CN115501240B - 一种生物制剂在心肌修复中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种生物制剂在心肌修复中的应用，属于心血管技术领域。该生物制剂为野黑樱苷，本发明发现野黑樱苷能够对缺血缺氧环境下的心肌细胞发挥保护作用，促进缺血缺氧环境下心肌细胞的增殖能力，降低缺血缺氧环境下心肌细胞中促凋亡蛋白BAX的表白，并升高缺血缺氧环境下心肌细胞中抑凋亡蛋白Bcl‑2的表达，从而为心肌梗死治疗提供一种新的方式。
Description
技术领域
本发明属于心血管技术领域，尤其涉及一种生物制剂在心肌修复中的应用。
背景技术
心肌梗死是导致患者心力衰竭和死亡的主要原因之一，现有的研究表明心肌梗死的发病率正呈现出逐年上升的趋势。其是一种常见的心肌缺血性疾病，其是因为冠状动脉供血急剧减少或中断导致心肌细胞大量坏死所导致的疾病。现有的外科手术治疗，溶栓治疗以及药物治疗只能够一定程度的改善患者的心室重构，保护剩余的心肌细胞，但是无法增加新的心肌细胞也无法恢复心肌细胞的增殖能力。因此，需要寻找新的治疗方式增强细胞的增殖能力并且降低缺氧缺血对于心肌细胞的损伤。
野黑樱苷(Prunasin)来源于杏、青梅、桃和杨梅等植物的种仁中，野黑樱苷的分子式为C14H17NO6，分子量为295.29，CAS号为99-18-3。目前，过于野黑樱苷功能的研究较少，而关于野黑樱苷在心肌修复中的功能尚无文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物制剂在心肌修复中的应用，从而为治疗患者的心肌梗死提供一种新的治疗方式。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种生物制剂在心肌修复中的应用，其特征在于，所述生物制剂为野黑樱苷。
优选地，所述野黑樱苷对缺血缺氧环境下的心肌细胞发挥保护作用。
优选地，所述野黑樱苷促进缺血缺氧环境下心肌细胞的增殖能力。
优选地，所述野黑樱苷降低缺血缺氧环境下心肌细胞的凋亡。
第二方面，本发明提供了一种用于对缺血缺氧诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用的药物，所述药物以野黑樱苷为活性成分，并辅以药学上可接受的辅料制成。
优选地，所述辅料为载剂，稀释剂或赋性剂。
优选地，所述药物至少具有以下功能之一：
对缺血缺氧环境下的心肌细胞发挥保护作用；
促进缺血缺氧环境下心肌细胞的增殖能力；
降低缺血缺氧环境下心肌细胞的凋亡。
优选地，所述药物的给药途径为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
优选地，所述药物的主要针对对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物。
优选地，所述哺乳动物优选为灵长目动物；所述灵长目动物优选为人。
第三方面，本发明提供了野黑樱苷在制备缺血缺氧环境下心肌细胞增殖促进剂中的应用。
第四方面，本发明提供了野黑樱苷在制备缺血缺氧环境下心肌细胞凋亡抑制剂中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明提供的生物制剂为野黑樱苷对缺血缺氧环境下的心肌细胞发挥保护作用，促进缺血缺氧环境下心肌细胞的增殖能力，降低缺血缺氧环境下心肌细胞的凋亡，从而为心肌梗死治疗提供一种新的方式。
附图说明
图1为野黑樱苷对于缺血缺氧环境下心肌细胞凋亡蛋白的影响；
图2为野黑樱苷对于缺血缺氧环境下心肌细胞LDH释放的影响。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
野黑樱苷对于人心肌细胞AC16的细胞活力的影响
(1)将对数生长期的AC16细胞按照3×103/孔接种至96孔板中；
(2)培养12h后，分别设置对照组和不同浓度的野黑樱苷组(5,10,20,40,80,160μmol/L)，按照上述分组添加相应的药物，对照组不添加药物至培养基中，每个分组设置3个重复孔；
(3)培养24h之后，每孔中加入10μL CCK-8试剂，孵育2h后置于酶标仪中检测450nm的吸光度，结果见表1。
表1野黑樱苷对于人心肌细胞AC16活力的影响
从表1中，本发明得出如下结论：
在野黑樱苷的浓度为5-80μmol/L时，对于细胞的活性没有明显的影响，当野黑樱苷的浓度为160μmol/L是，会对一定程度抑制细胞的活性。
实施例2
野黑樱苷对于心肌细胞缺血缺氧条件下的增殖的影响
(1)将对数生长期的AC16细胞3×103/孔接种至96孔板中；
(2)培养12h后，分别设置对照组和4个实验组，对照组更换为新的含10％FBS的H-DMEM培养基，置于常氧下，37℃继续培养；
实验组a更换为含有0.2％FBS的L-DMEM培养基，置于37℃、5％CO2、94％N2和1％O2的三气培养箱中继续培养；
实验组b，c，d除了添加20,40，80μmol/L野黑樱苷外，其余条件与实验组a相同，每个分组设置3个重复；
(3)养24h之后，每孔中加入10μL CCK-8试剂，孵育2h后置于酶标仪中检测450nm的吸光度，结果见表2。
表2野黑樱苷对于心肌细胞缺血缺氧条件下的增殖的影响
从表2中，本发明得出如下结论：
缺血缺氧损伤后，会导致细胞的增殖能力下降，而添加野黑樱苷则可以一定程度的恢复细胞的增殖能力，且效果在80μmol/L时达到最佳。
实施例3
野黑樱苷对于心肌细胞缺血缺氧条件下的凋亡蛋白表达的影响
(1)将对数生长期的AC16细胞接种至6孔板中；
(2)培养12h后，分别设置对照组和2个实验组，对照组更换为新的含10％FBS的H-DMEM培养基，置于常氧下，37℃继续培养；
实验组a更换为含有0.2％FBS的L-DMEM培养基，置于37℃、5％CO2、94％N2和1％O2的三气培养箱中继续培养；
实验组b除添加5μmol/L野黑樱苷外，其余条件与实验组a相同；
实验组c出添加80μmol/L野黑樱苷外，其余条件与实验组a相同，每组设置3个重复；
(3)培养24h之后，去除上清，加入蛋白裂解液提取蛋白样品；
(4)参照Western blot检测步骤，检测BCL-2和BAX的蛋白表达水平，结果如图1所示。
从图1中，本发明得出如下结果：
缺氧缺血损伤后，细胞中凋亡促进蛋白BAX的表达显著升高，而细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达显著降低；
当使用低浓度的野黑樱苷处理时，对于BAX的升高和Bcl-2降低没有明显的影响；
当使用高浓度的野黑樱苷处理时，损伤导致的BAX升高被明显抑制，同时，损伤导致的Bcl-2降低被明显恢复，说明使用高浓度的野黑樱苷处理时可以有效的降低心肌细胞的凋亡。
实施例4
(1)将对数生长期的AC16细胞接种至6孔板中；
(2)培养12h后，分别设置对照组和2个实验组，对照组更换为新的含10％FBS的H-DMEM培养基，置于常氧下，37℃继续培养；
实验组a更换为含有0.2％FBS的L-DMEM培养基，置于37℃、5％CO2、94％N2和1％O2的三气培养箱中继续培养；
实验组b除添加80μmol/L野黑樱苷外，其余条件与实验组a相同；
(3)养24h之后，收集上清，每个分组设置3个重复，根据LDH试剂盒操作说明检测上清中的LDH含量，结果如图2所示。
从图2中，本发明得出如下结论：
缺血缺氧损伤后，培养基中LDH含量明显升高，而添加野黑樱苷后培养基中LDH含量被一定程度的逆转，说明野黑樱苷可以在缺血缺氧损伤环境下对心肌细胞起到保护作用。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (2)
1.一种生物制剂在制备体外低血清和缺氧环境下心肌细胞增殖促进培养基中的应用，其特征在于，所述生物制剂为野黑樱苷；
所述培养基中，所述野黑樱苷的浓度为20-80μmol/L；
所述心肌细胞为人心肌细胞AC16。
2.一种生物制剂在制备体外低血清和缺氧环境下心肌细胞凋亡抑制培养基中的应用，其特征在于，所述生物制剂为野黑樱苷；
所述培养基中，所述野黑樱苷的浓度为80μmol/L；
所述心肌细胞为人心肌细胞AC16；
所述野黑樱苷通过逆转由低血清和缺氧环境导致的BAX蛋白升高和Bcl-2蛋白降低来实现抑制心肌细胞凋亡。
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| WO2022025598A1 (ko) * | 2020-07-28 | 2022-02-03 | 삼성전자 주식회사 | Smad1/5/8 활성화제를 포함하는 다능성줄기세포로부터 중간엽줄기세포로의 분화 유도용 조성물 및 그의 용도 |
| CN113679731A (zh) * | 2021-09-06 | 2021-11-23 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 野黑樱苷在制备治疗脂肪性肝病和肝纤维化的药物中的应用 |
| CN114259499A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-04-01 | 上海运佳黄浦制药有限公司 | 野黑樱苷在制备皮肤修复制剂中的应用及药物组合物 |
Non-Patent Citations (2)
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Also Published As
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