CN115501220B - 一种具有抑制炎症因子表达作用的组合物及应用 - Google Patents

一种具有抑制炎症因子表达作用的组合物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有抑制炎症因子表达作用的组合物及应用，一种具有抑制炎症因子表达作用的组合物，其由矢车菊素和蓝莓花色苷提取物组成。本发明使用脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)对小鼠巨噬细胞RAW264.7构建细胞免疫损伤模型，将矢车菊素单体与蓝莓花色苷提取物进行组合，使其在抑制RAW264.7细胞炎症因子TNF‑αmRNA表达方面能够产生明显的协同配伍作用，降低了矢车菊素单味药使用剂量、毒性与成本，同时协同增强蓝莓花色苷提取物中各活性成分的作用效果，此项发明既明确了药物单体的使用剂量，又有效利用了提取物中的多种活性成分，为抵抗炎症提供新的药物候选来源和提高抗炎临床治疗效果方面具有重要意义。

Description

一种具有抑制炎症因子表达作用的组合物及应用
技术领域
本发明涉及了生物医药技术领域，特别是涉及了一种具有抑制炎症因子表达作用的组合物及应用。
背景技术
炎症反应是宿主在内外因素刺激之下产生的一种防御性反应，过度的、慢性的炎症反应将导致机体多种组织损伤。炎症反应过程中，巨噬细胞的炎症相关信号通路被激活，诱导一系列的促炎症因子表达，从而参与炎症性疾病的发生与发展。TNF-α是炎症反应中最常见的一个炎症因子，它不仅可以激活放大炎症反应，还可以诱导细胞的凋亡，研究发现多数中药是通过抑制炎症因子TNF-α的表达来发挥其抗炎作用。
如中国发明专利CN102727654A公开了一种对炎症因子表达具有抑制作用的药物组合物，由第1提取物、第2提取物和第3提取物组成，所述提取物的制备方法如下：a)将原料药金银花、玄参、当归、甘草按照重量比2.5～4∶2.5～4∶1.5～2.5∶0.5～1.5的比例混匀；b)将所述原料药中加入水或40～60％的乙醇作为提取溶剂，所述原料药与所述提取溶剂的固液比为1∶5～10，提取2次以上，每次1.5～4.5小时，过滤后合并滤液，得到提取液和残渣；c)将所述提取液浓缩至干，后加水混悬，上大孔树脂，采用水、30％乙醇、60％乙醇和95％乙醇作为洗脱液进行连续淋洗，分别得到30％乙醇淋洗物即为所述第1提取物，60％乙醇淋洗物即为所述第2提取物、95％乙醇淋洗物即为所述第3提取物；d)将所述第1、2、3提取物混合，得到所述药物组合物。
目前研究中药的抗炎作用较普遍的是从中药方剂和中药提取液这两个方向进行的，从中药单体这个方向进行的研究并不多。而蓝莓花色苷提取物中除花色苷外还含有其他活性成分，但这些活性成分的在疾病治疗中所起的具体药效却不明确。目前也尚未见到有关矢车菊素与蓝莓花色苷提取物的组合物对抑制炎症因子TNF-α表达起协同作用的任何报道。
发明内容
为了弥补已有技术的缺陷，本发明提供了一种具有抑制炎症因子表达作用的组合物及应用。
本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：
第一方面，一种具有抑制炎症因子表达作用的组合物，其由矢车菊素和蓝莓花色苷提取物组成。
根据本发明的实施方式之一，所述矢车菊素的质量终浓度设为0.3125～40μg/mL，所述蓝莓花色苷提取物的质量终浓度设为12.5～800μg/mL。
根据本发明的实施方式之一，所述矢车菊素的质量终浓度设为2.5～10μg/mL，所述蓝莓花色苷提取物的质量终浓度设为40～400μg/mL。
根据本发明的实施方式之一，所述矢车菊素与蓝莓花色苷提取物的质量比为1:20～1:60。
根据本发明的实施方式之一，所述矢车菊素与蓝莓花色苷提取物的质量比为1:40。
根据本发明的实施方式之一，所述矢车菊素的质量终浓度设为2.93μg/mL，所述蓝莓花色苷提取物的质量终浓度设为118.68μg/mL。
根据本发明的实施方式之一，所述矢车菊素选自纯度98.66％的矢车菊素；所述蓝莓花色苷提取物通过以下方法制得：蓝莓打浆，离心处理获得汁液和果渣；汁液按照1:2(v/v)和无水乙醇混合，得到蓝莓乙醇溶液，以及将果渣在乙醇水溶液中进行超声萃取20～30min，得到蓝莓花色苷提取液；将蓝莓乙醇溶液和蓝莓花色苷提取液混合过滤，分离液通过装有HP2MGL大孔树脂的分离柱进行吸附分离，至吸附饱和；然后用70％乙醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩后进行真空冷冻干燥，即可得到粉末状的蓝莓花色苷提取物，备用。
需要说明的是，上述质量终浓度(μg/mL)是指每一毫升的培养基加1ug重量的矢车菊素或蓝莓花色苷提取物达到预设浓度。
第二方面，一种组合物在制备抑制炎症因子药物方面的应用，其中，所述组合物如任一上述的组合物。
根据本发明的实施方式之一，所述药物为炎症因子活性抑制剂。
根据本发明的实施方式之一，所述炎症因子为肿瘤坏死因子-α。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明使用脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)对小鼠巨噬细胞RAW264.7构建细胞免疫损伤模型，将矢车菊素单体与蓝莓花色苷提取物进行组合，使其在抑制RAW264.7细胞炎症因子TNF-αmRNA表达方面能够产生明显的协同配伍作用，降低了矢车菊素单味药使用剂量、毒性与成本，同时协同增强蓝莓花色苷提取物中各活性成分的作用效果，此项发明既明确了药物单体的使用剂量，又有效利用了提取物中的多种活性成分，为抵抗炎症提供新的药物候选来源和提高抗炎临床治疗效果方面具有重要意义。
附图说明
图1示出了不同浓度LPS对RAW264.7细胞活性的影响，注：与正常组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图2示出了不同浓度矢车菊素对RAW264.7细胞活性的影响，注：与正常组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图3示出了不同浓度蓝莓花色苷提取物对RAW264.7细胞活性的影响，注：与正常组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图4示出了不同质量比的矢车菊素+蓝莓花色苷提取物组合物对RAW264.7细胞中炎症因子TNF-α的影响，注：与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图5示出了矢车菊素与蓝莓花色苷提取物及二者组合物抑制炎症因子TNF-α表达的量效关系曲线，注：组合物药物质量浓度以组合中矢车菊素的质量浓度作图；
图6示出了矢车菊素与蓝莓花色苷提取物在质量比1：40配伍下的Fa-C曲线图。
具体实施方式
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
如无特殊说明，本说明书中的术语的含义与本领域技术人员一般理解的含义相同，但如有冲突，则以本说明书中的定义为准。
本文中“包括”、“包含”、“含”、“含有”、“具有”或其它变体意在涵盖非封闭式包括，这些术语之间不作区分。术语“包含”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。术语“包含”还包括术语“由…组成”和“基本上由…组成”。本发明的组合物和方法/工艺包含、由其组成和基本上由本文描述的必要元素和限制项以及本文描述的任一的附加的或任选的成分、组分、步骤或限制项组成。
在说明书和权利要求书中使用的涉及组分量、工艺条件等的所有数值或表述在所有情形中均应理解被“约”修饰。涉及相同组分或性质的所有范围均包括端点，该端点可独立地组合。由于这些范围是连续的，因此它们包括在最小值与最大值之间的每一数值。还应理解的是，本申请引用的任何数值范围预期包括该范围内的所有子范围。
花青素是一种水溶性的植物色素，存在于液泡内的细胞液中，最常见的一种常见的花青素——矢车菊素(Cyanidin，Cy)，具备抗炎、抗癌、抗氧化等药理药效。花青素与糖类物质以糖苷键结合之后即为花色苷，蓝莓中花色苷的含量很高，原果含量达到3.86％(果皮4.61％，汁1.29％)，是其最重要的生物活性成分。蓝莓花色苷提取物(BlueberryAnthocyaninsExtract，BAE)是蓝莓果实中提取出来的副作用小且安全、有效、健康的天然花色苷色素，对多种疾病有很好的疗效。
本发明人进行大量研究，发现RAW264.7细胞活性受矢车菊素和蓝莓花色苷提取物的质量终浓度影响，当药物超过某一质量终浓度时，RAW264.7细胞活性会出现明显下降。进一步研究发现，在对RAW264.7细胞无毒性影响的药物质量终浓度范围内，矢车菊素和蓝莓花色苷提取物按一定比例配伍后，能够协同抑制由LPS诱导的炎症反应中TNF-α的表达。花色苷作为多酚类化合物，具有多种药理药效，本发明首次发现矢车菊素和蓝莓花色苷提取物组合具有协同的抗炎作用，能发挥明显的协同抑制炎症因子TNF-α表达的作用，减轻了单味药的使用剂量与毒性，提高了提取物的药理药效，为炎症治疗提供新的候选药物来源。
下面结合实施例对本发明进行详细的说明，实施例仅是本发明的优选实施方式，不是对本发明的限定。本文中如无特殊说明，溶液浓度均为质量浓度。
实施例1矢车菊素、蓝莓花色苷提取物的细胞活性影响及二者组合物抑制炎症因子TNF-α表达的研究
1材料与试剂
1.1药物与试剂
矢车菊素(纯度98.66％)；蓝莓花色苷提取物；脂多糖(Lot 917A031金克隆生物)；二甲基亚砜(Lot 1209M0313，细胞培养级，Solarbio)；DMEM培养基(Lot 8121342，Gibco)；双抗(1％青霉素/链霉素，Gibco)；胰蛋白酶-EDTA(Lot 2277233，0.25％，Gibco)；PBS缓冲液(Lot 8122024，Gibco)；胎牛血清(Lot 8121342，VIVACELL)；CCK-8(Lot BS350B，Biosharp)；核酸提取试剂盒(Lot#020902，TRANSGEN BIOTECH)、cDNA反转录试剂盒(Lot#P31129，TRANSGEN BIOTECH)与荧光定量PCR试剂盒(Lot#011203，TRANSGEN BIOTECH)等。
其中，蓝莓花色苷提取物通过以下方法制得：蓝莓打浆，离心处理获得汁液和果渣；汁液按照1:2(v/v)和无水乙醇混合，得到蓝莓乙醇溶液，以及将果渣在乙醇水溶液中进行超声萃取20～30min，得到蓝莓花色苷提取液；将蓝莓乙醇溶液和蓝莓花色苷提取液混合过滤，分离液通过装有HP2MGL大孔树脂的分离柱进行吸附分离，至吸附饱和；然后用70％乙醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩后进行真空冷冻干燥，即可得到粉末状的蓝莓花色苷提取物，备用。
1.2细胞株
小鼠巨噬细胞RAW264.7
2实验方法
2.1溶液的配制
精密称取矢车菊素适量，使用DMSO溶解至20mg/mL；称取蓝莓花色苷提取物适量，使用PBS缓冲液溶解至10mg/mL的储备液，并使用0.22μm滤膜过滤储备液除菌；称取适量脂多糖，加入无菌水，配制成1mg/mL的储备液。储备液均放置－20℃保存。
2.2细胞培养
取RAW264.7置含10％胎牛血清和1％双抗的DMEM高糖培养基中，在37℃、5％二氧化碳的环境中培养。
2.3CCK-8法测定细胞活性
待细胞生长状态良好，按每孔1×104个细胞的密度，将RAW264.7细胞接种于96孔板中，每孔接100μL培养基，于37℃下孵育24h。
(1)不同浓度LPS(脂多糖)对细胞活性的影响
实验分为空白组，正常组，不同浓度LPS实验组。空白组：无细胞；正常组：有细胞，无LPS；不同浓度LPS实验组，设置LPS终浓度为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125、0.390625μg/mL 7个浓度梯度组，每组处理重复5孔。
(2)不同浓度矢车菊素对细胞活性的影响
实验分为空白组，正常组，不同浓度矢车菊素实验组。空白组：无细胞；正常组：有细胞，无矢车菊素；不同浓度矢车菊素实验组，设置矢车菊素终浓度为40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125μg/mL7个浓度梯度组，每组处理重复5孔。
(3)不同浓度蓝莓花色苷提取物对细胞活性的影响
实验分为空白组，正常组，不同浓度蓝莓花色苷提取物实验组。空白组：无细胞；正常组：有细胞，无莓花色苷粗提物；不同浓度蓝莓花色苷提取物实验组，设置蓝莓花色苷提取物终浓度为1600、800、400、200、100、50、25、12.5μg/mL 7个浓度梯度组，每组处理重复5孔。
根据各组实验加药需求，更换培养基，继续培养24h后，每孔中分别加入10μL CCK-8试剂，于37℃下避光孵育2h，于450nm处检测每OD值，计算细胞活力。
细胞活力％＝(实验组OD－空白OD/正常组－空白OD)×100％
2.4RT-qPCR法检测矢车菊素与蓝莓花色苷提取物三种浓度组合对炎症因子TNF-α的抑制作用
取生长状态良好的RAW264.7细胞，按每孔1×106个细胞的密度，将RAW264.7细胞接种于6孔板中,每孔加入2mL培养基，于37℃下孵育24h。
实验分为正常组，模型组、矢车菊素+蓝莓花色苷提取物实验组。正常组：有细胞，无LPS，无矢车菊素+蓝莓花色苷提取物；矢车菊素+蓝莓花色苷提取物实验组，设置矢车菊素+蓝莓花色苷提取物配伍为10+200、5+200、5+300μg/mL三种质量终浓度组合(参照步骤3细胞活性结果选择适当的药物质量终浓度进行配伍)，根据各组实验加药需求，更换培养基，药物作用2h后加入终浓度为1μg/mL的LPS，继续培养作用24h后收取细胞；
使用核酸提取试剂盒提取各组细胞的RNA；并逆转录为cDNA；查找小鼠TNF-αmRNA序列及相关信息，由公司进行引物合成，根据试剂盒步骤进行RT-PCR检测各组TNF-α的mRNA表达量，以2－ΔΔCt法计算炎症因子TNF-α的相对表达量。
3实验结果
3.1CCK-8法测定细胞活性的结果
(1)不同浓度LPS对RAW264.7细胞活性的影响
利用CCK-8法检测LPS对RAW264.7细胞活性的影响，实验结果表明当LPS浓度在≤6.25μg/mL时，RAW264.7细胞的活性与正常组比较，无统计学差异(P>0.05)；当LPS浓度≥12.5μg/mL时，RAW264.7细胞活性降低，且与正常组相比较差异显著(P<0.05)；RAW264.7细胞的最大LPS无毒剂量为6.25μg/mL。具体结果见图1。根据本发明需求，LPS造模浓度选择为1μg/mL。
(2)不同浓度矢车菊素对RAW264.7细胞活性的影响
利用CCK-8法检测矢车菊素对RAW264.7细胞活性的影响，实验结果表明当矢车菊素浓度在≤2.5μg/mL时，RAW264.7细胞的活性与正常组比较，无统计学差异(P>0.05)；当矢车菊素浓度在为5μg/mL时，RAW264.7细胞的活性增加，与正常组比较，有统计学差异(P＜0.05)；当矢车菊素浓度为10μg/mL时，对RAW264.7细胞的活性无影响；当矢车菊素浓度≥20μg/mL时，RAW264.7细胞的活性开始出现降低，与正常组比较，无统计学差异(P＞0.05)。具体结果见图2。当矢车菊素的质量终浓度≤40μg/mL时，矢车菊素对RAW264.7细胞无毒性影响，基于细胞活性和药物成本考虑，矢车菊素的质量终浓度选择≤10μg/mL。
(3)不同浓度蓝莓花色苷提取物对RAW264.7细胞活性的影响
利用CCK-8法检测蓝莓花色苷提取物对RAW264.7细胞活性的影响，实验结果表明当蓝莓花色苷提取物浓度在12.5～400μg/mL时，随着蓝莓花色苷提取物浓度浓度的增加，RAW264.7细胞的活性不断增加，蓝莓花色苷提取物浓度在50～400μg/mL时，与正常组比较差异极显著(P＜0.05)，说明在浓度范围，蓝莓花色苷提取物促进RAW264.7细胞的分裂增殖，细胞活性升高；当蓝莓花色苷提取物的质量终浓度≥800μg/mL，与正常组比较，RAW264.7细胞活性开始出现降低(P＞0.05)；当蓝莓花色苷提取物的质量终浓度≥1600μg/mL，与正常组比较，RAW264.7细胞活性出现了显著性降低(P＜0.05)；RAW264.7细胞的最大蓝莓花色苷提取物无毒剂量为800μg/mL。具体结果见图3。当蓝莓花色苷提取物的质量终浓度≥1600μg/mL，RAW264.7细胞活性出现显著性降低(P＜0.05)。因此，采用蓝莓花色苷提取物干预RAW264.7细胞炎症反应时质量终浓度应低于最大无毒剂量800μg/mL。
3.2RT-qPCR法检测矢车菊素组与蓝莓花色苷提取物三种浓度组合对炎症因子TNF-α的抑制作用结果
如图4所示，与对照组相比，模型组的炎症因子TNF-α的表达量显著上升；与模型组相比，三种(10+200、5+200和5+300μg/mL，即质量比为1:20、1:40和1:60)矢车菊素组+蓝莓花色苷提取物组合物，均能下调LPS刺激后炎症因子TNF-α的表达；当矢车菊素组+蓝莓花色苷提取物配伍为5+200μg/mL时，RAW264.7细胞中TNF-α炎症因子表达量最低。矢车菊素+蓝莓花色苷提取物质量比为1:40时，RAW264.7细胞中炎症因子TNF-α的抑制作用效果最好。
实施例2
1材料与试剂
1.1药物与试剂
同实施例1中1.1项药物与试剂。
1.2细胞株
小鼠巨噬细胞RAW264.7
2实验方法
2.1药物配制
同实施例1中2.1项药物配制
2.2细胞培养
同实施例1中2.2项细胞培养
2.3RT-qCR法检测矢车菊素组、蓝莓花色苷提取物及二者组合物对炎症因子TNF-α的抑制作用
取生长状态良好的RAW264.7细胞，按每孔1×106个细胞的密度，将RAW264.7细胞接种于6孔板中,每孔加入2mL培养基，于37℃下孵育24h。
实验分为正常组，模型组、矢车菊素组、粗提物实验组、矢车菊素组+粗提物实验组。
正常组：有细胞，无LPS，无矢车菊素组莓花色苷粗提物；模型组：有细胞与LPS刺激，无矢车菊素组与莓花色苷粗提物，矢车菊素组组终质量终浓度梯度设置为10、8、6、4、2、1μg/mL；莓花色苷粗提物终质量终浓度梯度设置为400、320、240、160、80、40μg/mL；矢车菊素组+莓花色苷粗提物终质量终浓度梯度设置为10+400、8+320、6+240、4+160、2+80、1+40μg/mL，根据各组实验加药需求，更换培养基，药物作用2h后加入终浓度为1μg/mL的LPS刺激，继续培养作用24h后收取细胞；
运用试剂盒提取各组细胞的RNA并逆转录为cDNA，查找小鼠TNF-αmRNA序列及相关信息，由公司进行引物合成，根据试剂盒步骤进行RT-PCR
检测各组TNF-α的mRNA表达量，以2－ΔΔCt法计算各目的基因的相对表达量。
抑制率计算公式如下：
抑制率＝(1－加药组mRNA相对表达量/模型组mRNA相对表达量)×100％。
2.3矢车菊素、蓝莓花色苷提取物及二者组合物对炎症因子TNF-α的协同抑制作用分析
采用中效原理和Chou-Talalay联合指数法对矢车菊素、蓝莓花色苷提取物组合物对炎症因子TNF-αmRNA表达的协同抑制作用进行测定。根据中效方程Fa/Fu＝(D/Dm)m计算单个或两个药物特定抑制率下的使用剂量。将中效方程转化为线性方程log(Fa/Fu)＝mlogD-mlogDm，D代表药物剂量，Fa代表小数抑制率，Fu＝1-Fa，Dm为中效浓度，代表50％效应时的药物浓度，m为线性方程直线的斜率。
根据Chou-Talalay方程(CI＝(D)1/(Dx)1+(Dx)2/(Dx)2)计算矢车菊素与蓝莓花色苷提取物的合用指数(CI)，D1、D2为矢车菊素与蓝莓花色苷提取物组合物在X药物效应(炎症因子TNF-αmRNA表达抑制率)时各自的浓度，(Dx)1、(Dx)2为达到上述X药物效应时矢车菊素、蓝莓花色苷提取物单独使用时的浓度。评价二者对炎症因子TNF-αmRNA表达的协同抑制作用。当CI<1，两药合用效应为协同效应；当CI＝1，两药合用效应为相加效应；当CI>1，两药合用效应为拮抗效应。
3实验结果
3.1矢车菊素、蓝莓花色苷提取物及二者组合物对炎症因子TNF-α表达的抑制作用
如图5所示，矢车菊素和蓝莓花色苷提取物对炎症因子TNF-α表达的抑制率均呈现浓度依赖性增加，其中矢车菊素的IC50为2.93μg/mL，蓝莓花色苷提取物的IC50为461.46μg/mL。组合物对炎症因子TNF-α表达的抑制率呈现浓度依赖性增加，且与矢车菊素、蓝莓花色苷提取物单独使用相比，达到特定药物效应时，组合物中单药的浓度明显降低。
3.2矢车菊素、蓝莓花色苷提取物对炎症因子TNF-α表达的协同抑制效应分析
根据中效原理和Chou-Talalay联合指数法评价矢车菊素、蓝莓花色苷提取物在质量比1：40配伍下，二者的协同配伍效应。根据计算结果绘制不同效应下，矢车菊素、蓝莓花色苷提取物的合用指数(Fa-C曲线)，通过合用效应与合用指数曲线图评价矢车菊素、蓝莓花色苷提取物的协同配伍效应。
由图6所示，矢车菊素、蓝莓花色苷提取物在质量比1：40配伍下能够发挥明显的协同抑制炎症因子TNF-α表达的作用。由表1可知，当Fa＝0.5时，矢车菊素、蓝莓花色苷提取物按质量终浓度1：40配伍后，能明显降低单药使用剂量。
表1 Fa＝0.5时，矢车菊素、蓝莓花色苷提取物及二者组合物(1:40)的药物剂量表
药物/复方 CI指数(Fa＝0.5) 药物剂量(μg/mL)
矢车菊素 / 4.41
蓝莓花色苷提取物 / 461.46
矢车菊素+蓝莓花色苷提取物(1：40) 0.92 2.93+118.68
实施例3
具有协同抑制炎症因子TNF-α表达的矢车菊素和蓝莓花色苷提取物组合物可以应用于制备预防和治疗炎症反应的药物或保健品。
具体地，所述药物为炎症因子活性抑制剂。更进一步地，所述炎症因子为肿瘤坏死因子-α。
本发明人首先通过CCK-8法检测了对RAW264.7细胞无毒性影响药物剂量，确保了后续的研究不会对细胞活性造成不利影响。矢车菊素与蓝莓花色苷提取物均有抗炎的临床疗效，发明人将矢车菊素与蓝莓花色苷提取物进行组合，在炎症因子TNF-α表达抑制方面能够产生明显的协同配伍作用，降低了单味药使用剂量和毒性和提高抗炎临床治疗效果方面具有重要意义。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，但凡采用等同替换或等效变换的形式所获得的技术方案，均应落在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种具有抗炎作用的组合物，其特征在于，其由矢车菊素和蓝莓花色苷提取物组成；
所述矢车菊素与蓝莓花色苷提取物的质量比为1:40；
所述矢车菊素选自纯度98.66%的矢车菊素；所述蓝莓花色苷提取物通过以下方法制得：蓝莓打浆，离心处理获得汁液和果渣；汁液按照1:2v/v和无水乙醇混合，得到蓝莓乙醇溶液，以及将果渣在乙醇水溶液中进行超声萃取20~30min，得到蓝莓花色苷提取液；将蓝莓乙醇溶液和蓝莓花色苷提取液混合过滤，分离液通过装有HP2MGL大孔树脂的分离柱进行吸附分离，至吸附饱和；然后用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩后进行真空冷冻干燥，即可得到粉末状的蓝莓花色苷提取物，备用。
2.一种组合物在制备具有抗炎作用的药物中的应用，其特征在于，所述组合物如权利要求1所述的组合物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物为炎症因子活性抑制剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述炎症因子为肿瘤坏死因子-α。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110151816A (zh) * 2019-05-28 2019-08-23 兰溪市立顺生物有限公司 用于治疗和预防类风湿性关节炎的组合物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘静波等.黄酮苷元类化合物制备技术及功能活性研究进展.《中国食品学报》.2018,第18卷(第10期),第276-285页. *
林杨等.蓝莓花色苷对脂多糖诱导RAW 264.7细胞炎症及结肠癌细胞增殖、凋亡的影响.《食品科学》.2020,第41卷(第13期),第133-140页. *

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