CN115521372B - 一种三螺旋重组人源化iii型胶原蛋白、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种具有三螺旋结构的重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及应用。本发明所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述的重组人源化III型胶原蛋白具有三螺旋结构以及(Gly‑X‑Y)n重复序列模式，并可自组装形成特征性的胶原蛋白纤维形貌；所述的重组人源化III型胶原蛋白具有多个人III型胶原蛋白的重要功能位点，生物活性高；本发明构建了重组人源化III型胶原蛋白的大肠杆菌表达体系，表达量高，易于纯化，制备的重组人源化III型胶原蛋白水溶性好，可广泛应用于护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、生物材料、医疗器械、保健食品等领域。
Description
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种三螺旋重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及应用。
背景技术
胶原蛋白是哺乳动物中含量最丰富的蛋白质，约占蛋白质总重量的30％。作为主要的结构蛋白，胶原蛋白存在于所有的结缔组织中，包括皮肤、骨骼、肌腱、韧带、软骨、血管等。胶原蛋白与其它蛋白质相比，存在显著差异，它是由三条具有(Gly-X-Y)n重复氨基酸序列的肽链，折叠形成的具有三螺旋结构的三聚体。胶原蛋白的三螺旋会继续自组装形成胶原纤维，继而形成肌腱、骨骼、皮肤等各种人体组织，为人体提供机械强度和结构完整性。研究发现，三螺旋结构还参与调控胶原蛋白与其他生物大分子的相互作用，任何甘氨酸突变导致三螺旋结构的破坏均会导致成骨不全症等严重疾病。因此，三螺旋结构是胶原蛋白的关键特征。
III型胶原蛋白是由COL3A1基因编码的一种成纤维胶原蛋白，它是由三条α1(III)肽链，紧密堆积形成具有三螺旋结构的同源三聚体。每条α1(III)肽链包含1000多个残基长度的(Gly-Xaa-Yaa)n重复氨基酸序列。III型胶原蛋白广泛存在于结缔组织中，如皮肤、肺、肝、肠和血管等。III型胶原蛋白常与I型胶原蛋白共生，一起构成细胞外基质的主要部分，并参与调控细胞的黏附、增殖、迁移、分化等基本活动。相比I型胶原蛋白，III型胶原蛋白在动物组织中的含量更低，因此，动物组织提取III型胶原蛋白难度更大，成本更高。基因工程方法制备的重组胶原蛋白，具有无病毒传播隐患、低免疫原性等优点，因此引起越来越多的关注。哺乳动物细胞、转基因植物等表达体系被用来制备重组胶原蛋白，但是它们存在培养条件严苛、成本高、产量低等严重问题。大肠杆菌表达系统具有培养周期短、成本低等优点，因此，被尝试用来制备重组III型胶原蛋白。
中国专利CN103122027A公开了一种以大肠杆菌为表达载体制备重组人源胶原蛋白的方法，该方法制备的重组胶原蛋白包括8或16次重复的III型胶原蛋白肽段和部分II型胶原蛋白肽段；中国专利CN110194795A制备包括8次重复的III型胶原蛋白肽段GERGGPGGPGPQGPPGKNGETGPQGPPGPT。但是这些报道制备的重组III型胶原蛋白均缺乏胶原蛋白特征性的三螺旋结构。
针对上述技术问题，本发明提供了一种三螺旋重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及应用。所述重组人源化III型胶原蛋白具有胶原蛋白特征性的三螺旋结构，且100％严格遵守Gly-X-Y重复序列，并可自组装形成特征性的胶原蛋白纤维；所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有多个人III型胶原蛋白的重要功能位点，生物活性高；本发明构建的重组人源化III型胶原蛋白的大肠杆菌表达体系，纯化简单，通过酶处理即可获得三螺旋重组人源化III型胶原蛋白，制备的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白水溶性好，质量稳定，可广泛应用于护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、生物材料、医疗器械、保健食品等领域。
发明内容
针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种三螺旋重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及其应用，所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有胶原蛋白特征性的三螺旋结构，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组人源化III型胶原蛋白100％严格遵守Gly-X-Y重复序列，并具有多个人III型胶原蛋白的重要功能位点；所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白由前体胶原蛋白经蛋白酶处理获得，纯化方便；所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有高生物相容性和生物活性，可以显著促进人成纤维细胞的增殖和黏附。具体包括以下内容：
第一方面，本发明提供了一种三螺旋重组人源化III型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
优选地，用蛋白酶处理前体胶原蛋白后获得三螺旋重组人源化III型胶原蛋白；所述前体胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
优选地，所述前体胶原蛋白的基因序列如SEQ ID NO.3所示。
优选地，所述蛋白酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、凝血酶。
第二方面，本发明提供了一种携带上述第一方面中所述前体胶原蛋白基因的重组载体或重组基因工程菌。
优选地，所述载体包括pCold或pET。
优选地，所述工程菌为大肠杆菌BL21-DE3。
第三方面，本发明提供了一种上述第一方面所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的制备方法，所述方法为：
(1)合成编码上述第一方面所述前体胶原蛋白的基因序列；
(2)将步骤(1)所述基因序列与载体连接，转化细菌，构建重组基因工程菌；
(3)表达步骤(2)构建的重组基因工程菌，收集菌体沉淀，破碎得上清液，纯化后获得前体胶原蛋白；
(4)加入蛋白酶对步骤(3)获得的前体胶原蛋白进行处理，纯化后获得三螺旋重组人源化III型胶原蛋白。
优选地，所述前体胶原蛋白的基因序列如SEQ ID NO.3所示。
优选地，所述蛋白酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、凝血酶。
优选地，所述步骤(2)中的载体包括pCold或pET。
优选地，所述步骤(2)中的细菌为大肠杆菌BL21-DE3。
优选地，所述步骤(3)中纯化为亲和层析。
第四方面，本发明提供了上述第一方面所述的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白在制备护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、生物材料、医疗器械、保健食品中的应用。
本发明的有益效果是：①本发明提供了一种三螺旋重组人源化III型胶原蛋白，与动物来源的III型胶原蛋白相比，具有分子量均一、纯度高、无病毒传播隐患等优点；②所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有胶原蛋白特征性的三螺旋结构，并可自组装形成特征性的胶原蛋白纤维；③所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白100％严格遵守Gly-X-Y重复氨基酸序列模式，不存在突变导致的疾病风险；④所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有多个人III型胶原蛋白的重要功能位点，可显著促进人成纤维细胞的黏附、增殖和迁移，表现出高生物相容性和生物活性；⑤本发明构建的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的大肠杆菌表达体系，表达量高，纯化简单，通过酶处理表达产物即可获得本申请所述的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白；⑥制备的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白水溶性好，质量稳定，可广泛应用于护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、生物材料、医疗器械、保健食品等领域。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解。
图1本发明所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的SDS-PAGE图；
图2本发明所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的圆二色谱图；
图3本发明所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的电镜图；
图4本发明所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的细胞毒性柱状图；
图5本发明所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的细胞增殖柱状图；
图6本发明所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的细胞黏附图；
图7本发明所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的细胞迁移图。
具体实施方式
以下具体结合实施例进一步描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
编码根据本发明实施例的所述三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该蛋白通过前体胶原蛋白经蛋白酶处理获得；前体胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，基因序列如SEQ ID NO.3所示。
实施例1三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的制备过程
1.确定前体胶原蛋白的氨基酸序列，如SEQ ID NO.2所示；
2.构建前体胶原蛋白的表达菌株：
合成编码前体胶原蛋白的基因序列，如SEQ ID NO.3所示，构建导入上述核酸的质粒，通过DNA测序确认质粒成功合成；将质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3菌株获得前体胶原蛋白表达菌株，将转化成功的菌株加入甘油后，保存于-80度冰箱；
3.前体胶原蛋白的制备与纯化：
取微量冻存的前体胶原蛋白表达菌株，加入50ml LB培养基(含有抗生素)，在37℃培养过夜；将其转移到1L LB培养基(含有抗生素)，在37℃继续培养，待OD值达到0.5-2.0时，加入IPTG诱导，在25℃、20℃、15℃共培养8h-36h；离心收集菌体，加入缓冲溶液分散菌体，细胞破碎后，收集上清；通过亲和层析纯化得到前体胶原蛋白。向一定浓度的前体胶原蛋白中加入蛋白酶，于4℃条件下反应12h以上，纯化去除酶切产物，冷冻干燥后得到三螺旋重组人源III型胶原蛋白(TRHCIII-1)；氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
实施例2三螺旋重组人源化III型胶原蛋白(TRHCIII-1)的表征
1.重组人源化III型胶原蛋白的SDS-PAGE表征
采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对纯化后的三螺旋重组人源III型胶原蛋白进行表征。不同批次纯化后的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白均为单一的条带(如图1所示)，表明成功制备高纯度的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白。由于胶原蛋白的特殊氨基酸序列和结构特征，导致其迁移速度较慢。
2.三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的圆二色谱表征
圆二色谱是用于表征蛋白质结构的常用方法，其中225nm附近的正峰是胶原蛋白三螺旋结构的特征峰。对本发明制备的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白进行圆二色谱鉴定，结果如图2中A所示。本发明制备的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白在225nm处具有正峰，表明该重组人源化III型胶原蛋白具有三螺旋结构。监测该三螺旋重组人源化III型胶原蛋白样品从4℃升至75℃的过程中225nm处的峰强度，得到其热变曲线(图2中B)，表明该三螺旋重组人源化III型胶原蛋白在低温时具有三螺旋结构，加热过程中逐渐失去三螺旋，而转变为无序结构。圆二色谱的表征结果表明，该三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有胶原蛋白特征性的三螺旋结构。
3.三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的电镜表征
利用扫描电镜对三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的组装形貌进行表征(图3所示)。冷冻干燥后得到的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白样品呈有序的纤维网状结构(图3中A所示)，在0.2M PBS溶液中的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白样品则自组装形成胶原蛋白特征性的纤维形貌(图3中B所示)。电镜结果表明，该三螺旋重组人源化III型胶原蛋白组装形成天然胶原蛋白类似的纤维形貌。
实施例3三螺旋重组人源化III型胶原蛋白的细胞实验
1.细胞毒性实验
将完全贴壁生长的人成纤维细胞(HHF-1)用0.25％胰酶消化，用完全培养液(1％FBS，2％Penicillin–Streptomycin，DMEM培养基)配制成细胞密度为1×105个/mL的细胞悬液。分别移取100μL细胞悬液接种于96孔培养板中并置于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中培养24hrs。吸出完全培养液，在实验组中加入经高糖DMEM培养基稀释的不同浓度的实施例1制备的三螺旋重组人源III型胶原蛋白(TRHCIII-1)溶液(0.001、0.005、0.01、0.05、0.1mg/ml)，每个浓度设置4个复孔；对照组为向细胞中加入等量未添加TRHCIII-1的高糖DMEM培养基，空白组为不含细胞的等量DMEM培养基，继续于37℃，5％CO2饱和湿度的培养箱中培养24hrs。向各组加入CCK-8试剂10μL，细胞培养箱内孵育1-4h，使用酶联免疫检测仪在450nm波长下测各孔吸光度值(OD值)。根据各组的吸光度均值按照如下公式计算细胞存活率：细胞存
实验结果如图4所示，加入不同浓度的本发明实施例1制备的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白后，细胞存活率均为100％以上，表明该三螺旋重组人源化III型胶原蛋白无细胞毒性，具有良好的生物安全性。
2.细胞增殖实验
取生长至培养皿面积70％-80％的人皮肤成纤维细胞(HFF-1)，0.25％胰酶消化，用完全培养液制成细胞密度为1×105个/mL的细胞悬液。取100μL细胞悬液接种于96孔培养板中并置于37℃，5％CO2饱和湿度的培养箱中培养。细胞培养24h后，吸出完全培养液。在实验组中加入高糖DMEM培养基稀释的0.1mg/ml的实施例1制备的TRHCIII-1溶液(设置4个复孔)；对照组为向细胞中加入等量未添加TRHCIII-1的高糖DMEM培养基，空白组为不含细胞的等量DMEM培养基，继续于37℃，5％CO2饱和湿度的培养箱中分别培养24hrs、72hrs和120hrs。每隔一段时间，向各组加入CCK-8试剂10μL，细胞培养箱内孵育1-4hrs，使用酶联免疫检测仪在450nm波长下测各孔吸光度值(OD值)。根据各组的吸光度均值按照如下公式计算细胞的相对增殖率(RGR)：
实验结果如图5所示，与空白对照组相比，加入本发明实施例1制备的TRHCIII-1的实验组在培养至第24hrs(Day 1)、72hrs(Day 3)和120hrs(Day 5)的细胞相对增殖率均大于100％，且随着时间的增加而呈增加的趋势。结果表明，本发明实施例1制备的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白，可显著促进人皮肤成纤维细胞的增殖。
3.细胞黏附实验
用PBS将本发明实施例1制备的TRHCIII-1稀释至0.1mg/mL，选用未TC处理的24孔细胞培养板，分别用1％热变性BSA，0.1mg/mL实施例1制备的TRHCIII-1处理孔板，每孔500μL样品，并于4℃冰箱中孵育24hrs。将生长至培养皿面积70％-80％的人成纤维细胞(HFF-1)用高糖DMEM培养基制成细胞密度为3×105个/mL的细胞悬液；将24孔板中的液体吸出，每孔加入500μL小鼠成纤维细胞悬液；5hrs后通过倒置显微镜观察细胞黏附效果。
实验结果如图6所示，在牛血清白蛋白(BSA)中生长的成纤维细胞呈圆形、未铺展的状态，而在TRHCIII-1中生长的成纤维细胞大多呈铺展、黏附的状态，表明本发明实施例1制备的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有良好的细胞黏附性能。
4.细胞迁移实验
取生长至培养皿面积70％-80％的人皮肤成纤维细胞(HFF-1)，0.25％胰酶消化，用完全培养液制成细胞密度为5×105个/mL的细胞悬液。用马克笔比着直尺在孔板底部画3条横线，取500μL细胞悬液接种于6孔培养板中并置于37℃，5％CO2饱和湿度的培养箱中培养。细胞培养24hrs后，用10μl枪头比着直尺垂直对准孔板，向下轻推纵向形成划痕，吸出完全培养液，用PBS漂洗3次，去掉划掉的细胞。在实验组中加入高糖DMEM培养基稀释的0.5mg/ml的实施例1制备的TRHCIII-1溶液(设置3个复孔)；对照组为向细胞中加入等量未添加TRHCIII-1的高糖DMEM培养基。在37℃，5％CO2饱和湿度的培养箱中分别培养0h、24hrs，以横向和纵向划线的交点为核心，在40倍显微镜下拍照，获得9个部位的照片，每组合计27个数据。
结果如图7所示，在0h时中央划痕区无细胞(图7中A所示)，在TRHCIII-1中培养24hrs，HFF-1迁移至中央划痕区(图7中B所示)，表明三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有显著促进成纤维细胞迁移的能力。
以上实验的结果表明，本发明提供的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白，具有胶原蛋白特征性的三螺旋结构以及(Gly-X-Y)n重复氨基酸序列，并可自组装形成特征性的胶原蛋白纤维形貌。该三螺旋重组人源化III型胶原蛋白具有高生物相容性和生物活性，可显著促进人成纤维细胞的黏附、增殖和迁移。制备的重组人源化III型胶原蛋白水溶性好，质量稳定，可广泛应用于护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、生物材料、医疗器械、保健食品等领域。
本发明不限于以上实施例所述，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
序列表
<110> 胶原蛋白（武汉）生物科技有限公司
<120> 一种三螺旋重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
20 25 30
Pro Gly Ala Pro Gly Gly Ala Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro
35 40 45
Gly Gly Ala Gly Ala Pro Gly Pro Met Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly
50 55 60
Gly Ala Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Gly
65 70 75 80
Pro Gly Gly Ala Gly Leu Ala Gly Ser Pro Gly Gly Pro Gly Pro Ala
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Gly Pro Ala Gly Ala Ala Gly Gly Pro Gly Ala Ala Gly Val Pro Gly
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Gly Pro Gly Ala Pro Gly Gly Ala Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Leu
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Pro Gly Gly Ala Gly Ala Pro Gly Pro Met Gly Pro Ala Gly Ala Pro
130 135 140
Gly Gly Ala Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly
145 150 155 160
Gly Pro Gly Gly Ala Gly Leu Ala Gly Ser Pro Gly Gly Pro Gly Pro
165 170 175
Ala Gly Pro Ala Gly Ala Ala Gly Gly Pro Gly Ala Ala Gly Val Pro
180 185 190
Gly Gly Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
195 200 205
Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
210 215 220
Pro
225
<210> 2
<211> 310
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met His His His His His His Ala Ala Gly Gly Gly Gly Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Ala Thr Gly Leu Ile Gly Gly Leu Ala Gly Gly Leu Gly Gly Pro
20 25 30
Gly Leu Leu Ala Pro Pro Thr Leu Gly Ala Gly Ala Leu Ala His Thr
35 40 45
Thr Met Thr Leu Leu Leu Thr Thr Leu Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly
50 55 60
Ala Ser Thr Ala Leu Ala Leu Leu Leu Gly Ile Gly Ala His Ala Leu
65 70 75 80
Ala Leu Val Pro Ala Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
85 90 95
Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro
100 105 110
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala Pro Gly Gly Ala Gly Leu Pro Gly
115 120 125
Pro Pro Gly Leu Pro Gly Gly Ala Gly Ala Pro Gly Pro Met Gly Pro
130 135 140
Ala Gly Ala Pro Gly Gly Ala Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly Ala Ala
145 150 155 160
Gly Ala Ala Gly Gly Pro Gly Gly Ala Gly Leu Ala Gly Ser Pro Gly
165 170 175
Gly Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Ala Ala Gly Gly Pro Gly Ala
180 185 190
Ala Gly Val Pro Gly Gly Pro Gly Ala Pro Gly Gly Ala Gly Leu Pro
195 200 205
Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Gly Ala Gly Ala Pro Gly Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ala Gly Ala Pro Gly Gly Ala Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly Ala
225 230 235 240
Ala Gly Ala Ala Gly Gly Pro Gly Gly Ala Gly Leu Ala Gly Ser Pro
245 250 255
Gly Gly Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Ala Ala Gly Gly Pro Gly
260 265 270
Ala Ala Gly Val Pro Gly Gly Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
275 280 285
Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro
290 295 300
Gly Pro Pro Gly Pro Pro
305 310
<210> 3
<211> 930
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atgcatcacc accaccacca tgctgatgaa caagaggaaa aggccaaggt gcgtaccgaa 60
ctgatccaag aactggcaca gggtctgggc ggttttgaaa agaaaaactt cccgactctg 120
ggtgatgaag acctggacca tacgtacatg accaaactgt tgacctatct gcaggagcgc 180
gaacaggcag aaaacagctg gcgtaaacgt ctgttaaaag gtattcaaga tcacgcactg 240
gacttggttc cgcgtggcag cccgggcccg cccggtccgc ctggcccgcc gggtccgccg 300
ggcccgccag ggccgccggg cccgccgggt cctccgggac cgccgggtcc gccgggccgc 360
cctggtgaac gtggtctccc tggcccaccg ggcctgccgg gtgagaatgg cgcgccaggc 420
ccgatgggtc cgcgtggtgc gccaggcgag cgcggcaggc cgggcctgcc gggggcggct 480
ggtgcgcgtg gtgagccggg cgaggacggt aaagatggtt ccccgggtga gccgggcccg 540
gcaggtccga gaggcgcggc cggtgaacca ggccgtgatg gtgttccggg tggtccgggt 600
cgtccgggcg agcgcggttt gcctggccct ccaggtcttc cgggtgagaa cggtgctccg 660
ggccctatgg gtccgcgtgg cgctccgggt gaacgcggtc gtccgggctt gccgggcgcg 720
gccggtgcgc gtggtgagcc gggtgaggac ggcaaggacg gctctccggg tgaaccggga 780
ccggcgggtc cgcgtggtgc tgcgggcgag ccgggacgcg atggtgtgcc gggcggtccg 840
ggcccgccgg gcccacccgg cccaccgggc ccgccaggtc cgccgggtcc gccgggacct 900
ccgggccctc cgggtccccc gggaccgccg 930
Claims (6)
1.一种三螺旋重组人源化III型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种携带编码权利要求1中所述氨基酸序列的基因的重组载体或重组基因工程菌。
3.如权利要求2所述的重组载体或重组基因工程菌，其特征在于，所述载体包括pCold或pET。
4.如权利要求2所述重组载体或重组基因工程菌，其特征在于，所述工程菌为大肠杆菌。
5.如权利要求1所述的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白在制备皮肤修复敷料、生物材料、医疗器械中的应用。
6.如权利要求1所述的三螺旋重组人源化III型胶原蛋白在制备护肤品、植入剂、人工皮肤中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210610258.8A CN115521372B (zh) | 2022-05-31 | 一种三螺旋重组人源化iii型胶原蛋白、制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210610258.8A CN115521372B (zh) | 2022-05-31 | 一种三螺旋重组人源化iii型胶原蛋白、制备方法及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115521372A CN115521372A (zh) | 2022-12-27 |
| CN115521372B true CN115521372B (zh) | 2024-06-07 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103122027A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-05-29 | 杨霞 | 一种重组人源胶原蛋白及其生产方法 |
| CN112194720A (zh) * | 2020-09-16 | 2021-01-08 | 叶华 | 一种重组人源iii型胶原蛋白及其生产方法 |
| CN113512094A (zh) * | 2021-06-29 | 2021-10-19 | 兰州大学 | 一种共价光交联多肽、共价光交联多肽自组装形成的胶原蛋白仿生材料 |
| WO2021224316A1 (de) * | 2020-05-06 | 2021-11-11 | Gelita Ag | Expression von kollagenpeptid-komponenten in prokaryotischen systemen |
| CN115521373A (zh) * | 2022-06-06 | 2022-12-27 | 胶原蛋白(武汉)生物科技有限公司 | 一种三螺旋重组人源化i型胶原蛋白、制备方法及其应用 |
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| Fluorescence self-quenching assay for the detection of target collagen sequences using a short probe peptide;Linge Nian等;Talanta;20180101(第176期);492-498 * |
| 重组胶原蛋白制备及其应用研究进展;唐云平等;食品工业科技;20160524;37(18);378-380 * |
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