CN115505621A - 一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，包括以下步骤，原料预处理：将核桃仁脱脂后粉碎过筛得到核桃粉，将核桃粉置于酶解罐中，加入5‑7倍量的水，浸泡15‑20分钟，高速匀浆6‑9分钟；制备核桃蛋白：加入纤维素酶和果胶酶，调节pH到6～7、温度为50～55℃下酶解3～5h，得到核桃蛋白；然后去除淀粉，酶解，灭酶，液‑固分离，浓缩，干燥得到核桃肽粉。本发明采用上述结构的一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，转化率高，制得的核桃肽亲水性强、可速溶与水、溶液澄清透明，并且具有优良的抗疲劳活性、抗氧化活性和降血压活性。
Description
技术领域
本发明涉及生物活性肽技术领域，特别是涉及一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法。
背景技术
核桃肽是修复脑组织细胞代谢的重要物质，能滋养脑细胞，增强脑功能，补充心肌细胞、净化血液，降低胆固醇、排除血管壁内的“污垢杂质”使血液净化，从而为人体提供更好的新鲜血液。用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病。核桃肽蛋白能防止动脉硬化，可提升白细胞，保护肝脏、有润肺、黑发的作用。不仅如此核桃肽还能抵抗自由基对细胞的氧化损害，润燥滑肠。年龄大的人多喝核桃肽，预防心血管疾病，通血管。青年人工作人群喝能够缓解用脑过度，精神紧张，可以说适合多种人群。所以，研究开发核桃生物活性肽具有广阔的前景。
传统获得肽的方法有很多。传统法主要有：酸法、碱法、电法、人工嫁接法、基因表达法等。但在工艺技术方面，这些合成工艺方法的局限性，是导致其这些合成方法没有产品的原因。而酶法在传统法的基础上有所突破和创新，适应了低碳经济和绿色环保的要求。酶法就是用生物酶催化蛋白质获得多肽，就是蛋白质降解，人工合成的多肽。酶法较酸法、碱法、电法温和、环保。生产工艺简易，投资少、见效快，适宜工业化生产。目前，酶解过程常采用各种蛋白酶一起参与整个酶解过程，忽略了蛋白酶之间的差异性，从而存在酶解效果不理想，制备得到的核桃肽质量不高的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，转化率高，制得的核桃肽亲水性强、可速溶与水、溶液澄清透明，并且具有优良的抗疲劳活性、抗氧化活性和降血压活性。
为实现上述目的，本发明提供了一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将核桃仁脱脂后粉碎过筛得到核桃粉，将核桃粉置于酶解罐中，加入5-7倍量的水，浸泡15-20分钟，高速匀浆6-9分钟；
(2)制备核桃蛋白：向步骤(1)加入纤维素酶和果胶酶，调节pH到6～7、温度为50～55℃下酶解3～5h，得到核桃蛋白；
(3)去除淀粉：将核桃蛋白加热处理，使脱脂核桃蛋白粉中的淀粉充分糊化后，停止加热并冷却；然后加入耐高温淀粉酶或糖化酶，调节pH到5.5-6.5，酶解40-60min，趁热离心，收集沉淀物；
(4)酶解：向步骤(3)中制备的沉淀物中加入水制备成蛋白水溶液，调节pH到6-9，升温至55℃，加入碱性蛋白酶酶解0.5小时，再加入木瓜蛋白酶继续酶解3.5小时，最后加入风味酶继续酶解0.5小时；
(5)灭酶：将步骤(4)得到的酶解液通入过热水蒸汽中，加热至中心温度达到85-95℃，保持10-30分钟进行灭酶、灭菌处理；
(6)液-固分离：将经过灭酶处理后的核桃粕酶解液进行液-固分离后除去不溶性固形物，制得核桃肽液；
(7)浓缩：将核桃肽液浓缩制得核桃肽浓缩液；
(8)干燥：将核桃肽浓缩液干燥，即可得到核桃肽粉。
优选的，步骤(3)中，核桃蛋白加热处理的温度为80-90℃，并保持10-20min，冷却的温度为45-65℃。
优选的，步骤(3)中，在收集沉淀物中，向沉淀物中加入3-5倍量的水，重复搅拌、浸提、离心2-3次；最后离心，收集沉淀物。
优选的，步骤(4)中，碱性蛋白酶的质量占沉淀物质量的4-6％，木瓜蛋白酶的质量占沉淀物质量的3-5％，风味蛋白酶的质量占沉淀物质量的1-3％。
优选的，步骤(7)中，采用真空浓缩得到核桃肽浓缩液，核桃肽浓缩液的水分含量为65-70％。
优选的，步骤(8)中，采用冷冻干燥的方式制得核桃肽粉。
本发明的有益效果：
(1)去除核桃蛋白粉中的淀粉，使原料中的淀粉水解为水溶性的低聚糖，减少核桃肽因美拉德褐变所产生的褐变；
(2)将碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味酶分批次加入，避免各种蛋白酶一起参与整个酶解过程，提高核桃肽的转化率，并且制得的核桃肽亲水性强，具有优良的抗疲劳活性、抗氧化活性和降血压活性；
(3)制备方法简单，成本低、浪费少，可用于工业化生产。
下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步描述，实施例中所用各种化学品和试剂如无特别说明均为市售购买。
实施例1
将核桃仁脱脂后粉碎过筛得到核桃粉，将核桃粉置于酶解罐中，加入6倍量的水，浸泡20分钟，高速匀浆7分钟，然后加入纤维素酶和果胶酶，调节pH到7、温度为50℃下酶解5h，得到核桃蛋白。将核桃蛋白加热处理，加热至温度为80℃，并保持20min，使脱脂核桃蛋白粉中的淀粉充分糊化后，停止加热并冷却，冷却至温度为45℃，然后加入耐高温淀粉酶或糖化酶，调节pH为6，酶解40min，趁热离心，收集沉淀物。在收集沉淀物中，向沉淀物中加入5倍量的水，重复搅拌、浸提、离心3次；最后离心，再次收集沉淀物。
向沉淀物中加入水制备成蛋白水溶液，调节pH为8，升温至55℃，加入碱性蛋白酶酶解0.5小时，再加入木瓜蛋白酶继续酶解3.5小时，最后加入风味酶继续酶解0.5小时，其中碱性蛋白酶的质量占沉淀物质量的4％，木瓜蛋白酶的质量占沉淀物质量的3％，风味蛋白酶的质量占沉淀物质量的1％。然后得到的酶解液通入过热水蒸汽中，加热至温度达到85℃，保持25分钟进行灭酶、灭菌处理。将经过灭酶处理后的核桃粕酶解液进行液-固分离后除去不溶性固形物，制得核桃肽液，采用真空浓缩得到核桃肽浓缩液，核桃肽浓缩液的水分含量为65％，采用冷冻干燥的方式制得核桃肽粉。
实施例2
将核桃仁脱脂后粉碎过筛得到核桃粉，将核桃粉置于酶解罐中，加入6倍量的水，浸泡20分钟，高速匀浆7分钟，然后加入纤维素酶和果胶酶，调节pH到7、温度为50℃下酶解5h，得到核桃蛋白。将核桃蛋白加热处理，加热至温度为85℃，并保持20min，使脱脂核桃蛋白粉中的淀粉充分糊化后，停止加热并冷却，冷却至温度为55℃，然后加入耐高温淀粉酶或糖化酶，调节pH为6.5，酶解50min，趁热离心，收集沉淀物。在收集沉淀物中，向沉淀物中加入5倍量的水，重复搅拌、浸提、离心3次；最后离心，再次收集沉淀物。
向沉淀物中加入水制备成蛋白水溶液，调节pH为8，升温至55℃，加入碱性蛋白酶酶解0.5小时，再加入木瓜蛋白酶继续酶解3.5小时，最后加入风味酶继续酶解0.5小时，其中碱性蛋白酶的质量占沉淀物质量的5％，木瓜蛋白酶的质量占沉淀物质量的4％，风味蛋白酶的质量占沉淀物质量的2％。然后得到的酶解液通入过热水蒸汽中，加热至中心温度达到90℃，保持25分钟进行灭酶、灭菌处理。将经过灭酶处理后的核桃粕酶解液进行液-固分离后除去不溶性固形物，制得核桃肽液，采用真空浓缩得到核桃肽浓缩液，核桃肽浓缩液的水分含量为68％，采用冷冻干燥的方式制得核桃肽粉。
实施例3
将核桃仁脱脂后粉碎过筛得到核桃粉，将核桃粉置于酶解罐中，加入6倍量的水，浸泡20分钟，高速匀浆7分钟，然后加入纤维素酶和果胶酶，调节pH到7、温度为50℃下酶解5h，得到核桃蛋白。将核桃蛋白加热处理，加热至温度为90℃，并保持20min，使脱脂核桃蛋白粉中的淀粉充分糊化后，停止加热并冷却，冷却至温度为65℃，然后加入耐高温淀粉酶或糖化酶，调节pH为6.5，酶解60min，趁热离心，收集沉淀物。在收集沉淀物中，向沉淀物中加入5倍量的水，重复搅拌、浸提、离心3次；最后离心，再次收集沉淀物。
向沉淀物中加入水制备成蛋白水溶液，调节pH为9，升温至55℃，加入碱性蛋白酶酶解0.5小时，再加入木瓜蛋白酶继续酶解3.5小时，最后加入风味酶继续酶解0.5小时，其中碱性蛋白酶的质量占沉淀物质量的6％，木瓜蛋白酶的质量占沉淀物质量的5％，风味蛋白酶的质量占沉淀物质量的3％。然后得到的酶解液通入过热水蒸汽中，加热至中心温度达到95℃，保持30分钟进行灭酶、灭菌处理。将经过灭酶处理后的核桃粕酶解液进行液-固分离后除去不溶性固形物，制得核桃肽液，采用真空浓缩得到核桃肽浓缩液，核桃肽浓缩液的水分含量为70％，采用冷冻干燥的方式制得核桃肽粉。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。
Claims (6)
1.一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将核桃仁脱脂后粉碎过筛得到核桃粉，将核桃粉置于酶解罐中，加入5-7倍量的水，浸泡15-20分钟，高速匀浆6-9分钟；
(2)制备核桃蛋白：向步骤(1)加入纤维素酶和果胶酶，调节pH到6～7、温度为50～55℃下酶解3～5h，得到核桃蛋白；
(3)去除淀粉：将核桃蛋白加热处理，使脱脂核桃蛋白粉中的淀粉充分糊化后，停止加热并冷却；然后加入耐高温淀粉酶或糖化酶，调节pH到5.5-6.5，酶解40-60min，趁热离心，收集沉淀物；
(4)酶解：向步骤(3)中制备的沉淀物中加入水制备成蛋白水溶液，调节pH到6-9，升温至55℃，加入碱性蛋白酶酶解0.5小时，再加入木瓜蛋白酶继续酶解3.5小时，最后加入风味酶继续酶解0.5小时；
(5)灭酶：将步骤(4)得到的酶解液通入过热水蒸汽中，加热至中心温度达到85-95℃，保持10-30分钟进行灭酶、灭菌处理；
(6)液-固分离：将经过灭酶处理后的核桃粕酶解液进行液-固分离后除去不溶性固形物，制得核桃肽液；
(7)浓缩：将核桃肽液浓缩制得核桃肽浓缩液；
(8)干燥：将核桃肽浓缩液干燥，即可得到核桃肽粉。
2.根据权利要求1所述的一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，其特征在于：步骤(3)中，核桃蛋白加热处理的温度为80-90℃，并保持10-20min，冷却的温度为45-65℃。
3.根据权利要求1所述的一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，其特征在于：步骤(3)中，在收集沉淀物中，向沉淀物中加入3-5倍量的水，重复搅拌、浸提、离心2-3次；最后离心，收集沉淀物。
4.根据权利要求1所述的一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，其特征在于：步骤(4)中，碱性蛋白酶的质量占沉淀物质量的4-6％，木瓜蛋白酶的质量占沉淀物质量的3-5％，风味蛋白酶的质量占沉淀物质量的1-3％。
5.根据权利要求1所述的一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，其特征在于：步骤(7)中，采用真空浓缩得到核桃肽浓缩液，核桃肽浓缩液的水分含量为65-70％。
6.根据权利要求1所述的一种利用生物酶解法制备核桃肽的方法，其特征在于：步骤(8)中，采用冷冻干燥的方式制得核桃肽粉。
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