本、沉淀剂、蒸馏 水和磁性纳米颗粒分散液的体积比为1:2:1:0.2,其余设置均与实施例2 相同。
实施例4
一种利用实施例1原位磁固相萃取系统萃取血清中维生素D的提取方法, 与实施例2的区别在于,加样混合处理中添加混合血清样本、沉淀剂、蒸馏 水和磁性纳米颗粒分散液的体积比为1:2:1:0.7,其余设置均与实施例2 相同。
实施例5
一种利用实施例1原位磁固相萃取系统萃取血清中维生素D的提取方法, 与实施例2的区别在于,加样混合处理中添加混合血清样本、沉淀剂、蒸馏 水和磁性纳米颗粒分散液的体积比为1:2:1:0.9,其余设置均与实施例2 相同。
实施例6
一种利用实施例1原位磁固相萃取系统萃取血清中维生素D的提取方法, 与实施例2的区别在于,I淋洗阶段循环处理一次,其余设置均与实施例2相 同。
实施例7
一种利用实施例1原位磁固相萃取系统萃取血清中维生素D的提取方法, 与实施例2的区别在于,I淋洗阶段循环处理两次,其余设置均与实施例2相 同。
实施例8
一种利用实施例1原位磁固相萃取系统萃取血清中维生素D的提取方法, 与实施例2的区别在于,I淋洗阶段循环处理四次,其余设置均与实施例2相 同。
实施例9
一种血清25(OH)D的检测方法,将实施例2-8提取方法提取出的25(OH)D 洗脱液分别进样至LC-MSMS仪器中,进行LC-MS/MS分析。
具体地,LC-MSMS仪器的色谱条件设置如下:色谱柱为Kinetex C18(3.0 ×50mm,2.6μm,);柱温30℃,流速0.6mL/min;进样量10μL; 流动相A为0.05%甲酸水溶液,流动相B为0.05%甲酸甲醇溶液;采用梯度 洗脱:0~0.7min,80% B;1.8~2.8min,97% B;3.0~5.0min,100% B;6.0~10.0min,80% B。
具体地,LC-MSMS仪器的质谱条件设置如下:电喷雾ESI离子源,正离 子扫描方式,电喷雾电压5500V,气帘气(CUR)50psi,雾化气(GS1)70 psi,辅助气(GS2)80psi,离子源温度为450℃。
具体地,MRM参数见表2。
表2目标化合物的质谱参数
实验例
1、商用仪器
液相色谱-串联质谱系统由Shimadzu LC-20ADXR高效液相色谱仪(日 本岛津公司)和API 4000Triple QuadTM质谱仪(美国SCIEX公司)组成。 仪器控制、数据采集与处理软件为Analyst1.6.3(美国SCIEX公司)。
2、试剂
25(OH)D3(纯度:≥99.59%)和25(OH)D2(纯度:≥97.82%)均购自美 国StanfordAnalytical Chemical公司;D6-25(OH)D2(纯度:≥99%)和 D6-25(OH)D3(纯度:≥99%)均购自美国Medical Isotopes公司;牛血清白蛋 白(Bovine serum albumin,BSA)和乙腈(色谱纯)购自美国Sigma公司; 甲醇(色谱纯)购自美国Fisher;甲酸(色谱纯)购自天津Aladdin公司;实 验用水均为双蒸水,购自广州屈臣氏集团有限公司;磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline,PBS)干粉购自北京Solarbio公司;MNPs由南开大学赠予。。
3、溶液及样本配制
(1)标准曲线样本和质控样本工作溶液配制
25(OH)D3与25(OH)D2混合标准工作溶液:分别25(OH)D3和25(OH)D2标准品用甲醇溶解后按1:1混合再用甲醇逐级稀释为5ng/mL、10ng/mL、50 ng/mL、100ng/mL、400ng/mL、500ng/mL、800ng/mL和1000ng/mL的混 合标准工作溶液。
混合内标溶液配制:分别将D6-25(OH)D2和D6-25(OH)D3用甲醇溶解后 按1:1混合再用甲醇逐级稀释为100ng/mL的混合内标溶液。
(2)空白血清替代基质溶液制备
空白血清替代基质(5% BSA)溶液制备:将袋装PBS干粉溶解到2L的 蒸馏水中,配制成浓度为0.01mol/L,pH值为7.2~7.4(25℃)的PBS溶液。 称量5g的牛血清白蛋白,再加入100mL PBS溶液即得到5% BSA溶液。
4、方法学考察
(1)绝对回收率
精密吸取90μL 5% BSA,加入混合标准工作溶液10μL后混匀,配制成 25(OH)D3与25(OH)D2质量浓度均为40ng/mL的质控样本,除不加内标外, 其余按实施例2的方法操作,进样LC-MS/MS分析。以其进样得到的峰面积 除以相应浓度的内标溶液直接进样得到的峰面积,计算血清中内源性物质对 内标的基质效应。
(2)基质效应
取6种不同来源的人血清样本,除不加内标外,其余按实施例2的方法 操作,得到相应血清基质后,分别加入低、高两种质量浓度混合内标溶液, 以其进样得到的峰面积除以相应浓度的内标溶液直接进样所得到的峰面积, 计算得到前处理后血清中内源性物质对内标的基质效应(Matrix Effect,ME)。
(3)线性范围及灵敏度
精密吸取90μL 5% BSA,加入混合标准工作溶液10μL后混匀,配制成 25(OH)D3与25(OH)D2质量浓度均为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、40ng/mL、 50ng/mL、80ng/mL和100ng/mL的生物标准曲线样品,按实施例2的方法 操作,进样LC-MS/MS分析。以血浆中待测物浓度为横坐标(X),待测物 与内标峰面积比值为纵坐标(Y),用加权(W=1/X2)最小二乘法进行回归 运算,计算得到标准曲线。
取5% BSA,加入混合标准工作溶液10μL后混匀,配制成25(OH)D3与 25(OH)D2质量浓度均为0、0.5ng/mL、1ng/mL的测试样本,按“2.1原位磁 固相萃取法”项下方法操作,进样LC-MS/MS分析。以空白基质的3倍信噪 比(S/N=3)的目标分析物浓度作为各成分的检出限(LOD);以空白基质的 S/N=10且20次测定的相对标准偏差(RSD)小于20%的目标分析物浓度作为 各成分的定量下限(LOQ)。
(4)精密度与准确度
精密吸取90μL 5% BSA,加入10μL的混合标准曲线工作溶液后混匀, 配制成25(OH)D3与25(OH)D2均为10ng/mL和40ng/mL的底、高质控样本。 按实施例2的方法操作,进样LC-MS/MS分析。同一天内测定6组平行样本, 考察本前处理方法的日内准确度和精密度;每天做6组平行样本,连续检测3 天,考察本前处理方法的日间准确度和精密度。
5、性能评价
(1)原位磁固相萃取性能
考察实施例2-8中不同磁性纳米颗粒的使用量、淋洗次数条件对原位磁固 相萃取效果的影响。结果如图3、4所示,在磁性纳米颗粒添加量为0.5mg, 淋洗次数为3次时,25(OH)D3与25(OH)D2的绝对回收率分别可达46%和48%。 由此可见,原位磁固相萃取法可有效回收维生素D,目标分析物损失少。
(2)基质效应
25(OH)D3与25(OH)D2在电喷雾电离条件下主要表现为基质抑制,绝对基 质效应在73.77%~88.17%,证明原位磁固相萃取方法可有效处理人血清等复 杂生物基质样本,降低基质效应,测定结果见表3。
表3血清中测定D6-25(OH)D的基质效应评价结果(n=10)
(3)线性范围及灵敏度
经测定,25(OH)D3和25(OH)D2在1.0~100ng/mL的浓度范围内均具有良 好的线性关系,回归方程见表4。利用实施例9的方法检测血清中维生素的 检出限及定量下限见表4。可见与固相萃取法和液相萃取法相比,基于原位 磁固相萃取的前处理方式可降低基质干扰,具有良好的检出限及定量限。
(4)精密度及准确度
25(OH)D3与25(OH)D2在低浓度与高浓度实测值的日内RSD与日间RSD 均小于7%,平均回收率为98%~103%,见表4,由此可见,原位磁固相萃取 法联合LC-MS/MS方法具有良好的准确度及稳定性。
表4质控样本中25(OH)D测定结果
综上所述,实验结果表明原位磁固相萃取法联合LC-MS/MS检测人血清 25(OH)D2和25(OH)D3的检测限均为0.5ng/mL,线性范围均为1~100ng/mL, 回收率为98%~103%,日内精密度与日间精密度均在7%以内。由此可见,本 发明提出的原位磁固相萃取系统及方法,以及其联用LC-MS/MS检测人血清 中25(OH)D的检测方法,其中,原位磁固相萃取法通过往复磁场操控磁性纳 米颗粒的行为方式,实现非接触式磁性搅拌,不仅操作过程简单,自动化程 度高,还可减少杂质干扰的同时保证高回收率,有效降低人血清样本等复杂 样本的基质干扰。依照临床检验相关指导原则的方法学验证,原位磁固相萃 取法液相色谱-串联质谱法测定人血清中25(OH)D,具有良好的准确性与稳定 性。原位磁固相萃取法有望成为LC-MS/MS新一代规模化的自动化前处理方 式,提供一种针对复杂基质下痕量化合物更为便捷、低干扰、准确的测定方 式。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于 本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在 不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发 明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限 制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落 在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实 施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起 见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也 可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (10)
1.一种血清25-羟基维生素D的提取方法,其特征在于,包括依次进行的I淋洗阶段和Ⅱ洗脱阶段,其中I淋洗阶段包括混匀(a)、左吸附(b)、右吸附(c)和移液(d),所述移液(d)为移出杂质;Ⅱ洗脱阶段包括混匀(e)、右吸附(f)、左吸附(g)和移液(h),所述移液(h)为移出25(OH)D洗脱液。
2.根据权利要求1所述的血清25-羟基维生素D的提取方法,其特征在于,所述I淋洗阶段前先进行加样混合处理,所述加样混合处理为添加并混匀血清样本、沉淀剂、蒸馏水和磁性纳米颗粒分散液,其中,所述沉淀剂为体积比1:1的甲醇-乙腈溶液;所述磁性纳米颗粒分散液为0.01g/mL的磁性纳米颗粒-甲醇溶液。
3.根据权利要求2所述的血清25-羟基维生素D的提取方法,其特征在于,所述加样混合处理中添加并混合血清样本、沉淀剂、蒸馏水和磁性纳米颗粒分散液的体积比为1:2:1:(0.2-0.9)。
4.根据权利要求2所述的血清25-羟基维生素D的提取方法,其特征在于,所述加样混合处理时间为4min。
5.根据权利要求2所述的血清25-羟基维生素D的提取方法,其特征在于,所述混匀(a)为淋洗液添加混匀,所述淋洗液为0.05%体积比的甲酸-水溶液,所述淋洗液的添加量是血清样本体积的四倍。
6.根据权利要求2所述的血清25-羟基维生素D的提取方法,其特征在于,所述混匀(e)为洗脱液添加混匀,所述洗脱液为甲醇,所述洗脱液的添加量与血清样本体积相等,所述混匀(e)和移液(h)的处理时间各为1min,所述左吸附(f)和右吸附(g)的处理时间各为2.5min。
7.根据权利要求1所述的血清25-羟基维生素D的提取方法,其特征在于,所述I淋洗阶段循环处理一至四次,每次处理时间为7min,其中所述混匀(a)和移液(d)的处理时间各为1min,所述左吸附(b)和右吸附(c)的处理时间各为2.5min。
8.一种应用如权利要求1-7任一所述提取方法的原位磁固相萃取系统,所述原位磁固相萃取系统由微振荡模块、磁分离模块以及移液模块组成,其中,微振荡模块由振动马达和振动架组成,通过振动马达驱动样本管与振动架产生共振,使得样本管在振动腔中快速自旋,从而使磁性纳米颗粒在溶液中充分分散并与目标物充分结合;磁分离模块由振动架两侧的一对正对放置的线圈组组成,在混匀程序结束后交替开启,实现对磁性纳米颗粒的往复迁移和集磁等过程;移液模块由移液针及其他移液相关模块组成,用于样本或试剂的转移。
9.一种血清25-羟基维生素D的检测方法,其特征在于,将权利要求-7任一所述提取方法提取出的25(OH)D洗脱液进样至LC-MSMS仪器中,进行LC-MS/MS分析。
10.根据权利要求9所述的一种血清25-羟基维生素D的检测方法,其特征在于,所述LC-MSMS仪器的色谱条件设置如下:色谱柱为Kinetex C18,3.0×50mm,2.6μm,柱温30℃,流速0.6mL/min;进样量10μL;流动相A为0.05%甲酸水溶液,流动相B为0.05%甲酸甲醇溶液;采用梯度洗脱:0~0.7min,80%B;1.8~2.8min,97%B;3.0~5.0min,100%B;6.0~10.0min,80%B;
所述LC-MSMS仪器的质谱条件设置如下:电喷雾ESI离子源,正离子扫描方式,电喷雾电压5500V,气帘气CUR 50psi,雾化气GS1 70psi,辅助气GS2 80psi,离子源温度为450℃。
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