JP2024050477A - 組換えヒト型化コラーゲンおよびその応用 - Google Patents
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Abstract
Description
リーダーペプチドおよび少なくとも1つの基本繰り返し単位を含み、
前記基本繰り返し単位は、SEQ ID No.1で示されるアミノ酸配列を含む、
組換えヒト型化コラーゲンを提供する。
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発現ベクターを構築し、前記発現ベクターを受容体細胞に導入し、選別することと、
選別した工学菌株を培養し、発現を誘導して精製を行い、前記組換えヒト型化コラーゲンを取得することと、を含む、
態様1に記載の組換えヒト型化コラーゲンの調製方法を提供する。
(1)前記組換えヒト型化コラーゲンをコードする核酸分子をプラスミドベクターに連結し、発現ベクターを構築し、前記発現ベクターを大腸菌発現株に導入し、選別して遺伝子組換え大腸菌を取得することと、
(2)前記遺伝子組換え大腸菌を発酵培養し、IPTGでタンパク質の発現を誘導した後、遠心分離で菌体を収集することと、
(3)収集した菌体を超音波破砕し、遠心分離で上清を収集することと、
(4)上清に対してニッケルイオンカラムアフィニティークロマトグラフィー精製を行い、前記組換えヒト型化コラーゲンを取得することと、を含む。
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本比較例は、ヒト胎盤由来のI型コラーゲンを提供し、sigma社から購入し、商品番号がC7774であった。
本比較例は、ヒト胎盤由来のIII型コラーゲンを提供し、sigma社から購入し、商品番号がC4407であった。
本試験例は、実施例1で調製された組換えヒト型化コラーゲンおよび比較例1、比較例2の天然ヒト胎盤由来のコラーゲンの細胞接着性をテストし、ステップは以下のとおりである。
本試験例は、実施例1で調製された組換えヒト型化コラーゲンに対して細胞毒性および細胞スクラッチ実験を行った。
細胞毒性を検出した。適当な溶媒を見つけてサンプルを溶解し、一般的に、選用溶媒の順は、超純水、95%のエタノール、DMSOである。最大溶解度を最高濃度として初回実験を行い、初回実験の状況に応じて正式な実験のサンプル濃度範囲を縮小し、正式な実験に使用される安全濃度を選択した。細胞毒性実験の結果は、図4に示すように、COL-HJ-01が細胞毒性を備えなかった。
(a)6ウェルプレートに2mLの希釈した細胞懸濁液を添加し、その濃度を1×106cells/wellとした。
本試験例は、実施例1で調製された組換えヒト型化コラーゲンの細胞増殖を試験する実験であり、実験ステップは、以下に示すとおりである。
本試験例は、実施例1で調製された組換えヒト型化コラーゲンの熱安定性を試験する実験であり、実験ステップは、以下のとおりである。
Claims (7)
- 組換えヒト型化コラーゲンであって、
前記組換えヒト型化コラーゲンのアミノ酸配列は、SEQ ID No.3で示されるものである、
ことを特徴とする組換えヒト型化コラーゲン。 - 核酸分子であって、
請求項1に記載の組換えヒト型化コラーゲンをコードし、
前記核酸分子のヌクレオチド配列は、SEQ ID No.4で示されるものである、
ことを特徴とする核酸分子。 - 少なくとも1つのコピーされた請求項2に記載の核酸分子を含む、
ことを特徴とする発現ベクター。 - 請求項1に記載の組換えヒト型化コラーゲンを発現する、
ことを特徴とする組換え細胞。 - 前記組換え細胞のゲノムに請求項2に記載の核酸分子が組み込まれる、
ことを特徴とする請求項4に記載の組換え細胞。 - 前記組換え細胞に請求項3に記載の発現ベクターが含まれる、
ことを特徴とする請求項4に記載の組換え細胞。 - 請求項1に記載の組換えヒト型化コラーゲンの、化粧品または皮膚損傷治療薬の調製における応用。
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