CN115518097A - 一种抗肿瘤药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供的一种抗肿瘤药物组合物，包括狭基线纹香茶菜水提取物和5‑氟尿嘧啶，将狭基线纹香茶菜水提取物和5‑氟尿嘧啶联合应用，可减少两种药物的用量，从而降低5‑氟尿嘧啶的毒副作用，并且相对于单独使用5‑氟尿嘧啶或狭基线纹香茶菜水提取物，还能显著增强对肝癌的抑制和/或治疗效果。不仅如此，由于5‑氟尿嘧啶价格昂贵，狭基线纹香茶菜水提取物价格较低廉，二者联用可降低药物组合物的成本，具有良好的应用前景。

Description

一种抗肿瘤药物组合物

技术领域

本发明涉及医药和食品技术领域，具体为一种抗肿瘤药物组合物。

背景技术

肝癌是目前世界公认死亡率较高的肿瘤之一，在我国死亡率居恶性肿瘤的第3位，我国每年约有38.3万人死于肝癌，占全球肝癌死亡总数的51％。肝癌具有起病隐匿、进展迅速、易转移、患者生存期短等特点，被发现时多数处于中晚期，因此临床肝癌治疗主要是化疗药物治疗和靶向药物治疗。

5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)是尿嘧啶中的氢原子被氟原子取代所得。其分子式为C₄H₃N₂O₂F，重均分子量为130.8。5-FU是一种亲水性药物，略溶于水，在水中溶解度为17mg/mL，在稀酸或碱液中溶解。5-FU也是一种临床上广泛使用的抗肿瘤药物，它对多种肿瘤包括肝癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌都具有抗肿瘤活性。其抗肿瘤的主要机制为5-FU的代谢产物一磷酸氟代脱氧尿苷(Fd UMP)抑制胸苷酸合成酶而阻止DNA的合成，抑制肿瘤的生长。5-FU口服吸收不完全且难以预测，故临床上多采用注射的方式给药。但5-FU的半衰期较短，在体内很快被代谢掉，需要频繁给药，给药非常不方便。此外，5-FU也具有一系列副作用，主要包括消化道反应及骨髓抑制，同时还会发生脱发、指甲改变、皮炎、皮肤色素增加的现象。因此，5-FU在临床上的使用也受到严重限制。

狭基线纹香茶菜(Isodon lophanthoides var gerardianus(Benth)Hara)是中药溪黄草的主流品种之一，溪黄草具有凉血散瘀、清利湿热、退黄利胆等功效，作为岭南民间常用药，在防治急性胆囊炎和急性黄疸型肝炎等肝胆疾病有较好的疗效。研究表明从狭基线纹香茶菜水提取物中分离纯化得到了13个单体化合物，其中新西兰牡荆苷-2，芹菜素-6，8-二-C-a-L-吡喃阿拉伯糖苷，迷迭香酸等化合物和水溶性总黄酮具有较强的抗HepG2肝癌细胞活性。且随着时间增加对HepG2细胞增殖的抑制作用有所增强，抑制率与作用时间有一定的依赖性。研究表明狭基线纹香茶菜水提取物能抑制HepG2细胞增殖，并呈现时间和浓度依赖性关系；狭基线纹香茶菜水提取物能诱导HepG2细胞线粒体膜电位去极化，也能诱导HepG2细胞内ROS升高，呈现浓度依赖性关系。流式细胞术显示狭基线纹香茶菜水提取物能将HepG2细胞阻滞于G0/G1期并呈剂量依赖性。RT-PCR实验研究表明狭基线纹香茶菜水提取物是通过下调抗凋亡蛋白基因bcl-2mRNA和survivin mRNA以及上调促凋亡蛋白Bax mRNA和Caspase-3mRNA的表达水平诱导HepG2细胞凋亡。

WB分析发现狭基线纹香茶菜水提取物作用后，细胞线粒体内cytochrome c随着药物浓度升高而减少，而胞质cytochrome c和cytosolic AIF随着药物浓度升高而增加，两者均呈浓度依赖关系。WB分析还表明狭基线纹香茶菜水提取物是通过下调抗凋亡蛋白(Bcl-2、Mcl-1和Survivin)和上调促凋亡蛋白(Bax)的表达水平诱导HepG2细胞凋亡。

综上，由于现有的化疗药物效果较差、毒副作用大、耐药性高，因此寻找新的高效低毒的治疗肝癌的药物具有重要意义。本发明提供的抗肿瘤药物组合物将狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶按一定浓度联合应用，但这些作用往往与药物之间的剂量比例、肿瘤细胞类型紧密相关。因此，找到狭基线纹香茶菜水提取物与5-氟尿嘧啶配伍剂量浓度，从而发挥协同作用具有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所提供的一种抗肿瘤药物组合物，用于克服现有技术中的上述缺陷。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种抗肿瘤药物组合物，包括狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶。

在其中一个实施例中，包括狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶组合形成的溶液；其中，狭基线纹香茶菜水提取物在所述溶液中的浓度为0.125mg/mL-4.0mg/mL；5-氟尿嘧啶在所述溶液中的浓度为0.0313μg-1.0μg/mL。

在其中一个实施例中，所述抗肿瘤药物组合物还包括药学上可接受的辅料。

在其中一个实施例中，狭基线纹香茶菜水提取物在所述抗肿瘤药物组合物中的浓度为0.25mg/mL-4.0mg/mL；5-氟尿嘧啶在所述抗肿瘤药物组合物中的浓度为0.125μg-1.0μg/mL。

优选的，根据抗HepG2肝癌细胞活性和减少副作用，制成溶液混合后，混合溶液中狭基线纹香茶菜水提取物在所述药物组合物中的浓度为2.0mg/mL；5-氟尿嘧啶在所述药物组合物中的浓度为0.5μg/mL。

在其中一个实施例中，所述辅料包括：注射用水、增溶剂、助溶剂、抗氧剂、pH值调节剂、乳化剂、吸附剂、络合剂中的至少一种。

本发明还提供一种抗肿瘤药物组合物制剂的制备方法，包括如权利要求3-5任一所述的一种抗肿瘤药物组合物。

进一步的，将所述抗肿瘤药物组合物直接混合做成制剂；或者，将所述抗肿瘤药物组合物中的狭基线纹香茶菜水提取物、5-氟尿嘧啶分别与相应的辅料混合分别做成制剂，然后再分别按照常规的方式进行包装并包装袋之间一一对应的相互连接；或者，所述抗肿瘤药物组合物中的狭基线纹香茶菜水提取物、5-氟尿嘧啶分别与相应的辅料混合后，两者再混合做成制剂；

其中狭基线纹香茶菜水提取物的制作方法是：取狭基线纹香茶菜干燥药材，粉碎粗粉后，粗粉药材用10BV纯化水煎煮，每次时间1.5h，共提取3次，弃药渣滤液合并，滤液纯化后，浓缩，经真空干燥后，得到狭基线纹香茶菜水提取物，备用。

优选的，所述辅料不与所述抗肿瘤药物组合物发生反应或不影响所述抗肿瘤药物组合物的功效。

本发明还提供一种抗肿瘤药物组合物在制备抑制和/或治疗HepG2细胞或肿瘤疾病的制剂中的应用。

进一步的，所述肿瘤疾病为肝癌。

本领域技术人员可以理解的是，本发明提供的一种抗肿瘤药物组合物以狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶为主剂，还可以包括药学上可接受的辅料。辅料包括：注射用水、增溶剂、助溶剂、抗氧剂、pH值调节剂等渗调节剂、乳化剂、吸附剂、络合剂等中的至少一种。

本发明不对该药物组合物的给药方式进行限定，可以采用不同的剂型给药，为了方便给药和药物吸收，本发明提供的一种抗肿瘤药物组合物的剂型为针剂。

本发明第二方面还提供上述药物组合物在制备抑制和/或治疗HepG2细胞的制剂中的应用。本发明第三方面还提供上述药物组合物在制备抑制和/或治疗肿瘤疾病的制剂中的应用。肿瘤疾病包括：肝癌、胃癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、骨肉瘤、以及骨髓瘤等。具体地，所述肿瘤疾病为肝癌。

狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶联合应用时，在不同剂量下，两种药物的CI值(联合指数)均小于1，DRI值(剂量减少指数)也明显增加，显示两者联合应用具有协同效应，狭基线纹香茶菜水提取物或5-氟尿嘧啶单药应用如要获得两种联合应用的效果，必须加大单药的使用剂量，才能得到两种药物小剂量联用的效果，但是单药剂量过大，容易产生副作用。狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶具有协同作用，显著増加对HepG2细胞的凋亡率，显著増加HepG2细胞中ROS水平，动物实验显示两药联合具有抑制移植瘤生长的作用，其机制是两药联用能増加促凋亡蛋白Bax，cleaved-PARP表达量，减少抗凋亡蛋白Bcl-2、PARP表达量。在减少毒副作用、提高生活质量方面，狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶两药联用显著降低动物肿瘤/体重比，动物的精神、饮食、活动、大小便等情况明显好转，对心、肝、肾、脾、肺、脑等脏器没有不良影响。这表明狭基线纹香茶菜水提取物和5-FU联合应用能增强人肝癌HepG2裸鼠移植瘤细胞对5-氟尿嘧啶的化疗敏感性，既抑制了肿瘤生长，又克服了化药的副作用，改善了疾病体征状况，延长了生存周期，提高了带瘤者的生活质量，实现中医药的减毒增效作用。这个特点无疑对治疗具有高度恶性、转移能力强和预后很差的肝细胞癌提供了一条可能的途径。

与现有技术相比，本发明提供的一种抗肿瘤药物组合物，将狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶联合应用，可减少两种药物的用量，从而降低5-氟尿嘧啶的毒副作用，并且相对于单独使用5-氟尿嘧啶或狭基线纹香茶菜水提取物，还能显著增强对肝癌的抑制和/或治疗效果。不仅如此，由于5-氟尿嘧啶价格昂贵，狭基线纹香茶菜水提取物价格较低廉，二者联用可降低药物组合物的成本，具有良好的应用前景。

附图说明：

图1为联合用药对HepG2细胞凋亡的影响示意图；

图2为联合用药对凋亡相关蛋白的影响示意图；

图3为联合用药诱导细胞凋亡与ROS水平变化示意图；

图4为联合用药对凋亡相关蛋白的影响示意图；

图5为各实验组肿瘤生长曲线示意图；

图6为各实验组肿瘤大小比较示意图；

图7为各实验组肿瘤/体重比示意图。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

本发明中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规的市售产品；本发明中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。

一种抗肿瘤药物组合物，该组合物为狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶的组合物。

较优地，狭基线纹香茶菜水提取物在所述药物组合物中的浓度为0.25mg/mL-4.0mg/mL；5-氟尿嘧啶在所述药物组合物中的浓度为0.125μg-1.0μg/mL。

或者，所述组合物的给药剂量能够根据给药对象、给药途径或药物的制剂形式进行变化，但以保证该组合物在哺乳动物体内能够达到有效的血药浓度为前提。

实施例1、不同浓度狭基线纹香茶菜水提取物与5-氟尿嘧啶协同抗肝癌细胞增殖作用

1、实验方法

(1)细胞接种

取处于对数生长期的HepG2细胞，按照肿瘤细胞常规传代方法，对HepG2细胞进行清洗、消化、离心。离心所得细胞用RPMI-1640(含10％胎牛血清和双抗：链霉素100U/mL和青霉素100U/mL)培养基重悬，取少量的细胞悬液用PBS溶液稀释10倍，使用流式细胞仪计数，再根据计数的结果将细胞悬液稀释到5×10⁴个/mL，按每孔100μL细胞悬液均匀接种于96孔板内，细胞周围加入100μL的PBS溶液，防止培养基的挥发。将接种好细胞的培养板分别做好标记，均置于37℃，5％CO₂的恒温细胞培养箱中培养过夜。

(2)供试药液的配制

称取适量的5-氟尿嘧啶(5-FU)原料药，用RPMI-1640培养基进行溶解，配制成10.0μg/mL的母液，再利用RPMI-1640培养基将母液稀释成不同浓度的5-FU药液，5-FU药液的浓度为0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL。

称取适量的狭基线纹香茶菜水提取物原料药，先用PBS溶液充分溶解，配制成40.0mg/mL的母液，再利用RPMI-1640培养基将母液稀释成不同浓度的狭基线纹香茶菜水提取物药液，狭基线纹香茶菜水提取物药液的浓度为0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL、4.0mg/mL、8.0mg/mL。

再分别将不同浓度的5-FU药液与狭基线纹香茶菜水提取物药液混合，得到不同浓度的5-FU和狭基线纹香茶菜水提取物混合药液：

表1不同浓度的5-FU药液与狭基线纹香茶菜水提取物药液等体积混合

注：表中所示为两种药液等体积混合后5-FU药液(μg/mL)/狭基线纹香茶菜水提取物(mg/mL)浓度数据。

(3)实验组别

阴性对照组：细胞+RPMI-1640培养基；

供试药液组：同实施例1中的“(2)供试药液的配制”

细胞+不同浓度的5-FU和狭基线纹香茶菜水提取物混合药液，细胞+不同浓度的5-FU药液，细胞+不同浓度的狭基线纹香茶菜水提取物药液；

空白组：不含细胞，只添加RPMI-1640培养基。

(4)给药

待细胞完全贴壁后，吸出孔板中原有的培养基，依照实验组别：阴性对照组加入100μL培养基；供试药液组分别加入不同浓度比的5-FU和狭基线纹香茶菜水提取物混合药液100μL，或者分别加入不同浓度的5-FU药液100μL，或者分别加入不同浓度的狭基线纹香茶菜水提取物药液100μL；空白组加入100μL培养基。给药完成后置于37℃，5％CO₂的恒温细胞培养箱中孵育24h。

(5)OD值的测量及细胞存活率的计算

给药24h后，弃去孔板中原有的培养基，加入100μL新的RPMI-1640培养基，再每孔加入100μLMTT试剂，置于37℃，5％CO₂的细胞培养箱中培养4h后，取出振荡混匀30s，最后将96孔板置于酶标仪上，在25℃，450nm处测定其吸光度值(OD值)，然后按照下述公式计算细胞存活率：细胞存活率(％)＝(OD供试药液组-OD空白组)/(OD阴性对照组-OD空白组)×100％。

OD供试药液组为供试药液组测得的OD值，OD空白组为空白组测得的OD值，OD阴性对照组为阴性对照组测得的OD值。

2、实验结果

表2 5-FU药液与狭基线纹香茶菜水提取物混合药液对HepG2细胞存活率的影响

由表2可知：5-FU与狭基线纹香茶菜水提取物混合药液作用于HepG2细胞，抑制肿瘤细胞增殖的效果均优于单独给药5-FU或给药狭基线纹香茶菜水提取物的效果，其中按混合液(0.5μg/mL5-FU药液+2.0mg/mL狭基线纹香茶菜水提取物)对HepG2细胞的抑制效果最佳。

实施例2、不同浓度狭基线纹香茶菜水提取物与5-氟尿嘧啶协同作用的分析

1、实验方法

(1)细胞接种同实施例1中的“(1)细胞接种”步骤

(2)供试药液的配制同实施例1中的“(2)供试药液的配制”步骤

(3)实验组别

阴性对照组：细胞+RPMI-1640培养基；

供试药液组：细胞+不同浓度的5-FU和狭基线纹香茶菜水提取物混合药液，细胞+不同浓度的5-FU药液，细胞+不同浓度的狭基线纹香茶菜水提取物药液；

空白组：不含细胞，只添加RPMI-1640培养基。

(4)给药 待细胞完全贴壁后，吸出孔板中原有的培养基，依照实验组别：阴性对照组加入100μL培养基；供试药液组分别加入不同浓度比的5-FU和狭基线纹香茶菜水提取物混合药液100μL(见下表)，或者分别加入不同浓度的5-FU药液100μL，或者分别加入不同浓度的狭基线纹香茶菜水提取物药液100μL；空白组加入100μL培养基。给药完成后置于37℃，5％CO2的恒温细胞培养箱中孵育24h。

表3不同浓度混合药液

(5)计算联合指数(CI)和剂量减少指数(DRI)

基于两种药物药理学相互作用，狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶以一定比例混合配液进行MTT实验，运用CalcuSyn软件，绘制细胞抑制率曲线，并计算联合指数(CI)和剂量减少指数(DRI)，同时计算单药使用剂量及联合使用剂量。CI＝1表明两者是相加作用，CI＜1表明两者有协同效应，CI＞1表明两者有拮抗效应。DRI反映的两种药物联用时的作用强度。

2、实验结果

表4狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶联合应用对HepG2的作用

统计学分析显示，狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶联合应用时，在不同剂量下，两种药物的CI值(联合指数)均小于1，DRI值(剂量减少指数)也明显增加，显示两者联合应用具有协同效应(如表2所示)，其中0.5μg/mL5-FU药液+2.0mg/mL狭基线纹香茶菜水提取物时，协同效果最优。狭基线纹香茶菜水提取物或5-氟尿嘧啶单药应用如要获得两种联合应用的效果，必须加大单药的使用剂量，才能得到两种药物小剂量联用的效果，此时单药剂量过大，容易产生副作用。

实施例3、狭基线纹香茶菜水提取物与5-氟尿嘧啶联合用药对HepG2细胞凋亡及机制分析

1、实验方法

(1)细胞接种同实施例1中的“(1)细胞接种”步骤

(2)供试药液的配制同实施例1中的“(2)供试药液的配制”步骤

(3)实验组别

阴性对照组：细胞+RPMI-1640培养基；

供试药液组：细胞+0.25μg/mL 5-FU药液，细胞+0.5μg/mL 5-FU药液，细胞+2.0mg/mL狭基线纹香茶菜水提取物药液，细胞+0.5μg/mL 5-FU和2.0mg/mL狭基线纹香茶菜水提取物混合药液，细胞+0.25μg/mL 5-FU和2.0mg/mL狭基线纹香茶菜水提取物混合药液，

空白组：不含细胞，只添加RPMI-1640培养基。

(4)给药 取处于对数生长期、生长状态良好的HepG2细胞，用0.25％胰蛋白酶消化细胞后，接种于6孔板中(约每孔1.0*10⁶cells)，加入适量含10％FBS的RPMI-1640培养液，常规孵育24h。阴性对照组加入100μL培养基；

供试药液组分别加入不同浓度的5-FU和狭基线纹香茶菜水提取物混合药液100μL，或者分别加入不同浓度的5-FU药液100μL，或者分别加入2.0mg/mL的狭基线纹香茶菜水提取物药液100μL；空白组加入100μL培养基。给药完成后置于37℃，5％CO₂的恒温细胞培养箱中孵育24h。

(5)检测细胞凋亡及机制分析

流式细胞术检测不同浓度狭基线纹香茶菜水提取物、不同浓度5-氟尿嘧啶以及狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶混合液对HepG2细胞凋亡率。提取各组细胞中的总蛋白，进行Western blot实验，检测促凋亡蛋白Bax，cleaved-PARP表达量和抗凋亡蛋白Bcl-2、PARP表达量。

2、实验结果

流式细胞术检测狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶混合液对HepG2细胞凋亡的影响。如图1和图2所示，结果如下：狭基线纹香茶菜水提取物(2.0mg/mL)联合5-氟尿嘧啶(0.5μg/mL)时，HepG2细胞的凋亡率明显增加，单药应用时细胞凋亡率较低。狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶具有协同作用，Western blot实验证实，狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶联用能増加促凋亡蛋白Bax，cleaved-PARP表达量，减少抗凋亡蛋白Bcl-2、PARP表达量。

实施例4、狭基线纹香茶菜水提取物与5-氟尿嘧啶联合用药对HepG2细胞内ROS水平影响分析

1、实验方法

(1)细胞接种同实施例1中的“(1)细胞接种”步骤

(2)供试药液的配制同实施例1中的“(2)供试药液的配制”步骤

(3)实验组别

阴性对照组：细胞+RPMI-1640培养基；

供试药液组：细胞+0.5μg/mL 5-FU药液，细胞+2.0mg/mL狭基线纹香茶菜水提取物药液，细胞+0.5μg/mL 5-FU和2.0mg/mL狭基线纹香茶菜水提取物混合药液，细胞+0.5μg/mL5-FU和2.0mg/mL狭基线纹香茶菜水提取物+NAC(5mM)混合药液，

空白组：不含细胞，只添加RPMI-1640培养基。

(4)给药 取对数生长期的HepG2细胞接种于六孔板中24h后，按实验组别要求分别将不同浓度狭基线纹香茶菜水提取物/5-氟尿嘧啶、NAC(抗氧化剂)加入到HepG2细胞，药物作用48h。

(5)检测细胞内ROS水平

药物作用48h后，终止药物处理，收集细胞，重悬于含50μmol/L的DCFH-DA无血清培养液中，置37℃细胞培养箱孵育培养20min，每隔5min混匀一下，然后，用无血清培养液洗涤细胞3次，用荧光显微镜观察，用荧光酶标仪测定平均荧光强度。提取各组细胞中的总蛋白，进行Western blot实验，检测促凋亡蛋白Bax，cleaved-PARP表达量和抗凋亡蛋白Bcl-2、PARP表达量。

2、实验结果

运用细胞流式术检测HepG2细胞凋亡及细胞中ROS水平，实验数据显示狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶联用可显著増加细胞中ROS水平；给予NAC处理后，细胞中的ROS水平显著下降，如图3所示。Western blot实验证实，NAC能拮抗狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶对凋亡相关蛋白的影响，如图4所示。推导出狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶联用诱导的细胞凋亡是ROS依赖的。

实施例5狭基线纹香茶菜水提取物与5-氟尿嘧啶联合用药对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤影响

1.人肝癌裸鼠动物模型的建立

(1)BALB/C-nu裸鼠4-6周龄，体重18-22g，SPF级，共48只，雌雄各半，置于SPF级屏蔽系统，室温恒定，专用高压后饲料及饮水喂养，1周后开始实验。

(2)将人肝癌HepG2细胞常规培养于37℃的含5％CO2培养箱中，收集对数生长期肝癌细胞，0.25％胰酶(含EDTA)适量消化贴壁细胞，加完全RPMI-1640培养基(含10％FBS)终止消化，反复吹打，离心(1000prm)3min，PBS洗涤细胞两次，离心(1000prm)3min，收集细胞，用PBS调整细胞悬液浓度至1*10⁷个/mL，保持于4℃左右，接种前充分混悬均匀，按0.2mL/只的剂量接种于裸鼠腋下皮下，所有裸鼠接种均应在30min内完成。然后每日观察生长情况，当肿瘤体积达到100mm³时，且裸鼠一般状况良好，说明成功建立移植瘤模型。

2.药效实验研究

实验分狭基线纹香茶菜水提取物治疗组，生理盐水组(空白对照组)，5-Fu组、联合用药组和正常对照组(不造模组)。水提取物治疗组每天按200mg/kg·d的药物量灌胃，联合用药组每天按200mg/kg·d的药物量灌胃并腹腔注射5-氟尿嘧啶(20mg/kg/次，每周二次)，空白对照组和正常对照组每天口服同体积生理盐水，5-Fu组腹腔注射5-氟尿嘧啶(20mg/kg/次，每周二次)。24天后处死裸鼠。

3.给药后观察裸鼠成瘤情况：

每日观察精神、饮食、活动、大小便、体重等情况，测量瘤体，计算肿瘤体积，并绘出肿瘤体积生长曲线，计算肿瘤抑制率。

人肝癌HepG2裸鼠移植瘤建模成功后，在平均肿瘤体积约长到100mm³时开始给药。各组连续给药24天，观察记录瘤体体积变化，绘制各组肿瘤生长曲线，结果见图5。

由图5所示，在给药24天后，与模型组相比，水提取物组、5-FU组、联合用药组均能抑制肿瘤的生长，其中以联合用药组效果最佳。

用药结束2天后，经裸鼠眼眶静脉丛取血后颈椎脱臼处死裸鼠，剥离瘤组织，各组瘤组织见图6，称瘤重，计算抑瘤率和肿瘤/体重比，如表5所示。

表5各组药物对移植瘤生长的抑制作用(

n＝6)

与模型组比较，#P<0.01；

结果显示，水提取物组的抑瘤率为53.9％，5-FU组的抑瘤率为60.1％。水提取物+5-FU组的抑瘤率为63.5％，由此可见，与模型组相比，5-FU组、水提取物组和联合用药组均具有抑制移植瘤生长的作用，且呈量效关系，其中，联合用药组抑制移植瘤生长的作用更明显。

2.4肿瘤/体重比

由表6和图7可知，值得令人注意的是，联合用药组的肿瘤/体重比显著低于5-FU组(P<0.01)和水提取物组(P<0.05)，说明中药和化药联合应用对降低动物肿瘤/体重比更有意义，而且，实验也发现5-FU组的动物由于化药的副作用较大，普遍比较瘦弱、懒动、食量减少、部分存在腹泻等现象，联合用药组动物的精神、饮食、活动、大小便等情况明显好转，说明水提取物和5-FU联合应用既抑制了肿瘤生长，又克服了化药的副作用，改善了生活质量。

表6各实验组肿瘤/体重比(

n＝6)

与模型组比较，#P<0.01；与5-Fu组比较，*P<0.01；与水溶性总黄酮组比较，▲P<0.01，a P<0.05；

根据上述实施例1-5表明；

(1)狭基线纹香茶菜水提取物与5-FU以联合用药方式作用于HepG2细胞，抑制肿瘤细胞增殖的效果均优于单独给药5-FU或药狭基线纹香茶菜水提取物的效果。运用CalcuSyn软件计算联合指数(CI)和剂量减少指数(DRI)，说明狭基线纹香茶菜水提取物与5-FU联用具有协同作用。

(2)狭基线纹香茶菜水提取物与5-氟尿嘧啶联合用药可以协同促进HepG2细胞凋亡，联用可显著増加细胞中ROS水平，说明狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶联用诱导的细胞凋亡是ROS依赖的。其机制可能是増加促凋亡蛋白Bax，cleaved-PARP表达量，减少抗凋亡蛋白Bcl-2、PARP表达量。

(3)狭基线纹香茶菜水提取物与5-氟尿嘧啶联合用药可以协同抑制移植瘤生长，联合用药组的肿瘤/体重比显著低于5-FU组和水提取物组。

综上，本发明研究表明特定重量比的5-FU与狭基线纹香茶菜水提取物联合使用，在一定浓度范围内对于抑制HepG2细胞的增殖具有协同作用。体内实验说明水提取物和5-FU联合应用既抑制了肿瘤生长，又克服了化药的副作用，改善了生活质量。本发明特定重量比的5-FU与狭基线纹香茶菜水提取物可用于制备治疗肝癌的药物,具有良好的应用前景。

Claims (10)

1.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，包括狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶。

2.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，包括狭基线纹香茶菜水提取物和5-氟尿嘧啶组合形成的溶液；其中，狭基线纹香茶菜水提取物在所述溶液中的浓度为0.125mg/mL-4.0mg/mL；5-氟尿嘧啶在所述溶液中的浓度为0.0313μg-1.0μg/mL。

3.根据权利要求2所述的一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述抗肿瘤药物组合物还包括药学上可接受的辅料。

4.根据权利要求3所述的一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，狭基线纹香茶菜水提取物在所述抗肿瘤药物组合物中的浓度为0.25mg/mL-4.0mg/mL；5-氟尿嘧啶在所述抗肿瘤药物组合物中的浓度为0.125μg-1.0μg/mL。

5.根据权利要求3所述的一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述辅料包括：注射用水、增溶剂、助溶剂、抗氧剂、pH值调节剂、乳化剂、吸附剂、络合剂中的至少一种。

6.一种抗肿瘤药物组合物制剂的制备方法，其特征在于，包括如权利要求3-5任一所述的一种抗肿瘤药物组合物。

7.根据权利要求6所述的一种抗肿瘤药物组合物制剂的制备方法，其特征在于，

将所述抗肿瘤药物组合物直接混合做成制剂；或者，将所述抗肿瘤药物组合物中的狭基线纹香茶菜水提取物、5-氟尿嘧啶分别与相应的辅料混合分别做成制剂，然后再分别按照常规的方式进行包装并包装袋之间一一对应的相互连接；或者，所述抗肿瘤药物组合物中的狭基线纹香茶菜水提取物、5-氟尿嘧啶分别与相应的辅料混合后，两者再混合做成制剂。

8.根据权利要求7所述的一种抗肿瘤药物组合物制剂的制备方法，其特征在于，所述辅料不与所述抗肿瘤药物组合物发生反应或不影响所述抗肿瘤药物组合物的功效。

9.权利要求1-5任一所述的一种抗肿瘤药物组合物，在下面的应用：

(1)制备抑制和/或治疗HepG2细胞的制剂中的应用；

(2)制备抑制和/或治疗肿瘤疾病的制剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的一种抗肿瘤药物组合物的应用，其特征在于，所述肿瘤疾病为肝癌。

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